چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 5373 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی DNA ویروس هرپس سیمپلکس تیپ 1 و2 و ابشتاین بار ویروس در مایع مغزی-نخاعی بیماران مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس در مقایسه با گروه کنترل به روش P.C.R |
| عنوان لاتین طرح | Evaluation of Herpes Simplex Virus 1, 2 and Epstein Barr virus DNA in cerebro spinal fluid of patients with Multiple Sclerosis Comparing to control group with P.C.R assay. |
| نوع طرح | |
| محل اجرای طرح | مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی و گرمسیری |
| رسته مطالعاتی | بنیادی- کاربردی |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| محمدعلی روزبه فر | همکار | دانشجو | rezmash_64@yahoo.com | |
| رویا علوی نائینی | مجری اول | استاد راهنما | دکترای تخصصی | ranaini@gmail.com |
| علی مقتدری | مجری دوم | استاد راهنما | فلوشیپ | amoghtaderi@gmail.com |
| مهرناز ناروئی نژاد | مشاور | استاد مشاور | کارشناسی ارشد | mehrnaznar@gmail.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | بررسی DNA ویروس هرپس سیمپلکس تیپ 1 و2 و ابشتاین بار ویروس در مایع مغزی-نخاعی بیماران مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس در مقایسه با گروه کنترل به روش P.C.R |
| خلاصه طرح به لاتین | Evaluation of Herpes Simplex Virus 1, 2 and Epstein Barr virus DNA in cerebro spinal fluid of patients with Multiple Sclerosis Comparing to control group with P.C.R assay. |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | مولتیپل اسکلروزیس (M.S) شایعترین اختلال عصبی و از بیشترین میزان بروز در جوانان برخوردار است . علایم اولیه عموماً پیش از 55 سالگی آغاز می شود و در سن 20 تا 40 سالگی به اوج خود می رسد . نسبت بیماری در زنان به مردان 2 برابر می باشد. حدود300 هزار نفر را در آمریکا مبتلا کرده است . علت بیماری ناشناخته است اما ظن به نوعی مکانیسم ایمنی علیه آنتی ژنهای میلینی وجود دارد . این اختلال از نظر پاتولوژیک با گسترش کانونی مشخص می شود . مناطق پراکنده دمیلینه شده و به دنبال گلیوزیس واکنشی ایجاد می شود . امکان صدمه نیز وجود دارد . ضایعات مذکور در ماده سفید مغز و نخاع و عصب دو بروز می نماید . ارتباط قوی بین بیماری و DR2-HLA وجود دارد عفونت ها ی ویرال یا سایر فاکتورها ممکن است باعث فعال شدن T-cell و آنتی بادی برعلیه سیستم عصبی مرکزی ، که باعث شکست سد مغزی – نخاعی می شود. علائم بالینی به صورت ضعف ، کرختی یا ناهنجاری در یک اندام، فقدان ناگهانی یا تاری دید در یک چشم (نوریت اپتیک) ، دوبینی ، عدم تعادل یا اختلال عملکرد مثانه می باشد . این علائم گذرا بوده و بعد از چند روز یا هفته از بین می روند . ممکن است چند ماه تا چند سال فاصله بین حمله اولیه تا شروع علائم عصبی باشد . عود بیماری با عفونت آغاز شده و در زنان بیشتر در طی سه ماهه بعد از زایمان اتفاق می افتد . براساس سیر بیماری به انواع عود کننده –فروکشی کنندهRelapsing-remitting، پیشرونده ی ثانویه Secondary-progressive وPrimary progressive تقسیم می شود . مایع مغزی نخاعی (CSF) بطور شایع غیر طبیعی بوده و لنفوسیتوز خفیف یا افزایش مختصر پروتئین در آن مشاهده می شود . الکتروفوزر پروتئین CSF نشانگر وجود نوارهای مجزاIgG (باندی اولیگوکلونال)در90% بیماران میباشد. MRI نیز می تواند ضایعات تحت بالینی را مشخص نماید و تقریباً در قطعیت تشخیص کمک کننده است . درمان با اینترفرون –بتا(IFN- )، ایمنوگلوبولین داخل وریدی (IVIg)، گلایترامراستات Glatiramer Acetate و پالس کورتون می باشد .(1) با توجه به اینکه عفونتهای ویرال یکی از اتیولوژیهای M.S می باشد گروههای متعدد ویروس به عنوان ایتولوژی یا تشدید کننده ی آن معرفی شده اند که می توان به ویروس هرپس سیمپلکس(H.S.V)،ابشتین بار ویروس(E.B.V)، واریسلا زوستر(V.Z.V)،هرپس ویروس انسانی (H.H.V)، اوریون ،سرخک و علل عفونی دیگر مانند کلامیدیا و بیماری لایم نیز در مطالعات پیدا شده اند. H.S.V شامل HSV-1 ،HSV-2 و هرپس هومینیس که عفونت را ایجاد می کند که سطوح پوستی ، مخاطی، CNSوگاهی ارگانهای احشایی را درگیر می کند . HSV از خانواده هرپس ویریده می باشد. (2) V.Z.V نیز باعث بیماریهای واریسلا و هرپس زوستر می شود از خانواده هرپس ویریده می باشد . (3) E.B.V نیز که باعث منونوکلئوزعفونی ، کارسینوم نازو فارنکس ، لنفوم بورکیت، بیماری هوچکین می شود از خانواده هرپس ویریده می باشد . (4) سایتومگال ویروس C.M.V وهرپس ویروسی انسانی نیز جزء هرپس ویریده می باشد . (5) در مطالعه Sander vj و همکارانش در آمریکا که حضور هرپس ویروس را در نمونه های مغزی بیماران M.S با بیماران کنترل با PCR بررسی کردند، مواردHSV،HHV6،VZVدر بیماران M.S در مقایسه با گروه کنترل بیشتر بوده است. (6) در مطالعه Christensen T و همکارانش از دانمارک،EBV،HHV6وvzv ارتباط با M.S داشته اند.(7) در مطالعه Ferran te P و همکارانش در ایتالیا HSV1 در خون محیطی بیماران M.Sدر حین حمله حاد کلینیکی فعال می شود ممکن است نقشی در تشدید یا عود M.S داشته باشد. EBVوHHV-6 در هردو گروه کنترل و مبتلا تفاوتی نداشته است ولی درمورد HSV-1 فقط در گروه مبتلا یافت شد. (8) در مطالعه V.Nociti و همکارانش در ایتالیا افزایش تیترIgG –EBV –Anti در سرم و مایع CSF بیماران M.S در مقایسه با بیماری پلی رادیکولوپاتی دمیلنیه و آمیوتروفیک لترال اسکلروزیس بوده است که نقش EBV را درM.S بیان کرد.(9) در مطالعه Siddharama در هند عفونت با کلامیدیا پنوموینه ،HHV-6 ،EBV در پیشرفت بیماری M.S نقش داشته است.(10) در مطالعه P.Sundstrom و همکارانش در سوئد ارتباط بینEBV،6HHV- با M.Sوجود داشت ولی ارتباطی میان HSV، VZVو سرخک با M.S یافت نشد. (11) در مطالعه Sabine cepok وهمکارانش در آلمان براساس بررسی مایع csf یک افزایش پاسخ ایمنی به EBV در بیماران M.S وجود داشت که پیشنهاد کننده نقش مهم ویروس در پاتوژنز M.S می باشد . (12) در مطالعه Batinac T و همکارانش یک ریسک افزایش یافته لنفوم غیرهوچکین دربیماران که سابقه بیماری اتوایمیون مثل M.Sداشته وجود داشت و از طرفی هر دو نوع لنفوم هوچکین و غیر هوچکین ارتباط با ویرس EBV دارند . در این مطالعه بیماری لایم نیز از اتیولوژی لنفوما و M.S مطرح شده است.(13). در مطالعه Khaki M وهمکارانش در اراک ارتباط بین M.S و سرخک و اوریون بوده است و همه بیماران از نظر آنتی بادی EBV و پاراانفلوانزا منفی بوده اند.(14) در مطالعه Ben Fredj N و همکارانش در تونس مشخص شد 2HSV-1,HSV-CMV,HHV-8 در هر دو گروه بیماران M.S و گروه کنترل منفی بوده است.اما EBV,HHV-7,HHV-6,VZV در هر دو گروه مثبت بوده اند که میزان آنها در گروه بیماران M.S بالاتر بوده که از میان این ویروس ها EBV وHHV-7 درصد بالاتری را به خود اختصاص داده اند.(15) هدف ازاین مطالعه تعیین وجود ویروس هرپس 2و1 و EBV به روش P.C.R در نمونه های CSF بیماران مبتلا به M.S در مقایسه با گروه کنترل می باشد. |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | 1- آیا DNA هرپس سیمپکلس تیپ 1 درگروه بیماران مبتلا به M.S بالاتر از گروه کنترل می باشد؟ 2- آیا DNA هرپس سیمپکلس تیپ 2 درگروه بیماران مبتلا به M.S بالاتر از گروه کنترل می باشد؟ 3- آیاDNA ابشتاین بار ویروس درگروه بیماران مبتلا به M.S بالاتر از گروه کنترل می باشد؟ |
| هدف کلی طرح | بررسی وجود DNA ویروس هرپس سیمپلکس تیپ 1 و2 وEBV در بیماران مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس با روش PCR و مقایسه با گروه کنترل |
| اهداف اختصاصی | 1- تعیین فراوانی DNA هرپس سیمپلکس تیپ1در C.S.F بیماران مبتلا به M.S به روش P.C.R در مقایسه با گروه کنترل 2- تعیین فراوانی DNA هرپس سیمپلکس تیپ2در C.S.F بیماران مبتلا به M.S به روش P.C.R در مقایسه با گروه کنترل 3- تعیین فراوانی DNA ابشتاین بار ویروس در C.S.F بیماران مبتلا به M.S به روش P.C.R در مقایسه با گروه کنترل |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | کلیه مراکز بهداشتی و درمانی و آموزشی کشور که به نحوی مرتبط با تشخیص و درمان بیماران مبتلا به M.S هستند. |
| تعریف واژه های تخصصی | P.C.R: polymerase chain reaction M.S: Multiple Sclerosis H.S.V: Herpes Simplex Virus E.B.V:Epstein Barr Virus C.S.F:Cerebro Spinal Fluid |
| نوع مطالعه | بنیادی- کاربردی |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | جامعه مورد مطالعه شامل بیماران مبتلا به M.S ز نوع Remitting- relapseو بیماران گروه کنترل شامل بیماریهای نورولوژیک مثلا بیماریهای نورودژنرایتو، و پسودو تومور سربری می باشد . معیارهای خروج بیماران تحت درمان MS و عدم رضایت بیماران از نوع پونکسیون لومبر می باشد. |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | حجم نمونه شامل 50 بیمار با تشخیص M.S و 50 بیمار کنترل می باشد. و روش محاسبه آن برای مقالات شرح داده شده می باشد. |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | روش نمونه گیری در دسترس می باشد. |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | جهت جمع آوری داده ها از فرم های اطلاعاتی استفاده می شود . |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | تهیه نمونه: ابتدا 2 سی سی از نمونه مایع مغزی نخاعی بعد از انجام کارهای روتین داخل یک فایلکن ریخته می شود و به مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی ارسال می شود.در ضمن تمام مشخصات مربوط به بیمار در پرسشنامه درج می گردد.نمونه در دمای 80- درجه سانتیگراد نگهداری می شوند تا زمانی که تعداد نمونه ها به 50 عدد برسد.سپس از حالت فریز در آورده و مهیا می شوند.P.C.R جهت انجام تست استخراج DNA: نمونه مایع مغزی نخاعی از80- درجه سانتیگراد در آورده و برای استخراج آماده می شوند بدین صورت که برای استخراج از کیت کیاژن یا اینوتیروژن استفاده می شود.کیت های نامبرده از نمایندگی های داخل کشور تهیه می شوند. روش انجام P.C.R : استفاده از کیت های آماده که از شرکت ندای فن تهیه می شوند که پرایمرMASTER MIX ومواد مورد نظر جهت انجام P.C.R در خود کیت موجود می باشد. P.C.R و بقیه پروتکل بر اساس دستورالعمل خود کیت انجام می شود و در نهایت جهت حضور باند و یا عدم حضور باند مورد بررسی قرار می گیرند.در صورت نبود کیت بعد از استخراج DNA پرایمرهای مربوط به هر ویروس بر اساس مقالات دیگر تعیین توالی می شوند و نوع پرایمر از کمپانی مورد نظر خریداری می شود و بعد از تهیه پرایمر مواد مورد نیاز مانند dntp ، PCR buffer ، آنزیم taq نیز تهیه می شود یا از premix آماده جهت انجام P.C.R استفاده می شود.برنامه به دستگاه ترموسیکلر با روش دستی داده می شود.بر اساس کارهایی که در مقالات دیگر انجام شده است تنظیم میگردد. انجام تست الکتروفورز: محصول P.C.R یا پروداکت جهت بررسی حضور یا حضور باند الکتروفورز می شود.برای انجام الکتروفورز ابتدا ژل آگاروز 5/1% تهیه می شود.در چاهک اول ژل LADDER ریخته می شود که جهت تشخیص یا تعیین اندازه باند می باشد.در چاهک دوم از کنترل مثبت استفاده می شود.در چاهک سوم از کنترل منفی استفاده می شود که به جای DNA ی الگو از آب مقطر استفاده می شود.دربقیه چاهک ها محصول P.C.R تست ها load می شود سپس ژل داخل تانک الکتروفورز قرار داده می شود و الکتروفورز انجام می شود.سپس ژل داخل محلول حاوی رنگ اتیدیوم بروماید قرار داده می شود تا باندهای تشکیل شده روی ژل رنگ آمیزی شوند.در مرحله آخر ژل داخل دستگاه ژل داک قرار داده می شود تا حضور باند بررسی شود. |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | استفاده می شود.SPSS version17 فراوانی مطلق ونسبی داده ها اندازه گیری می شود و برای مقایسه ازنرم افزار استفاده می شود.t-student test و برای مقایسه داده های کمی از chi-squared test جهت مقایسه داده های کیفی - M.S + +HSV-1 -HSV-1 - M.S + +HSV-2 -HSV-2 - M.S + +EBV -EBV |
| ملاحظات اخلاقی | در این مطالعه پس از تصویب در کمیته اخلاق پزشکی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان براساس مفاد بیانیه هلسینکی و کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی ، هدف از انجام مطالعه به طور کامل برای افراد مورد مطالعه توضیح داده می شود و به طور آگاهانه از بیماران رضایت کسب می گردد (مطابق کد1 کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی ) و جهت حفظ اصول اخلاق پژوهشی کلیه اطلاعات شخصی بیماران مورد مطالعه محرمانه باقی خواهد ماند (معادل کد17 کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی )بیمار محق می باشد هر زمان مایل بود بدون این که در برخورد پزشک با وی و نحوه درمان او تغییری ایجاد شود از مطالعه خارج گردد.(معادل کد8 کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی ). |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | عدم رضایت بیماران جهت انجام L.P می باشد که با توضیح دادن بیشتر روش انجام کار سعی می شود رضایت بیماران کسب شود. |
| کلمات کلیدی | مولتیپل اسکلروزیس ،هرپس سیمپکلس تیپ1، هرپس سیمپکلس تیپ2،EBV،P.C.R |
| فهرست منابع و مراجع | 1. Greenberg A, Aminoff J,Simon P. Demyelinating myelopathies. David A Greenberg, Micheal J Aminoff, Roger P Simon. Clinical Neurology. 5th ed. New York: MC Graw-Hill; 2003: 167-169. 2. Harrison. 172. Harrison. [ Harrison’s internal medicine ] Persian. 17th-ed. 1. Tehran: samat; 1388: 47. 3. Harrison. 173. Harrison. [ Harrison’s internal medicine ] Persian. 17th-ed. 1. Tehran: samat; 1388: 61. 4. Harrison. 174. Harrison. [ Harrison’s internal medicine ] Persian. 17th-ed. 1. Tehran: samat; 1388: 67. 5. Harrison. 175. Harrison. [ Harrison’s internal medicine ] Persian. 17th-ed. 1. Tehran: samat; 1388: 74-80. 6. Sanders VJ, Felisan S, Waddell A, Tourtellot WW. Detection of herpes viridae in postmortem multiple sclerosis brain tissue and controls by polymerase chain reaction. J Neuroviral 1996; 2(4): 249-58. 7. Christensen T. Human herpes viruses in M.S. Int M.S J 2007; 14(2): 41-7. 8. Ferrante P, Mancuso R, Pagani E, et al. Molecular evidences for a rol of HSV-1 in multiple sclerosis clinical acute attack. J Neurovirol 2000; 6(2):109-14. 9. Nociti V, Frisullo G, Marti A, et al. Epstein-Barr virus antibodies in serum and cerebrospinal fluid from multiple sclerosis, Chronic Inflammatory Demyelinating Polyradiculoneuropathy and Amyotrophic Lateral Sclerosis. Journal of Neuroimmunology 2010; 225(1-2): 149-152. 10. Siddharama P, Subramaniam S. The role of infections in the pathogenesis and course of multiple sclerosis. Ann Indian Acad Neurol 2010; 13(2):80-86. 11. Sundstorm P, Juto P, Wadell G, et al. An altered immune response to Epstein-Barr virus in multiple sclerosis. Neurology 2004; 62: 2277-2282. 12. Cepok S, Zhou D, Srivastava R, et al. Identification of Epstein-Barr virus putative targets of the immune response in multiple sclerosis. The Journal of Clinical Investigation 2005. 13. Bantinac T, Petranovic D, Zamolo G, et al. Lyme borreliosis and multiple sclerosis are associated with primary effusion lymphoma. Med Hypotheses 2007; 69(1):117-9. 14. Khaki M, Ghazavi A, Ghasemi K, et al. [Evaluation of viral antibodies in Iranian multiple sclerosis patients] Persian. Department of Immunology and Microbiology 2011; 16(3): 224-8. 15. Ben Fredj N, Rotola A, Nefzi F, et al. Identification of human herpesviruses 1 to 8 in Tunisian multiple sclerosis patients and healthy blood donors. J Neurovirol 2011. |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| scan0001.jpg | 1391/03/28 | 82616 | دانلود |
| scan0002.jpg | 1391/03/28 | 8950520 | دانلود |
| 1_218_rezayat nameh.doc | 1391/03/28 | 87040 | دانلود |
| نهایی.doc | 1391/07/13 | 282112 | دانلود |
| 91.3.24.doc | 1391/07/13 | 73216 | دانلود |
| شریفی.doc | 1391/07/13 | 65536 | دانلود |
| 1391/07/13 | دانلود |
