بررسی DNA کلامیدیا پنومونیه درمایع مغزی نخاعی بیماران مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس به روش PCRومقایسه ان با گروه کنترل

Evaluation of DNA of chlamydia pneumoniae in patients with Multiple Sclerosis comparing to control group by PCR method


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان: رویا علوی نائینی

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 5395
عنوان فارسی طرح بررسی DNA کلامیدیا پنومونیه درمایع مغزی نخاعی بیماران مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس به روش PCRومقایسه ان با گروه کنترل
عنوان لاتین طرح Evaluation of DNA of chlamydia pneumoniae in patients with Multiple Sclerosis comparing to control group by PCR method
نوع طرح
محل اجرای طرح مدیریت توسعه فناوری سلامت
رسته مطالعاتی تحقیقی- کاربردی
دانشکده/مرکز دانشکده پزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
رویا علوی نائینیمجریاستاد راهنمادکترای تخصصی ranaini@gmail.com
علی مقتدریاستاد راهنمای دوم پایان نامه دانشجوییاستاد راهنمافلوشیپamoghtaderi@gmail.com
مهرناز ناروئی نژادمشاورمشاور علمیکارشناسی ارشدmehrnaznar@gmail.com
علیرضا عباسیهمکاراجراء طرحدستیاری پزشکیaliabasi45@yahoo.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی DNA کلامیدیا پنومونیه درمایع مغزی نخاعی بیماران مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس به روش PCRومقایسه ان با گروه کنترل
خلاصه طرح به لاتینEvaluation of DNA of chlamydia pneumoniae in patients with Multiple Sclerosis comparing to control group by PCR method
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشبیماری MS بیماری بسیار ناتوان کننده و مزمن است که گروه جوانان را در جامعه درگیر می نماید . این بیماری با حملاتی از عود و بهبودی وبا درگیری سیستم اعصاب مرکزی ، سبب ایجاد اختلالات شدید درتوانائیهای حسی، حرکتی ، تعادلی وبینایی می شود1 و از آنجایی که گروه درگیر ممکن است سالها با عوارض بیماری دست و پنجه نرم کنند ، لزوم علت یابی وشناخت پاتوژنزاین بیماری بسیار ضروری به نظر میرسد زیرا بستر سازی مناسب جهت تشخیص صحیح و به موقع بیماران و همچنین درمان کافی بر اساس عامل اتیولوژیک نه تنها آنها را از ناتوانی فرسایشی و مزمن می رهاند بلکه بودجه فراوانی را که جهت دوره های درمانی و باز توانی این بیماران مصرف می شود دوباره احیاء می نماید .

ازسالهای گذشته محققین به دنبال پاتوژنز بیماری بوده اند و همواره سعی بر آن داشته اند که بتوانند مکانیسم بیماری زایی و عامل بیماری زا را شناسایی کرده و راه های درمانی قابل قبول و کارآمدی را ارائه دهند.

بررسیهای مختلف انجام شده در مراکز تحقیقاتی ، فرآیندهای ایمنی را به عنوان مکانیسم اصلی ایجاد بیماری مطرح کرده اند. با کشف آنتی بادی های خاص و مواد التهابی در مایع مغزی نخاعی و سرم بیماران ، این فرضیه شکل گرفته است که عامل پاتوژن با ورود به سیستم اعصاب مرکزی سبب آغاز واکنشهای ایمنی شده واین واکنشها به نوبه خود سبب التهاب و تخریب سلولها و ماده سفید مغزی نخاعی می شوند2 . عامل محرک سیستم ایمنی ناشناخته است . اما اینکه به چه دلیل ارگانیسم کلامیدیا پنومونیه به عنوان عامل بیماری زای احتمالی مطرح شده است و این فرضیه که کلامیدیا پنومونیه با ورود به بدن و سیستم اعصاب مرکزی پاکسازی نشده و به عنوان عامل پاتوژن بیماری در بدن میزبان باقی می ماند ، نکته ای است که تاکنون توجه زیادی را به خود معطوف کرده است . وجود خاصیت بیماری زایی مزمن در این ارگانیسم و توانایی آن در ازمان بیماری همچنین بروز اشکال مختلف بیماری توسط این ارگانیسم از طرفی و پیشرفت موذیانه و کاملاً آهسته درگیری های ایجاد شده توسط این پاتوژن از طرف دیگر، محققان را برآن داشته است که وجود کلامیدیا پنومونیه را به عنوان عامل آغاز گر فرآیند بیماری زایی و تحریک سیستم ایمنی در مطالعات خود منظور نمایند 3.

کلامیدیا پنومونیه سالها پس از ورود به بدن می تواند به شکل نهفته باقی بماند و احتمالاً به فر آیند تحریک سیستم ایمنی ادامه دهد . مواردی نیز از بیماران مبتلا به MS که در آنها کلامیدیا پنومونیه یافت شده است وجود دارد که با درمان این ارگانیسم ، بیماری روند رو به بهبود را طی کرده است .

محققان از روشهای مختلف برای یافتن کلامیدیا پنومونیه استفاده کرده اند که شامل استفاده از کشت و بررسی به روش میکرو ایمیونوفلورسانس و کشف مستقیم ارگانیسم به وسیله میکروسکپ الکترونی ، بررسی آنتی بادی های باکتری به صورت IgA-IgM-IgG با روش ELISA در سرم و مایع مغزی نخاعی و کشف DNA ی کلامیدیا در سرم و CSF بیماران با استفاده از روش PCR بوده است . البته نتایج حاصل از این مطالعات متفاوت بوده اند و به دلیل پر هزینه بودن برخی از این روشها وامکان دسترسی به آنها فقط در مراکز تحقیقاتی ، استفاده از ELISA در بررسی آنتی بادی های موجود در CSF و PCRدر بررسی DNA ی میکرو ارگانیسم درCSF بیماران مبتلا به MS و مقایسه آنها با هم بیشترین توجه را توسط محققین به خود معطوف داشته است و همواره گروه کنترل ازافراد مبتلا به سایر بیماریهای نورولوژیک انتخاب شده اند.4

ضرورت دارد مطالعات وسیع و متعدد در مراکز مختلف انجام گیرد تا بتوان به نتایج قابل قبول دست یافت . لازم به ذکر است که چنانچه بتوان نقش کلامیدیا پنومونیه را به عنوان عامل آغاز گر فر آیند بیماری زایی در بیماری MS به اثبات رساند و روشهای دقیق و در دسترس کشف میکرو ارگانیسم را مشخص کرد ، با درمان صحیح و به موقع بیماری MS می توان ازعوارض عدیده و طاقت فرسای آن ، بیمار و جامعه را رهانید .5

این مطالعه در همین راستا و جهت بررسی بیشتر نقش پاتوژنز کلامیدیا پنومونیه در بیماری MS در بیماران ایرانی انجام شده است و از هر دو روش ELISA وPCRدر بررسی کلامیدیا در CSFبیماران شناخته شده MS و بیماران با سایر بیماریهای نورولوژیک به عنوان گروه کنترل استفاده شده است . مقایسه نتایج حاصله از مطالعه این دو گروه می تواند تأئید کننده نقش اختصاصی بیماری زایی کلامیدیا پنومونیه در بیماری MS باشد و گامی در جهت پیشبرد مطالعات جهانی در زمینه شناسایی پاتوژنز و درمان بیماری مالتیپل اسکلروزیس باشد .

بررسی های متعددی در رابطه با ارتباط بیماری زایی کلامیدیا پنومونیه وبیماریMSانجام شده است اثبات ارتباط این اورگانیسم با بیماری MSمیتوانددردرمان این بیماری نقش مفیدی داشته باشد

در مطالعه ای که به وسیله Taun Dong-si et al . انجام شد از روش PCR جهت یافتن کلامیدیا پنومونیه در CSFبیماران MS استفاده شده است . آنها 18 بیمار MS و 19 بیمار other) neurologic diseases) OND را به عنوان گروه کنترل در نظر گرفتند . در دوازده نفر از 18 بیمار MS و 4 نفر از 19 مورد کنترل ، کلامیدیا پنومونیه با استفاده از روش PCR یافت شد. نتایج حاصله حضور کلامیدیا پنومونیه را در CSF بیشتر بیماران MS تأئید کرد اما فقط در تعداد کمی از OND ها این یافته به اثبات رسید .این ارگانیسم به طور فعال در CSF به تکثیر می پردازد .

در مطالعه ی اخیر توسط siram et al در بررسی CSFبیماران MSو موارد OND (سایر بیماری های نورولوژیک)با روش PCR جهت یافتن DNAی کلامیدیا پنومونیه در یافتند که این ارگانیسمبه میزان 83% در بیماران MS قابل چک کردن است و در سایر بیمار های نورولو ژیک فقط 16% یاد شده است لذا این نتیجه به نفع این ارتباط است.

در ادامه بررسیها Gieffers J et al .مطالعه ای انجام دادند که نشان داد DNA کلامیدیا پنومونیه و ارگانیسم زنده در CSFبیماران MS یافت شده است و آنها در بررسی خود در پی یافتن این مسئله هستند که آیا این پدیده مختص MS است یا در سایر ONDها یا بیماران سالم هم وجود دارد. 11



در مطالعه توسطet al. Hao Q تعداد 66 بیمار MS و 25 بیمار OND از نظر وجود کلامیدیا نومونیه در CSF به روش کشت ، PCR و آنتی بادی بررسی شدند .افزایش تیتر IgG ضد کلامیدیا پنومونیه در 20% بیماران MS و 4% از ONDها یافت شد.

اختلاف نظرهای زیادی در رابطه با نقش PCR در ارزیابی DNAی کلامیدیا پنمونیه در CSF بیماران وجود دارد و به دلیل احتمال مثبت کاذب بودن PCR وتشابه با DNA انسانی هنوز نیاز به ارزیابی بیشتری دارد در نتیجه مطالعات متعدد در مراکز مختلف لازم است تا احتمال پاتوژنز کلامیدیا پنمونیه را در MS تایید کند



با توجه به مطالب فوق این مطالعه به صورت مقایسه ای بین گروه بیماران MS و سایر بیماریهای نورولوژیک برای یافتن DNAی ارگانیسم درCSF به روش PCR انجام شده است .

هدف کلی طرحتعیین DNA کلامیدیا پنومونیه درمایع مغزی نخاعی بیماران مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس به روش PCRوقایسه ان با گروه کنترل
اهداف اختصاصی
• تعیین فراوانی DNA ی کلامیدیا پنومونیه در مایع مغزی نخاعی بیماران مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس با استفاده از روش PCR

• تعیین فراوانی DNAی کلامیدیا پنومونیه در مایع مغزی نخاعی گروه کنترل به روش PCR

• مقایسه فراوانی DNAی کلامیدیا پنومونیه در مایع مغزی نخاعی بیماران مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس و مقایسه آن با گروه کنترل به روش PCR

سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح کلیه مراکزاموزشی وبهداشتی درمانی کشور که به نحوی باتشخیص ودرمان بیماران مبتلابه مولتیپل اسکلروزیس درارتباط می باشند
تعریف واژه های تخصصی  بیماری مولتیپل اسکلروزیس : بیماری ناتوان کننده که در اثر درگیری ماده سفید مغزی و نخاعی و مخچه ای رخ می دهد و سبب اختلالات حسی ، حرکتی ، تعادلی و بینایی می شود .  سایر بیماری های نورولوژیک : شامل بیماری های نورودژنراتیو مثل آلزایمر ، نوروپاتی محیطی وسودوتومور سربری ( به عنوان گروه کنترل )
نوع مطالعهمطالعه مورد-شاهدی میباشد
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) جامعه موردمطالعه شامل : بیماران مبتلا به مولتیپل اسکلروزیس ثابت شده گروه کنترل شامل : بیماریهای نورودژنراتیو-نوروپاتی محیطی و...می باشد.
حجم نمونه و روش محاسبه آن
تعداد 50 بیمار با تشخیص قطعی بیماری مولتیپل اسکلروزیس با در نظر گرفتن مرحله و نوع بیماری یعنی پیشرونده یا غیر دوره ای تعیین می گردد پس از کسب رضایت نامه کتبی میزان 2 سی سی مایع مغزی نخاعی گرفته می شود و در برودت 80 – درجه سانتی گراد نگهداری می شود ..

گروه کنترل : تعداد 50 بیمار نورولوژیک که به علت بیماری های نورودژنراتیو ( شایعترین آنها آلزایمر ، نوروپاتی محیطی و سودوتومور سربری ) در بخش داخلی اعصاب بستری هستند 2 سی سی مایع مغزی نخاعی گرفته می شود و در فریزر 80 – درجه نگه داری می شود ..

روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)روش نمونه گیری در دسترس واسان میباشد
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)فرم اطلاعاتی ضمیمه شده است.(اخرین صفحه)
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)تهیه نمونه: ابتدا 2 سی سی از نمونه مایع مغزی نخاعی بعد از انجام کارهای روتین داخل یک فایلکن ریخته می شود و به مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی ارسال می شود.در ضمن تمام مشخصات مربوط به بیمار در فرم اطلاعاتی درج می گردد.نمونه در دمای 80- درجه سانتیگراد نگهداری می شوند تا زمانی که تعداد نمونه ها به 50 عدد برسد.سپس از حالت فریز در آورده و مهیا می شوند.P.C.R جهت انجام تست
استخراج DNA: نمونه مایع مغزی نخاعی از80- درجه سانتیگراد در آورده و برای استخراج آماده می شوند بدین صورت که برای استخراج از کیت کیاژن یا اینوتیروژن استفاده می شود.کیت های نامبرده از نمایندگی های داخل کشور تهیه می شوند.
روش انجام P.C.R : استفاده از کیت های آماده که از شرکت ندای فن تهیه می شوند که پرایمرMASTERMIX ومواد مورد نظر جهت انجام P.C.R در خود کیت موجود می باشد. P.C.R و بقیه پروتکل بر اساس دستورالعمل خود کیت انجام می شود و در نهایت جهت حضور باند و یا عدم حضور باند مورد بررسی قرار می گیرند.در صورت نبود کیت بعد از استخراج DNA پرایمرهای مربوط به کلامیدیا بر اساس مقالات دیگر تعیین توالی می شوند و نوع پرایمر از کمپانی مورد نظر خریداری می شود و بعد از تهیه پرایمر مواد مورد نیاز مانند dntp ، PCR buffer ، آنزیمtaq نیز تهیه می شود یا از premix آماده جهت انجام P.C.R استفاده می شود.برنامه به دستگاه ترموسیکلر با روش دستی داده می شود.بر اساس کارهایی که در مقالات دیگر انجام شده است تنظیم میگردد.

روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) داده های کیفی با ازمون کای دو 17 spssبااستفاده از نرم افزار انالیز میگرددو داده های کمی با t student test تست مورد انالیز قرار خواهد گرفت
ملاحظات اخلاقی در این مطالعه پس از تصویب در کمیته اخلاق پزشکی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان براساس مفاد بیانیه هلسینکی و کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی ، هدف از انجام مطالعه به طور کامل برای افراد مورد مطالعه توضیح داده می شود و به طور آگاهانه از بیماران رضایت کسب می گردد (مطابق کد1 کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی )). با توجه به اینکه یکی از راه ها ی تشخیص بیماری مولتیپل اسکلروزیس وجود باند الیگوکلونال در مایع مغزی نخاعی بیماران می باشد لذا انجام پونکسون لومبر پس از کسب رضایت شخصی از بیماران الزامی است و جهت حفظ اصول اخلاق پژوهشی کلیه اطلاعات شخصی بیماران مورد مطالعه محرمانه باقی خواهد ماند (معادل کد17 کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی )بیمار محق می باشد هر زمان مایل بود بدون این که در برخورد پزشک با وی و نحوه درمان او تغییری ایجاد شود از مطالعه خارج گردد.(معادل کد8 کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی ).
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهاعدم همکاری بیماران جهت ال پی و نمونه گیری مایع مغزی نخاعی
کلمات کلیدی MULTIPLE SCLEROSIS . CSF .CHLAMYDIA PNEUMONIAE
فهرست منابع و مراجعREFERENCES: 1-SimonR.P.,Greenberg D.A., Aminoff M.J., Clinical Neurology,7,Mc Grawhill;1999: 165 - 169 . 2-Margaret R. Hammer S. Stephan A. Petra m. Chlamydia pneumonia: In Mandell G.L., Bennet J. E. ,Dolin R. , Infectious Disease ,7 ,CHERCHIL LIVINGSTONE ; 2010 : 2467-2469 . 3-Derfuss T. , Gurkov R. ,Thenberg F. ,et al : Intrathecal antibody production against chlamydia pneumonia in multiple sclerosis is part of a polyspecific immune response .oxford journals medicine Brain ; 124;7 2001: 1325-1335 . 4-Sriram S. , Yao s. , Stratton C. ,et al . : Comparative study of the presence of chlamydia pneumonia in cerebro spinal fluid of patient with clinically definitive and monosymptomatic multiple sclerosis .Clin. Diagn.Lab.Immunol. 9:1332-1337; 2002. 5- SriramS. ,Rose A. ,Yiya S.,WhetsellW.,.:Detection of chlamydial Bodies and Antigens in the Central Nervous System of Patient with Multiple Sclerosis . Journal of infectious disease 192(7) : 1219-1228 ; 2005 . 6-SotgiuS. ,Piana A., Pugliatti M., et al : Chlamydia Pneumonia in the cerebrospinal fluid of patient with multiple sclerosis and neurological controls. Multiple Sclerosis ,7(6):371-4; Des 2001. 7- Bagos P. G., Nikolpoulosg. ,Loannidis A. :Chlamlydia Pneumonia infection and the risk of multiple sclerosis:a meta -analysis. Multiple Sclerosis ,vol. 12 no.4 : 397-411; 2006 . 8 – LowenbergP. ,Grau A. :MS Link to Chlamydia Bacterium Confirmed . American Neurological Association (ANA); July 2011 . 9- Tuan D. ,Claudia B., Stefan B, : Chlamydia Pneumonia Is Frequently Found in Cerebrospinal Fluid of Patients with Multiple Sclerosis .Trends in Microbiology ,vol14,issue 11, 474- 479 ; 2006 . 10- Stratton C. W. ,Wheldon D. B. : Multiple sclerosis : an infectious syndrome involving Chlamydia Pneumoniae . Journal of Infectious Diseases ,vol192,issue 7, 1219-1228 ; 2002 . 11- Gieffers J. , Pohl D. , Treib J. , et al : Presence of chlamydia pneumonia DNA in the cerebrospinal fluid is a common phenomenon in a variety of neurological disease and not restricted to multiple sclerosis .Ann Neurol. ,49(5) , 585-9 ;2001. 12-Contini C. , Seraceni s. , Cultrera R. : Chlamydia Pneumonia Infection an Its Role in Neurological Disorders . InteriscipPerspect Infect Dis.,273-275;2010 . 13-Tondella M. L. ,Galagoda G. : Is Chlamydia Pneumonia Present in Cerebrospinal Fluid of Multiple Sclerosis Patient? ClinicaDiagn Lab Immunol,10(5) ;2003 . 14-Hao Q. , Miyashita N. , Matsui M. , et al . : Chlamydia Pneumonia infection associated with enhanced MRI spinal lesions in multiple sclerosis .Utano National Haspital,kyoto 15- JrH.M. ,Siram S. :An Infectious Basis for Multiple Sclerosis : Perspective on the Role of Chlamydia Pneumonia and Other Agents .BioDrugs ,15(3) ,199- 206 ; 2001. 16 – Aghaei M ., Ashtari F., Bahar M. , et al. : Chlamydia Pneumonia Seropositivity in Iranian Patients with multiple sclerosis: a pilot study . NeurolNeurochir Pol, Mar-Apr,45(2),128-31;2011.

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
skf22E.jpg1391/05/081134544دانلود
skf291.jpg1391/05/081411716دانلود
پاور پوینت پروپوزال دکتر عباسی اماده دفاع.pptx1391/10/05108856دانلود
445.doc1391/10/1192672دانلود
4.jpeg1391/10/13358219دانلود
41.jpeg1391/10/13399577دانلود
نهایی.doc1391/10/13254976دانلود
91.9.22.doc1391/10/1375264دانلود
5395.jpg1392/04/041290383دانلود
5395nameh.png1392/05/234419041دانلود