بررسی ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی و کارسینوم زگیلی(وروکوس کارسینوما) حفره دهان به روش ایمونوهیستوشیمی

Evaluation of MMP-10 protein expression in oral Squamous Cell Carcinoma and Verrucous Carcinoma by immunohistochemical method


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان:

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 5855
عنوان فارسی طرح بررسی ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی و کارسینوم زگیلی(وروکوس کارسینوما) حفره دهان به روش ایمونوهیستوشیمی
عنوان لاتین طرح Evaluation of MMP-10 protein expression in oral Squamous Cell Carcinoma and Verrucous Carcinoma by immunohistochemical method
نوع طرح
محل اجرای طرح زاهدان
رسته مطالعاتی توصیفی- تحلیلی
دانشکده/مرکز دانشکده دندانپزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
حمیده کده دکترای تخصصی h_a_kade@yahoo.com
شیرین سراوانیهمکارمشاوره ایمونوهیستوشیمی نمونه هادکترای تخصصی shirin.saravani@yahoo.com
فاطمه حیدریهمکارمشاوره ایمونوهیستوشیمی نمونه هادکترای تخصصی heydari3688@gmail.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی و کارسینوم زگیلی(وروکوس کارسینوما) حفره دهان به روش ایمونوهیستوشیمی
خلاصه طرح به لاتینEvaluation of MMP-10 protein expression in oral Squamous Cell Carcinoma and Verrucous Carcinoma by immunohistochemical method
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشکارسینوم سلول سنگفرشی ( (Squamous cell carcinoma شایعترین بدخیمی حفره دهان با 94% شیوع میباشد1. این تومور بسیار مهاجم است و تهاجم در آن از طریق تخریب غشا پایه(BM) وماتریکس خارج سلولی (ECM)اتفاق می افتد2. وروکوس کارسینوما یا کارسینوم زگیلی یک شکل از SCC با درجه هیستولوژیک پایین است و از لحاظ میکروسکوپی به طور فریبنده ای نمای خوش خیمی داشته وتوسط رت ریجهای وسیع و طویل مشخص می شود که به سمت بافت همبندی با فشار وارد شده اند و باتولید کراتین فراوان همراه است. 2.از طرفی در 20% موارد در وروکوس کارسینوما، کانون هایی از SCC وجود دارد. به علت تشابه میکروسکوپی، تشخیص این دو ضایعه از یکدیگر در برخی موارد ممکن است مشکل باشد و این در حالی است که درمان انها متفاوت است1.
MMPs یک خانواده پروتئیناز وابسته به روی (Zn) می باشند که در مهاجرت، آنژیوژنز و فعالیت پروتئولیتیک فاکتور های رشد، نقش دارند و جهت بازسازی بافت نرم و تهاجم تومور مورد نیاز هستند. خانواده MMP حداقل 26 عضو دارد که تماما در هسته کاتالیتیک و مولکول روی آن مشترک می باشند4و3.
این خانواده شامل کلاژنازها (MMP-1،MMP-8،MMP-13) با ژلاتینازها (MMP-2،MMP-9)، متالوالاستازها (MMP-12) استروملیزین ها (MMP-11،MMP-10،MMP-3) و ماتری لیزین ها (MMP-2،MMP-26) می باشند6و5و3. سلول های تومورال یا خود MMP ها را تولید می کنند یا سلول های استرومال را به منظور ترشح آنها القاء می کنند7.
MMP-10 یا استروملیزین 2 (ST-2) یکی از اعضای خانواده MMP است8. که درin vitro، ژلاتین، کلاژن نوع 3و4، الاستین، فیبرونکتین و لامینین را تجزیه می کند7.مقادیر بالای ST-2 در تومورهای مختلف، کراتینوسیت ها، ماکروفاژهای الوئولار انسانی، فیبروبلاست ها و کارسینوما های سر و گردن، ریه و کبد نیز یافت شده است. بروز MMP-10 در کراتواکانتوما (شکل Low grade of SCC) نیز یافت شده است8.
اگرچه نقش دقیق آن در طی پیشرفت تومور هنوز شناخته نشده است9 ولی ممکن است در تخریب ماتریکس خارج سلولی در طی پیشرفت تومور و همچنین التهاب نقش داشته باشد8.
به هرحال در مقایسه با دیگر MMP ها مطالعات در مورد بروز MMP-10 در تومورهای مختلف انسانی محدود است.
Deraz و همکارانش در سال 2011، در طی مطالعه ای به بررسی ظهور MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن (HNSCC) به روش ایمونوهیستوشیمی پرداختند و متوجه ظهور بالای MMP-10 در 89 مورد از 116 مورد HNSCC شدند. همچنین میزان ظهور MMP-10 به طور معنی داری در ارتباط با تهاجم و متاستاز در نمونه های HNSCC بود. در نتیجه پیشنهاد دادند که MMP-10 نقش مهمی در تهاجم و متاستاز HNSCC بازی می کند10.
Kren و همکارانش در سال 2006 مطالعه ای تحت عنوان ظهور ماتریس متالوپروتئیناز های 3و 10و11و7 در نئوپلاسم non-small ریه (95 مورد) انجام دادند و چنین نتیجه گرفتند: ظهور بالای MMP-10 و MMP-11 در ارتباط با grade بالاتر تومور و همچنین درگیری لنف نودها بود اما در مورد MMP-3 چنین ارتباطی یافت نشد11.
Impola و همکارانش در سال 2004، به بررسی ظهور افتراقی MMP-7 و MMP-9 و MMP-12 در وروکوس کارسینوما و کارسینوم سلول سنگفرشی پرداختند. در این مطالعه که روی 15 مورد oral SCC، 15 مورد وروکوس کارسینوما (VC) و 13 مورد وروکوس هایپرپلازی انجام شد نتایج نشان داد که ماهیت کمتر مهاجم VC ممکن است در ارتباط با نحوه ظهور MMP ها در آن باشد به طوری که عدم ظهور MMP های 7و9و12 در VC در مقایسه با SCC مشاهده شد2.
Mathew و همکارانش در سال 2002 مطالعه ای تحت عنوان ظهور (ST-2) MMP-10 در SCC مری انسانی انجام دادند. در این مطالعه که روی 50 مورد SCC ناحیه مری انجام شد، ظهور ST-2 در سیتوپلاسم سلول های تومورال و عناصر مزانشیمال در 37 مورد از 50 مورد مشاهده شد. همچنین ارتباط معناداری بین ظهور ST-2 و سایز تومور، تهاجم موضعی تومور و متاستاز دوردست مشاهده شد.8
Dabbous در سال 2002 در طی مطالعه ای به بررسی ظهور MMPs ها در وروکوس کارسینوماهای حفره دهان پرداخت در این مطالعه ظهور MMP های 1و13و2و9و14و3و7 در VC بررسی شد و نتایج نشان داد که ظهور MMP-2 و MMP-14 در اکثر بافت های تومورال مشاهده نشد و واکنش متوسطی در سلول های تومورال و استرومال برای MMP-9 وجود داشت، در نهایت برطبق بروز سایر MMP ها نتیجه گرفتند که MMP های 1و 13و MMP های 3و7 ممکن است نقش کلیدی در رشد VC داشته و ظهور پایین MMP2 ممکن است در پتانسیل غیر متاستاتیک و غیر مهاجم VC شرکت داشته باشد12.
بنابراین با توجه به اینکه مطالعات اندکی در مورد بیولوژی رشد و کارسینوم وروکوس دهانی انجام شده و هنوز نحوه مکانیسم رشد این تومور در لبه های pushing مورد سوال است و از طرفی در مقایسه با دیگر MMP ها مطالعات در مورد بروز MMP-10 در تومورهای مختلف انسانی محدود است، هدف از این مطالعه، مقایسه بروز نشانگر فوق در ضایعات SCC دهان با درجات هیستولوژیک بالا و پایین و کارسینوم وروکوس می باشد تا در مواردی که تشخیص وروکوس کارسینوما از SCC مهاجم مشکل است بتوان از نشانگر فوق کمک جست و همچنین grading دقیق تر SCC را به کمک این مارکر انجام داد.
سوالات و / یا فرضیات پژوهش1. ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی حفره دهان چگونه است؟
2. ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم زگیلی حفره دهان چگونه است؟
3. ظهور پروتئین MMP-10 در 2 گروه مورد مطالعه متفاوت است.
4. بین ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی حفره دهان و grading آن ارتباط وجود دارد.
هدف کلی طرحتعیین ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی و کارسینوم زگیلی(وروکوس کارسینوما) حفره دهان به روش ایمونو هیستوشیمی
اهداف اختصاصی1. تعیین ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی حفره دهان
2. تعیین ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم زگیلی حفره دهان
3. مقایسه ظهور پروتئین MMP-10 در 2 گروه مورد مطالعه
تعیین ارتباط پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی حفره دهان و grading آ
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرحدانشگاه علوم پزشکی زاهدان و سایر دانشگاهها
تعریف واژه های تخصصیایمونوهیستوشیمی: بکار گیری تکنیک ها و اصول ایمونولوژیک در مطالعه سلول ها و بافت ها 13.
MMP-10 : MMP-10 یا استروملیزین 2(ST-2) یکی از اعضای خانواده MMPs (ماتریکس متالوپروتئیناز) که خانواده ای بزرگ از آنزیم های پروتئولیتیک هستند8.
Grading: یک معیار هیستولوژیک بوده و عبارت از درجه شباهت تومور به بافت مادری (اپی تلیوم سنگفرشی) و توانایی آنها در تولید محصولات طبیعی کراتین می باشد1.
نوع مطالعهتوصیفی تحلیلی
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)بلوکهای پارافینی موجود در آرشیو دانشکده دندانپزشکی و بیمارستان خاتم الانبیاء زاهدان
معیارهای ورود:
1.تمامی نمونه هایی که مشخصات پرونده بیمار مربوط به آن، از نظر متغیرهای مورد مطالعه کامل باشد.
2.تمامی بلوکهایی که دارای میزان کافی از ضایعه به منظور رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی باشند.
3.نمونه ها فیکساسیون مطلوب داشته باشند.
4.نمونه ها فاقد نکروز در لام مورد نظر باشند.
5.نمونه هایی که از لحاظ تشخیص میکروسکوپی مورد اتفاق پاتولوژیست های طرح باشد
حجم نمونه و روش محاسبه آنجامعه مورد پژوهش در این مطالعه 45 نمونه بلوک پارافینی(30 عدد Scc و15 عدد Ovc) میباشد.
* بر اساس رفرنس شماره 10 و با در نظر گرفتن p=0/77 و d=0/15 و a=0/05 در این مطالعه، حجم نمونه برای Scc 30 نمونه و برای Vc بر اساس موارد موجود در آرشیو 15 نمونه برآورد می گردد.


فرمول حجم نمونه:
(Z1-α/2)2 × p(1-p) (1/96)2×(0/74)(0/26)
N= = =30
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)روش نمونه گیری برای نمونه های وروکوس کارسینوما(VC) بصورت سرشمار و برای نمونه های کارسینوم سلول سنگفرشی(SCC) بصورت تصادفی می باشد
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)برطبق مشاهده و گزارش توسط پاتولوژیست و همچنین اطلاعات ثبت شده در پرونده بیماران
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)در این مطالعه گذشته نگر توصیفی – تحلیلی که به صورت مقطعی اجرا می گردد 30 نمونه از بلوکهای کارسینوم سلول سنگفرشی دهانی (15 نمونه گرید پایین و 15 نمونه گرید بالا)و 15 نمونه از بلوکهای وروکوس کارسینوماو 8 مورد مخاط طبیعی دهان از حاشیه های سالم بدست آمده ازبیوپسی کامل ضایعات فوق(شاهد داخلی)، موجود در آرشیو دانشکده دندانپزشکی و بیمارستان خاتم الانبیاء استخراج می شود، بعد از بررسی لامهای مورد نظر توسط دو پاتولوژیست و تایید آنها طبق معیارهای ورود و خروج، ابتدا grading در هر نمونه تعیین میشود سپس از بلوکهای پارافینی برشهای 5 میکرونی تهیه شده، برشها را روی لام مخصوص قرار داده و به مدت یک شبانه روز در داخل فور در دمای 37 درجه قرار داده تا دپارافینه شود و در مرحله بعد جهت آبگیری و شفاف سازی لامها را در گزیلل و درجات مختلف الکل سفید قرار داده تا آنتی ژنهای سطحی ظاهر گردد. سپس لامها را در داخل بافر سیترات (PH=6) قرار داده و داخل میکروویو به مدت 5 دقیقه در حالت جوش کامل میگذاریم سپس آنها را داخل بافر سیترات در آورده و داخل PBS(phosphate-buffered saline) با PH برابر 2/7 قرار می دهیم و بطور سلسله وار مراحل رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی را انجام می دهیم . از مارکر (آنتی بادی مونوکلونال) mmp-10 ساخت شرکت Novocastra استفاده می شود و از محلول Diluent جهت رقیق نمودن آنتی بادیها استفاده می شود. جهت اطمینان از صحت رنگ آمیزی برای همه نمونه ها از شاهد مثبت و منفی نیز استفاده می شود.در نهایت لامها توسط پاتولوژیست از لحاظ رنگ آمیزی مارکر فوق بر اساس درصد سلولهای رنگ گرفته بررسی می شوند.زمانیکه هیچ سلولی رنگ نگرفته باشد(-)negative ،(+) low expression کمتر از ده درصد سلول ها رنگ گرفته باشد،(++) moderate expression بین 10-50 درصد سلول ها رنگ گرفته باشد و (+++) intensive expression زمانیکه بیشتر از 50 درصد سلول ها رنگ گرفته باشد(15
روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)بخش توصیفی توسط محاصبه درصد و دامنه اطمینان 95% و بخش تحلیلی توسط آزمون کای دو و همبستگی اسپیرمن بررسی خواهد شد.
میانگین ظهور MMP-10ازلحاظ تعداد سلولهای رنگ گرفته در گروههای مورد مطالعه

نوع ضایعه
میزان ظهور مارکر MMP-10 p-Value
تعداد درصد تعداد درصد
وروکوس کارسینوما
کارسینوم سلول سنگفرشی

ملاحظات اخلاقی کدهای اخلاقی 7 و 17 مربوط به محرمانه نگه داشتن اطلاعات فردی و رعایت حقوق مادی و معنوی عناصر ذیربط رعایت خواهد شد.
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهابا توجه به اینکه ممکن است نمونه های مورد نیاز طرح در آرشیو دانشکده و بیمارستان خاتم الانبیاء موجود نباشند احتمال دارد برای دستیابی به نمونه های باقی مانده نیاز به مراجعه به سایر مراکز باشد.
کلمات کلیدیماتریکس متالوپروتئیناز10، کارسینوم سلول سنگفرشی ، کارسینوم زگیلی MMP-10,Squamous Cell Carcinoma,Verrucous Carcinoma
فهرست منابع و مراجع1-Neville BW, Damm DD, Allen CM, Bouquot JE. Oral & Maxillofacial Pathology 3rd ed. Printed in china: Saunders Elsevier: copy right 2009.P 409.
2-Impola U, Uitto VJ, Hietanen J, Hakkinen L, Zhang L, Larjava H. Differential expression of matrilysin-1 (MMP-7), 92 kD gelatinase (MMP-9), and metalloelastase (MMP-12) in oral verrucous and squamous cell cancer. J Pathol 2004;202(1):14-22.
3- Nanci A. Ten Cates Oral Histology, development, structure, and function. 6th ed. St.Louis: Mosby: 2008. P 35-70,341, 345-385.
4- Adegboyega P, Boromound N, Freeman D. Diagnostic utility of cell cycle and apoptosis regulatory in verrucous squamous carcinoma. Immunohistochem Mol morpho 2005; 13(2): 171-7.
5- Watanabe S, Watanabe R, Oton-Leite AF, Alencar C, Oliveira JC, Leles CR. Analysis of cell proliferation and pattern of invasion in oral squamous cell carcinoma. J Oral Sci 2010; 52(3); 417-424.
6- Egeblad M, Warb Z. New functions for the matrix metalloproteinase in cancer progression. Nat Rev Cancer 2002; 2(3): 161-74.
7- Boyd S, Virolainen S, Parssinen J, Skook T, Hogerlinden M. MMP-10 (Steromelysin-2) and MMP-21 in human and murine squamous cell cancer. Exp Dermatol 2009; 18: 1044-1052.
8-Mathew R, Khanna R, Kumar R, Mathur M, Shakul N, Ralhan R. Steromelysin-2 overexpression in human esophageal squamous cell carcinoma: potential clinical implications. Cancer detect prev 2002; 26 (3): 222-28.
9- Kerkela E, Ala-aho R, Jaskanan L, Lohi J, Grenman R, M-Kahari V,Saarialho-Kere U, Differential patterns of Steromelysin-2 (MMP-10) and MT1-MMP (MMP-14) expression in epithelial skin Cancers. Br J Cancer 2001; 84(5): 659-669s.
10- Deraz E, kudo Y,Yoshida M, Obayashi M, Tsunematsu T, Tani H, et al. MMP-10/Stromelysin-2 Promotes Invasion of Head and Neck Cancer. Plos One 2011; 6(10): e25438.
11-kren L, Goncharuk V, krenova Z, Stratil D, Ross J, et al. Expression of Matrix Metalloproteinases 3, 10 and 11 (Stromelysins 1, 2 and 3) and Matrix Metalloproteinase 7 (Matrilysin) by Cancer Cells in Non-Small Cell Lung Neoplasms. Clinicopathologic Studies. Ces.-slov Patol 2006; 42(1), p 16–19.
12-Dabbous M, EL-Torky M, Haney L. Matrix metalloproteinases(MMPs) in verrucous carcinoma of the oral cavity. Oral cancer- Pathology and epidemiology 2002;212.
13- Rosai J. Ackerman's Surgical pathology. 9th ed. Edinburgh London: Mosby Co; 2004. P 45-50.
14-Barros SS, Henriques AC, Pereira KM, Medeiros AM, Galvao HC, Freitas A. Immunohistochemical expression of matrix metalloproteinases in squamous cell carcinoma of the tongue and lower lip. Arch Oral Biol 2011;56(8):752-760.

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
2[1].jpg1391/11/01173562دانلود
صورتجلسه شورای پژوهش دانشکده مورخ 92و3و20.docx1392/04/1753856دانلود
دکتر کده.doc1392/04/17286208دانلود
5855.jpg1392/06/311113259دانلود