تعیین وضعیت بالانس عوامل پرو اکسیدانت وآنتی اکسیدان ورابطه آن با سطح سرمی مس ،روی ،آهن ونسبت روی /مس در بیماران مبتلا به لیشمانیازیس پوستی در بیمارستان امام رضا(ع) مشهد و بیمارستان بوعلی زاهدان در سال 1392

To Investigate Proxidant and Antioxidant balance and its relationship with serum levels of Copper,Iron , Zinc and Zinc/ Copper ratio in patients with Cutaneous Leishmaniasis In Emam Reza Hospital ,Mashhad,IR. And Buali Hospital Zahedan ,IR, 1392


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان:

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 5870
عنوان فارسی طرح تعیین وضعیت بالانس عوامل پرو اکسیدانت وآنتی اکسیدان ورابطه آن با سطح سرمی مس ،روی ،آهن ونسبت روی /مس در بیماران مبتلا به لیشمانیازیس پوستی در بیمارستان امام رضا(ع) مشهد و بیمارستان بوعلی زاهدان در سال 1392
عنوان لاتین طرح To Investigate Proxidant and Antioxidant balance and its relationship with serum levels of Copper,Iron , Zinc and Zinc/ Copper ratio in patients with Cutaneous Leishmaniasis In Emam Reza Hospital ,Mashhad,IR. And Buali Hospital Zahedan ,IR, 1392
نوع طرح
محل اجرای طرح دانشگاه علوم پزشکی زاهدان
رسته مطالعاتی توصیفی- تحلیلی
دانشکده/مرکز دانشگاه علوم پزشکی
زمان اجرا -روز

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
ناصر کریمیانهمکار karimiantn1@mums.ac.ir
عادل ابراهیم زادهمجری اول دکترا(p.h.d)
داریوش حمیدیمجری دوممشاور طرح dhamiialam@mums.ac.ir
لیدا جراحیمشاوراستاد مشاور jarahil@mums.ac.ir
بیتا کیافرمشاوراستاد مشاور kiafarb@mums.ac.ir

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی تعیین وضعیت بالانس عوامل پرو اکسیدانت وآنتی اکسیدان ورابطه آن با سطح سرمی مس ،روی ،آهن ونسبت روی /مس در بیماران مبتلا به لیشمانیازیس پوستی در بیمارستان امام رضا(ع) مشهد و بیمارستان بوعلی زاهدان در سال 1392
خلاصه طرح به لاتینTo Investigate Proxidant and Antioxidant balance and its relationship with serum levels of Copper,Iron , Zinc and Zinc/ Copper ratio in patients with Cutaneous Leishmaniasis In Emam Reza Hospital ,Mashhad,IR. And Buali Hospital Zahedan ,IR, 1392
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش( Cutaneus Leishmaniasis (CL بیماری عفونی مزمن وگرانولوماتوزی است که حاصل آسیب وارده به پوست توسط پارازیت Leishmania است.ROS و RNS تولیدی طی پاسخ التهابی ،اولین ومهمترین مسیر دفاعی میزبان علیه پارازیت مهاجم است(1). این بیماری خاص مناطق گرمسیر ونیمه گرمسیر است وتکثیر پارازیت در ماکروفاژهای میزبان موجب ظهور زخم های پوستی ویا مخاطی می شود که اغلب اثر این زخم ها باقی می ماند(2). می توان گفت که بروز CL وبروز سرطان به خصوص سرطان های Basal-cell و Squamous-cell با هم مرتبط هستند و ابتلا به CL می تواند زمینه ساز ابتلا به این نوع سرطان ها باشد(3-7).تعداد زیادی از سلول های التهابی طی آلودگی انگلی داخل ویا خارج سلولی فعال وموجب القاء وفعال شدن آنزیمهای تولید کننده عوامل اکیسدان می شوند(8و9).از جمله این آنزیم ها می توان NADPH اکسیداز وگزانتین اکسیداز را نام برد که موجب تولید آنیون سوپراکسید، نیتریک اکسیداز القایی ( iNOS ) که از آرژنین NO● تولید می کند و میلوپراکسیداز که از سوبستراهای H2O2 و یون کلرید ، HOCl تولید می کند، می شوند.با حمله پارازیت به بافت، EPO (ائوزینوفیل پراکسیداز ) فعال و از H2O2 ویون برماید ، HOBr ( هیپوبروموس اسید ) تولید می کند(10).آنزیم SOD از Znبرای تثبیت واز Cu برای فعالیت آنتی اکسیدانی خود علیه رادیکال های آزاد اکسیژنی (ROS) بهره می گیرد(11). افزایش سطح سرمی Cu با تحریک تولید ROS والقاء تغییرات پاتولوژیک در بافت ها، باعث آسیب بافتی می شود(12). گونه های Leishmaniasis به رادیکال های آزاد درون سلولی مثل سوپراکسید ،هیدروژن پراکسید ، نیتریک اکسید وپراکسی نیتریت حساس هستند ولی با مکانیسم های متفاوتی مثل غشای لیپوفسفوگلیکانی که مهار کننده تولید NADPH اکسیداز (تولید کننده رادیکال سوپراکسید) ویا بیان آنزیم ها وپروتئین های با خاصیت آنتی اکسیدانی، خود را از اثر سیستم دفاعی ماکروفاژی میزبان حفظ می کنند(12,13).تغییرات سطح سرمی آهن،روی ومس نشان دهنده بروز التهاب وعفونت در بدن است که همراه با افزایش سطح پروتئین های فاز حاد مثل سرولوپلاسمین است(16)Zn.، کوفاکتور بیش از 200 آنزیم دخیل در فرایندهای متابولیک،ایمنی وترمیم زخم است(17).Cu، از املاح ضروری غذایی است که کوفاکتور متالوآنزیم های مسئول متابولیسم اکسیداتیو مثل سیتوکروم اکسیداز، فروکسیداز، آمینواسیداز، سوپراکسید دیسموتاز،آسکوربیک اسید اکسیداز وتیروزیناز است وFe درتشکیل ساختار هموگلوبین واکسیداسیون بافتی دخیل است(16). Abdurrahim Kocyigit وهمکاران در سال 2005 با اندازه گیری میزان (PC) پروتئین کربونیل پلاسما ،(MDA) مالون دی آلدئید ، (TP) پراکسید توتال و Total Antioxidant Responces (TAR)،افزایش معنی دار این ترکیبات را در بیماران مبتلا به CL اعلام کردند.همچنین در این مطالعه رابطه مستقیمی بین سطح MDA پلاسمایی و آسیب DNA ورابطه منفی بین سطح TAR و TP مشاهده شد.رابطه معکوس بین TAR و TP وافزایش عوامل اکسیدان موجب آسیب اکسیداتیو سلولها وبافت ها در این بیماران می شود(1).در مطالعه دیگری روی بیماران مبتلا به (VL (Visceral Leishmaniasis حاد ومزمن، توسطChandra S. Lal وهمکاران در 2012 ،کاهش میزان Zn و Fe سرمی در گروه مزمن ،افزایش Mg سرمی گروه مزمن ، افزایش Cu در دو حالت حاد ومزمن مشاهده شد(12).آنزیم های دخیل درپاسخ ایمنی بدن مثل SOD ,CAT و GSH-Px عمدتا برای عمل خود به Zn و Cu نیاز دارند( 14). Kocyigit A. و همکارانش در سال 1998 کاهش میزان Fe و Zn سرمی و افزایش Cu را در بیماران مبتلا به CL مطرح کردند(15).در سال 2009، F.Pourfallahوهمکارانش با مطالعه میزان سرمیZn،Fe وCu ونسبت Cu/Zn در 60 بیمار مبتلا به CL متوجه کاهش Zn ،Fe ونسبت Cu/Zn سرمی و افزایش Cu سرمی شدند.نسبت Cu/ Zn معیاری از توان سیستم ایمنی در کنترل وسرکوب عفونت در CL است.کاهش سطح سرمی Zn به علت افزایش بیوسنتز متالوآنزیم های کبدی وبافتی وافزایش Cu سرمی همراه با افزایش سنتز سرولوپلاسمین است.کاهش سطح سرمیCu در جریان بیماری های مزمن التهابی با افزایش فعالیت مسیرهای مرتبط با TNF-α و IL-6 و مهار مسیر NF-ΚB همراه است(16).Huseyin Vurl وهمکاران درسال 2004 ,با مطالعه نسبت عوامل اکسیدان به آنتی اکسیدان در 70بیمار مبتلا به CL ، از طریق مقایسه میزان پراکسیداسیون لیپیدی LPO (معیار تشخیص وضعیت اکسیداسیون بدن) ومیزان کاهش GSH ، GSH-PX و سطح سرمی ویتامین C (معیار تشخیص وضعیت آنتی اکسیدانی بدن) ،متوجه افزایش LPO و GSH وکاهش GSH-PX و ویتامین C ،بروز شرایط استرس اکسیداتیو و فعال شدن سیستم آنتی اکسیدانی بدن ،برهم خوردن تعادل اکسیدان –آنتی اکسیدان و در نتیجه افزایش oxidative–antioxidative status in human cutaneous leishmaniasis, Cell Biochem Funct 2004; 22: 153–156.
[20] Kocyigit A, Gur S, Erel O, Gurel MS. Associations among plasma selenium, zinc, copper, and iron concentrations and immunoregulatory cytokine levels in patients with cutaneous leishmaniasis. 2002 Winter;90(1-3):47-55
[21] Kocyigit A, Erel O, Gurel MS, Avci S, Aktepe N. Alterations of serum selenium, zinc, copper, and iron concentrations and some related antioxidant enzyme activities in patients with cutaneous leishmaniasis. 1998 H2O2)


Standard 2 (75% Uric acid) (25% H2O2)


Standard 3 (50% Uric acid) (50% H2O2)


Standard 4 (25% Uric acid) (75% H2O2)


Standard 5 (0% Uric acid) (100% H2O2)


مرحله 5-


پس از انکوباسیون ، µl 50 از HCl 2 نرمال را به چاهک اضافه می شود.


مرحله 6-


توسط دستگاه الایزا ریدر در طول موج 450nm جذب هر یک از چاهک های پلیت الایزا خوانده می شود.


از جذب های بدست آمده نمونه های استاندارد H2O2 0%,25%,50%,75,100% ) و (Uric acid 0%,25%,50%,75,100%


با غلظت های معین، منحنی استانداردی به دست می آید که توسط این منحنی می توان غلظت نمونه های سرمی با جذب های خوانده شده در طول موج 450nm را مشخص پراکسیداسیون لیپیدی و پیشرفت بیماری شدند(19). در سال 2002 ،Kocyigit A. وهمکارانش ،با بررسی اثر سایتوکاین های تنظیم کننده سیستم ایمنی شامل IL-1β ، IL-2r ، IL-8 و TNF-α بر سطح سرمی Se(سلنیوم)، Zn ، Cu و Fe در بیماران CL،وهمچنین اندازه گیری وکنترل سطح پلاسمایی آلبومین جهت تعیین وضعیت تغذیه ای بیماران ، متوجه کاهش معنی دار میزان Se ، Zn ، Fe و IL-2r وافزایش معنی دار Cu ، IL-1β ،IL-6 ، IL-8 و TNF-α شدند(20).Kocyigit A وهمکارانش در 1998 به مطالعه تغییرات سرمی Se ،Zn ، Cu ، Fe وپروتئین های حامل آنها مثل سرولوپلاسمین (Cp )،ترانسفرین (Tf)، وآلبومین وفعالیت آنزیم های آنتی اکسیدانی مرتبط با این پروتئین ها در بیماران CL ،پرداختند وحاصل این تحقیق تعیین افزایش غلظت سرمی Cu ، CP ، وافزایش فعالیت آنزیم SOD وکاهش فعالیت GSH-Px ، CAT ، وکاهش مقادیر سرمی Se ، Zn ، Fe و Tf در این بیماران بود(21).با توجه به اینکه در مطالعات انجام گرفته تا به حال به صورت مجزا وگزینشی فقط روی برخی ترکیبات اکسیدان وآنتی اکسیدان وتعادل آنها در بیماران CL ورابطه آنها با سطح سرمی املاح ضروری بدن شامل Zn، Cu ، Fe و... پرداخته اند ومعیار مشخصی از تعادل کلی بین عوامل اکسیدان- آنتی اکسیدان ورابطه آن با سطح املاح ضروری بدن وتاثیر این رابطه بر وضعیت درمان این بیماران در دسترس نیست ،لذا در این تحقیق هدف تعیین سطح بالانس جامع بین عوامل اکسیدان- آنتی اکسیدان ورابطه آن با سطح املاح ضروری بدن واستفاده از یافته های این مطالعه در کنترل درمان،تعیین نوع درمان مکمل ومناسب وتسریع وبهبود روند درمان این گروه از بیماران می باشد.نمود.


Dec;65(3):271-81
سوالات و / یا فرضیات پژوهش1) نسبت عوامل پرواکسیدانت- آنتی اکسیدان در جمعیت مورد مطالعه در مقایسه با گروه کنترل سالم چگونه است؟

2) سطح عوامل پرو اکسیدانت –آنتی اکسیدان بر حسب سطح سرمی مس،آهن ،روی ونسبت روی / مس در گروه بیمار بر حسب ابعاد زخم سالک چگونه است؟
3) سطح عوامل پرو اکسیدانت –آنتی اکسیدان بر حسب سطح سرمی مس،آهن ،روی ونسبت روی / مس در گروه بیمار بر حسب مدت ابتلا چگونه است؟
4) سطح عوامل پرو اکسیدانت –آنتی اکسیدان بر حسب سطح سرمی مس،آهن ،روی ونسبت روی / مس در دو گروه بیمار و سا لم چگونه است؟
5) مقدار و جهت (کاهشی- افزایشی –بدون تغییر ) تغییرات مارکرهای سرمی مس، آهن ، و نسبت روی / مس در جمعیت مورد مطالعه و مقایسه با گروه کنترل سالم چگونه است؟
هدف کلی طرح:: تعیین وضعیت بالانس عوامل پرو اکسیدانت وآنتی اکسیدان ورابطه آن با سطح سرمی مس ،روی ،آهن ونسبت روی/ مس در بیماران مبتلا به لیشمانیازیس پوستی در مرکز آموزشی، پژوهشی ودرمانی امام رضا(ع) مشهد و بیمارستان بوعلی زاهدان در سال 1392
اهداف اختصاصی1. نسبت عوامل پرواکسیدانت- آنتی اکسیدان در جمعیت مورد مطالعه در مقایسه با گروه کنترل سالم
2. تعیین سطح عوامل پرو اکسیدانت –آنتی اکسیدان در دو گروه بیمار و سالم بر حسب سطح سرمی مس،آهن ،روی ونسبت روی / مس با احتساب ابعاد زخم سالک در گروه بیمار
3. تعیین سطح عوامل پرو اکسیدانت –آنتی اکسیدان بر حسب سطح سرمی مس،آهن ،روی ونسبت روی / مس در دو گروه بیمارو سالم با احتساب مدت ابتلا در گروه بیمار
4. تعیین سطح عوامل پرو اکسیدانت –آنتی اکسیدان بر حسب سطح سرمی مس،آهن ،روی ونسبت روی / مس در دو گروه بیمار و سا لم
5. تعیین مقدار و جهت (کاهشی- افزایشی –بدون تغییر ) تغییرات مارکرهای سرمی مس، آهن ، و نسبت روی / مس در جمعیت مورد مطالعه و مقایسه با گروه کنترل سالم
تعریف واژه های تخصصیاکسیداسیون: واکنشی که طی آن الکترون ویا هیدروژن از یک سوبسترا به یک ترکیب اکسید کننده (اکسیدان ) منتقل وباعث تولید رادیکال آزاد وشروع واکنش های زنجیره وار مخرب وکشنده سلولی می شود.
عوامل پرو اکسیدانت: رادیکال سوپراکسید -● O2،هیدروژن پراکسید H2O2 ، رادیکال هیدروکسیل● HO ،هیپوکلریت OCl، رادیکال آلکوکسی● RO ، رادیکال پراکسی● ROO ، هیدروپراکسید آلی ROOH ، پراکسی نیتریت- ONOO
آنتی اکسیدان : مولکولی که واکنش اکسیداسیون سایر مولکول ها را که توسط عوامل اکسیدان القاء می شود ، مهار می کند مثل گلوتاتیون، ویتامین A، ویتامین E ، وآنزیم های سوپراکسید دیسموتاز SOD ، کاتالاز وپراکسیدازها.
لیشمانیازیس پوستی: بیماری خاص مناطق گرمسیر ونیمه گرمسیری که با حمله گونه های مختلف پارازیت Leishmania به بافت پوست ، موجب تشکیل زخم در این بافت می شود
نوع مطالعه مورد- شاهدی
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)
مورد: بیماران مبتلا به لیشمانیازیس پوستی مراجعه کننده به بیمارستان امام رضا (ع) مشهد و بیمارستان بوعلی زاهدان
کنترل: داوطلبین سالم که از نظر جنس و سن به صورت گروهی همسان شده باشند.


ورود:
1.بیماران مبتلا به آلودگی انگل لیشمانیا که حداکثر6 هفته از مدت ابتلا آنها به بیماری گذشته باشد.
2.بیماران دارای زخم های Nodular ویا Nodulo- ulcerative.
.3 افراد مبتلا تحت هیچ گونه درمان Systemic Antimonial ، Intralesional ویا مکمل ویتامینی – املاح قرار نگرفته باشند.
خروج:
1. باردار بودن افراد شامل طرح
2. استفاده از هر گونه مواد مخدر ودخانی
3. ابتلا به سایر عفونت های باکتریایی ، انگلی و ویروسی
حجم نمونه و روش محاسبه آنبا توجه به رفرنس شماره21 ( معیار تعیین حجم نمونه با توجه به رفرنس تعیین میزان Cu و Znدر سرم می باشد.) و استفاده از فرمول آزمون دو میانگین مربوط به یک صفت کمی در دو جامعه مستقل با درنظرگیری بتای 0.1 و آلفای 0.01 و میانگین 1310 و 1116 و انحراف معیار 184 و 220 تعداد 40 نفر در هر گروه تعیین شد که به تعداد 70 نفر در هر گروه افزایش داده شد.



alfa= 0.01 Z1-a/2= 2.578289751

Beta= 0.1 Z1-B= 1.281555798

μ1= 1300

μ2= 1116

SD1= 184

SD2= 220 n= 37

روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) نمونه گیری در دسترس
افراد موردنظر ازبین بیماران CLمراجعه کننده به بخش پوست بیمارستان امام رضا(ع) مشهد و بمارستان بوعلی زاهدان که حداکثر 6 هفته از ابتلای آنها به بیماری می گذرد، با تشخیص پزشک مبنی برآلودگی به انگل Leishmania.l.tropica به صورت نمونه گیری در دسترس و افراد کنترل از بین افراد سالم داوطلب همسان شده از لحاظ سن وجنس انتخاب می شوند. افراد مورد، ابتدا انتخاب می شوند و سپس همسان سازی سنی و جنسی به صورت گروهی (افراد از لحاظ جنس: زن ومرد، و سن : سه گروه سنی کودک، جوان و پیر ، در دوگروه مورد وشاهد همسان می شوند) برای انتخاب افراد گروه شاهد انجام می شود. افراد گروه شاهد از بین مراجعان به بخش پوست بیمارستان امام رضا(ع) مشهد و بیمارستان بوعلی زاهدان که مبتلا به سا لک نباشند انتخاب می شوند
از افراد مراجعه کننده به درمانگاه پس از تشخیص پزشک و کسب معیارهای ورود و پرکردن پرسشنامه ورضایتنامه شرکت در طرح ، نمونه زخم و خون تهیه می شود.
افراد کنترل از بین افراد سالم و پس از پرکردن پرسشنامه ورضایتنامه شرکت در طرح، نمونه خون تهیه می گردد.

تهیه نمونه از زخم ها جهت تشخیص گونه انگلی:
ابتدا محل زخم با اتانول 96% ضدعفونی و از حاشیه زخم با لانست تمیز واستریل نمونه جدا می شود. از نمونه ها اسمیر تهیه و اسلایدها در دمای آزمایشگاه خشک و سپس با متانول تثبیت شده ،با رنگ Geimsa رنگ آمیزی و وبا میکروسکوپ مشاهده می شوند.
تهیه نمونه سرم:
1-از بیماران با ناشتایی شبانه،10 ml خون ورید براکیال جمع آوری ودر 3000 rpm به مدت 10 دقیقه سانتریفوژ می شوند.نمونه های سرمی در میکروتیوپ های 1.5 ml تفکیک ودر فریزر -80 0c تا زمان انجام تست های روی، آهن ،مس ،نسبت روی / مس ونسبت عوامل پرواکسیدانت- آنتی اکسیدان نگه داری می شوند.
2- برای تعیین سطح سرمی املاح مس ،روی وآهن از روش های بیوشیمیایی(دستگاه اتوآنالایزر و کیت مربوطه ) استفاده می شود.
3- جهت تعیین نسبت عوامل پرو اکسیدانت – آنتی اکسیدان از روش PABاستفاده می شود.

روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)افراد موردنظر ازبین بیماران CLمراجعه کننده به بخش پوست بیمارستان امام رضا(ع) مشهد و بمارستان بوعلی زاهدان که حداکثر 6 هفته از ابتلای آنها به بیماری می گذرد، با تشخیص پزشک مبنی برآلودگی به انگل Leishmania.l.tropica به صورت نمونه گیری در دسترس و افراد کنترل از بین افراد سالم داوطلب همسان شده از لحاظ سن وجنس انتخاب می شوند


روش اندازه گیری بالانس پرو اکسیدانت و آنتی اکسیدانت :به روش PAB ( Prooxidant–Antioxidant Balance)(18)


مواد و محلولهای لازم


1- پودر TMB (3و3و5و5 تترا متیل بنزیدین ):


2- آنزیم پراکسیداز 230U/mg


3- کلرامین T تری هیدرات (Chloramine T trihydrate )


4- پراکسید هیدروژن30% (H2O2 ):


5- DMSO (دی متیل سولفوکساید):


6- بافر استات سدیم pH=5.8) 0.05M و pH=4.5)


7- اسید اوریک Uric acid)):


اساس کار :


بالانس پرو اکسیدانت - آنتی اکسیدانت توسطTMB در دو واکنش مختلف:


1- واکنش آنزیمی که کروموژن توسط پراکسیدها (در این آزمایش H2O2) به TMB کاتیون دار اکسید می شود.


2- واکنشی که TMB + (کاتیون دار) توسط آنتی اکسیدانها ( در این آزمایش اسید اوریک ) احیا می شود.











TMB TMB+
































روش کار :


مرحله 1-


60 میلی گرم پودر TMB را در DMSO 10ml حل کرده تا محلول DMSO /TMB بدست آید. سپس جهت محلول TMB کاتیون دار


( (TMB+ 1 mll از محلول بالا را به 50ml بافر استات سدیم( pH=4.5, 0.05M ) اضافه می کنیم.


175ul از محلول کلرامینT تازه تهیه شده (100mM) به 50ml از این محلول اضافه شده و خوب مخلوط می گردد و به مدت 1 ساعت در دمای 37 درجه در تاریکی انکوبه می گردد.


مرحله 2-


16.25 µlاز محلول آنزیم پراکسیدازبه 50ml محلول TMB کاتیون دار اضافه کرده و 1cc در میکروتیوپ ها توزیع می شود و در دمای 20 نگهداری می شود.


مرحله 3-


برای تهیه محلول 200ml ,TMB از محلول DMSO /TMB به 10ml بافر استات سدیم ( pH=5.6, 0.05M )اضافه کرده و سپس 1ml از محلول TMB کاتیون دار دارای آنزیم پراکسیداز (محلول مرحله 2) را با 10ml از محلول TMB مخلوط کرده و و فورا استفاده می شود.


مرحله 4-


10µl از هر نمونه سرمی، استاندارد یا بلانک (آب مقطر ) با 200µl از این محلول ( محلول مرحله 3) مخلوط شده و در چاهک های الایزا به طریق شکل زیر تزریق شده و به مدت 12 دقیقه در دمای 37 در تاریکی انکوبه می شود.


Sample 6


Sample 2 Blank A


Sample 6


Sample 2 Standard


0%H2O2


100%Uric acid B


Sample 7


Sample 3


Standard


25%H2O2


75%Uric acid C


Sample 7


Sample 3


Standard


50%H2O2


50%Uric acid D


Sample 8


Sample 4


Standard


75%H2O2


25%Uric acid E


Sample 8


Sample 4


Standard


100%H2O2


0%Uric acid F


Sample 8


Sample 5


Sample 1 G


Sample 8


Sample 5


Sample 1 H















































طرز تهیه محلول استاندارد:


محلول استاندارد شامل در صدی از پر اکسید هیدروژن 250mM و اسید اوریک 3mM در 10mm سود می باشد.


Uric acid 3mM in NaOH 10mM


H2O2 250mM


Standard 1 (100% Uric acid) (0%
روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)داده های به دست آمده وارد نرم افزار SPSS شده و توسط جداول توزیع فراوانی و شاخص های پراکندگی و مرکزی توصیف می شوند. مقایسه متغیرهای کیفی با آزمون کای اسکوئر انجام می شود. برای تحلیل داده های کمی در دو گروه از تست تی استفاده می گردد. مقایسه متغیرهای کمی با آزمون همبستگی پیرسون انجام می شود. در صورت نرمال نبودن داده های متغیرهای کمی از آزمون های معادل ناپارامتری استفاده می شود. سطح معنی داری PV<0.05در نظر گرفته می شود.
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهاهمسان کردن افراد از نظر سن وجنس مشکل است که با گذشت زمان ودرگیر کردن افراد بیشتر، در طرح قابل رفع است .
جلب رضایت افراد مورد برای گرفتن نمونه خون وزخم وافرد سالم برای گرفتن نمونه خون مشکل است که با گذشت زمان ودرگیر کردن افراد بیشتر، در طرح قابل رفع است.
کلمات کلیدیاکسیداسیون- عوامل پرو اکسیدانت- آنتی اکسیدان- لیشمانیازیس پوستی
Oxidation reaction- Proxidant agents- Antioxidants - Cutaneous Leishmaniasis
فهرست منابع و مراجع
[1] Abdurrahim Kocyigit, Huseyin Keles, Sahbettin Selek, Salih Guzel,Hakim Celik, Ozcan Erel,Increased DNA damage and oxidative stress in patients with cutaneous leishmaniasis, Mutation Research 585 (2005) 71–78
[2] M.N. Sotto, E.H. Yamashiro-Kanahiro, V.L. da Matte, T. de Brito, Cutaneous leishmanisis of the new world: diagnostic immunopathology and antigen pathway in skin and mucosa,
Acta Trop. 46 (1989) 121–130
[3] S. Suster, M. Ronnen, Basal cell carcinoma arising in a leishmania scar, Int. J. Dermatol. 27 (1988) 175–176.
[4] D. Friedman, R.S. Hanson, L.H. Golberg, Squamous cell carcinoma arising in a leishmania scar, Dermatol. Surg. 29 (2003)1148–1149.
[5] E. Kargi, E. Gungor, G. Aslan, B. Erdogan, Epidermoid carcinoma in cutaneous leishmaniasis scar, Ann. Plast. Surg. 46(2001) 657–658.
[6] T.A. Morsy, A.M.Mangoud, S.M. al Seghayer, Cutaneous leishmaniasis and basal cell carcinoma in a patient from Al Baha,Saudi Arabia, J. Egypt. Soc. Parasitol. 22 (1992) 167–170.
[7] P. Kopterides, S. Halikias, N. Tsavaris, Visceral leishmaniasis masquerading as myelodysplasia, Am. J. Hematol. 74 (2003) 198–199.
[8] K.R. Gantt, T.L. Goldman, M.L. McCormick, M.A. Miller,S.M.B. Jeronimo, E.T. Nascimento, B.E. Britigan, M.E. Wilson,Oxidative response of human and murine macrophages during phagocytosis of Leishmania chagasi, J. Immunol. 167(2001) 893–901.
[9] H.W. Murray, R.F. Teitelbaum, l-arginine-dependent reactive nitrogen intermediates and the antimicrobial effect of activated human mononuclear phagocytes, J. Infect. Dis. 165 (1992)513–517.
[10] V. Wu, Y. Chen, A. d’Avignon, S.L. Hazen, 3-Bromotyrosine and 3,5-dibromotirosine are major product of protein oxidation by eozinophil peroxidase: potential markers for eozinonophildependent tissue injury in vivo, Biochemistry 23 (1999)3538–3548.
[11] Panemangalore M, Bebe FN. Effect of high dietary zinc of plasma ceruloplasmin and erythrocyte superoxide dismutase activities in copper-depleted and repleted rats. Biol Trace Elem Res 1996;55(1–2):111–26.
[12]Chandra S. Lal a, , Sanjay Kumara , Alok Ranjanb , Vidya N. Rabidasc , Neena Vermad Krishna Pandeyc ,Rakesh B. Vermab, Sushmita Dase, Dharmendra Singhe, Pradeep Dase, Comparative analysis of serum zinc, copper, magnesium, calcium and iron level in acute and chronic patients of visceral leishmaniasis, Journal of Trace Elements in Medicine and Biology xxx (2012) xxx–xxx,JTEMB-25423; No. of Pages 5(Article in press)
[13] Barber EF, Cousins RJ. Interleukin-1 stimulated induction of ceruloplasmin synthesis in normal and copper-deficient rats. J Nutr 1988;118:375–81.
[14] Amini M, Nahrevian H, Khatmi S, Farahmand M, Mirkhani F, Javadian S. Biochemical
association between essential trace elements and susceptibility to Leishmania major in BALB/c and C57BL/6 mice. Braz Infect Dis 2009;13(April(2)):83–5.
[15]Kocyigit A, Erel O, Seyrek A, Gurel MS, Aktepe N, Avci S, et al. Effects of antimonial therapy on serum zinc, copper and iron concentrations in patients with cutaneous leishmaniasis. Eastern J Med 1998;3(2):58–61.
[16] F Pourfallah, S Javadian, Z Zamani, R Saghiri, S Sadeghi, B Zarea, Sh Faiaz,F Mirkhani, N Fatemi, Evaluation of Serum Levels of Zinc, Copper, Iron, and Zinc/Copper Ratio in Cutaneous Leishmaniasis, Iranian J Arthropod-Borne Dis, (2009), 3(2): 7-11
[17] Tudor R, Zalewski PD, Ratnaike RN ,Zinc in health and chronic disease. J Nutr Health Aging. (2005) 9(1): 45-51.
[18] Daryoush Hamidi Alamdari a , Majid Ghayour-Mobarhan , Shima Tavallaie,Mohammad Reza Parizadeh, Mohsen Moohebati, Fahimeh Ghafoori ,Seyyed Mohammad Reza Kazemi-Bajestani, Konstantinos Paletas, Theodosia Pegiou ,George Koliakos a, Prooxidant–antioxidant balance as a new risk factor in patients with angiographically defined coronary artery disease, Clinical Biochemistry xx (2008) xxx–xxx
[19] Huseyin Vural, Nurten Aksoya, Hatice Ozbilge, Alterations of

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
پرسشنامه.docx1391/12/2317723دانلود
Picture 609.jpg1391/12/23194456دانلود
Picture 610.jpg1391/12/23268834دانلود
1-s2.0-S0009912007004882-main.pdf1391/12/23213406دانلود
100424.pdf1391/12/232643383دانلود
BAP ( dr.hamidi).pdf1391/12/23242609دانلود
Se and PAB.pdf1391/12/2398169دانلود
statin 1.pdf1391/12/23448638دانلود
The influence of copper, selenium and zinc.pdf1391/12/23306320دانلود
science.pdf1391/12/23430498دانلود
فرم رضایت آگاهانه شرکت در طرح تحقیقاتی.doc1392/02/2589600دانلود
نهایی.docx1392/03/062981173دانلود
92.1.28.doc1392/03/0679872دانلود
5870.png1392/04/096948362دانلود