چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 6002 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی پلی مورفیسم miRNA-499 rs3746444 در بیماران مبتلا به سل ریوی در مقایسه با افراد سالم |
| عنوان لاتین طرح | Evaluation of miRNA-499 rs3746444 gene polymorphism in pulmonary tuberculosis and healthy subjects |
| نوع طرح | |
| محل اجرای طرح | مدیریت توسعه فناوری سلامت |
| رسته مطالعاتی | مورد شاهدی |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| پریسا خورگامی | همکار | khorgamip@yahoo.com | ||
| محمد نادری | مجری | استاد راهنما | دکترای تخصصی | naderi597@gmail.com |
| محمد هاشمی | مشاور | مشاور طرح | دکترا - PHD | mhd.hashemi@gmail.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | بررسی پلی مورفیسم miRNA-499 rs3746444 در بیماران مبتلا به سل ریوی در مقایسه با افراد سالم |
| خلاصه طرح به لاتین | Evaluation of miRNA-499 rs3746444 gene polymorphism in pulmonary tuberculosis and healthy subjects |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | توبرکلوزیس بیماریی است که توسط مایکوباکتریوم توبرکلوزیس ایجاد می شود. در سال 1993 ( WHO) world health organization توبرکلوزیس را به عنوان یک اورﮊانس سلامت عمومی اعلام کرد. امروز نیز توبرکلوزیس همچنان یک مشکل سلامت عمومی عمده محسوب می شود. توبرکلوزیس می تواند هر ارگانی را درگیر کند, اما عمدتًا ریه ها با تشکیل گرانولوما درگیرمیشوند. مایکوباکتریوم توبرکلوز از خانواده مایکوباکتریاسه است که میتواند سبب بیماری در انسان و حیوانات شود. (1) تقریباً یک سوم جمعیت جهان ( دو میلیارد نفر ) به میکروب سل آلوده و در خطر ابتلا به بیماری سل قرار دارند. هر ساله حدود 9 میلیون نفر به سل فعال مبتلا شده و حدود 5/1 میلیون نفر در اثر این بیماری جان می سپارند. بیش از 90 درصد موارد بیماری و مرگ ناشی از سل در کشورهای در حال توسعه رخ می دهد. کشورهایی که 75 درصد موارد بیماری در آنها به فعال ترین گروه سنی به لحاظ اقتصادی( 54-15 سال ) تعلق دارد(2). علی رغم تشخیص باسیل توبرکلوز بیش از 100سال , مشکلات عمده ای برای کنترل مایکوباکتریوم توبرکلوزیس هنوز باقی مانده است. اطلاعات بیشتر در مورد ﮊنتیک و فاکتورهای ایمنولوﮊیک که بر حساسیت انسان تاثیر می گذارند می تواند بر تولیدواکسن و درمان افرادیکه در معرض خطر بیماری فعال هستند منجر شود.(3) در ایران شایع ترین نوع سل ،ریوی بوده ، به طوری که سل ریوی اسمیر خلط مثبت 53 درصد کل موارد سل را تشکیل می دهد. در میان استانها ، گلستان و سیستان و بلوچستان بیشترین میزان بروز و شیوع را در کشور دارا هستند. بر طبق آخرین آمار منتشره وزارت بهداشت ، ( جمعیت تحت پوشش دانشگاهها ) میزان بروز سل به ترتیب در زابل و زاهدان 7/109 و 6/36 در 100000 نفر جمعیت در سال 88 گزارش شده است(4). یافته های مطالعات جدید نشان می دهد که پلی مورفیسم rs3746444 در pre-miR-499 با بیماریهای مختلفی از جمله کانسر پستان, کارسینوم سلول سنگفرشی سرویکس, هپاتوسلولر کارسینوما, آرتریت روماتوئید, بیماری شریان کرونری و بیماری ریوی انسدادی مزمن و توبرکلوزیس ارتباط دارد(5). Micro RNAs(miRNA) , RNAs کوچکی هستند که تقریبا 19-23 نوکلئوتید دارند, که مکمل نقاط اختصاصیmessenger RNA ((mRNA و تنظیم کننده مهمی بعد نسخه برداری در بیان ﮊن هستند (3). بیش از 530 miRNA در انسان شناسایی شده است , که عملکرد دقیق سلولی آنها و نقش آنها در ایجاد بیماری هنوز به خوبی روشن نشده است(6). پلی مورفیسم در ﮊن miRNA یعنی از طریق non protein coding RNA intermediaries با فراوری بیولوﮋیک miRNA و یا انتخاب هدف miRNA بر فنوتیپ بیماری انسانی اثر می گذارد(3). پلی مورفیسم ﮊنی در بسیاری از ﮊنهای انتخاب شده که ارتباط با ایمنی innate و adaptive نسبت به TB دارد, ﮊنهای Toll-like receptor ((TLR و سیتوکینها را نشان داده است.
چونmiRNAs نقش مهمی در تنظیم پاسخهای ایمنی بازی می کنند, پس ممکن است که SNPs در miRNA درگیر در پاسخ ایمنی نسبت به پاتوﮊنها همراه باشند که با خطر TB ریوی همراه است. (single nucleotide polymorphism) SNPs درmiRNA,تنظیم کننده signal pathway با واسطه TLRهستند. پاسخ ایمنی innate با واسطهTLR به عنوان خط اول دفاع در برابر میکروارگانیسمها تکامل پیدا می کند و نقش مهمی در آغاز و جهت دهی سیستم ایمنی adaptive بازی می کند (3). مطالعات اخیر نشان داده است که به هم ریختگی تنظیم miRNA منجر به autoimmunity می شود(7). SNP مربوط به miRNA می تواند در خصوصیات miRNA تغییر ایجاد کرده ,از طریق تغییر در انتخاب هدف و یا بروز miRNA منجر به تغییرات در عملکرد یا فنوتیپ شود. Taganovو همکاران نشان دادند که بیان miR-146 بعد تماس سلولهای THP-1 با لیپوپلی ساکاریدها (LPS) القا شد و سپس بروزTLR-and cytokines signaling pathway related protein دچار downregulation شد.pathwayNF-kB برای ایمنی ذاتی مهم است, زیرا نه فقط تشخیص و کلیرانس پاتوﮊن مثل MTB را بهبود می بخشد , بلکه همچنین ترجمه بسیاری از ﮊنهای مرتبط با پاسخ ایمنی را که می تواند انتشار پاتوﮊنهای مهاجم را محدود کند هم درگیر می کند. به عنوان مثال , miR-146a می تواند تولید اینترفرون را از طریق هدف قرار دادن TRAF6 , IRAK1 و IRAK2 مهار کند. برخلاف miR-146a , miR-499که ایمنی در رابطه با MTB را تنظیم می کند تا کنون شناخته نشده است. شواهد نشان می دهد که miR-499 بروز ﮊن زنجیره سنگین β را در طی آتروفی عضلات اسکلتی و تمایز و پرولیفراسیون در سلولهای پیش ساز cardiomyocteانسانی تنظیم می کند. بروز miR-499 مصرف آمینواسیدهای ضروری بعدی را همراه با کاهش تنظیم myostation and MEF2C mRNA در عضلات اسکلتی انسان افزایش داده است(3). امروزه اهمیت MiRNA در تنظیم بسیاری از فرایندهای ایمنی به طور وسیعی نشان داده شده است که شامل تنظیم گرانولوپوئزیس ، تکامل و بلوغ سلولهای B و T ، Antigen presentation و تولید سیتوکینها و SignalsTLR و Immunoglobulin Class Switch Recombination In B-cell & T-cell Receptor Signalingاست(8). miRNA در گردش با ملاحظه نقش اساسیmiRNAکه در تکامل و بیماری مطرح است بر عاقبت عفونت TB اثر می گذارد و این مساله با اندازه گیری سطحmiRNA در خون قابل اندازه گیری است. MiRNA اندوﮊن در سرم وجود دارد و به فعالیت RNAase مقاوم است(9). مطالعات جدید پیشنهاد کردند که miRNA سرم می تواند بیومارکر جدیدی برای تشخیص و ارزیابی TB ریوی فعال باشد(9). 2 نوعSNP شاملhas-miRNA-146a rs2910164)) و (has-MiRNA-499 rs3746444)موجود هستند که بالقوه TLR mediating signaling pathway را تنظیم می کنند, که ارتباط این دو نوع SNP با حساسیت به TB ریوی بررسی شده است. در مطالعه Ding dong و همکارانش در چین که در 2 جمعیت تبت و هان انجام شده ارتباط بین افزایش استعداد ابتلا به سل و پلی مورفیسمهای ( has-mirna-499 rs3746444 t>c) و (has-mirna-146a rs2910164 g>c)در جمعیت هان و تبت بررسی شد که طبق آن ارتباطی بین( has-mirna-499 rs3746444 t>c) و افزایش استعداد ابتلا به سل دیده نشد اما وجود آلل c ریسک ابتلا به سل را کاهش داد. در مورد جمعیت مورد مطالعه در تبت ارتباطی بین ( has-mirna-499 rs3746444 t>c) و استعداد ابتلا به سل وجود داشت اما در افرادی که دارای آلل c بودند افزایش ریسک ابتلا به سل را داشتند. در مورد پلی مورفیسم (has-mirna-146a rs2910164 g>c) نشان داده شده که در هر 2 جمعیت تبت و هان افزایش استعداد ابتلا به سل وجود داشت اگرچه نقش آلل g در جایگاه rs2910164 مانند آلل c در جایگاه rs 376444 در مورد مردم تبت و هان متفاوت است(3). در مطالعه ای که در ایران و در شهرستان زاهدان انجام شده ارتباط معنی داری بین پلی مورفیسم (has-mirna-146a rs2910164) و استعداد ابتلا به آرتریت روماتوئید دیده نشده است. اما ارتباط مشخصی بین ( has-mirna-499 rs3746444) و آرتریت روماتوئید گزارش شده است(5). همچنین دیده شده که در فیبروبلاستهای سینویال ، بافتهای مفصلی ، مونوسیتهای مایع مفصلی و سلولهای تک هسته ای خون محیطی و در سرم و پلاسمای بیماران مبتلا به آرتریت روماتوئید بیشتر بیان شده است و همچنین در این مطالعه ارتباط این پلی مورفیسم با بسیاری از بیماریها شامل آرتریت روماتوئید ، لوپوس اریتماتو سیستمیک ، آرتریت پسوریاتیک ، مالتیپل اسکلروزیس ، بیماری کرون و کولیت اولسراتیو و انواع مختلفی از سرطانها ذکر شده است(5).در مطالعه ای که در چین در بین 92 miRNA کشف شده مهمدر مقایسه با گروه کنترل انجام شد نشان داد که 59 MiRNA در سرم بیماران مبتلا به سل فعال به میزان پایین و 33MiRNA به میزات بالاظهور یافتند.جالب اینکه فقط 2 miRNA با ظهور متفاوت نه فقط در سرم بلکه در خلط افراد مبتلا به سل فعال ریوی در مقایسه با افراد سالم کنترل افزایش داشتند(9). بیانmiRNA ممکن است هدف مفیدی برای تحقیقات پاتوفیزیولوﮊیTB ریوی فعال باشد و بر یافتن پتانسیل تشخیصی و پروگنوز و اثر آن بر سیاست های درمانی آینده موثر باشد(9). با توجه به اهمیت بیماری سل و شیوع قابل ملاحظه آن در منطقه و لزوم تشخیص و درمان به موقع و با عنایت به نقش گسترده MiRNA و پلی مورفیسمهای آن در استعداد ابتلا به بیماریهای مختلف و از جمله سل ریوی ، هدف از انجام این مطالعه مقایسه فراوانی پلی مورفیسم MiRNA-499 rs3746444 در بیماران مبتلا به سل ریوی و گروه شاهد در شهرستان زاهدان می باشد. |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | ۱- فراوانی پلی مورفیسم miRNA-499( rs3746444 ) در افراد افراد مبتلا به سل ریوی با افراد سالم متفاوت است. |
| هدف کلی طرح | : تعیین پلی مورفیسم miRNA-499 rs3746444 در بیماران مبتلا به سل ریوی با افراد سالم |
| اهداف اختصاصی | 1- تعیین توزیع فراوانی پلی مورفیسمmiRNA -499 rs3746444)) در افراد سالم
2- تعیین توزیع فراوانی پلی مورفیسمmiRNA -499rs3746444)) در افراد مبتلا به سل ریوی 3- مقایسه فراوانی پلی مورفیسمmiRNA -499rs3746444) درافراد مبتلا به سل ریوی با افراد سالم |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | الف) مراکز تحقیقات ﮊنتیک ب) مرکز تحقیقات سل ج) کلیه مراکز دانشگاهی |
| تعریف واژه های تخصصی | RNAمیکرو :miRNA |
| نوع مطالعه | 2- مورد – شاهدی (Case control) |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | کلیه بیماران مبتلا به سل که در سال 1392 و قبل از آن جهت ارزیابی و درمان به بیمارستان بوعلی شهرستان زاهدان مراجعه کرده اند یا خواهند کرد.
3- جامعه مورد مطالعه(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) : الف) سن بالای 16 سال ب) عدم وجود هرگونه عفونت سیستمیک یا موضعی ( با یا بدون درگیری ریوی ) ج) عدم وجود هرگونه بیماری غیر عفونی سیستمیک حاد یا مزمن ( با یا بدون درگیری ریوی ) د) عدم وجود هرگونه نئوپلاسم تشخیص داده شده ( با یا بدون درگیری ریوی ) 4-معیارهای ورود به گروه شاهد: الف) سن بالای 16 سال ب) عدم وجود هرگونه عفونت سیستمیک یا موضعی ( با یا بدون درگیری ریوی ) ج) عدم وجود هرگونه بیماری غیر عفونی سیستمیک حاد یا مزمن ( با یا بدون درگیری ریوی ) د) عدم وجود هرگونه نئوپلاسم تشخیص داده شده ( با یا بدون درگیری ریوی) -معیارهای خروج از مطالعه: عدم همکاری بیمار در ادامه طرح |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | حجم نمونه حداقل 200 نفر شامل کلیه بیماران مسلول ریوی تشخیص داده شده تحت درمان یا درمان شده شهرستان زاهدان در سال 92 و قبل از آن می باشد . به همین تعداد نیز از افراد سالم جامعه که به بیماری سل مبتلا نشده اند و سابقه هیچ گونه بیماری سیستمیک ندارند انتخاب می شوند. تعداد افراد ذکر شده در حجم نمونه بر اساس مطالعات قبلی انجام شده در دنیا , تعیین شده است. |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | آسان و در دسترس |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | در این مطالعه جهت جمع آوری اطلاعات از تکنیک مشاهده ای استفاده می شود و اطلاعات کلی و مشخصات دموگرافیک فرد شامل سن ، جنس ، سابقه خانوادگی ابتلا به بیماری سل و نتایج آزمایشگاهی با استفاده از معاینه ، شرح حال و اطلاعات پرونده در فرمهای اطلاعات ثبت می شود. |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | هدف از انجام این مطالعه مورد-شاهدی مقایسه فراوانی پلی مورفیسم MiRNA 499 (rs374666) در بیماران مبتلا به سل و افراد سالم در سال 92 و قبل از آن است. در این مطالعه تعداد 200 نفر از بیماران مبتلا به سل ریوی بالای 16 سال که و 200 نفر از افراد سالم بالای 16 سال به عنوان گروه شاهد مورد مطالعه قرار خواهند گرفت. در گروه بیماران سلی ریوی در ابتدا از کلیه بیماران مشکوک به سل ریوی ( دارای علایم سرفه همراه با خلط و کاهش وزن ، هموپتزی ، درد قفسه سینه ، بی اشتهایی ، خستگی و تعریق شبانه ) اسمیر مستقیم خلط و کشت باسیل مایکوباکتریوم توبرکلوزیس ( به عنوان روش استاندارد تشخیصی ) انجام خواهد شد و با توجه به زمان بر بودن آماده شدن نتایج کشت ، در بیمارانی که حداقل 2 نمونه اسمیر خلط مثبت داشته باشند نمونه گیری خون انجام شده و بررسی پلی مورفیسم تنها در بیمارانی انجام خواهد شد که کشت مثبت هم داشته باشند. در ابتدا پس از کسب رضایت کامل از بیماران ، اطلاعات دموگرافیک بیماران شامل جنس ، سن و سابقه خانوادگی ابتلا به بیماری سل ثبت خواهد شد. سپس جهت نمونه گیری ( در فراد دارای معیارهای ورود به مطالعه ) 3 میلی لیتر خون وریدی در لوله های حاوی EDTA جمع آوری می گردد و نمونه خون در منهای 20 درجه سانتی گراد نگهداری می شود. DNA سلولهای خون محیطی به روش salting out تخلیص می شود پرایمرهای اختصاصی ARMS طراحی شده و پس از بهینه سازی شرایط PCR ﮊنوتیپ گروه شاهد و مورد با این روش مورد ارزیابی قرار میگیرد. محصول PCR روی ﮊل آگار 2% با اتیدیوم بروماید رنگ آمیزی گردیده و محصولات PCR مورد ارزیابی قرار گرفته و ﮊنوتیپ فرد تعیین می گردد. |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | پس از گرداوری اطلاعات لازم،یافته ها در نرم افزار آماری SPSS وارد گشته و با استفاده از آزمون آماری T-Test و Chi-Squareداده ها مورد تجزیه و تحلیل قرار خواهند گرفت. |
| ملاحظات اخلاقی | با توجه به کد شماره 1 ، 7 و 17 از کدهای مصوب کمیته کشوری اخلاق در پژوهشهای علوم پزشکی اطلاعات بیماران در تمام طول مدت طرح و پس از آن به صورت محرمانه حفظ خواهد شد. با رضایت کامل از بیماران نمونه گیری می شود و تعهد می شود نام و مشخصات بیماران در هیچ گزارشی قید نشود و انجام آزمایشات هیچگونه هزینه ای برای بیمار نخواهد داشت. نتایج آزمایشات به اطلاع بیمار رسانده خواهد شد.
|
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | عدم همکاری بیماران جهت تهیه نمونه ها |
| کلمات کلیدی | Polymorphism ,miRNA , pulmonary tuberculosis
|
| فهرست منابع و مراجع | 1. Fitzgerald D W, Sterling T R, Haas D W. Mycobacterium tuberculosis. In: Mandell G L, Bennett J E, Dolin R. Mandell, Douglas, and Bennett's principles and practice of infectious diseases. 7th ed. Newyork:churchil livingstone:2010;p3129-63.
2. میرحقانی لیلا و ناصحی مهشید. راهنمای کشوری مبارزه با سل, مجموعه انتشارات مرکز تحقیقات سل و بیماریهای ریوی, مرکز مدیریت بیماریها, معاونت سلامت, وزارت بهداشت درمان و آموزش پزشکی. 1389. ص 5. 3. Li D, Wang T , Song X, et all. Genetic study of two single nucleotide polymorphism within corresponding microRNAs and susceptibility to tuberculosis in a Chinese Tibetan and Han. Human Immunology 2011;72:598-602. 4. متانت ملیحه, شریفی مود بتول, علوی نایینی رویا و امینیان فر محمد. اپیدمیولوﮊی سل در دهه اخیر و مروری بر وضعیت آن در جنوب شرق ایران, مجله تحقیقات علوم پزشکی زاهدان , سال 1390, دوره 13, شماره 9. 1:-7. 5. 5.Hashemi M, Eskandari-Nasab E, ZakeriZ,et all. Association of pre-miRNA-146a rs2910164 and pre-miRNA-499 rs3746444 polymorphism and susceptibility to rheumatoid arthritis. 2012 Nov 8. DOI:10.3892/mmr. 2012. 1176. 6. Bano R, Fazal S, Haroon Khan M, et all. MiRNA:small but deadly. African Journal of Biotechnology 2011; 10(47):9542-9548. 7. Tufekci K U, Oner M G, Genc S, et all. microRNAs and multiple sclerosis. SAGE-Hindawi Access to Research Autoimmune Disease. Volume 2011(2011), Article ID 807426, 27 pages doi:10.4061/2011/807426. 8. Löfgren S E, Frostegard J, Truedsson L, et all. Genetic association of miRNA-146-a with systemic lupus erythematous in Europeans through decreased expression of the gene. Genes and Immunity 2012;13:268-274. 9. Fu Y,Yi Z, Wu X, et all. Circulating miRNA in patients with active polmunary tuberculosis. Journal of clinical Microbiology 2011 Dec;49(12):4246-51. doi:10.1128/JCM.05459-11. |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| 137_334_rezayatname akhlagh.doc | 1392/01/24 | 85504 | دانلود |
| Li-2011 miRNA tuberculosis.pdf | 1392/01/24 | 136040 | دانلود |
| MMR-2133 miRNA.pdf | 1392/01/24 | 252185 | دانلود |
| نهایی.docx | 1392/02/10 | 104222 | دانلود |
| 92.2.4.doc | 1392/02/10 | 78848 | دانلود |
| ---- ---- -------1.jpg.jpeg | 1392/02/10 | 126466 | دانلود |
| ---- ---- -------2.jpg.jpeg | 1392/02/10 | 142243 | دانلود |
| ---- ---- ------- 001.jpg.jpeg | 1392/02/10 | 109873 | دانلود |
| 111.doc | 1392/04/15 | 246784 | دانلود |
| 6002.bmp | 1392/11/07 | 12684726 | دانلود |
