چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 6091 |
| عنوان فارسی طرح | مقایسه فراوانی پلی مورفیسم ژن های XRCC5، XRCC6 و XRCC7 در بیماران مبتلا به مالتیپل اسکلروزیس (MS) و گروه کنترل |
| عنوان لاتین طرح | Comparison of XRCC5, XRCC6 and XRCC7 genes polymorphism in multiple sclerosis patients and healthy controls |
| نوع طرح | |
| محل اجرای طرح | مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی |
| رسته مطالعاتی | مورد شاهدی |
| دانشکده/مرکز | مرکز تحقیقات سلولی ومولکولی |
| زمان اجرا -روز |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| دانیال جهان تیغ | مجری اول | همکاری در اجرای طرح | دکترای تخصصی | danial_jahantigh@yahoo.com |
| مهرناز ناروئی نژاد | مجری دوم | همکاری در اجرای طرح | کارشناسی ارشد | mehrnaznar@gmail.com |
| علی مقتدری | همکار | فلوشیپ | amoghtaderi@gmail.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | مقایسه فراوانی پلی مورفیسم ژن های XRCC5، XRCC6 و XRCC7 در بیماران مبتلا به مالتیپل اسکلروزیس (MS) و گروه کنترل |
| خلاصه طرح به لاتین | Comparison of XRCC5, XRCC6 and XRCC7 genes polymorphism in multiple sclerosis patients and healthy controls |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | مالتیپل اسکلروزیس (OMIM126200) یا MS یک بیماری پیچیده سیستم عصبی مرکزی CNS)) است که با وجود علت نامعلوم، احتمالا ناشی از اثرات متقابل بین فرایند های التهابی (inflammatory) و تخریب نورونی (neurodegeneration) میباشد و تخمین زده می شود که بیش از دو میلیون نفر را در دنیا درگیر کرده است . مشخصه اصلی این بیماری تخریب غلاف میلین آکسون ها و تشکیل astrocytic scar می باشد ]1و2[.
بیماران MS بسته به اینکه در فاز اولیه شروع بیماری یا فاز عودکننده-فروکش کننده ( relapsing-remitting) باشند و یا در فاز پیشرونده ثانویه (secondary progressive) و یا پیشرونده اولیه primary progressive (PP-MS)، علایم مختلفی بروز می دهند. اما علائم کلی برای این اختلال را می توان شامل موارد زیر دانست : اختلالات بینایی و سیستم های حسی و حرکتی، اختلال در هماهنگی و تعادل، اختلال عملکرد روده و مثانه و مشکلات روانشناختی است.مشکلات بینایی ممکن است شامل دوبینی، تاری دید، نابینایی در یک یا هر دو چشم ،درد چشم باشد. مشکلات حرکتی معمولا شامل فلج نسبی یا کامل، ضعف عضلانی، سفتی، لکنت زبان، کشش و یا لرزش عضلات است. برخی افراد دچار ناراحتی حسی از قبیل بی حسی به خصوص در اندام ها، از دست دادن آگاهی، درد صورت، شوک های الکتریکی، حساسیت به گرما و سفتی در اطراف تنه و معده می باشند. آتاکسی، تهوع، سرگیجه، لکنت زبان و از دست دادن توانایی حرکات سریع و متناوب از علائم اختلال در هماهنگی و تعادل است.مشکلات مثانه/روده شامل بی اختیاری ادراری، احتباس می باشد.مشکلات شناختی عبارتند از: افسردگی، از دست دادن حافظه کوتاه مدت یا بلند مدت، زوال عقل، نوسانات خلقی و اضطراب است.علائم دیگر شامل خستگی، اختلالات خواب و صرع می باشد. اوج شروع بیماری بین سنین 20 و 40 سال است.با این حال ممکن است در کودکان نیز توسعه یافته و به علاوه در افراذ بالای 60 سال نیز گزارش شده است.زنان تقریبا دو برابر بیشتر از مردان به بیماری MS مبتلا می شوند. در MS عمدتا بافت ماده سفید در CNS تحت تاثیر قرار می گیرد و تولید پلاک ها و ضایعاتی در مغز و نخاع می شود.بافت ماده سفید حاوی فیبرهای عصبی می باشد که سیگنال های الکتریکی را در سراسر سیستم عصبی منتقل می کند.علاوه بر یک بیماری سیستم عصبی که بواسطه تولید ضایعات CNS می باشد، MS همچنین به عنوان یک اختلال خودایمنی شناخته می شود که شامل اختلال در سیستم ایمنی بدن می باشد و باعث می شود غلاف میلین تخریب شود.غلاف میلین آکسون ها را عایق می کند و اجازه ی تکانه های عصبی سریعتری را بین سلولها می دهد.بنابراین این پروسه ی دمیلینه شدن منجر به تاخیر یا انسداد کامل مسیر های سیگنالی در CNS می شود.آکسون ها نیز ممکن است به علت فقدان مواد غذایی و عایق که توسط سلولهای اطراف تامین می شود، آسیب ببینند.التهاب همچنین بر روی الیگودندروسیت ها که سلولهای عصبی را تغذیه می کنند، تاثیر می گذارد.از طریق این فرایندها است که اثر زخم بر روی بافت( sclerosis) در مناطق مختلف CNS ( (multipleایجاد می شود. MS یک بیماری ارثی در معنای کلاسیک نمی باشد، اما به نظر می رسد زمینه ژنتیکی همراه با عوامل محیطی( نظیر عفونت ، تغذیه ، استرس و حتی جغرافیای محل زندگی) در استعداد ابتلا به بیماری نقش داشته باشد ]3و4[. مطالعات بر روی موارد خانوادگی بیماری و نیز دوقلوها نشان داده است که یک مولفه ژنتیکی قوی بیماری مالتیپل اسکلروزیس را تحت تاثیر قرار می دهد. شیوع این بیماری میان بستگان درجه اول افراد مبتلا 20 تا 40 برابر بیشتر از افراد کل جامعه است. نرخ تطابق بالاتر برای دوقلوهای همسان (%34-25) نسبت به دوقلوهای ناهمسان (%5-2) وراثت پذیری بالای آن را نشان می دهد. اصلی ترین ریسک فاکتور ژنتیکی برای بیماری MS مربوط به ناحیه کلاس II مجموعه اصلی سازگاری نسجی شناخته شده است ، مخصوصا هاپلوتایپ های HLA-DRB1*1501 ]5[. علاوه بر MHC مناطق ژنتیکی دیگری در استعداد به MS دلالت داشته که از مطالعات بررسی پیوستگی ژنوم بدست آمده است. این مطالعات بیش از 20 لوکوس را شامل می شود، از جمله CD58، IL2RA،IL7R که در تنظیم عملکرد سلول T نقش دارند و CLEC16A، TNFRSF1A، IRF که در تنظیم عملکرد سایر سلول های سیستم ایمنی دخیل هستند. با وجود تمام این یافته ها مکانیزم دقیقی جهت توجیه چگونگی ارتباط این نواحی ژنتیکی با افزایش استعداد ابتلا به بیماری، هنوز شناخته نشده است ]2و6[. عدم هماهنگی و تنظیم میان پاسخ های سیستم ایمنی ذاتی و اختصاصی میتواند زمینه را برای استعداد التهاب CNS و متعاقب آن تخریب اعصاب وبنا براین گسترش MS مهیا نماید. در واقع بیشتر مطالعات آسیب غشاء میلینی را با پاسخ های التهابی تنظیم نشده مرتبط میدانند. به همین علت این بیماری در گروه بیماری های خود ایمنی قرار گرفته است. آسیب های DNA که به وسیله گونه های فعال اکسیژن ROSحاصل از پرتوهای یونیزان، اشعه گاما و اشعه X، و همچنین عوامل شیمیو یا رادیو تراپی ایجاد می گردند، عموما سبب تغییرات باز و درنتیجه شکستگی در یک (SSB) و یا هر دو رشته DNA (DSB) و یا در برخی موارد موجب کراس لینک رشته های DNA در سلول می شوند ]7و8[. این آسیب در DNA ممکن است منجر به نا پایداری ژنومی و در نهایت سبب ایجاد سرطان گردد ]7و8[. در سلول های پستانداران دو مسیر ترمیم برای ترمیم شکست های DNA وجود دارد که تفاوت اصلی بین این دو سیستم های ترمیمی در وابستگی به DNA الگو است. 1- مسیر نوترکیبی همولوگ (Homologous recombination, HR): این مسیر برای چسباندن دو انتهای DNA شکسته شده در کروموزوم های همولوگ و یا کروماتین های خواهری به کار می رود ]9[. 2- مسیر انتهای چسبنده غیر همولوگ (Non-homologous end joining, NHEJ): در طی این مسیر به طور مستقیمی شکست های دو رشته DNA در نواحی انتهایی فاقد توالی های همولوگ و یا دارای توالی همولوگ کوچک ترمیم می شوند ]10[. در باکتریها و یوکاریوت های پست مسیر ترمیمی HR مسیر غالب برای ترمیم شکست های دو رشته DNA است در صورتی که در یوکاریوت های عالی و خصوصا پستانداران مسیر NHEJ، مسیری است که برای ترمیم DSB ترجیح داده می شود ]11[. یکی از اجزای کلیدی ماشین ترمیمی NHEJ، پروتئین کیناز وابسته به DNA (DNA-PK) است که شامل یک ساب یونیت اتصال به DNA هدف به نام کمپلکس KU و یک ساب یونیت کاتالیک (DNA-PKcs) می-باشد ]12[. KU70 و KU80 کمپلکس KU را شکل می دهند که یک کمپلکس هترودیمر اتصال به DNA است و به عنوان یکی از اعضای حیاتی مسیر ترمیمی NHEJ فعالیت می کند ]13[. KU80 و KU70 به ترتیب به وسیله ژن های XRCC5 و XRCC6 بیان می گردند ]13[. ساب یونیت کاتالیک وابسته به DNA نیز به وسیله ی ژن XRCC7 بیان می گردد ]12و13[. پلی مورفیسم های متعددی برای ژن های XRCC5، XRCC6 و XRCC7 گزارش شده است. در سال 2007 وانگ و همکاران یک VNTR جدید واقع در ناحیه پروموتور ژن XRCC5 را گزارش داده اند. بر طبق این مطالعه این پلی مورفیسم دارای سه آلل 2R، 1R و 0R است ]14[. اخیرا و در سال 2012 رجائی و همکاران یک آلل دیگر نیز به این VNTR افزوده و آن را 3R نامیده اند که این آلل جدید تا کنون تنها در مطالعه فوق الذکر و در جمعیت ایران (شیراز) مشاهده گردیده است ]15[. ناحیه پروموتری KU80 شامل کپی های متعدد از عناصر کنترلی cis، محل شناسایی SP1، می باشند. سه آلل 2R، 1R و 0R هر کدام به ترتیب دارای هفت، شش و پنج کپی از عناصر تنظیمی cis هستند و این در حالی است که آلل 3R دارای هشت کپی از این عناصر تنظیمی می باشد ]15[. از میان پلی مورفیسم های مختلف ژن XRCC6، مطالعات زیادی بر روی پلی مورفیسم XRCC6 -61C>G که در ناحیه پروموتری این ژن واقع گردیده، انجام گرفته و ارتباط این پلی مورفیسم با افزایش خطر ابتلا به برخی از بیماریها مانند سرطان سینه به اثبات رسیده است ]16[. گوناگونی ژنتیکی XRCC7 6721G>T در اینترون 8 واقع شده و ممکن است فرآیند پیرایش ژن را تحت تاثیر قرار داده و در نتیجه سبب نا پایداری mRNA گردد ]17[. ارتباط این پلی مورفیسم با افزایش خطر ابتلا به بیماری گیلوما و کارسینومای سلول کلیه نشان داده شده است ]18[. نقش برخی از XRCC ها در شیوع بعضی از بیماری های خود ایمن، به دلیل حضور این پروتئین ها در محل-های آسیب به DNA، اثبات گردیده است ]21-19[. تا کنون هیج مطالعه ای بر روی ارتباط بین پلی مورفیسم های ژن های XRCC5، XRCC6 و XRCC7 و خطر ابتلا به بیماری MS صورت نگرفته است. علاوه بر این، با توجه به عملکرد کلیدی زن ها XRCC5، XRCC6 و XRCC7 در مسیر ترمیمی NHEJ، ما فرض کردیم بین پلی مورفیسم در این ژن ها و خطر ابتلا به بیماری MS ارتباط معنی داری وجود داشته باشد. |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | 1- توزیع فراوانی ژنوتیپیک و اللیک پلی مورفیسم در VNTR ژن XRCC5 در مبتلایان به MS و گروه شاهد متفاوت است.
2- توزیع فراوانی ژنوتیپیک و اللیک پلی مورفیسم -61C>G ژن XRCC6 در مبتلایان به MS و گروه شاهد متفاوت است. 3- توزیع فراوانی ژنوتیپیک و اللیک پلی مورفیسم 6721G>T ژن XRCC7 در مبتلایان به MS و گروه شاهد متفاوت است. |
| هدف کلی طرح | هدف از انجام این مطالعه، مقایسه فراوانی پلی مورفیسم ژن های XRCC5، XRCC6 و XRCC7 در بیماران مبتلا به مالتیپل اسکلروزیس (MS) و گروه کنترل می باشد. |
| اهداف اختصاصی | - مقایسه توزیع فراوانی ژنوتیپیک و اللیک پلی مورفیسم در VNTR ژن XRCC5 در مبتلایان به MS و گروه شاهد
2- مقایسه توزیع فراوانی ژنوتیپیک و اللیک پلی مورفیسم -61C>G ژن XRCC6 در مبتلایان به MS و گروه شاهد 3- مقایسه توزیع فراوانی ژنوتیپیک و اللیک پلی مورفیسم 6721G>T ژن XRCC7 در مبتلایان به MS و گروه شاهد |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی و درمانی زاهدان
مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی |
| تعریف واژه های تخصصی | ندارد |
| نوع مطالعه | موردی- شاهدی |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | جامعه مورد مطالعه :
بیماران مبتلا به Multiple Sclerosis مراجعه کننده به بیمارستان حضرت علی ابن ابیطالب (ع) شرایط خروج: عدم همکاری بیماران، ابتلا به گونه بیماری سیستمیک، ژنتیکی، بیماری های خود ایمن و عفونی مزمن و انواع سرطان ها |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | بر اساس سرشماری، طبق آمار موجود توقع بر این است در حدود 100 فرد مبتلا به Multiple Sclerosis در دسترس جهت نمونه گیری باشند. بدیهی است به همین تعداد نمونه از افراد طبیعی که فاقد هر گونه بیمار سیستمیک و ژنتیکی باشند و هیچ گونه سابقه بیماری های خود ایمنی و التهابی نداشته اند بعنوان گروه کنترل انتخاب می شوند. بر اساس نمونه های بیماران، همسان سازی گروه کنترل نیز انجام می پذیرد. |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | بر اساس سرشماری، طبق آمار موجود توقع بر این است در حدود 100 فرد مبتلا به Multiple Sclerosis در دسترس جهت نمونه گیری باشند. بدیهی است به همین تعداد نمونه از افراد طبیعی که فاقد هر گونه بیمار سیستمیک و ژنتیکی باشند و هیچ گونه سابقه بیماری های خود ایمنی و التهابی نداشته اند بعنوان گروه کنترل انتخاب می شوند. بر اساس نمونه های بیماران، همسان سازی گروه کنترل نیز انجام می پذیرد. |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | از بیماران و افراد گروه شاهد مقدار 2 میلی لیتر خون تام گرفته شده و در لوله های حاوی ماده ضد انعقاد ریخته و تا زمان استخراج DNA در دمای 20- نگهداری می شوند. |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | این مطالعه که از نوع مورد- شاهدی است بر روی 200 نفر از مبتلایان به بیماری MS و افراد افراد طبیعی که فاقد هر گرونه بیمار سیستمیک و ژنتیکی به روش نمونه گیری غیر احتمالی آسان در دو گروه 100 نفره مبتلا به MS (مورد) و سالم(شاهد) انتخاب می شوند، انجام خواهد شد. پس از اخذ رضایت کتبی از بیماران از هر کدام از آنها 2 میلی لیتر خون گرفته و تا زمان انجام آزمایش در لوله های حاوی EDTAجمع آوری و در دمای 70 – درجه سانتی گراد نگهداری می شود. برای انجام این مطالعه از DNA استخراج شده در طرح "بررسی متیلاسیون پروموتور ژن PADI2 در بیماران مبتلا به مالتیپل اسکلروزیس" که به طور هم زمان در حال اجراست، استفاده خواهد شد. جهت بررسی پلی مورفیسم ها با استفاده از پرایمرهای مناسب ابتدا قطعات مورد نظر به روش PCR تکثیر وسپس در صورت لزوم, توسط آنزیم های حد ساز جهت بررسی تغییر ژنتیکی مورد نظر برش داده می شوند . و در آخر با استفاده از الکتروفورز به شناسایی قطعات برش یافته می پردازیم .یافته های حاصل از PCR با استفاده از آزمون های آماری مناسب تحت تجزیه و تحلیل قرار خواهند گرفت. |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | جهت مقایسه فراوانی پلی مورفیسم ها از آزمون chi-square یا آزمون دقیق فیشر و شاخص OR استفاده می گردد. |
| ملاحظات اخلاقی | تمامی بیماران تحت مطالعه آگاهانه و برای مقاصد علمی اقدام به دادن نمونه خون کرده اند. شرکت در این طرح هیچگونه هزینه ای برای بیماران ندارد و نام و مشخصات بیماران گزارش نخواهد شد. در این تحقیق قوانین مصوب کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی طبق کد های 1، 2، 3، 12-5، 14،15، 17، و 21-19 که شامل این تحقیق می شوند، رعایت خواهد شد. |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | ندارد |
| کلمات کلیدی | مالتیپل اسکلروزیس ،XRCC5، XRCC6 ،XRCC7 ،پلی مورفیسم |
| فهرست منابع و مراجع | [1]. Hans Lassmann, Jack van Horssen .The molecular basis of neurodegeneration in multiple sclerosis. FEBS Letters 585 (2011) 3715–3723.
[2]. Ranjan Dutta, Bruce D. Trapp. Mechanisms of neuronal dysfunction and degeneration in multiple sclerosis.Progress in Neurobiology 93 (2011) 1–12 . [3]. Murat Kurtuncu, Erdem Tuzun.Multiple sclerosis: Could it be an epigenetic disease?. Medical Hypotheses (2008) 71, 945–947. [4]. Sergio E Baranzini. Revealing the genetic basis of multiple sclerosis:are we there yet? Current Opinion in Genetics & Development 2011, 21:317–324. [5]. Adam E. Handel , Gabriele C. De Luca , Julia Morahan, Lahiru Handunnetthi, A. Dessa Sadovnick ,George C. Ebers, Sreeram V. Ramagopalan . No evidence for an effect of DNA methylation on multiple sclerosis severity at HLA-DRB1*15 or HLA-DRB5. Journal of Neuroimmunology 223 (2010) 120–123. [6]. S. Nischwitz , B. Müller-Myhsok , F. Weber. Risk conferring genes in multiple sclerosis.FEBS Letters 585 (2011) 3789–3797. [7]. Kopjar VG-VN, Milas I. Assessment of chemotherapy-induced DNA damage in peripheral blood leukocytes of cancer patients using the alkaline comet assay. Carcinog Mutagen 2002; 22: 13-30. [8]. Singh MTM NP, Tice RR, Schneider EL. A simple technique for quantitation of low levels of DNA damage in individual cells. Exp Cell Res 1988; 175 184-91. [9]. Li X, Heyer WD (2008) Homologous recombination in DNA repair and DNA damage tolerance. Cell Res 18: 99–113. [10]. Cahill D, Connor B, Carney JP (2006) Mechanisms of eukaryotic DNA double strand break repair. Front Biosci 11: 1958–1976. [11]. Hopfner KP, Putnam CD, Tainer JA. DNA double-strand break repair from head to tail. Curr Opin Struct Biol 2002; 12: 115- 22. [12]. Smith GC, Jackson SP. The DNA-dependent protein kinase. Genes Dev 1999; 13: 916-34. [13]. Kuschel B, Auranen A, McBride S, Novik KL, Antoniou A, Lipscombe JM, Day NE, Easton DF, Ponder BA, Pharoah PD, Dunning A.Variants in DNA double-strand break repair genes and breast cancer susceptibility. Hum Mol Genet. 2002 Jun 1;11(12):1399-407. [14]. Wang S, Wang M, Yin S, Fu G, Li C, Chen R, Li A, Zhou J, Zhang Z, Liu Q. A novel variable number of tandem repeats (VNTR) polymorphism containing Sp1 binding elements in the promoter of XRCC5 is a risk factor for human bladder cancer. Mutat Res. 2008; 638(1-2):26-36. [15]. Rajaei M, Saadat I, Saadat M. Introducing a novel allele for the polymorphism of variable number of tandem repeats in the promoter region of XRCC5. Biochem Biophys Res Commun. 2012 Oct 26;427(3):503-5. [16]. Fu YP, Yu JC, Cheng TC, Lou MA, Hsu GC, Wu CY, et al. Breast cancer risk associated with genotypic polymorphism of the nonhomologous end-joining genes: a multigenic study on cancer susceptibility. Cancer Res 2003; 63: 2440-6. [17]. Sipley JD, Menninger JC, Hartley KO, Ward DC, Jackson SP, Anderson CW. Gene for the catalytic subunit of the human DNA-activated protein kinase maps to the site of the XRCC7 gene on chromosome 8. Proc Natl Acad Sci U S A 1995; 92: 7515-9. [18]. Wang LE, Bondy ML, Shen H, El-Zein R, Aldape K, Cao Y, et al. Polymorphisms of DNA repair genes and risk of glioma. Cancer Res 2004; 64: 5560-3. [19]. Tajouri, L., Mellick, A.S., Ashton, K.J., Tannenberg, A.E., Nagra, R.M., Tourtellotte, W.W., and Griffiths, L.R. (2003). Quantitative and qualitative changes in gene expression patterns characterize the activity of plaques in multiple sclerosis. Brain Res Mol Brain Res 119, 170–183. [20]. Lee, K.J., Dong, X., Wang, J., Takeda, Y., and Dynan, W.S. (2002). Identification of human autoantibodies to the DNA ligase IV/ XRCC4 complex and mapping of an autoimmune epitope to a potential regulatory region. J Immunol 169, 3413–3421. [21]. Takeda, Y., and Dynan, W.S. (2001). Autoantibodies against DNA double-strand break repair proteins. Front Biosci 6, D1412–D1422. |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| رضایت نامه.doc | 1392/03/11 | 88064 | دانلود |
| Danial Jahantigh.doc | 1392/04/29 | 298496 | دانلود |
| SWScan0017200054.jpg | 1392/04/29 | 133108 | دانلود |
| SWScan0017200055.jpg | 1392/04/29 | 159057 | دانلود |
| SWScan0017200056.jpg | 1392/04/29 | 147544 | دانلود |
| SWScan0017200057.jpg | 1392/04/29 | 148702 | دانلود |
| جواب اصلاحات .docx | 1392/05/12 | 16558 | دانلود |
| پرپوزال اصلاح شده.doc | 1392/05/12 | 304640 | دانلود |
| 1_225__uploads_1_218_Tarh[3][1].doc | 1392/05/22 | 304640 | دانلود |
| davatname.png | 1392/05/23 | 5466676 | دانلود |
| dastoorkar.png | 1392/05/23 | 5913324 | دانلود |
| ara1.png | 1392/05/23 | 4358663 | دانلود |
| ara2.png | 1392/05/23 | 4928979 | دانلود |
| 6091.png | 1392/05/26 | 3416516 | دانلود |
