بررسی مقایسه ای اثر ضد میکروبی عصاره اتانولی و اسانس زنیان با چندآنتی بیوتیک(سفالکسین-سفتازیدیم -وانکومایسین- -پنیسیلین- کوتریموکسازول-سفتری آکسون- اریترومایسین) بر علیه باکتری های استاندارد کلبسیلا، پنوموکوک، اشرشیاکلی، استافیلوکوک اورئوس

Determination antibacterial effects of carumn copticum extracts and essential oil compared with some antibiotics against bacteria estandard


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان:

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 6168
عنوان فارسی طرح بررسی مقایسه ای اثر ضد میکروبی عصاره اتانولی و اسانس زنیان با چندآنتی بیوتیک(سفالکسین-سفتازیدیم -وانکومایسین- -پنیسیلین- کوتریموکسازول-سفتری آکسون- اریترومایسین) بر علیه باکتری های استاندارد کلبسیلا، پنوموکوک، اشرشیاکلی، استافیلوکوک اورئوس
عنوان لاتین طرح Determination antibacterial effects of carumn copticum extracts and essential oil compared with some antibiotics against bacteria estandard
نوع طرح
محل اجرای طرح مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی و گرمسیری
رسته مطالعاتی تجربی- آزمایشی
دانشکده/مرکز دانشکده پزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
بتول شریفی مودمجری اولتدوین طرحمتخصصbatoolsharifi@yahoo.com
مهدیه شفقتمجری دومتدوین طرحکارشناسی ارشدmedical.zahedan@gmail.com
ناهید سپهری رادهمکارنظارت بر آزمایش نمونه هاکارشناسی ارشدnahid.sepehri@gmail.com
الهام پهلوانیهمکارهماهنگی اقدامات آزمایشگاهیکارشناسی ارشدelham_pahlavani@yahoo.com
سعیده سعیدیهمکارکمک در آزمایشات میکروبی و مکانیسم عمل s.saeedi12@yahoo.com
ناهید رضاییهمکارمشاور آمارکارشناس ارشدrezaee.admin@gmail.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی مقایسه ای اثر ضد میکروبی عصاره اتانولی و اسانس زنیان با چندآنتی بیوتیک(سفالکسین-سفتازیدیم -وانکومایسین- -پنیسیلین- کوتریموکسازول-سفتری آکسون- اریترومایسین) بر علیه باکتری های استاندارد کلبسیلا، پنوموکوک، اشرشیاکلی، استافیلوکوک اورئوس
خلاصه طرح به لاتینDetermination antibacterial effects of carumn copticum extracts and essential oil compared with some antibiotics against bacteria estandard
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشعوارض جانبی داروهای شیمیایی، الزامات زیست محیطی و گرایش تدریجی به سمت گیاه درمانی سبب شده که به ویژه در دهه اخیر صدها هکتار از زمین‌های زراعی در کشورهای توسعه یافته به کشت گیاهان دارویی اختصاص یابد. در حال حاضر سطح زیر کشت گیاهان دارویی در ایران 91 هزار هکتار و میزان تولید این محصولات 100 هزار تن است. صادرات گیاهان دارویی ایران در سال 13۸۴ کمتر از ۴۰ میلیون دلار بود، در حالیکه در سال 1387 حجم مبادلات دارویی ایران به 89 میلیون دلار رسید (1). در قرن حاضر تحقیقات گسترده ای در مورد گیاهان دارویی انجام پذیرفته و داروهای با منشأ طبیعی افق های جدیدی را برای جامعه پزشکان داروسازان و پژوهشگران گشوده است. در حال حاضر یک سوم داروهای مورد استفاده بشر را داروهایی با منشأ گیاهی تشکیل می دهند و این میزان به شدت رو به افزایش است (2).
گیاهان دارویی به واسطه داشتن ترکیب های متفاوت از زمانهای قدیم در درمان بیماریهای مختلف مورد استفاده قرار می گیرند. یکی از این ترکیب های مهم اسانس ها یا روغنهای اسانسی هستند که دارای اثرات بیولوژیکی فراوان می باشد(3). اخیرا متابولیتهای ثانویه گیاهان دارویی مانند اسانس ها و عصاره های گیاهی از نظر اثرات ضدمیکروبی شان مورد بررسی قرار گرفته اند(4) و مشخص شده است که اغلب اسانس های گیاهی استخراج شده از گیاهان دارویی دارای خواص ضدقارچی،ضدانگل،ضدباکتری و ضدویروس می باشند(5). بنابراین اسانس های گیاهی در زمینه های فارموکولوژیکی،داروشناسی گیاهی،میکروبیولوژی پزشکی و کلینیکی،فیتوپاتولوژی و نگهداری مواد غذایی،میوه ها و سبزیها شدیدا غربالگری شده و مورد استفاده قرارگرفته اند(6) غذاهای آلوده به باکتریهای پاتوژن و یا آنتروکسین های آنها منجر به بروز بیماریهایی می شوندکه جزو شایعترین بیماریها در جهان به حساب می آیند. آنتروکسین های تولید شده توسط E.coli،Staphyliococcus aureus و گونه های Salmonella، Yerisinia، Colstridium مسئول مسمومیت دستگاه گوارش و بروزعلائم گوارش ناشی از آن می شوند(7).
امروزه بررسی اثرات ضدمیکروبی عصاره های گیاهی به خصوص گیاهانی به صورت سنتی مصرف طبی دارند، یکی از مباحث مورد علاقه محققین به شمار می رود. دو دلیل اصلی برای علاقمندی ذکرشده است. نخست این که ترکیبات موجود در گیاهان که کم و بیش طی سال ها تجویز مکرر روی انسان آزمایش شده اند. ذخیره های عظیم بالقوه ای از داروهای مختلف از جمله ترکیبات مهارکننده میکروارگانیسم های مختلف هستند و اکنون می توان از آن ها به عنوان منابعی جهت کشت داروهای جدید ازجمله ترکیبات ضدمیکروبی بهره برد. دلیل دوم مقاومت میکروبی در اثر مصرف غیر اصولی داروهای ضدمیکروبی فعلی توسط عامه مردم و همچنین نرخ بالای حساسیت های دارویی نسبت به این ترکیبات شیمیایی نیاز شدید دستیابی به داروهای جدید را خاطر نشان می سازد (9-8)
مساله مهمی که در آنتی بیوتیک درمانی وجود دارد، ظهورمقاومت دارویی درباکتری هاست. فراوانی مقاومت دارویی، به نوع ارگانیسم و نوع دارو بستگی دارد. بعضی از ارگانیسم ها مانند برخی کلی فرمها، استافیلوکوکوس اورئوس به سرعت صفت مقاومت را کسب می کنند، برخی دیگر مانند استرپتوکوکوس پیوژنز به ندرت مقاومت را به دست می آورند. در واقع مقاومت نسبت به برخی از آنتی بیوتیک ها مانند مترونیدازول هرگز گسترش نمی یابد، در حالی که در برابر سایر داروها مانند پنی سیلین، تتراسایکلین و استرپتومایسین سویه های مقاوم به سرعت ظاهر می شوند. هنگامی که مجموعه کوچکی از باکتریهای مقاوم ظاهرشوند، به دلیل حضور آنتی بیوتیک در یک موقعیت مفید انتخابی قرار می گیرند و به قیمت از بین رفتن باکتریهای حساس تکثیر می یابند. بنابراین اغلب، تجویز گسترده و نامشخص آنتی بیوتیک ها به بقا و افزایش باکتری های مقاوم به دارو کمک می نماید (10).
مکانیسم های مختلفی هستند که به کمک آ ن ها میکروارگانیسم های مختلف نسبت به داروها مقاوم می-شوند.
1-میکروارگانیسم ها آنزیمی تولید می کنندکه داروی فعال راتخریب می کند. به عنوان مثال استافیلوکوک-های مقاوم به پنی سیلینG یک بتالاکتاماز تولید می کنندکه داروها را تخریب می کند.
2-میکروارگانیسم ها نفوذپذیری خود به دارو را تغییر می دهند. به عنوان مثال تتراسیکلین در باکتری های حساس تجمع می یابد ولی در باکتری های مقاوم، چنین نیست. مقاومت پلی میکسین ها هم ناشی از تغییر نفوذپذیری به دارو است.
3-میکروارگانیسم ها یک هدف ساختمانی تغییر یافته برای دارو درست می کند. به عنوان مثال مقاومت کروموزومی به آمینوگلیکوزید به فقدان یا تغییر یک پروتئین اختصاصی در جز s 30 ریبوزوم باکتری که در میکروارگانیسم حساس مثل یک جایگاه اتصال عمل می کند، مربوط می باشد.
4-میکروارگانیسم ها یک راه متابولیسمی تغییر یافته پیدا می کنند که واکنشی که توسط دارو مهار می شود را حذف می کند.
5-میکروارگانیسم ها یک آنزیم تغییر یافته می سازند که هنوز عمل متابولیکی خود را انجام می دهد ولی کمتر تحت تاثیر دارو قرار می گیرد. به عنوان مثال در باکتری های مقاوم به تری متوپریم، دی هیدروفولیک اسید ردوکتاز بسیار کمتر از باکتری های حساس به تری متوپریم مهار می شود (11).
مطالعات نشان می دهد، افزایش استفاده از آنتی‎بیوتیک‎ها و استفاده نابجا و نامناسب مانند مصرف بیش از حد نیاز و نامناسب مانند مصرف بیش از حد نیاز و یا عدم رعایت دوز توصیه شده توسط بیماران منجر به گسترش مقاومت باکتریایی به انتی بیوتیک‎ها شده است (12). این امر منجر به افزایش تمایل به توسعه ترکیب‎های جدید ضدمیکروبی موثرتر و بدون سمیت شده است (13).

زنیان با نام علمی ((Carum capticum(L.)C.B.Clarke گیاهی علفی و یکساله از تیره چتریان می‎باشد (15-14). این گیاه بومی مصر بوده و در نواحی مدیترانه و کشورهای جنوب غربی آسیا نظیر ایران، عراق، افغانستان، پاکستان و هند کشت می‎گردد (16). میوه زنیان از نظر طبیعت گرم بوده و از آن به عنوان مقوی معده، ضدنفخ (17) اشتهاآور)18)همچنین در از بین بردن بوی دهان و بهبودی زخم‎های چرکی، رفع ناراحتی‎های دستگاه گوارش ؛ (20-19)و قطع اسهال (21) کاربرد دارد. ریشه این گیاه نیز کرم‎کش، مدر و بادشکن است (21). زنیان دارای اسانسی است که مقدار نسبی آن برحسب محل رویش گیاه تفاوت می‎نماید. اسانس مذکور این گیاه که با استفاده از بخار آب بدست میاید به آژوان (Ajwan) موسوم می باشد. این اسانس دارای تیمول، سیمنت، الفاکینن، دیپانتن، گاماتلپینن و مواد دیگری مثل کارواکینون است. زنیان که به انگلیسی Ammi نامیده می شود (22). زنیان در شرق ایران و در استان سیستان و بلوچستان بیشتر یافت می شود (23).
اسانس هایی که دارای خواص انتی باکتریال قوی بر علیه پاتوژن های غذایی هستند، حاوی مقادیر زیادی کاروکرول، تیمول، اوژنول می باشند. ساختمان شیمیایی هر اسانس بر میزان فعالیت ضدمیکروبی آن تاثیر مستقیم دارد (24).
گیاهان خانواده چتریان از جمله جنس زنیان حاوی ترکیب هایی هستند که فعالیت های بیولوژیکی متعددی از جمله خاصیت ضدمیکروبی را نشان می دهند (26-25). تحقیقات نشان داده شده است که در مورد بسیاری از گیاهان تیمول و کاروکرول و در مواردی پارا-سایمن مهمترین اجزاموثردر فعالیت ضدمیکروبی اسانس گیاهان می باشند. از آنجا که تیمول و پارا-سایمن اجزا اصلی تشکیل دهنده اسانس گیاه زنیان می باشند، می توان فعالیت ضدمیکروبی اسانس را به این ترکیبات نسبت داد (24).
مطالعات نشان می دهد گیاهان خانواده چتریان دارای خواص ضدباکتریایی متوسط تا قوی می-باشند.Gachkar و همکاران (27)گزارش دادند که اسانس زیره سبز علیه E.coli، S.aureus، L.monocytogenesموثرتر از اسانس اکلیل کوهی است.
Singh وهمکاران(28)خواص ضدباکتریایی اسانس 7 گونه از خانواده چتریان را علیه Corynebacteriumdiphteria،Staphylococcusaureus، Esherichiacoli ،Klebsillaspp،Proteousvulgarisموردآزمایش قرار دادند و گزارش نمودند که اسانس زنیان بسیارموثر است.RaniوKhullar(29)نشان دادند که عصاره زنیان علیه Salmonella typhiبسیارموثرتر از زیره سبز است.
در مطالعات دیگر Iacobellisو همکاران فعالیت ضدمیکروبی اسانس گیاه زنیان را بروش آگاردیفیوژن بررسی کردند و اثرهای مهاری نسبتا بالای آن راعلیه رودوترولا ،اروینیا،گزانتوموس واگروباکتریوم مشاهده کردند ( 30).
تحقیقات نشان داده که عصاره تام جوشاننده آبی و خیسانده الکلی تمام اجزاء گیاه مورخوش دارای اثرات ضد دردی و ضدالتهابی حاد و مزمن در موش سفید کوچک و بزرگ (Small and large rat) می باشد (31). اسانس تازه و رقیق شده مریم گلی از رشد باکتریهای Echerchia coli و Staphlococcos aureus جلوگیری می‎کند و اسانس تا دو ماه پس از اسانس‎گیری خاصیت ضدمیکروبی خود را حفظ می‎کند (32) اسانس تازه Ztaria multiflora بر باکتری Staphlococcos aureus تا سه ماه خاصیت میکروب کشی دارد. اسانس گیاه Thymus pubscense نیز اثرات باکتریسیدی بر باکتریهایEcherchia coli وStaphlococcos aureus دارد (33). عصاره آبی دو گونه مریم گلیS.officinalis و Salvia scarea اثر مهار رشد از نوع باکتری Staphlococcos aureus دارند و عصاره‎های متانولی بر روی باکتریهای Proteus vulgaris، Aeruginosa eudomonas sp، Streptococcus pyogenes و قارچ Aspergilus niger موثر بود.
درمطالعه‌ی زهرا مهدوی و همکارانش به بررسی اثر ضد میکروبی عصاره متانولی برگ گیاه بنه بر روی باکتریهای باسیلوس سابتیلیس،سودوموناس انتشارات مانی، اصفهان، ایران.
24- شریفیان، ا. (1384) اثر اسانس گیاهان آویشن، اویشن باریک و آویشن شیرازی بر باکتری استافیلوکوکوس اورئوس. پایان نامه دکتری رشته مهندسی کشاورزی- علوم و صنایع غذایی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران، ایران.

25- Pae, H.O. Oh, H., Yun, Y. G., Oh, G. S., Jang, S. I., Hwang, K. M., Kwon, T. O., Lee, H. S. and Chung, H. T. Imperatorin, a furanocoumarin from Angelica dahurica (Umbelliferae), induces cytochrome c-dependent apoptosis in human promyelocytic leukaemia, HL-60 cells Pharmacoloolgy Toxcicology. 2002., 91: 40-48.

26- Ye, Y.N., Liu, E.S.L., Li, Y., So, H.L., Cho, C.C.M., Sheng, H.P., Lee, S.S. and Cho, C.H. Protective effect of polysaccharides-enriched fraction from Angelica sinensis on hepatic injury. Life Science. 2001., 69: 637-646.
27- Gachkar, L., Yadegari, D., Rezaei, M.B., Taghizadeh,M., Alipoor Astaneh, Sh. and Rasooli, .Chemical and biological characteristics of Cuminumcyminum and Rosmarinus officinalis essential oils.Food Chemistry, 2007: 102: 898-904

28-Singh, G.,Kapoor, I.P.S., Pandey, S.K., Singh, U.K.AND Singh.Studies on essential oils:Part10;Antibacterial activity Of Volatile Oils from some species.Phytotherapy Research, 2002;16: 680-682
29-Rani, p. and Khullar, N. Antimicrobial evalution of some medical plants for their antienteric potential ageinst Multi-drug resistant Salmonella typhi.Phytotheraphy Research, 2004., 18:670-673
30- Iaconellis NS,Lo CP,Capasso F,Senatore F. Antibacterial activity of Cuminum cyminum L. and Carum carvi L. Essential oils. J Agric Food Chem 2005;53(1):57-61
31- محمدی، م. (1378) بررسی سمیت حاد، اثرات ضد دردی و ضدالتهابی عصاره تام Zhumeria majdae بر موش‎های سفید کوچک و بزرگ. پایان نامه دکترای، دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران.
32- رضائی، ح. (1384) عرضه و ارائه نتایج چند طرح استراتژیک تحقیقاتی در زمینه گیاهان داروئی، همایش ملی توسعه پایدار گیاهان داروئی، مشهد، ایران.
33- رسولی، ا. (1379) ترکیب اسانسی Zataria و Thymusو فعالیت ضدمیکروبی آنها بر Staphylococcos aureus و Esherichia coli اولین همایش بین‎المللی طب سنتی و مفردات پزشکی، تهران.
34-مهدوی میمند زهرا،مصحفی محمد حسن،فروتن فر حمید.بررسی اثرات ضد میکروبی عصاره متانولی 12 گونه گیاهی بر روی 6 گونه میکروبی به روش سیلندر-پلیت.مجله دانشگاه علوم پزشکی رفسنجان.دورههشتم،شماره3،پاییز1388،صفحات238-.227
35-5- 2007 UpToDate 15.2; UpToDate, Inc. 95 Sawyer Rd. Waltham, MA 02453.
http://www.uptodate.com
36- Watson AR , Taylor CM , MC Graw M. Disorders of the urinary system. In: Forfar and Arneil's Textbook of Pediatrics. 6 th ed. Edinburgh: Churchill – Livingstone ; 2003.p. 613 – 620.
37- Bradly M.Examination of urine.In:Davidsohn TS, editors. Clinical diagnosis Saunder SCO;2000.380-455.
38- Mashhadian NV and Rakhshandeh H. Antibacterial and antifungal effects of Nigella sativa extracts against S. aureus, P. aeroginosa and C. albicans. Pakistan J. Medical Sci. 2005; 21 (1): 47 - 52.
39- Nostro A, Ger MP, Angelo VD and Cannatelli MAC. Exteraction method and biouautography for evallution plant antimicrobial activity. Applied Microbiol. 2001; 15: 379 – 85
40-Androw JM. BSAC Standardized disc susceptibility testing method. J. Antimicrobial Chemotherapy 2001; 7 (5): 48 - پنی سیلین به عنوان کنترل مثبت استفاده خواهیم کرد.



بررسی اثر ضد میکروبی با تعیین حداقل غلظت ممانعت کننده از رشد باکتری (MIC) و حداقل غلظت کشندگی:(MBC)

علاوه بر روش دیسک گذاری ، حساسیت هرسویه از باکتری های مورد نظر نسبت به اسانس به دست آمده گیاه زنیان با استفاده از روش رقیق سازی در محیط مایع در پلیت های 96 خانه ای ته گرد مورد بررسی قرار گرفت. به خانه های ردیف اول پلیت فقط محیط کشت و سوسپانسیون باکتری اضافه گردید. در ردیف بعدی به 6 خانه از پلیت ها، مقدار 100میکرولیتر از محیط مایع مغذی مولر هینتون اضافه شد. به چاهک اول 100 میکرولیتر از اسانس گیاه به غلظت 10 میلی گرم در میلی لیتر اضافه شده و تا چاهک ششم به ترتیب غلظت های3/0-62/0-25/1-5/2-5 میلی گرم در میلی لیتر با روش رقیق سازی تهیه گردید. به هر چاهک مقدار20 میکرولیتر از سوسپانسیون باکتری معادل 5/0 مک فارلند اضافه شد. محتویات هرچاهک 2 دقیقه بوسیله دستگاه Plate Reader مجهز به تکان دهنده با هم مخلوط شده و در زمان صفر عمل طیف سنجی با طول موج 620 نانومتر اندازه گیری شد. پلیت ها به مدت 24 ساعت در دمای 35 درجه سانتی گراد گرمخانه داری شدند و کدورت و یا عدم کدورت چاهک ها به صورت چشمی مورد ارزیابی قرار گرفتند. اولین رقتی که توانست کمترین میزان کدورت را نشان دهد به عنوان حداقل غلظت کشنده تعیین گردید. این ازمایش در سه تکرار جداگانه انجام و میانگین سه تکرار برای هر چاهک برای تعیین کمترین غلظت بازدارنده مورد استفاده قرار گرفت.



برای تعیین MBC از لوله هایی که در آنها کدورت دیده نشود بر روی محیط EMB کشت داده می شود و با روش رقت های متوالی عمل شمارش کلنی صورت میگیرد. اولین لوله ای که مقدار کاهش رشد تعداد باکتری ها نسبت به زمان صفر لوله شاهد، بیشتر از یک هزارم باشد، به عنوان MBC انتخاب می شود در مرحله بعدی برای تعیین دقیق مقدار MBC بین MBC غلظت های پایین تر، غلظت واسط نیز به طریق مشابه آزمایش میگردد. نتایج آزمایش های بدست آمده به صورت توصیفی بایکدیگر مقایسه می شود.

57.
آئوژینوزا، کلبسیلا پنومونیه،اشرشیاکولی،استافیلوکوک اپی درمیس و استافیلوکوک آرئوس پرداخته شده که اثر ضد باکتریایی این گیاه را به اثبات رساندند(34).
با توجه به تنوع آب و هوایی و تنوع فلورگیاهی در ایران ، شناسایی مواد موثر گیاهان بومی کشور و استخراج آنها به منظور تولید انبوه و در سطح صنعتی آنها اهمیت زیادی پیدا کرده است. این کار در مورد گیاهانی از جمله زنیان که بومی منطقه سیستان می باشد و کمتر مورد بررسی قرارگرفته است از اهمیت ویژه ای برخوردار است . از آنجا که عفونت های میکروبی تهدید جدی برای سلامتی انسان ها بوده و درطول تاریخ همواره باعث به مخاطره افتادن جان افرادشده است. و با توجه به اینکه استفاده از داروهای گیاهی ازدیرباز موردتوجه می باشد. لذا شناخت و مطالعه علمی برروی گیاهان موجود در کشور وبررسی چگونگی تاثیر این مواد برروی این میکروب ها و باکتری ها می تواند کمک شایانی به استفاده صحیح از این ترکیبات و مصرف درست و به جای آن ها برای درمان امراض وبیماریها باشد.
در مطالعات قبلی تا کنون مقایسه عصاره اتانولی و اسانس گیاه زنیان بررسی نشده است. پس با توجه به اثر ضد میکروبی این گیاه و اهمیت عفونت های تنفسی و گوارشی در این مطالعه به بررسی اثر ضد میکروبی عصاره اتانولی و اسانس میپردازیم. سپس با مقایسه عصاره و اسانس اثر ضد میکروبی را با آنتی بیوتیکهای مرسوم در درمان عفونت تنفسی و گوارشی که شامل سفالکسین-سفتازیدیم -وانکومایسین-پنیسیلین- کوتریموکسازول-سفتری آکسون- اریترومایسین است(36-35) مطالعه خواهیم کرد.

سوالات و / یا فرضیات پژوهش- تعیین توزیع حساسیت یا مقاومت آنتی بیوتیکی نمونه‌ها برحسب جنس وگونه باکتری
 2-مقایسه نتایج حساسیت آنتی بیوتیکی با عصاره اتانولی و همچنین اسانس زنیان برحسب جنس و گونه باکتری
 3-مقایسه اثر عصاره و اثر اسانس بر فعالیت باکتری بر حسب جنس و گونه باکتری
هدف کلی طرحمقایسه اثر ضد میکروبی عصاره اتانولی و اسانس زنیان با چندآنتی بیوتیک
اهداف اختصاصی1- تعیین توزیع حساسیت یا مقاومت آنتی بیوتیکی نمونه‌ها برحسب جنس و گونه باکتری
2- تعیین توزیع حساسیت یا مقاومت میکروبهای جدا شده به عصاره اتانولی و اسانس زنیان برحسب جنس و گونه باکتری
2- 3-مقایسه نتایج حساسیت یا مقاومت میکروبهای جدا شده به آنتی بیوتیک و عصاره اتانولی و همچنین اسانس زنیان برحسب جنس و گونه باکتری
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح
مراکز درمانی وبهداشتی
تعریف واژه های تخصصیCaroum cpticum: نام علمی گیاه زنیان میباشد.
سفتازیدیم: نسل سوم
سفتریاکسون: نسل سوم
وانکومایسین: آنتی بیوتیک رایج در درمان عفونت تنقسی می باشد.
کفلین:G + (نسل اول)
سیبروفلوکساسین: آنتی بیوتیک مرسوم در درمان عفونت ادراری می باشد
پنیسیلین: G +
کوتریموکسازول: آنتی بیوتیک مرسوم در درمان عفونت ادراری می باشد
اریترومایسین:
نوع مطالعهتوصیفی -تحلیلی
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)با توجه به اینکه سویه ها استاندارد میباشد نیازی به معیار ورود و خروج نمی باشد.
حجم نمونه و روش محاسبه آن
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)بذر خشک نمونه گیاه زنیان در یکی ازمزارع شهرستان زابل جمع آوری می شود.برای تهیه عصاره الکلی از روش خیساندن ،و برای تهیه اسانس از تقطیر با آب و بخار استفاده می شود.
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)جمع آوری مواد گیاهی:

بذرگیاهان از مزرعه تهیه میشود.

آماده سازی عصاره اتانولی گیاه زنیان:

گیاه زنیان را با آب مقطر شسته میگذاریم در هوای آزاد خشک شود سپس گیاه رامیکوبیم و با آسیاب پودر میکنیم.

در این تحقیق از اتانول 70 درجه و روش پرکولاسیون استفاده میشود. بدین ترتیب که 50 گرم از پودرزنیان را در داخل دکانتور ریخته، سپس مرحله مرحله به آن اتانول 70 درجه می افزاییم. برای افزودن اتانول ابتدا آن را گرم و سپس به داخل دکانتور انتقال میدهیم. افزودن اتانول را تا جایی ادامه می دهیم که تمامی حجم پودر داخل دکانتور خیس شده و مقداری از اتانول هم در روی سطح نمونه داخل دکانتور باشد. برای عصاره گیری کامل مدت 24 ساعت زمان لازم است. در این حالت پودر گیاه بهتر می تواند حلال را در خود جذب نماید تا حداکثر مواد موثره در اتانول حل شود. پس از عصاره گیری عمل جداسازی حلال از عصاره توسط دستگاه روتاری با کمک پمپ خلاء انجام میشود(37). و با توجه به اینکه حلال حذف شده اثر ضدباکتریایی از اتانول وجود ندارد (38).عصاره گیری در دانشگاه سیستان وباوچستان انجام میشود .عصاره گیاه به وسیله سرنگ میلی پور با فیلترهای به قطر22 /0میکرون فیلتره میگردد (39).

در این تحقیق سویه های استانداردکلبسیلا، پنوموکوک ، اشیرشیا کلی و استافیلوکوک اورئوس از سازمان پژوهش های علمی و صنعتی ایران تهیه و جهت مطالعه استفاده می شوند. (38).

روش تهیه اسانس:از بذر نمونه 100 گرم به طور دقیق وزن می شودو در یک آسیاب کاملا خرد خواهد گردید و براساس روش توصیه شده در فارماکوپه بریتانا(British pharmacopoeia 1988) و بروش تقطیر با آب به مدت 4 ساعت اسانس گیری می شود.سپس اسانس ها از آب جدا شده و پس از آبگیری تا زمان استفاده در شیشه های تیره و در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری می شوند.



رقیق سازی عصاره گیاه و تهیه دیسک های حاوی عصاره:

عصاره گیاهان مورد مطالعه را با پروپیلن گلیکول رقیق کرده و علاوه بر عصاره خالص، غلظت های 123/0-62/0-25/1-5/2-5 mg/ml ازعصاره تهیه میشود، سپس جهت تهیه دیسک های حاوی عصاره از دیسک های بلانک ساخت پادتن طب استفاده میشود. بدین ترتیب که دیسک های بلانک را در لوله های حاوی رقت های تعیین شده عصاره قرار میدهیم و بعد از مدت 3 تا 5 دقیقه پس از جذب کامل، دیسک ها را در دمای 37 درجة سانتی گراد قرار داده تا کاملاً خشک شده و جهت دیسک گذاری آماده شوند(20).

رقیق سازی اسانس گیاه و تهیه دیسک های حاوی اسانس:

جهت تعیین حداقل غلظت بازدارندگی (MIC) اسانس مورد نظر از روش استاندارد رقیق سازی بر محیط آگار استفاده می شود.با توجه به عدم حلالیت اسانس در محیط کشت محتوی آب لازم است به کمک حلال الی مناسب اسانس را درمحیط کشت تثبیت و یکنواخت نمود.به این منظور از حلال آلی اتانول استفاده می شود(Dillon and board, 1994؛ Murdock et al., 1999). اسانس استخراج شده در اتانول رقیق شده غلظت های 3/0-62/0-25/1-5/2-5 میلی گرم در میلی لیتر از آنها تهیه شده و به محیط کشت Muller-Hinntun agarانتقال می یابد و به خوبی در تمام قسمتهای محیط کشت یکنواخت می گردد (39).

بررسی اثر ضد باکتریایی عصاره :

روش انتشار در آگار: ابتدا از تمام سویه های باکتریایی سوسپانسیون میکروبی معادل5/0 مک فارلندcfu/ml) 108×5/1) تهیه میشود و سپس با 100 میکرولیتر از سوسپانسیون تهیه شده بر سطح محیط مولرهینتون آگار کشت یکنواخت انجام میشود.آنگاه دیسک های بلانک استریل، حاوی رقت های مختلف عصاره، با فاصله معین از یکدیگر از لبه پلیت بر روی سطح محیط کشت آگار قرار داده میشوند. پلیت ها به مدت 24 ساعت در 37 درجة سانتی گراد انکوبه شده و نتایج اثر ضدباکتریایی با اندازه گیری قطر هاله عدم رشد اطراف دیسک ها ثبت می شوند. برای حصول اطمینان، این آزمایش برای هر سویه باکتری سه بار تکرار میشود. میانگین قطر هاله عدم رشد در سه بار تکرار به عنوان قطر نهایی ثبت میشود(21) قطر هاله عدم رشد کمتر از 8 میلی متر به عنوان مقاوم، 8 تا 9 میلی متر نسبتاً مقاوم، بیشتر از 10 تا 12 میلی متر نسبتاً حساس و بیشتر از12 میلی متر به عنوان حساس در نظر گرفته میشود(40). همچنین از دیسک حاوی DMSO به عنوان کنترل منفی استفاده می شود لازم بذکر است در باکتری اشرشیا کلی از آنتی بیوتیک هایاریترومایسین، پنی سیلین، سفتازیدیم به عنوان کنترل مثبت ، باکتری استافیلوکوک اورئوس از آنتی بیوتیک های کوتریموکسازول، ونکومایسین، پنی سیلین، اریترومایسین بعنوان کنترل مثبت، باکتری کلبسیلا از آنتی بیوتیک های سفتریاکسون، سفتازیدیم به عنوان کنترل مثبت و باکتری پنوموکوک از آنتی بیوتیک های
روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)نتایجی که از سویه های متفاوت بدست میاید وارد spss شده وبا کمک این نرم افزار و به روش t-test تجزیه وتحلیل میشود.
ملاحظات اخلاقی ندارد
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها
1- هماهنگی با گروه شیمی دانشگاه سیستان و بلوچسستان برای عصاره گیری از گیاه
2-مشکلاتی که در زمان آماده سازی اسانس به وجود می اید. فرار بودن اسانس و... نگهداری اسانس و آبگیری اسانس جهت رفع این مشکلات اقدامات تمهیدات لازم انجام خواهد گرفت.
کلمات کلیدیcarumn copticum (زنیان)، antibacterial(ضدمیکروبی)، extract(عصاره)
فهرست منابع و مراجع1- زمانی، ر.، احمدی، ک.، سالاری، ا. و پورهمتی،ا. (1388) پتانسیل تولید و پرورش گیاهان دارویی و سمی در استان کرمان. دومین همایش معرفی فرصت های سرمایه گذاری استان کرمان، ماهان، ایران.
2- امیدبیگی، ر. (1376) رهیافت های تولید و فرآوری گیاهان دارویی. جلد اول، انتشارات طراحان نشر، تهران


3-سلطانی پور،م. ا.، "مقایسه ترکیب های اسانس برگ گیاه مورخوش (Zhumeria majdae) جمع آوری شده از مناطق مختلف استان هرمزگان در مراحل مختلف رشد وبررسی پتانسیل آللوپاتیک و خواص ضدمیکروبی اسانس استخراج شده". پایان نامه دانشجوی کارشناسی ارشد رشته علوم گیاهی، دانشکده علوم،دانشگاه شیراز.،1381
4-Tepe B., Donmez E., Unlu M., Candan F., Daferera D., and Vardar-Unlu G. Antimicrobial and antioxidative activities of the essential oils and methanol extracts of Salvia cryptantha (montbret et aucher ex benth.) and Salvia multicaulis (vahl). Food Chemistry, 2004.,84, 519–525.

5-Kordali S., Kotan R., Mavi A., Cakir A., Ala A., and Yildirim A. Determination of the chemical composition and antioxidant activity of the essential oil of Artemisia dracunculus and of the antifungal and antibacterial activities of Turkish Artemisia absinthium, A. dracunculus, Artemisia santonicum, and Artemisia spicigera essential oils. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2005.,53: 9452–9458.

6-Daferera D.J., Ziogas B.N., and Polissiou M.G. GC–MS Analysis of essential oils from some Greek aromatic plants and their fungitoxicity on Penicillium digitatum. Journal of Agricultural Food Chemistry, ٢٠٠٠. ٤٨,٢٥٧٦–٢٥٨١.

7-Feyzi, M.T.,Introduction Of the Satureje Bakhtiarica and its ecological characteristic in Esfahan province., proceeding of Natiomal Congress Of a Medical plants.Iran (2002)

8-Moshafi M.H., Mehrabani M. and Zolhasab, H. Antibacterial activity studies of Salvia Mirzayanii and Salvia Atropatana against six standard gram positive and gram negative bacteria. Kerman University Medicinal science,2004., 11 (2): 109-18.

9-Moshafi M.H., Forutan H. and Mehrabani, M. Investigation of antibacterial effects Hibiscus Sabdariffa L. Dried caryx by agar diffusion and bioautografic methods. Journal Kerman University Medical science, 2006 13 (2): 103-10.

10- مورای، پ. (1390) باکتری شناسی پزشکی. ترجمه بهادر، ع . انتشارات خسروی، تهران

11-جاوتز، م. برگ، آ. (1378) باکتری شناسی جاوتز. ترجمه رستمی، م.ر. انتشارات رایان طب علوم، تهران.

12- Kotzé M. and Eloff, J. N. Extraction ofantibacterial compound from Combretummicrophyllum (Combretaceae). South AfricanJournal of Botany,2002., 68: 62-67.

13- کرمانشاهی، ر.، معطر، ف و سلیمانی منش، ع. (1385) ارزیابی اثرهای ضد باکتریایی عصاره های آبی و الکلی گیاه گلرنگ بر روی تعدادی از باکتریها .مجله علوم دانشگاه شهید چمران 15: 25-18

14- Zargari, A. (1988). Medicinal Plants, Vol 2. Tehran University Press
15- Khajeh, M., Yamini, Y., Sefidkon, F. and Bahramifar, NComparison of essential oil composition of Carum copticum obtained by supercritical carbon dioxide extraction and hydrodistillation methods. FoodChemistry. 2004; 86: 587–591.
16-Pruthi, J. S. (2000) Minor Spices and Condiment Crop Management. Icar, New Delhi.
17- Mirheidar, H. Learnings from Pants: Using Plants as Prevention and Diseases Cure. Islamic culture introduction center;1993
18- Kriticar, K. R. and Basu, B. D. (1989) Indian Medicinal Plants. Vol 2. LALIT MOHAN.
19- Kapoor, L. D. (2001) Handbook of Ayurvedic Medicinal Plants. CRC Press LLC
20- Pareek, S. K., Saxena, R. K., Kidwai, M. A. and Gupta, R. Effect of sowing date, stage of harvest and spacing on henbane crop. Indian Journal of Agronomy,1991; 36: 247-250.
21- Platel, K. and Srinivasan, K. Studies on the influence of dietary spices on food transit time in experimental rats. Nutrition Research,2001; 21: 1309-1314.
22- زرگری، ع. (1376) گیاهان داروئی. جلد اول. انتشارات دانشگاه تهران، تهران، ایران .
23- صمصام شریعت، ه. (1374) پرورش و تکثیر گیاهان داروئی،

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
اخلاق.doc1392/06/2388576دانلود
امضا همکار.pdf1392/07/03216411دانلود
اسکن صورتجلسه شهریور.jpg1392/07/06477400دانلود
showLogin.doc1392/07/06351232دانلود
form davari.doc1392/07/0752224دانلود
داوری.doc1392/07/0750176دانلود