چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 6205 |
| عنوان فارسی طرح | استفاده از تکنیک مالتیپلکس ار-تی پی سی ار در بررسی فراوانی شش نوع مختلف از ویروس های دستگاه تنفسی در بیماران مراجعه کننده به کلینیک بوعلی با علایم حاد تنفسی |
| عنوان لاتین طرح | Multiplex RT- PCR and detection of six different respiratory viruses among patients with acute respiratory symptoms attending Boo- Ali clinic |
| نوع طرح | |
| محل اجرای طرح | مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی و گرمسیری |
| رسته مطالعاتی | مقطعی- توصیفی |
| دانشکده/مرکز | دانشگاه علوم پزشکی |
| زمان اجرا -روز |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| مصطفی حیدری | کارشناسی ارشد | mostafaheydari.m@gmail.com | ||
| ملیحه متانت(پژوهشگر/استاد راهنما) | مجری دوم | متخصص | malihemetanat@yahoo.com | |
| نرگس اربابی | همکار | کارشناسی ارشد | narges.arbabi@gmail.com | |
| مسعود صالحی | دکترای تخصصی | shahestan@gmail.com | ||
| علی بیدری | دستیاری پزشکی | bideriali@yahoo.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | استفاده از تکنیک مالتیپلکس ار-تی پی سی ار در بررسی فراوانی شش نوع مختلف از ویروس های دستگاه تنفسی در بیماران مراجعه کننده به کلینیک بوعلی با علایم حاد تنفسی |
| خلاصه طرح به لاتین | Multiplex RT- PCR and detection of six different respiratory viruses among patients with acute respiratory symptoms attending Boo- Ali clinic |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش |
در جوامع انسانی, سالیانه بیشترین آمار مرگ و میر و مراجعه به بیمارستان ها در تمامی گروه های سنی به آن دسته از ویروس ها تعلق دارد که دستگاه تنفسی انسان را مورد هجوم قرار میدهند. در سرتاسر جهان با آلودگی قسمت فوقانی دستگاه تنفسی مواجه می گردند که در بعضی موارد این علایم منتهی به آلودگی های شدید تر در قسمت تحتانی دستگاه تنفسی میگردد.1 بیماریهای تنفسی بویژه از انواع ویروسی و حاد شایع ترین بیماری های انسانی بوده و در همه فصول سال بالاخص در فصلهای سرد سال مشکلات فراوانی را برای مردم (از قبیل غیبت از کار و مدرسه..) و همچنین سیستم های بهداشتی و درمانی ایجاد می کند. میزان موربیدتی بیماریهای تنفسی حاد در اقتصاد کشورها تاثیرات منفی زیادی ایجاد می کند. این الودگی ها منشاء اصلی مراجعه به بیمارستان ها در کشورهای توصعه یافته و مرگ و میر در کشورهای در حال توسعه می باشد. 1,2,3 مهمترین ویروس هایی که باعث بروز آلودگی های دستگاه تنفسی (با فراوانی بیشتر در کودکان و فراوانی کمتر در بزرگسالان) میگردند عبارتند از : آنفلوانزای نوع A و B (Influenza A and B) , پارا انفلونزای نوع 1و2و3و4 (Parainfluenza viruses), رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B(Respiratory Syncytial Virus type A &B) , آدنو ویروس ها(Adenovirus), رهاینو ویروس( Rhinovirus) و برخی ویروس های نو ظهور به نام های: متانیومو ویروس های انسانی(Human Metapneumoviruses) و کورونو ویروس ها (Coronavirus).1,4 در این میان تکنیک های گوناگونی از قبیل ایزوله کردن ویروس ها, ایمینو فلورسنت (مستقیم و غیر مستقیم), ار-تی پی سی ار و مالتیپکس پی-سی-ار در تشخیص عوامل بیماری زا با منشا ویروسی را می توان به عنوان پر کاربرد ترین و رایج ترین تکنیک ها در کشورهای در حال توسعه به شمار اورد. مقایسه های کاربردی در این زمینه نشان دهنده نقاط ضعف و قوت هر کدام از این تکنیک ها می باشد. برای مثال تکنیک ایزوله کردن مستقیم ویروس ها, یکی از قدیمی ترین تکنیک ها در زمینه تشخیص این عوامل به شمار می اید و این در حالیست که این شیوه با محدودیت های بسیار از قبیل محدود بودن گونه ها و تنوع سلول های قابل کشت برای رشد ویروس های گوناگون, دشواری در پرورش ویروس های جدید در سلول های در دسترس و در نهایت زمان بری این تکنیک می باشد. این تکنیک به صورت عمده نیازمند بازه زمانی 48-72 ساعت برای ویروس ها با توانایی رشد بالا و در حدود 10 روز برای ویروس ها با توانایی رشد پایین می باشد. در مقابل این محدودیت ها, تکنیک ایمونوفلورسنت, تکنیکی بسیار سریع می باشد که با محدودیت هایی از قبیل پایین بودن دقت, نیازمندی به افراد مجرب و در نهایت در دسترس نبودن انتی بادی برای ویروس های نو ظهور مواجه است1,5,6,7,8,9,10 . تکنیک مونو پلکس ار-تی پی سی ار(Monoplex RT-PCR) نیازمند تست مجزا برای هر ویروس می باشد, که در نتیجه بسیار هزینه و زمان بر بوده و نمونه هایی که در انها بشتر از یک ویروس موجود می باشد غیر قابل بررسی باقی می مانند. در این میان بومی سازی و استفاده از تکنیکی با درصد خطای کمتر نسبت به سایر تکنیک هاو بهره وری زمانی و اقتصادی میتواند کمک شایانی در بدست آوردن تصویر مشخصی از نحوه چرخش فصلی این ویروس ها و به ویژه در این منطقه جغرافیایی به انجام رساند. دسترسی به این سیستم می تواند به خودی خود گام بسیار بلندی در تشخیص, پیشگیری و بهبود بیماران تنفسی در این استان ایفا نماید. مالتیپلکس ار-تی پی سی ار(Multiplex RT-PCR) به عنوان تکنیکی تقریبا نو ظهور در تشخیص ویروس های سیستم تنفسی با ویژگی حساسیت بالا و بسیاراختصاصی برای گونه های متفاوت ویروسی در این میان قابل بررسی می باشد. مالتیپلکس ار-تی پی سی ار به ما این امکان را میدهد که در تستی واحد تعداد بیشتری از ویروس ها در مدت زمان کمتری, نسبت به سایر تکنیک ها, قابل تشخیص باشند.11 مقدمه ای بر ویروس های مورد بررسی: : Respiratory Syncytial Virus-A and B رسپیریتوری سنسیشیال ویروس متعلق به خانواده پاراماکسوویریدایی(Paramyxoviridae) بوده و دارای RNA تک رشته ای به عنوان ماده ژنتیکی می باشد.این ویروس برای اولین بار در حیوان ازمایشگاهی (شامپانزه) همراه با شواهد سرما خوردگی مشاهده و خالص سازی گردید بعد ها این ویروس در کودکی با شرایط حاد تنفسی مشاهده و مشخص گردید که این ویروس یکی از مهمترین عوامل ایجاد بیماری های حاد تنفسی در نوزادان و کودکان می باشد12 مطالعات اپیدمیولوژیکی نشان دهنده این مطلب است که این ویروس در سرتاسر کشورهای جهان حضوری فعال داشته و به عنوان مهمترین عامل در ایجاد علایم حاد قسمت تحتانی دستگاه تنفسی و همچنین مرگ و میر در کودکان شناخته شده می باشد. مطالعات در آمریکا نشان میدهد که RSV ویروس عامل بستری شدن بیش از 100,000 بیمار و مرگ بیش از 4500 آنها می باشد. 1 مطالعات تکمیلی نشان میدهد که در کشورهای در حال توسعه و با شرایط بهداشتی متوسط, سالانه بین 1 تا 50 نفر از هر 1000 نفر بعد از ابتلا, با شرایط حاد بیماری مواجه شده و این بیماری باعث بروز نارسایی های تنفسی همیشگی در این افراد گردد1, 13. RSV ویروس از قابلیت بسیار بالایی در انتقال به افراد سالم و چرخش در جامعه برخوردار می باشد. 14 تکرر الودگی به این ویروس در کودکان خود بیانگر تغییر مداوم در ساختار این ویروس بوده که ساخت واکسن موثر برای این ویروس را دشوار می سازد. نقشه اپیدمیولوژیکی مربوط به این ویروس نشان می دهد که در قسمت های شمالی خط استوا این ویروس در ماه های پاییز و زمستان دارای بیشترین فراوانی میباشد. بر اساس این اطلاعات, در قسمت هایی از کره زمین با رطوبت نسبی بالا فراوانی و نقشه اپیدمیولوژی این ویروس از طرح خاصی پیروی نکرده و قابل پیش بینی نمی باشد15 دو نوع A و B این ویروس مینوانند در شرایط اپیدمی و همزمان حضور داشته باشند اما به صورت معمول به شکل 1 تا 2 سال درمیان باعث بروز شرایط اپیدمی میگردند. اگاهی از این مطلب نشان میدهد که معمولا الودگی به این ویروس با پایین امدن شرایط ایمنی در افراد شدت میگیرد13. پارا انفلونزای نوع 1و2و3 (Parainfluenza viruses type 1,2 and 3) پاراانفلانزا ویروس متعلق به خانواده Paramyxoviridae و دارای چها گونه متفاوت می باشد. این چهار گونه به نوبه خود در دو زیر گروه و یا جنرای (Genera) مختلف به نام های Respirovirus برای گونه های 1 و 3 و Rubulavirus برای گونه های 2و4 جای داده میشوند. ساختار ژنومی در این ویروس تشکیل یافته از یک واحد RNA تک رشته ای به به صورت کلی این رشته قطبی منفی بوده اما در برخی نمونه ها دارای RNA قطبی مثبت نیز می باشد. از میان چهار گونه مختلف, گونه های 1,2 و 3 باعث الودگی های شدید در قسمت تحتانی دستگاه تنفسی شده اند13. در زمینه بیماری زایی و اپیدمیولوژی, انواع مختلف این ویروس در تمامی کشورها یافت شده و باعث بروز علایم گوناگون الودگی در دستگاه تنفسی از قبیل کروپ و برونشیتیس و ذات الریه میگردند.23 در این زمینه نوع 1و2 این ویروس باعث بروز کروپ, نوع 3 باعث بروز ذات الریه و نوع 4 فاقد شواهد بالینی خاص بوده و یا باعث بروز شواهد سرماخوردگی های ساده در بیماران میگردد. در کشورها با اقلیم گرمسیری, این ویروس یکی از مهمترین عوامل سرماخوردگی های ویروسی در فصول سرد سال به شمار میرود و از میان چهار نوع مختلف ان, دو سویه 1 و 2 توانایی بالایی در ایجاد شرایط اپیدمیولوژیکی دارا میباشند16,13,1. بررسی دیگری بر روی زایران ایرانی حج با عفونتهای ویروسی حاد تنفسی در سال 2006 در شیراز صورت گرفته است در مقاله امده است با توجه به حضور بیش از دو میلیون زایر از کشورهای مختلف جهان در عربستان سعودی بیماری های تنفسی از شایع ترین علت بیماری زایران ایرانی می باشد. در این مطالعه که به روش فلورسنت مستقیم انجام شده است ابتدا نمونه گیری در افراد علامت دار در در فرودگاه صورت گرفت و برای انفلوانزا A وB پارا انفلوانزا 1 تا 3 ادنوویروس ویروس سنسیشیال تنفسی و رینوویروس و انتروویروس به روش reverse transcription polymerase chain reaction بررسی گردید بیماران در سن بین 19 تا 82 سال و135 نفر زن و 120 نفر مرد بوده اند در نهایت 32.5 درصد یک پاتوژن ویروسی داشته اند و در این بین 9.8 درصد انفلوانزا - پاراانفلوانزا 7.4 درصد رینوویروس 5.9 درصد - اتتروویروس 2درصد و RSV در 4 نفر یا 1.6 درصد و عفونت همزمان در 1 بیمار یا 0.4 درصد بدست امد.17 متانیومو ویروس های انسانی(Human Metapneumoviruses) متانیومو ویروس های انسانی و یا (HMPV) متعلق به خانواده Paramyxoviridae بوده و به زیر گروه Paramyxovirus ها و دستهMetapneumoviruse تعلق دارد و همانند RSV این ویروس نیز دارای RNA به عنوان ماده ژنتیکی میباشد. بررسی های ژنتیکی نشان دهنده دو نوع گوناگون و در نهایت چهار سویه ی متفاوت از این ویروس میباشد. این ویروس برای اولین بار در سال 2001 در کشور هلند در کودکی با شواهد الودگی دستگاه تنفسی تشخیص داده شد18. مطالعات اپیدمیولوژیکی نشان دهنده حضور این ویروس در تمامی قاره ها می باشد. در مناطقی با شرایط اب و هوایی گرم و خشک HMPV بیشتر در انتهای فصل زمستان و اوایل بهار مشاهده میگردد و نقطه قابل ملاحظه افزایش فراوانی این بیماری بعد از پایان اپیدمی RSVمشخص گردیده است.در بسیاری از کشورها HMPV در تمامی طول سال و با امار کمتر در فصول تابستان و پاییزقابل تشخیص identification of 12 respiratory viruses using a dual priming oligonucleotide system-based multiplex PCR assay. J Virol Methods 2009 Mar; 156 (1-2):111-6. 21.Beka H, Kilic A, Unuvar E, Onel M ,Oguz F, Sidal M, Aslan S, Bozkaya E, Badur S, Agacfidan A. Frequency of Common Viruses in Etiology of Acute Respiratory Tract Infections. Indian J Pediatr (February 2013) 80(2):91–96 22.Feikin D R, Njenga M. K, Bigogo G, Aura B, Aol G, Audi A ,Jagero G, Muluare P O, Gikunju S, et al. Etiology and Incidence of Viral and Bacterial AcuteRespiratory Illness among Older Children and Adults inRural Western Kenya, 2007–2010. PLoS ONE 7(8): e43656. doi:10.1371/journal.pone.0043656 23-Hirsch H, Martino R, Ward KN, Boeckh M, Einsele H, Ljungman P. Fourth European Conference on Infections in Leukaemia (ECIL-4): Guidelines for Diagnosis and Treatment of Human Respiratory Syncytial Virus, Parainfluenza Virus, Metapneumovirus,Rhinovirus, and Coronavirus, CID 2013:56 (15 January) ,285-266 میباشد. استفاده از یک تکنیک ازمایشگاهی دقیق, کم هزینه و سریع برای تشخیص این ویروس مورد نیاز می باشد19. مطالعات مختلف نشان میدهند که این ویروس در جایگاه دوم بعد از RSV در بروز شواهد حاد در قسمت تحتانی دستگاه تنفسی نقش دارد2, 20 در یک مطالعه در109 بیمار ، فراوانی علل ویروسی 4/39 بود وویروس انفلوانزا و RSV و در درجه بعد متاپنوموویروس شایع بود.21 در یک مطالعه در کنیا، شایعترین علت ایجاد کننده بیماری حاد تنفسی در نوجوانان و بالغین، ویروس انفلوانزا و RSV و متاپنوموویروس بود22 این ویروس موجب عفونت تنفسی فوقانی و تراکوبرونشیت در 5-20% در بچه ها و بالغین میشود23 در این طرح تحقیقاتی ما قصد داریم فراوانی این ویروسهارا در بیماران با علائم حاد تنفسی ، برای اولین بار در این منطقه مورد بررسی قرار دهیم. |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | فراوانی عفونت های مربوط به پارا انفلونزای نوع 1و2و3, رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B و متانیومو ویروس انسانی در بیماران مبتلا به علائم حاد تنفسی چقدر می باشد؟
فراوانی عفونت های مربوط به به پارا انفلونزای نوع 1و2و3, رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B و متانیومو ویروس انسانی در بیماران مبتلا به علائم حاد تنفسی بر حسب گروه سنی چقدر است؟ فراوانی عفونت های مربوط به به پارا انفلونزای نوع 1و2و3, رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B و متانیومو ویروس انسانی در بیماران مبتلا به علائم حاد تنفسی براساس جنس چقدر است؟ فراوانی عفونت های مربوط به به پارا انفلونزای نوع 1و2و3, رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B و متانیومو ویروس انسانی در بیماران مبتلا به علائم حاد تنفسی بر حسب فصل چقدر است؟ فراوانی عفونت مربوط به به پارا انفلونزای نوع 1و2و3, رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B و متانیومو ویروس انسانی در بیماران مبتلا به علائم حاد تنفسی بر حسب علائم بالینی چقدر است؟ |
| هدف کلی طرح | استفاده از تکنیک مالتیپلکس ار-تی پی سی ار در بررسی فراوانی شش نوع مختلف از ویروس های دستگاه تنفسی در بیماران مراجعه کننده به کلینیک بوعلی با علایم حاد تنفسی |
| اهداف اختصاصی | تشخیص وجود پارا انفلونزای نوع 1و2و3, رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B و متانیومو ویروس انسانی در بیماران مراجعه کننده با علایم حاد تنفسی.
تشخیص وجود پارا انفلونزای نوع 1و2و3, رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B و متانیومو ویروس انسانی در بیماران مراجعه کننده با علایم حاد تنفسی برحسب گروه سنی تشخیص وجود پارا انفلونزای نوع 1و2و3, رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B و متانیومو ویروس انسانی در بیماران مراجعه کننده با علایم حاد تنفسی برحسب جنس تشخیص عفونت پارا انفلونزای نوع 1و2و3, رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B و متانیومو ویروس انسانی در بیماران مبتلا به عفونت حاد تنفسی بر حسب فصل تشخیص وجود پارا انفلونزای نوع 1و2و3, رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B و متانیومو ویروس انسانی در بیماران مراجعه کننده با علایم حاد تنفسی بر حسب علائم |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی و گرمسیری |
| تعریف واژه های تخصصی | -9
Parainfluenza viruses: Are the etiologic agents causing different levels of respiratory illnesses, both in human and animals, which belong to paramayxoviridae family. Respiratory Syncytial viruses: Are the major causes of lower respiratory infections in different age groups belonging to family paramyxoviridae. Human metanumoviruses: Are the second common cause of respiratory track infection (after respiratory syncytial virus) which also belong to family paramyxoviridae Multiplex RT-PCR: Multiplex RT-PCR or multiplex reverse transcription–polymerase chain reaction, is the modified version of uniplex RT-PCR. In this technique instead of single, pare of oligonucleotide primers, we are using a two or more pare of primers for multi detection purposes. Acute Respiratory infection (ARI): An upper respiratory tract infection might be cause by different etiological agents, (viruses, bacteria etc.).ARI characterized by variety of respiratory symptoms like sneezing, coughing, watery eyes and nasal congestion, etc. Definitions of Community-Acquired Respiratory Virus: • Respiratory Tract Infectious Disease (RTID) Case Classification: Possible case: meeting the clinical criteria of RTID Probable case: meeting the clinical criteria of RTID together with an epidemiological link Confirmed case: meeting the clinical criteria of RTID and the laboratory criteria Clinical criteria New onset of symptoms AND at least 1 of the following 4 respiratory symptoms: Cough Sore throat Shortness of breath Coryza AND the clinician’s judgment that the illness is due to an infection Epidemiological criteria An epidemiological link to human-to-human transmission (Activity in the community, contact with visitor, another patient, or healthcare worker) Laboratory criteria Detection of CARV(community-acquired respiratory virus) in a clinical specimen, preferably from the site of clinical involvement, by at least 1 of the following: Virus isolation by cell culture Direct virus antigen detection Nucleic acid amplification testing AN |
| نوع مطالعه | توصیفی-مقطعی |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | بیماران مراجعه کننده با علایم تنفسی به کلینیکهای بیمارستان بوعلی زاهدان
INCLUSION CRITERIA بیمارانی واردمطالعه میشوند که: سن: افراد بالاتر از 18 سال علایم: با اغاز حاد (1-3روزه )و وجود یکی از علائم( کوریزا، سرفه و سوزش گلو، تنگی نفس )داشته باشند. EXCLUSION CRITERIA بیمارانی که برای شرکت در طرح مطالعاتی رضایت یا همکاری لازم را نداشته باشند. عفونت ثابت شده ای ( مثل انفلوانزا) برای بیماروجود نداشته باشد. از شروع علائم 4 روز یا بیشتر سپری شده باشد. وجود بیماری زمینه ای( مالیگننسی، بیماری قلبی ریوی زمینه ای ونقص ایمنی سابقه آلرژی و سینوزیت مزمن |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | با استفاده از آمار ذکر شده در مطالعات انجام گرفته ,حجم نمونه 200 نفر در نظر گرفته شد |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | روش نمونه گیری در دسترس واسان میباشد |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | جهت جمع آوری اطلاعات از پرسشنامه ای که به این منظور طراحی گردیده است و نیز تکنیکهای مشاوره ای استفاده می شود و اطلاعات جمع آوری شده مربوط به ابتلای اخیر و یافته های پاراکلینیک می باشد.
جهت جمع اوری داده ها ازفرم های اطلاعاتی استفاده میشود فرم اطلاعاتی ضمیمه شده است.(اخرین صفحه):در برخورد با بیماران مبتلا به الودگی تنفسی اولین مرحله پر کردن فرمهای مربوط به اطلاعات فردی و مشخصات بالینی بیماران مورد هدف می باشد.در این فرم پارامترهایی شامل نام و نام خانوادگی سن جنس تب تنگی نفس لرز کوریزا اشک ریزش سردرد خلط گلودرد اسهال و در نظر گرفته می شود.این اطلاعات پس ازدریافت نمونه در پرسشنامه تکمیل می گردد. نمونه گیری از بیماران:در نمونه گیری از دستگاه تنفسی به طور کلی از از شیوه شامل نمونه سواب از گلو بینی و حلق استفادهNASOPHARYNGEAL.THROAT.NASAL میشود. در مرحله بعد این سواب ها را در تیوب های استاندارد و حاوی Viral transport medium(vtm)یا محیط های انتقالی ویروس منتقل می نماییم. |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | تعداد 200 بیمار با تشخیص بیماری تنفسی حاد که دارای علایم تنگی نفس یا سوزش گلو، سرفه وکوریزا هستند انتخاب میشوند اطلاعات لازم در پرسشنامه ثبت شده و پس از توضیح در خصوص نحوه نمونه گیری و همچنین اخذ رضایت با سواب مرطوب و استریل از حلق و بینی نمونه گیری انجام شده و در شرایط استریل در لوله های ازمایش حاوی حامل نگهداری و به ازمایشگاه ارسال می گردد.
بیمار بعد از قرار گرفتن در شرایط مناسب در وضعیتی که صورت او مقابل ما باشد شفت استریل و فاقد رطوبت را که مخصوص نمونه برداری می باشد را به اهستگی وارد فضای دهان بیمار نموده و به ارامی دیواره لوزه ها و بینی را با انتهای پنبه ای ان تماس میدهیم. شفت حاصل را به درون لوله ازمایشگاهی محتوی VTM منتقل می کنیم. این مرحله در حد امکان بصورت استریل انجام میشود. نمونه را ضمن حفظ درجه حرارت نگهداری 4درجه سانتیگراد در اسرع وقت به ازمایشگاه ارسال میکنیم. پروتکل و نحوه انجام تست های ازمایشگاهی: دریافت و اماده سازی نمونه ها:شفت های موجود در لوله های ازمایشگاهی را در شرایط استریل خارج کرده و با سرعت 1000RPM در 4درجه سانتی گراد به مدت 10 دقیقه سانتریفوژ میکنیم. استخراج RNA:در این مرحله 50 تا 200 میکرو لیتر از هر نمونه (بر اساس کیت های در دسترس)برای استخراج RNA مورد استفاده قرار می گیرد. و PCR انجام میشود ژل الکتروفورزیس: • تشخیص پارا انفلونزای نوع 1و2و3 • رسپیریتوری سینسیشیال ویروس نوع Aو B • متانیومو ویروس انسانی در بیماران مراجعه کننده به کلینیک بوعلی با علایم حاد تنفسی شرایط نگهداری بلند مدت نمونه ها: I. به منظور نگهداری بلند مدت نمونه ها انها را به واحد های کوچکتر یک تا دو میلی لیتر تقسیم کرده و بعد از ثبت دقیق نامگذاری موارد مورد نیاز در فریزر با دمای -20 تا -80 درجه سانتیگراد نگهداری می نماییم. II. با توجه به اسیب پذیر RNA ویروسها در نتیجه تغییرات دمایی لازم است برای نگهداری طولانی نمونه ها از تغییر وضعیت دمایی پیشگیری و یا محدود گردد. |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | |
| ملاحظات اخلاقی | در این مطالعه پس از تصویب در کمیته اخلاق پزشکی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان براساس مفاد بیانیه هلسینکی و کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی ، هدف از انجام مطالعه به طور کامل برای افراد مورد مطالعه توضیح داده می شود و به طور آگاهانه از بیماران رضایت کسب می گردد (مطابق کد1 کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی ) و جهت حفظ اصول اخلاق پژوهشی کلیه اطلاعات شخصی بیماران مورد مطالعه محرمانه باقی خواهد ماند (معادل کد17 کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی )بیمار محق می باشد هر زمان مایل بود بدون این که در برخورد پزشک با وی و نحوه درمان او تغییری ایجاد شود از مطالعه خارج گردد.(معادل کد8 کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی ). |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | عدم همکاری بیماران جهت نمونه گیری از ترشحات.
احتمال افزایش هزینه های ازمایشگاهی با توجه به افزایش قیمت های مواد مصرفی و دستمزدهای کارکنان مرتبط. |
| کلمات کلیدی | Parainfluenza 1,2 and 3, Respiratory Syncytial Virus A and B Human metanumovirus , Multiplex RT-PCR,
پارا انفلونزای نوع 1و2و3و رسپیریتوری سینسیشیال ویروس |
| فهرست منابع و مراجع | 1. Mahony JB. Detection of respiratory viruses by molecular methods. Clin Microbiol Rev 2008 Oct; 21 (4):716-47
2. Kahn JS. Epidemiology of human metapneumo virus. Clin Microbiol Rev 2006 Jul;19 (3):546-57. 3. Bharaj P, Sullender WM, Kabra SK, Mani K, Cherian J, Tyagi V, et al. Respiratory viral infections detected by multiplex PCR among pediatric patients with lower respiratory tract infections seen at an urban hospital in Delhi from 2005 to 2007. Virol J 2009; 6: 89. 4. Mahony J, Chong S, Merante F, Yaghoubian S, Sinha T, Lisle C, et al. Development of a respiratory virus panel test for detection of twenty human respiratory viruses by use of multiplex PCR and a fluid microbead-based assay. J Clin Microbiol 2007 Sep;45 (9):2965-70. 5. Gadsby NJ, Hardie A, Claas EC, Templeton KE. Comparison of the Luminex Respiratory Virus Panel fast assay with in-house real-time PCR for respiratory viral infection diagnosis. J Clin Microbiol 2010 Jun;48 (6):2213-6. 6. Legoff J, Kara R, Moulin F, Si-Mohamed A, Krivine A, Belec L, et al. Evaluation of the one-step multiplex real-time reverse transcription-PCR ProFlu-1 assay for detection of influenza A and influenza B viruses and respiratory syncytial viruses in children. J Clin Microbiol 2008 Feb;46 (2):789-91. 7. Yoo SJ, Kuak EY, Shin BM. Detection of 12 respiratory viruses with two-set multiplex reverse transcriptase-PCR assay using a dual priming oligonucleotide system. Korean J Lab Med 2007 Dec; 27 (6):420-7. 8. Nolte FS, Marshall DJ, Rasberry C, Schievelbein S, Banks GG, Storch GA, et al. MultiCode-PLx system for multiplexed detection of seventeen respiratory viruses. J Clin Microbiol 2007 Sep; 45 (9):2779-86. 9. Bellau-Pujol S, Vabret A, Legrand L, Dina J, Gouarin S, Petitjean-Lecherbonnier J, et al. Development of three multiplex RT-PCR assays for the detection of 12 respiratory RNA viruses. J Virol Methods 2005 Jun; 126 (1-2): 53-63. 64 10. SUE C. KEHL, KELLY J. HENRICKSON, WEIMIN HUA, AND JIANG FAN, et al Evaluation of the Hexaplex Assay for Detection of Respiratory Viruses in Children. J OF Clin Microbiology 2001 May; 1696–1701. Gadsby NJ, Hardie A, Claas EC, Templeton KE. Comparison of the Luminex Respiratory Virus Panel fast assay with in-house real-time PCR for respiratory viral infection diagnosis. J Clin Microbiol 2010 Jun;48 (6):2213-6. 11. Choudhary M.L, Anand S p , Heydari M. Development of multiplex one step RT –PCRthat detects eighteen respiratory viruses in clinical specimens and comparison with real time RT-PCR.Jornal of Virological Methods.2013.120431-5 12. 15. Chanock RM, Roizman B, Myers R. Recovery from infants with respiratory illness of a virus related to chimpanzee coryza agent. I. Isolation, properties and characterization. Am J Hygiene 1957; 66: 281-290. 13. Knipe, David M.; Howley, Peter M. Fields Virology, 5th Edition .In: Robert A. Lamb, Griffith D. editors. Paramyxoviridae. Copyright ©2007 Lippincott Williams & Wilkins.p 1440-1536. 14. Weinberger M. Respiratory infections and asthma: current treatment strategies. Drug Discov Today 2004 Oct 1; 9 (19):831-7. 15. www.cdc.gov/CDC, 2002; McIntosh, 2000, Respiratory Syncytial virus epidemiology available from www.cdc.gov/ncidod/eid/vol7no2/pdfs/goldmann. 16. Henrickson KJ. Parainfluenza viruses. Clin Microbiol Rev 2003 Apr; 16 (2):242-64. 17-Alborzi A. Aelami MH. Ziyaeyan M.Jamalidoust M. Viral etiology of acute respiratory infections among Iranian Hajj pilgrims, 2006.J Travel Med:2009:16(4):239-42. 18.Van den Hoogen, B. G., T. M. Bestebroer, A. D. M. E. Osterhaus, and R. A. M. Fouchier. 2002. Analysis of the genomic sequence of a human metapneumovirus. Virology 295:119–132. 19.Galiano M, Videla C, Puch SS, Martinez A, Echavarria M, Carballal G. Evidence of human metapneumo virus in children in Argentina. J Med Virol 2004 Feb; 72 (2):299-303. 20.Kim SR, Ki CS, Lee NY. Rapid detection and |
| معرفی پژوهش/ اهداف پژوهش (عین عبارت هدف پروپوزال را کپی نکنید. بلکه با جملاتی که برای مردم قابل فهم باشد (برای سواد حدود پنجم ابتدایی )هدف را برای شرکت کنندگان توضیح دهید.) در تمام این متن در صورتیکه شرکت کننده کودک یا فرد فاقد ظرفیت تصمیم گیری است باید مواردیکه منظور از "من"، فرد شرکت کننده بوده است به "کودک" یا "فرد تحت سرپرستی من" اصلاح شود و مواردیکه منظور از "من"، رضایت دهنده است به من به عنوان "ولی" یا "قیم قانونی" اصلاح شود. | |
| خون گیری (آیا طرح شما نیاز به خونگیری دارد یا خیر) | |
| نحوه همکاری/ مزایا ی طرح (در این بخش برای شرکت کنندگان به زبان ساده توضیح دهید که: چه مداخله ای بر روی آنها صورت میگیرد. چه اقدامات پاراکلینیکی بر روی آنها انجام میشود. چه نمونه ای و با چه حجمی از آنها میگیرید در این مدت چند نوبت مراجعه باید داشته باشند و به چه فواصلی چه اقداماتی را در پیگیری آنها انجام میدهید. (حتی میتوانید سود بالقوه ای که شرکت کنندگان میتوانند از شرکت در این پژوهش ببرند بنویسید. این سود میتواند شرح احتمال درمان یا تشخیص بهتر بیماریشان، دریافت خدمات سلامت رایگان و یا پرداخت مشوق مالی در ازای جبران همکاریشان باشد) | |
| عوارض جانبی (منظور عوارض و میزان احتمال بروز آنها در این مطالعه است) | |
| جبران عوارض احتمالی (برای آنکه شرکت کننده بتواند ارزیابی مناسبی از سود و زیان شرکت در پژوهش شما داشته باشد لازم است بتواند سود و زیان مداخلات معمول و مداخلات این پژوهش را مقایسه کند. به عنوان مثال میزان موفقیت و میزان عوارض هریک را مقایسه کند.) - او باید بداند كه اگر در حين و بعد از انجام پژوهش هم هر مشكلي اعم از جسمي و روحي به علت شرکت در اين پژوهش برایش پيش آمد درمان عوارض، و هزينههاي آن و غرامت مربوطه بر عهده مجري خواهد بود. | |
| هزینه های مربوط به انجام طرح تحقیقاتی (تمام مداخلات پژوهشی باید برای بیمار رایگان باشد و بیمار بداند شامل چه مواردی هستند. ) | |
| روش های جایگزین در صورت عدم تمایل به شرکت در مطالعه چه روش های درمانی برای بیمار ارائه خواهد شد | |
| محرمانه بودن بیمار باید بداندکه دست اندر كاران اين پژوهش، كليه اطلاعات مربوط به او را نزد خود به صورت محرمانه نگهداشته و فقط اجازه دارند نتايج كلي و گروهي اين پژوهش را بدون ذکر نام و مشخصات بیمار منتشر كنند. و كميته اخلاق در پژوهش با هدف نظارت بر رعایت حقوق وی ميتواند به اطلاعات ایشان دسترسي داشته باشد. | |
| پاسخگویی به پرسش ها در این بخش نام و اطلاعات دسترسی فردی از عوامل پژوهش را که بتواند اطلاعات صحیح و کافی در اختیار شرکت کنندگان قرار دهند و در مورد عوارض و نگرانیها راهنمایی لازم را ارائه دهند ذکر شود | |
| حق نپذیرفتن یا انصراف بیمار باید بداند که شرکت اودر اين پژوهش کاملاً داوطلبانه است و مجبور به شرکت در اين پژوهش نيست و در صورت عدم شرکت از مراقبتهاي معمول تشخيصي و درماني محروم نخواهد شد او باید بداند كه حتي پس از موافقت با شركت در پژوهش ميتواند هر وقت كه بخواهد، پس از اطلاع به مجري، از پژوهش خارج شود و خروج اواز پژوهش باعث محرومیت از دریافت خدمات درمانی معمول برای اونخواهد شد. | |
| رضایت او باید بداند که اگر اشکال يا اعتراضي نسبت به دست اندركاران يا روند پژوهش دارد مي تواند با كميته اخلاق در پژوهش دانشگاه تماس گرفته و مشکل خود را به صورت شفاهي يا كتبي مطرح نمايد. در انتهای فرم قید گردد : اينجانب موارد فوقالذکر را خواندم و فهميدم و بر اساس آن رضايت آگاهانه خود را براي شركت در اين پژوهش اعلام ميکنم. اينجانب ……………… خود را ملزم به اجراي تعهدات مربوط به مجري در مفاد فوق دانسته و متعهد ميگردم در تأمين حقوق و ايمني شركت كننده در اين پژوهش تلاش نمايم | |
| پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| اسکن امضا بیدری.jpg | 1392/07/01 | 267547 | دانلود |
| اسکن صورتجلسه شهریور.jpg | 1392/07/06 | 477400 | دانلود |
| رضایت%20نامه | 1392/07/06 | 88576 | دانلود |
| _____________.doc | 1392/08/04 | 331776 | دانلود |
