چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 6223 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر ضدمیکروبی عصاره اتانولی پنیر باد(Withania somnifera ) برروی سویه های استافیلوکوکوس آرئوس ، سودوموناس آئروژینوزا و اشرشیاکلی مقاوم به آنتی بیوتیک جدا شده از بیماران بیمارستان شهرستان زاهدان |
| عنوان لاتین طرح | Antibacterial effects study of ethanolic extract of Withania somnifera against antibiotic resistant strains of S. auerus, P. aeruginosa and E. coli isolated from patients in Zahedan hospitals. |
| نوع طرح | |
| محل اجرای طرح | مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی و گرمسیری |
| رسته مطالعاتی | توصیفی(مطالعه کمی) |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پیراپزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| محمد بکائیان | مجری اول | دکترای تخصصی | bokaeian.m@gmail.com | |
| سعیده سعیدی | مجری دوم | همکاری در جمع آوری اطلاعات | s.saeedi12@yahoo.com | |
| ناهید سپهری راد | همکار | کمک در آزمایشات میکروبی و مکانیسم عمل | کارشناسی ارشد | nahid.sepehri@gmail.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | بررسی اثر ضدمیکروبی عصاره اتانولی پنیر باد(Withania somnifera ) برروی سویه های استافیلوکوکوس آرئوس ، سودوموناس آئروژینوزا و اشرشیاکلی مقاوم به آنتی بیوتیک جدا شده از بیماران بیمارستان شهرستان زاهدان |
| خلاصه طرح به لاتین | Antibacterial effects study of ethanolic extract of Withania somnifera against antibiotic resistant strains of S. auerus, P. aeruginosa and E. coli isolated from patients in Zahedan hospitals. |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | گسترش زیاد مقاومت به آنتی بیوتیک ها در بین باکتری های بیماری زا، درمان بیماری های عفونی را مشکل و پرهزینه کرده است (1). داروهای آنتی بیوتیک موجود، علاوه بر گران بودن و مقرون به صرفه نبودن تولید آن ها، مشکل مقاوم شدن ایزوله های بیماری زا در برابر آن ها را هم در بردارند، به همین دلیل تهیه آنتی بیوتیک های جدید ضروری به نظر می رسد. پنیر باد(Withania somnifera) گیاهی درختچه ای از خانوادهSolinaceae می باشد که در نواحی مختلفی از پاکستان، آفریقا، مدیترانه و هند رشد می کند(2). در ایران، این گیاه بومی استان سیستان و بلوچستان بوده و در مناطق سراوان، سرباز و زابل یافت می شود. گیاه پنیر باد به عنوان عامل ضدالتهاب، آنتی اکسیدانت، تقویت کننده حافظه و ضد درد مورد استفاده قرار می گیرد(5-3). همچنین برخی از مطالعات بیانگر خواص میکروبی و ضد قارچی این گیاه می باشد(6، 7). استافیلوکوکوس آرئوس باکتری بیماری زای مهمی است که در بروز عفونت های مختلف از جمله اندوکاردیت، سپتی سمی، ضایعات کلیوی، مننژیت، مسمومیت های غذایی در انسان و ورم پستان در گاو های شیری دخالت دارد(8). این باکتری به دلیل داشتن عوامل بیماری زای متعدد از جمله آنزیم ها و سموم مختلف در مقابل دفاع میزبان پایداری می کند. بروز مقاومت روز افزون در میان ایزوله های کلینیکی این باکتری در سال های اخیر موجب گسترش مجدد عفونت های استافیلوکوکی در میان بخش های بیمارستانی شده است(9). اشرشیاکلی باسیلی گرم منفی از خانواده انتروباکتریاسه است که بیماری های مختلفی از جمله عفونت دستگاه ادرای تناسلی، عفونت کیسه صفرا و مجاری صفراوی، مننژیت نوزادان نارس و کودکان ضعیف، عفونت زخم، پنومونی، پریتونیت را در انسان ایجاد می کند(10). پسودوموناس آئروژینوزا باکتری گرم منفی میله ای است که به عنوان یک پاتوژن فرصت طلب بیمارستانی میتواند در بیماران بستری در بخش مراقبت های ویژه، سوختگی و سایر بخش ها ایجاد عفونتهای ثانویه ی اکتسابی نماید(11) . هدف از این طرح، بررسی اثر ضدمیکروبی عصاره اتانولی پنیر باد بر سویه های استافیلوکوکوس آرئوس،پسودوموناس آئروژینوزا و اشرشیاکلی مقاوم به آنتی بیوتیک جدا شده از بیماران بیمارستان شهرستان زاهدان می باشد.
در مطالعه Mehrotra که در هند انجام شد عصاره آبی ریشه پنیر باد مهار کننده بسیار قوی رشد استافیلوکوکوس آرئوس مقاوم به آنتی بیوتیک بوده است(12). در مطالعه Pujari، عصاره اتانولی پنیر باد فعالیت ضدمیکروبی بسیار زیادی در برابر باکتری های استافیلوکوکوس آرئوس و سالمونلا تیفی داشته است(13). بر اساس مطالعه sinha عصاره متانولی ریشه و برگ این گیاه مهار کننده باکتری های استافیلوکوکوس آرئوس و اشرشیاکلی با قطر هاله مهاری(12 میلی متر برای ریشه) و 14میلی متر برای برگ) بوده است(14). در بررسی دیگری نیز مشخص شد که عصاره آبی و متانولی ریشه پنیر باد مهار کننده رشد باکتری ها به ترتیب با قطر هاله مهاری(33-15 میلی متر برای استافیلوکوکوس آرئوس و 50- 38 میلی متر برای اشرشیاکلی است(15). در مطالعه Halamova نتایج نشان داد که عصاره استونی بذر این گیاه رشد باکتری استافیلوکوکوس آرئوس را با قطر هاله مهاری 21 میلی متر مهار کرده است(16). بر اساس گزارش Alam نیز عصاره متانولی ریشه، برگ و میوه پنیر باد در برابر باکتری های اشرشیا کلی و پسودوموناس آئروزینوزا دارای اثر مهارکنندگی است(17). Jain و همکاران هم گزارش کرده اند که عصاره متانولی پنیر باد مهار کننده رشد باکتری های اشرشیاکلی، پسودوموناس آئروژینوزا و استافیلوکوکوس آرئوس با قطر هاله مهاری 38، 36 و 15 میلی متر به ترتیب می باشد(18). با توجه به نتایج فوق و بومی بودن این گیاه در مناطقی از استان سیستان و بلوچستان و نیز با توجه به ایجاد و گسترش سویه های مقاوم باکتریایی در این منطقه و هزینه بالای آنتی بیوتیک ها و آشنایی و پذیرش بهتر داروهای گیاهی در این استان، لزوم انجام بررسی بیشتر اثرات ضد باکتریایی این گیاه کاملا احساس میگردد. رنگ در آن مشاهده می شود به عنوان MIC( حداقل غلظت مهار کننده) در نظر گرفته می شود(22). 56:1000-1018. 21. Baron E. J. and Finegold S. M. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology 1990; 171-178. 22. Yu J.Q, Lei J.C, Yu H, Cai X, Zou G.L. Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oil of Scutellaria barbata. Phytochemistry 2004; 65: 881–884. |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | عصاره گیاهی پنیر باد بر روی سویه های مقاوم استافیلوکوکوس ارئوس، پسودو موناس آئروزینوزاو اشرشیاکلی موثر است. |
| هدف کلی طرح | هدف از این مطالعه بررسی اثر ضدمیکروبی عصاره اتانولی پنیر باد برروی سویه های استافیلوکوکوس آرئوس، پسودو موناس آئروزینوزا و اشرشیاکلی جدا شده از بیماران بیمارستان شهرستان زاهدان می باشد. |
| اهداف اختصاصی | 1- تعیین توزیع فراوانی و حساسیت باکتری های اشرشیا کلی ، استافیلوکوکوس ارئوس و پسودو موناس آئروزینوزا به آنتی بیوتیک های مرسوم
2- تعیین توزیع فراوانی و حساسیت باکتری های اشرشیا کلی ، استافیلوکوکوس آرئوس و پسودو موناس آئروزینوزابه عصاره گیاه پنیر باد |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | دانشگاه علوم پزشکی زاهدان و بیمارستان های تحت پوشش |
| تعریف واژه های تخصصی | |
| نوع مطالعه | توصیفی |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | باکتری های جدا شده از نمونه های بیماران مراجعه کننده به بیمارستان بو علی ، علی بن ابی طالب و نبی اکرم (ع) شهر زاهدان
معیار های ورود به مطالعه، مثبت شدن تست های تشخیصی و معیار خروج از مطالعه نیز منفی شدن تست ها می باشد. |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | حجم نمونه بر اساس مطالعات مشابه و از هر سه نمونه 50 عدد در نظر گرفته میشود. |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | روش نمونه گیری آسان و تارسیدن به تعداد نمونه مورد نظر ادامه می یابد. |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | پر کردن پرسشنامه، انجام تجربیات آزمایشگاهی
بسمه تعالی فرم اطلاعاتی ضمیمه شماره پرونده:.................................. نام و نام خانوادگی بیمار:............................... سن:....................... جنس:مرد □ زن □ هاله عدم رشد : دارد □ ندارد □ MIC عصاره در باکتری مورد نظر باکتری های جدا شده از نمونه بیمار: |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) |
تهیه نمونه: گیاه پنیر باد از استان سیستان و بلوچستان شهرستان زابل جمع آوری میگردد و در هرباریوم دانشگاه سیستان و بلوچستان برای تایید بررسی می شود، پس از جمع آوری گیاه، برگ آن در دمای اتاق خشک گردیده و جهت تهیه عصاره با آسیاب خرد می شوند(16). تهیه عصاره: برای تهیه عصاره 20 گرم از پودر گیاه آسیاب شده در 60 میلی لیتر از اتانول 95% قرار داده می شود و به مدت 24 ساعت برروی شیکر قرار می گیرد، بعد از24 ساعت عصاره به وسیله کاغذ واتمن صاف می شود و سپس با استفاده از روتاری( دستگاه خلاء از مرکز) عصاره گیاه تغلیظ می شود، سپس عصاره گیاه خشک شده و وزن می شود. 10 گرم عصاره خشک شده در 2 سی سی DMSO حل می شود و سپس در 4 درجه سانتی گراد در شیشه های استریل نگه داری می شود(19). تهیه باکتری: تمام نمونه های بالینی که از بخش های مختلف 3 بیمارستان نبی اکرم، علی بن ابی طالب و بوعلی جمع آوری می شوند، روی محیط های کشت میکروب شناسی شامل بلاد آگار، مک کانکی آگار، EMB آگار و شکلات آگار کشت داده می شوند و با تست های بیوشیمیایی مربوطه(شامل تست کاتالاز، اوره آز و سیمون سیترات برای اشرشیاکلی، کاتالاز و کوآگولاز برای استافیلوکوکوس آرئوس، تست اکسیداز، کاتالاز، سیترات و اندول برای پسودوموناس آئروژینوزا) تعیین هویت میشوند. تعیین حساسیت باکتری به آنتی بیوتیک های مرسوم: حساسیت سویه های باکتری اشرشیاکلی نسبت به آنتی بیوتیکهای اریترومایسین، تتراسیکلین، سفکسیم، نالیدیکسیک اسید، استافیلوکوکوس آرئوس نسبت به آنتی بیوتیکهای تتراسیکلین، پنی سیلین ، تری متو پریم و پسودوموناس آئروزینوزا نسبت به آنتی بیوتیکهای سیپروفلوکساسین، نالیدکسیک اسید و نیتروفورانتوئین که از شرکت پادتن طب ایران تهیه میشوند با استفاده از روش استاندارد دیسک دیفیوژِن کربی- بائر مورد ارزیابی قرار می گیرد. بدین منظور، در ابتدا از تمام سویه های باکتری، غلظت 5/0 مک فارلند (cfu/ml 108×5/1) در محیط مایع آبگوشتی مولر هینتون تهیه می شود.سپس یک سوآب پنبه ای در داخل شیرابه میکروبی که به غلظت نیم مک فارلند است وارد شده و مایع اضافی از سوآب بوسیله چرخاندن آن با فشار به دیواره داخلی لوله گرفته شده و سپس سوآب مرطوب در سطح محیط مولر هینتون آگار بصورت خطوط رفت و برگشت کشت میشود و محیط تقریبا با زاویه 60 درجه چرخانده و دوبار دیگر عمل کشت تکرارمی شود. پس از کشت، پلیت ها بمدت 5-3 دقیقه در دمای اتاق نگهداری شده تا مایع اضافی جذب شود. دیسک های آنتی بیوتیک که قبلا از یخچال بیرون آورده شده اند و دمای آن ها به حرارت اتاق رسیده ، توسط پنسی که در الکل قرار گرفته و با شعله استریل و سپس سرد شده است، در سطح پلیت محتوی مولر هینتون آگار که قبلا باکتری ها کشت شده اند ، قرار می گیرند و با پنس کمی دیسک ها روی محیط فشار داده میشوند تا تماس کامل شود. دیسک ها به فاصله 15 میلی متر از لبه پلیت و 24 میلی متر از مرکز دیسک قرار می گیرند. سپس پلیت ها در دمای 35 درجه سانتی گراد بمدت 24 ساعت در انکوباتور قرار می گیرند. بعد از این مدت منطقه عدم رشد در اطراف دیسک های آنتی بیوتیک با استفاده از خط کش میلی متری اندازه گیری می شوند و قطر منطقه عدم رشد با جدول استاندارد تفسیر میشوند(20). تعیین حداقل غلظت مهار کننده آنتی بیوتیک: برای تعیین حداقل غلظت مهار کننده آنتی بیوتیک از روش براث دایلوشن استفاده می شود. در این مطالعه از آنتی بیوتیکهاغلظتهای مختلف در محیط نوترینت براث تهیه می شود و یک محیط کشت بدون آنتی بیوتیک نیز به عنوان کنترل در میکروپلیت های 96 خانه ای تهیه می شود و در نهایت µl 10 از سوسپانسیون با کدورت نیم واحد مک فارلند به محیط کشت اضافه می شود و بعد میکروپلیت ها در دمای 37 درجه سانتی گراد برای 18 تا 24 ساعت قرار داده می شوند. تغییر رنگ بعد از این زمان قابل مشاهده است و اولین غلظتی که تغییر رنگ در آن مشاهده می شود به عنوان MIC( حداقل غلظت مهار کننده) در نظر گرفته می شود(21). تعیین حداقل غلظت مهار کننده عصاره: برای تعیین حداقل غلظت مهار کننده(MIC) عصاره از روش براث دایلوشن استفاده می شود که محیط کشت مورد استفاده در آن مولر هینتون براث می باشد. به طور خلاصه رقت سازی در چاهک در میکروپلیت های 96 خانه ای با غلظت های مختلف انجام می شود، به طوری که به هر چاهک µl 10از اولین غلظت عصاره اضافه می شود و بعد µl10 مولر هینتون براث اضافه می شود، در نهایت µl 10 از سوسپانسیون باکتری با غلظت نیم واحد مک فارلند به چاهک ها اضافه می شود و بعد میکروپلیت ها در دمای 37 درجه سانتی گراد برای 18 تا 24 ساعت قرار داده می شوند. تغییر رنگ بعد از این زمان قابل مشاهده است و اولین غلظتی که تغییر |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | در پایان مطالعه اطلاعات حاصل از بررسی های آزمایشگاهی، داده ها توسط روش های آماری یعنی بررسی میانگین، فراوانی، انحراف معیار با استفاده از جداول و نمودار ها توسط نرم افزار آماری SPSS ver. 17 توصیف می گردد. |
| ملاحظات اخلاقی | با توجه به کد شماره 7 از کدهای مصوب کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی اطلاعات بیماران در تمام طول مدت طرح و پس از آن بصورت محرمانه حفظ خواهد شد. |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | در اجرای این طرح محدودیت خاصی وجود ندارد. |
| کلمات کلیدی | آنتی باکتریال، عصاره گیاهی، مقاومت آنتی بیوتیکی
Antibacterial, Plant extract, Antibiotic resistance |
| فهرست منابع و مراجع | 1. Weinstine Robert A. Controlling antimicrobial resistance in hospitals: Infection control and use of antibiotics. Emerging Infectious Disease 2001; 7(2), 188-192.
2. Ali N, Ahmad B, Bashir S, Shah J, Azam S and Ahmad M. Calcium channel blocking activities of Withania coagulans. African Journal of Pharmacy and Pharmacology 2009; 3(9): 439-442. 3. Al-Hindawi M.K., Al-Khafaji S.H. and Abdul- Nabi M.H. Anti-granuloma activity of Iraqi Withania somnifera. J Ethnopharmacol 1992, 37(2), 113-116. 4. Bhattacharya S.K, Satyan K.S, Ghosal S. Antioxidant activity of glycowithanolides from W. somnifera in rat brain frontal cortex and striatum. Indian J. Experimental Biology 1997; 35: 236-239. 5. Schliebs R, Liebmann A, Bhattacharya S.K, Kumar A, Ghosal S and Bigl V.Systemic administration of defined extracts from Withania somnifera (Indian Ginseng) and Shilajit differentially affects cholinergic but not glutamatergic and GABAergic markers in rat brain. Neurochem Int 1997; 30(2): 181-190. 6. Gaind K.N, Budhiraja R.D . Antibacterial and anthelmintic activity of Withania coagulans. Indian J. Pharm 1967; 29(6): 185-186. 7. Choudhary M.I, Shahwar D, Parveen Z, Jabbar A, Ali I, Rahman A. Antifungal steroidal lactones from Withania coagulans. Phytochemistry 1995; 40(4): 1243-6. 8. Shopsin B, Kreiswirth B. Molecular epidmiology of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Emerging infectioud Disease Journal 2001;7(2):323-6. 9. Wisplinghoff H, Bischoff T, Tallent S.M, Seifert H, Wenzel R.P, Edmond M.B. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis of 24,179 cases from a prospective nationwide surveillance study. Clin Infect Dis 2004;39:309–17. 10- Paterson D.L. Resistance in gram- negative bacteria: Enterobacteriaceae. Am J Med 2006;119: 62-70. 11. دوستی م، اجاق فقیهی م، رمضانی ع، صائینی م.ر. مقایسه ی روش های کشت و PCR برای تشخیص اختصاصی سودوموناس آئروژینوزا و فراوانی درصد مقاومت به آنتی بیوتیک ها برروی نمونه های بالینی. مجله دانشکده پزشکی اصفهان. سال سی ام. شماره 192. 1391 12. Mehrotra1 V, Mehrotra S, Kirar V, Shyam R, Misra K, Srivastava A.K, Nandi S.P. Antioxidant and antimicrobial activities of aqueous extract of Withania somnifera against methicillin-resistant Staphylococcus aureusJ. Microbiol. Biotech. Res 2011;1 (1): 40-45 13. Pujari S. A, Gandhi M. B.Studies on effect of root extracts of Withania somnifera on some clinically isolated bacterial pathogens. Journal of Environmental Research And Development 2012; 7(2) . 14. Sinha S.N. Screening of antioxidant and antibacterial activities of various extracts of Withania somnifera (l.) Dunal international journal of pharmacology and therapeutics 2012; 2. 15. Jaina P , Varshney R. Antimicrobial activity of aqueous and methanolic extracts of Withania somnifera (AshwagandhaJ. Chem. Pharm. Res., 2011, 3(3):260-263. 16. Halamova K, Kokoska L, Polesny Z, Macakova K, Flesar J and Rada V. Selective in vitro growth inhibitory effect of Withania somnifera on human pathogenic bacteria and bifidobacteria. Pak. J. Bot 2013; 45(2): 667-670. 17. Alam N, Hossain M, Mottalib M.A, Sulaiman S.A, Gan S.H and Khalil M.I. Methanolic extracts of Withania somnifera leaves, fruits and roots possess antioxidant properties and antibacterial activities BMC Complementary and Alternative Medicine 2012, 12:175 18. Jain P, Varshney R: Antimicrobial activity of aqueous and methanolic extracts of Withania somnifera (Ashwagandha). J Chem Pharmaceut Res 2011, 3(3):260–263. 19. Hanafy M.S. and Hatem M.E. Studies on the antimicrobial activity of Nigella sativa seed (black cumin). Journal of Ethanopharmacology. 1991; 34:275-278. 20. Brown FJ, Edward D, Hawkey P, Morrison D, Ridgway G, Towner K. Guideline for the laboratory diagnosis and susceptibility testing of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus. J Antimicrob Chemother 2005; |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| پروپوزال پنیر باد.doc | 1392/07/02 | 290816 | دانلود |
| pro.pdf | 1392/08/29 | 242680 | دانلود |
| sorat jalaseh 001.jpg | 1392/09/11 | 363346 | دانلود |
| peivastha 004.jpg | 1392/09/11 | 400190 | دانلود |
| peivastha 005.jpg | 1392/09/11 | 401268 | دانلود |
| peivastha 001.jpg | 1392/09/11 | 807207 | دانلود |
| peivastha 002.jpg | 1392/09/11 | 656913 | دانلود |
| peivastha 003.jpg | 1392/09/11 | 308036 | دانلود |
| 6223.JPG | 1392/11/08 | 550269 | دانلود |
