بررسی ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول بازال و کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن به روش ایمونوهیستوشیمی

Evaluation of MMP-10 protein expression in head and neck Basal Cell Carcinoma and Squamous Cell Carcinoma by immunohistochemical method


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان: حمیده کده

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 6236
عنوان فارسی طرح بررسی ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول بازال و کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن به روش ایمونوهیستوشیمی
عنوان لاتین طرح Evaluation of MMP-10 protein expression in head and neck Basal Cell Carcinoma and Squamous Cell Carcinoma by immunohistochemical method
نوع طرح
محل اجرای طرح بیمارستان خاتم الا نبیا
رسته مطالعاتی بنیادی- کاربردی
دانشکده/مرکز دانشکده دندانپزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
حمیده کدهمجری دکترای تخصصی h_a_kade@yahoo.com
فاطمه حیدریمشاورمشاوره ایمونوهیستوشیمی نمونه هادکترای تخصصی heydari3688@gmail.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول بازال و کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن به روش ایمونوهیستوشیمی
خلاصه طرح به لاتینEvaluation of MMP-10 protein expression in head and neck Basal Cell Carcinoma and Squamous Cell Carcinoma by immunohistochemical method
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشکارسینوم سلول سنگفرشی ناحیه سر و گردن (HNSCC) یکی از سرطانهای شایع بدن با شیوع سالانه 500000 مورد در جهان است1. عود بالا، پاسخ ناکافی به درمان و نسبت بالای مرگ ومیر بعلت قدرت تهاجم و متاستاز بالا از ویژگیهای آن محسوب میشود2. متاستاز به ناحیه لنف نودها یکی از فاکتور مهم پیشگویی کننده مرگ و میر در این بیماران محسوب میشود1.
با وجود پیشرفتهاییکه در زمینه استراتژییهای درمانی صورت گرفته است ولی نسبت مرگ و میر و شکست در درمان SCC ناحیه سر و گردن هنوز بالاست. شناسایی مولکولهای جدید دخیل در تهاجم و متاستاز و فهم بهتر مکانیسمهای پیش برنده سلولهای تومورال در طی تهاجم، اهمیت اساسی در طراحی استراتژیهای درمانی جهت درمان این بیماران دارد1.
بازال سل کارسینوما (BCC) شایعترین بدخیمی در بین افراد سفید پوست در جهان محسوب میشود، به ندرت دچار متاستاز میشود ولی موضعا مهاجم است و در نتیجه می تواند باعث مرگ ومیر افراد شود. ریسک فاکتورهای مرتبط با آن اکسپوز به نور خورشید، ارسنیک، رادیاسیون و ایمونوساپرشن می باشد. بازال سل کارسینوما بیشتر در نواحی در معرض تابش مثل ناحیه سر و گردن ایجاد میشود3.
ماتریکس متالوپرتئینازها (MMP) یک خانواده از آنزیمهایی هستند که در تنظیم تعادل بین سنتز و تخریب ماتریکس خارج سلولی شرکت می کنند، تخریب ماتریکس خارج سلولی در هر دو فرایندهای فیزیولوژیک و پاتولوژیک بافتها نظیر زخمهای مزمن و سرطانها مورد نیاز است. بنابراین ماتریکس متالوپروتئینازها از طریق شکست ماتریکس خارج سلولی و غشاء پایه نقش مهمی در مراحل مختلف پیشرفت تومورها و در نتیجه انتشار متاستاتیک آنها بازی می کنند4.
خانواده MMP حداقل 26 عضو دارد 5. سلول های تومورال یا خود MMP ها را تولید می کنند یا سلول های استرومال را به منظور ترشح آنها القاء می کنند6.
MMP-10 یا استروملیزین 2 (ST-2) یکی از اعضای خانواده MMP است7. که درin vitro، ژلاتین، کلاژن نوع 3و4، الاستین، فیبرونکتین و لامینین را تجزیه می کند6.مقادیر بالای ST-2 در تومورهای مختلف، کراتینوسیت ها، ماکروفاژهای الوئولار انسانی، فیبروبلاست ها و کارسینوما های سر و گردن، ریه و کبد نیز یافت شده است 7.
اگرچه نقش دقیق آن در طی پیشرفت تومور هنوز شناخته نشده است4 ولی ممکن است در تخریب ماتریکس خارج سلولی در طی پیشرفت تومور و همچنین التهاب نقش داشته باشد7.
مطالعات متعددی در مورد بروز MMPs در HNSCC و نقش احتمالی آنها در تهاجم تومور انجام شده ولی بعلت حجم نمونه پایین، تنوع روشهای مورد استفاده و نتایج ضد و نقیض در اکثر مطالعات، هنوز بررسی نقش دقیق MMPs در HNSCC مشکل است8.
طبق تحقیقات انجام شده تاکنون، چندین عضو خانواده MMPs شامل MMP2, MMP9,MT1-MMP در فرایند تهاجم و متاستاز HNSCC دخیل هستند1.
MMP10 mRNA در BCC یافت شده است ولی مطالعات انجام شده در این زمینه محدود است4.
Mashhadiabbas و همکارانش در طی تحقیقی در سال 2012 میزان ظهور MMP2, MMP10,TIMP-1 TIMP-2 و Podoplanin را در 40 نمونه کارسینوم سلول سنگفرشی دهان به روش ایمونوهیستوشیمی بررسی کردند. همه نمونه های SCC مارکرهای مورد نظر را بروز دادند و میزان بروز MMP2 ارتباط معناداری را با گرید هیستولوژیک SCC داشت، بروز Podoplanin ارتباط مثبتی با جنس و ارتباط منفی با سایز تومور داشت و آنها پیشنهاد دادند که بروز MMP2, MMP10,TIMP-2 و Podoplanin نقش مهمی را در فرایند تهاجم کارسینوم سلول سنگفرشی ایفا می کنند9 .
Deraz و همکارانش در سال 2011، در طی مطالعه ای به بررسی ظهور MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن (HNSCC) به روش ایمونوهیستوشیمی پرداختند و متوجه ظهور بالای MMP-10 در 89 مورد از 116 مورد HNSCC شدند. همچنین میزان ظهور MMP-10 به طور معنی داری در ارتباط با الگوی تهاجم ، متاستاز به لنف نودها و Stage در نمونه های HNSCC بود. در نتیجه پیشنهاد دادند که MMP-10 نقش مهمی در تهاجم و متاستاز HNSCC بازی می کند و می تواند بعنوان یک مارکر پیشگویی کننده متاستاز در HNSCC محسوب شود1.
Yen و همکارانش در سال 2009 در طی مطالعه ای ظهور mRNA ماتریکس متالو پروتیئنازهای 1، 10 و 12 را بعنوان مارکرهای بالقوه سرطان دهان بررسی کردند، آنها از لثه و مارجین عضله پلاتیسمای گردن بعنوان کنترل استفاده کردند و به این نتیجه رسیدند که با استفاده از هر کنترلی MMP10 مارکر مناسبی جهت شناسایی سرطان دهان میباشد10.
Boyd و همکارانش نیز در سال 2007 بروز MMPs-1, -7, -8, -9, -10, -13, -26, and TIMPs-1 and -3 را در 25 نمونه BCC در افراد گیرنده پیوند کلیه به روش ایمونوهیستوشیمی بررسی کردند. تفاوت معناداری در بروز این مارکرها بین افراد ایمونوساپرس شده و افراد با سیستم ایمنی سالم مشاهده نشد. MMP1, 9 و TIMP-1 در ماکروفاژهای استرومال بازال سل کارسینوما در افراد با سیستم ایمنی سالم غالب تر بود و در نهایت نتیجه گرفتند که بروز پری تومورال TIMP-1 در افراد با سیستم ایمنی سالم باعث کاهش تخریب ماتریکس خارج سلولی و کاهش مهاجرت سلولهای سرطانی می شود3.
Kerkela و همکارانش در سال 2001 به بررسی ظهور MMP10 و MMP14 در سرطانهای اپی تلیالی پوست (SCC, BCC, Actinic Keratosis, Bowen disease ( پرداختند، در این بررسی که به روش in situ hybridization انجام گرفت ظهور MMP10 در 13 مورد از 21 مورد SCC و 11 مورد از 19 مورد BCC و فقط هم در سلولهای تومورال لامینین-5 مثبت مشاهده شد در حالیکه ظهور آن در ضایعات پیش بدخیم (اکتینیک کراتوز و بیماری بوونوئید) منفی بود.آنها نتیجه گرفتند که ظهور MMP10 با رفتار مهاجم تومورها که بصورت هیستولوژیک ارزیابی شد و همچنین با ظهور MMP14 ارتباطی نداشت و ممکن است در طی فرایند بهبود زخم و ریمودلینگ التهابی در تومورهای پوستی القا شود4.
بنابراین در این مطالعه به بررسی میزان بروز MMP-10 در سرطانهای شایع سر و گردن : SCC (کارسینوم با قدرت متاستاز و تهاجم بالا) و BCC (کارسینوم موضعا مخرب) به روش ایمونوهیستوشیمی پرداخته می شود.
سوالات و / یا فرضیات پژوهش1. ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی سر وگردن چگونه است؟
2. ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول بازال سر و گردن چگونه است؟
3. ظهور پروتئین MMP-10 در 2 گروه مورد مطالعه متفاوت است.
4. بین ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن و grading آن ارتباط وجود دارد.
هدف کلی طرحتعیین ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول بازال و کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن به روش ایمونوهیستوشیمی
اهداف اختصاصی1. تعیین ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن
2. تعیین ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول بازال سر و گردن
3. مقایسه ظهور پروتئین MMP-10 در 2 گروه مورد مطالعه
4. تعیین ارتباط ظهور پروتئین MMP-10 در کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن و grading آن
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرحدانشگاه علوم پزشکی زاهدان
تعریف واژه های تخصصی ایمونوهیستوشیمی: بکار گیری تکنیک ها و اصول ایمونولوژیک در مطالعه سلول ها و بافت ها 11.
MMP-10 : MMP-10 یا استروملیزین 2(ST-2) یکی از اعضای خانواده MMPs (ماتریکس متالوپروتئیناز) که خانواده ای بزرگ از آنزیم های پروتئولیتیک هستند7.
Grading: یک معیار هیستولوژیک بوده و عبارت از درجه شباهت تومور به بافت مادری (اپی تلیوم سنگفرشی) و توانایی آنها در تولید محصولات طبیعی کراتین می باشد12.
نوع مطالعه توصیفی تحلیلی
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)بلوکهای پارافینی با تشخیص BCC , SCCموجود در آرشیو بیمارستان خاتم الانبیاء زاهدان
معیارهای ورود:
1.تمامی نمونه هایی که مشخصات پرونده بیمار مربوط به آن، از نظر متغیرهای مورد مطالعه کامل باشد.
2.تمامی بلوکهایی که دارای میزان کافی از ضایعه به منظور رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی باشند.
3.نمونه ها فیکساسیون مطلوب داشته باشند.
4.نمونه ها فاقد نکروز در لام مورد نظر باشند.
5.نمونه هایی که از لحاظ تشخیص میکروسکوپی مورد اتفاق پاتولوژیست های طرح باشد.
حجم نمونه و روش محاسبه آنحجم نمونه بر اساس تعداد نمونه های موجود در آرشیو بیمارستان خاتم الانبیا انتخاب خواهد شد که با توجه به بررسی های بعمل آمده 60 نمونه (در هر گروه 30 نمونه) برآورد می شود.
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)سرشماری
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)برطبق مشاهده و گزارش توسط پاتولوژیست و همچنین اطلاعات ثبت شده در پرونده بیماران(فرم اطلاعاتی ضمیمه شماره 1)
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)در این مطالعه گذشته نگر توصیفی – تحلیلی که به صورت مقطعی اجرا می گردد 30 تعداد نمونه از بلوکهای کارسینوم سلول سنگفرشی سر و گردن و 30 نمونه از کارسینوم سلول بازال موجود در آرشیو بیمارستان خاتم الانبیاء استخراج می شود، بعد از بررسی لامهای مورد نظر توسط دو پاتولوژیست و تایید آنها طبق معیارهای ورود و خروج، ابتدا grading در نمونه های کارسینوم سلول سنگفرشی تعیین میشود سپس از بلوکهای پارافینی برشهای 5 میکرونی تهیه شده، برشها را روی لام مخصوص قرار داده و به مدت یک شبانه روز در داخل فور در دمای 37 درجه قرار داده تا دپارافینه شود و در مرحله بعد جهت آبگیری و شفاف سازی لامها را در گزیلل و درجات مختلف الکل سفید قرار داده تا آنتی ژنهای سطحی ظاهر گردد. سپس لامها را در داخل بافر سیترات (PH=6) قرار داده و داخل میکروویو به مدت 5 دقیقه در حالت جوش کامل میگذاریم سپس آنها را داخل بافر سیترات در آورده و داخل PBS(phosphate-buffered saline) با PH برابر 2/7 قرار می دهیم و بطور سلسله وار مراحل رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی را انجام می دهیم . از مارکر (آنتی بادی مونوکلونال) mmp-10 ساخت شرکت Novocastra استفاده می شود و از محلول Diluent جهت رقیق نمودن آنتی بادیها استفاده می شود. جهت اطمینان از صحت رنگ آمیزی برای همه نمونه ها از شاهد مثبت و منفی نیز استفاده می شود.در نهایت لامها توسط پاتولوژیست از لحاظ رنگ آمیزی مارکر فوق بر اساس درصد سلولهای رنگ گرفته بررسی می شوند. زمانیکه هیچ سلولی رنگ نگرفته باشد (-)negative ،(+) low expression کمتر از ده درصد سلول ها رنگ گرفته باشد،(++) moderate expression بین 10-50 درصد سلول ها رنگ گرفته باشد و (+++) intensive expression زمانیکه بیشتر از 50 درصد سلول ها رنگ گرفته باشد13.
روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)بخش توصیفی توسط محاصبه درصد و دامنه اطمینان 95% و بخش تحلیلی توسط آزمون کای دو و همبستگی اسپیرمن بررسی خواهد شد.
میزان بروز MMP-10ازلحاظ تعداد سلولهای رنگ گرفته در گریدهای مختلف SCC

گرید SCC
میزان ظهور مارکر MMP-10 p-Value
تعداد درصد
I (well. Diff)
II (moderate.diff)
III/IV (poorly.diff)
ملاحظات اخلاقی کدهای اخلاقی 17 مربوط به محرمانه نگه داشتن اطلاعات فردی و رعایت حقوق مادی و معنوی عناصر ذیربط رعایت خواهد شد.
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهابا توجه به اینکه ممکن است نمونه های مورد نیاز طرح در آرشیو بیمارستان خاتم الانبیاء موجود نباشند احتمال دارد برای دستیابی به نمونه های باقی مانده نیاز به مراجعه به سایر مراکز باشد.
کلمات کلیدیماتریکس متالوپروتئیناز10، کارسینوم سلول سنگفرشی ، کارسینوم سلول بازال، سر و گردن MMP-10,Squamous Cell Carcinoma,basal cell Carcinoma, head and neck
فهرست منابع و مراجع1- Deraz EM, Kudo Y, Yoshida M, Obayashi M, Tsunematsu T, Tani H. MMP-10/Stromelysin-2 Promotes Invasion of Head and Neck Cancer. PLOS One 2011;6(10): e25438.
2- Stokes A, Joutsa J, Ala-aho R. Expression Profiles and Clinical Correlations of Degradome Components in the Tumor Microenvironment of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma. Clin Cancer Res 2010;16:2022-2035.
3- Boyd S, Tolvanen K, Virolainen S, Kuivanen T, Kyllönen L, Saarialho-Kere U. Differential expression of stromal MMP-1, MMP-9 and TIMP-1 in basal cell carcinomas of immunosuppressed patients and controls. Virchows Arch 2008; 452(1):83-90.
4- Kerkelä E, Ala-aho R, Jeskanen L, Lohi J, Grénman R, M-Kähäri V. Differential patterns of stromelysin-2 (MMP-10) and MT1-MMP (MMP-14) expression in epithelial skin cancers. British Journal of Cancer 2001; 84(5): 659–669.
5- Nanci A. Ten Cates Oral Histology, development, structure, and function. 6th ed. St.Louis: Mosby: 2008. P 35-70,341, 345-385.
6- Boyd S, Virolainen S, Parssinen J, Skook T, Hogerlinden M. MMP-10 (Steromelysin-2) and MMP-21 in human and murine squamous cell cancer. Exp Dermatol 2009; 18: 1044-1052.
7- Mathew R, Khanna R, Kumar R, Mathur M, Shakul N, Ralhan R. Steromelysin-2 overexpression in human esophageal squamous cell carcinoma: potential clinical implications. Cancer Detect Prev 2002; 26 (3): 222-28.
8- Werner JA, Rathcke IO, Mandic R. The role of matrix metalloproteinases in squamous cell carcinomas of the head and neck. Clinical & Experimental Metastasis 2002;19: 275–28.
9- Mashhadiabbas F, Mahjour F, Mahjour B, Fereidooni F, Hosseini F. The immunohistochemical characterization of MMP-2, MMP-10, TIMP-1, TIMP-2, and podoplanin in oral squamous cell carcinoma. Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology and Oral Radiology 2012;114(2):240-50.
10- Yen CY, Chen CH, Chang CH, Tseng HF, Liu SY, Chuang LY. Matrix metalloproteinases (MMP) 1 and MMP10 but not MMP12 are potential oral cancer markers. Biomarkers2009;14(4):244-9.
11- Rosai J. Ackerman's Surgical pathology. 9th ed. Edinburgh London: Mosby Co; 2004. P 45-50.
12- Neville BW, Damm DD, Allen CM, Bouquot JE. Oral & Maxillofacial Pathology 3rd ed. Printed in china: Saunders Elsevier: copy right 2009.P 409.
13- Barros SS, Henriques AC, Pereira KM, Medeiros AM, Galvao HC, Freitas A. Immunohistochemical expression of matrix metalloproteinases in squamous cell carcinoma of the tongue and lower lip. Arch Oral Biol 2011;56(8):752-760.

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
dr.kade.doc1392/09/03279040دانلود
suratjalase shora 6,8,92.docx1392/09/0351665دانلود
format emza 6236.jpg1392/09/03159622دانلود
6236.JPG1392/11/08531880دانلود