بررسی اثر سیتوتوکسیک شوینده ها ی مختلف اندودنتیک بر بقای سلول های بنیادی پاپیلای اپیکال انسان

Evaluation of cytotoxic effects of various endodontic irrigation on the survival of human stem cell of apical papilla


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان: نرگس فرهاد ملاشاهی

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 6251
عنوان فارسی طرح بررسی اثر سیتوتوکسیک شوینده ها ی مختلف اندودنتیک بر بقای سلول های بنیادی پاپیلای اپیکال انسان
عنوان لاتین طرح Evaluation of cytotoxic effects of various endodontic irrigation on the survival of human stem cell of apical papilla
نوع طرح
محل اجرای طرح
رسته مطالعاتی کاربردی
دانشکده/مرکز دانشکده دندانپزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
نرگس فرهاد ملاشاهیمجری دکترای تخصصی nargesfarhadm@gmail.com
حامد کرکه آبادیهمکار dr.hamed27@yahoo.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی اثر سیتوتوکسیک شوینده ها ی مختلف اندودنتیک بر بقای سلول های بنیادی پاپیلای اپیکال انسان
خلاصه طرح به لاتینEvaluation of cytotoxic effects of various endodontic irrigation on the survival of human stem cell of apical papilla
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشسالانه میلیونها دندان به واسطۀ درمان کانال ریشه از مرگ رهایی می یابند.گرچه موفقیت درمانهای اندودانتیک در حفظ دندان طبیعی بیش از 90% است، با این وجود اکثر دندانها به دلیل تحلیل ، شکستگی ، ریشه های ناکامل و تخریب وسیع ساختارهای کرونالی ناشی از پوسیدگی قابل بازسازی نبوده و با درمانهای پروتزی نظیر ایمپلنت جایگذاری می شوند ۱،۲.
شیوۀ جدیدی از بازسازی ساختارهای دندانی ، بر مبنای درمانهای رژنراتیو با استفاده از مهندسی بافت ارائه و به عنوان یک متد آلترناتیو جهت بقای دندانهایی که استحکام ساختاری آنها تضعیف شده، پیشنهاد شده است.Langer و Vacanti ، مهندسی بافت را به عنوان یک تخصص بین رشته ای تعریف کرده اند که در این حوزه با استفاده از اصول مهندسی و علوم زیستی در جهت ظهور جانشین های بیولوژیکی گام برداشته و فانکشن بافتی حفظ یا بهبود می یابد. عناصر کلیدی مهندسی بافت شامل stem cell ، morphogens و scaffold of extra cellular matrix می باشند۲،۳.
درمانهای رژنراتیو اندودانتیک از جنبۀ بیولوژیکی متکی بر روشهایی با هدف جایگزینی ساختارهای آسیب دیده نظیر دنتین و ساختارهای ریشه ، علاوه بر سلولهای کمپلکس پالپ – دنتین می باشد۱،۲،۳. ساده ترین شیوۀ رژنراسیون بافت پالپ ، رشد مجدد پالپ بر روی بافت عفونی یا نکروتیک است. به هر حال، تلاشها برای رژنره شدن بافت پالپ تحت این شرایط با شکست مواجه شده است.stem cell پالپ و پریودنتال و فیبروبلاستها به سیستم های عفونی کانال ریشه نه می چسبند و نه رشد می کنند۱. ضدعفونی کانال ریشه گامی بسیار مهم و سرنوشت ساز در درمانهای رژنراتیو اندودانتیک محسوب می شود. از مجموع مطالعات preclinical و case report چنین برمی آید که، درمان رژنراتیو موفقیت آمیز یک دندان با پالپ نکروتیک نیازمند ضدعفونی سیستم کانال ریشه می باشد ۴ . اخیرا راهکارهای کلینیکی متعددی در رابطه با حفظ و تحریک stem cell دندانی پیشنهاد شده اند که اکثر آنها بر مبنای ضدعفونی شیمیایی کانال ریشه با هیپوکلریت سدیم(Naocl)، ترکیب Naocl 25/5% سالین و کلرهگزیدین 12/0% ۵،۶ ، Naocl 25/5% یا 5/2% به تنهایی۷ و یاNaocl 6% با کلرهگزیدین 2%۸ وخمیر آنتی بیوتیکی سه گانه می باشند۹ . استفاده از این شوینده ها برمبنای اثرات شناخته شده باکتریوسیدال و باکتریواستاتیک می باشد.Trevino و همکارانش در پژوهشی که در سال 2011 انجام دادند تاثیر چهار پروتکل شستشو را بر بقایstem cell اپیکال پاپیلا که بصورت In Vitro در پلاسمای غنی شده با پلاکت در داخل کانال ریشه کشت داده شده بودند بررسی و نتیجه گیری کردند که EDTA 17% و پس از آن EDTA 17% /Naocl 6% در مقایسه با گروههایی که از کلرهگزیدین 2% استفاده شده بود ، بهترین حمایت را از stem cell بعمل می-آورند. نتایج مطالعۀ آنها نشان داد که شوینده ها به تنهایی ، شدیدا بر بقای stem cell STRO –l enriched تاثیر گذار هستند. ۹
در مطالعه Essner و همکارانش (در سال 2011) تاثیر هیپوکلریت سدیم بر سلولهای پالپ انسان در یک مطالعه In Vitro بررسی شد. سلولهای بافت پالپ مولرهای سوم کشیده شده انسان تهیه و در معرض غلظتهای 0/33 ، 16/0 ، 08/0 و 04/0 درصد هیپوکلریت سدیم به مدت 5 ، 10 ، 15 دقیقه قرار گرفتند. ارزیابی Cell Viability با استفاده از Cell Titre – GLO Luminescent انجام گردید و نتایج نشان داد که با کاهش غلظت هیپوکلریت سدیم تعداد سلولهای زنده افزایش می یابد. هیپوکلریت سدیم 04/0 درصد مشابه با گروه کنترل در تمام فواصل زمانی باعث حفظ همه سلولها گردید۱۰.
در مطالعه دیگری که در سال 2008 توسط Ring و همکارانش صورت گرفت ، تاثیر 10 شوینده و chelator بر چسبندگی stem cell به سطح ریشه مقایسه شدند. بدین منظور 38 دندان تک کانال سالم با پروتیپروپروفایل شکل دهی شدند. سپس از هیپوکلریت سدیم 6%، کلرهگزیدین 2%، Aquatine Endodontic cleaner وMorinda Citrifolia Juice همراه با EDTA یا MTAD جهت شستشوی کانال استفاده گردید. دندانهای اینسترومنت شده فورا در کشت سلولی در مواجهه با stem cell پالپ دندان به مدت 1 هفته قرار داده شدند. نتایج نشان دهندۀ آن بود که تعداد stem cell چسبیده با سیتوتوکسیتی شوینده ارتباط داشت و پیشنهاد گردید که جهت بهبود چسبندگی stem cell استفاده از یک شوینده Biocompatible ضروری است. ۱۱
با وجود استراتژی های درمانی ارائه شده در رابطه با درمانهای رژنراتیو اندودانتیک، این درمانها استاندارد خاصی نداشته و پروتکل های درمانی بدون آگاهی از تاثیر روشهای ضدعفونی بر بقای stem cell گزارش و اجرا شده اند، به هرحال استفاده از این متریال ها ممکن است برای stem cell سیتوتوکسیک باشد، چنانکه سیتوتوکسیتی آنها برای سایر انواع سلولها نظیر سلولهای لیگامان پریودنتال ، فیبرو بلاستهای کشت داده شده و stem cell دندانهای شیری گزارش شده است ۹. لذا در این مطالعه برآنیم تا تاثیر برخی متریالهای شوینده را در زمانهای متفاوت بر بقای stem cell پاپیلای اپیکال بررسی نماییم.
سوالات و / یا فرضیات پژوهش۱ـاثر سیتوتوکسیک MTAD در زمانهای مختلف ۱ ، ۵ و ۱۵دقیقه بر روی سلول های بنیادی اپیکال پاپیلا متفاوت می باشد.
۲ـاثر سیتوتوکسیک QMix در زمانهای مختلف ۱ ، ۵ و ۱۵دقیقه بر روی سلول های بنیادی اپیکال پاپیلا متفاوت می باشد.
۳ـاثر سیتوتوکسیک نرمال سالین در زمانهای مختلف ۱ ، ۵ و ۱۵دقیقه بر روی سلول های بنیادی اطراف ریشه متفاوت می باشد.
۴ـاثر سیتوتوکسیک هیپوکلریت سدیم 2.5 % در زمانهای مختلف ۱ ، ۵ و ۱۵دقیقه بر روی سلول های بنیادی اطراف ریشه متفاوت می باشد.
۵ـاثر سیتوتوکسیک شوینده های مختلف در زمان های مختلف۱ ، ۵ و ۱۵دقیقه بر روی سلول های بنیادی اپیکال پاپیلا متفاوت می باشد.
هدف کلی طرحاثرات سیتوتوکسیک شوینده های مختلف اندودنتیک بر بقای سلول های بنیادی اپیکال پاپیلای دندانی
اهداف اختصاصی۱ـمقایسه اثرسیتوتوکسیک MTAD در زمان های مختلف ۱۵،۵،۱ دقیقه بر سلول های بنیادی اپیکال پاپیلا
۲ـ مقایسه اثرسیتوتوکسیکQmix در زمان های مختلف ۱۵،۵،۱ دقیقه بر سلول های بنیادی اپیکال پاپیلا
۳ـمقایسه اثرسیتوتوکسیک هیپوکلریت سدیم در زمان های مختلف ۱۵،۵،۱ دقیقه بر سلول های بنیادی اپیکال پاپیلا
۴ـمقایسه اثرسیتوتوکسیک نرمال سالین در زمان های مختلف ۱۵،۵،۱ دقیقه بر سلول های بنیادی اپیکال پاپیلا
5. ـمقایسه اثرسیتوتوکسیکMTAD ,Qmix نرمال سالین و هیپوکلریت سدیم در زمان های مختلف ۱۵،۵،۱ دقیقه بر سلول های بنیادی اپیکال پاپیلا
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرحدندانپزشکان، متخصصین اندودنتیکس
تعریف واژه های تخصصی Tissue engineering: ترکیبب سلول ها، مهند سی مواد و روشها و عوامل بیو شیمیایی و فیزیکو شیمیایی جهت بهبود یا جایگزین کردن عملکرد بیولوژیک سلولها و بافت می باشد.
Triple antibiotic paste: ترکیب سه آنتی بیوتیک سیپروفلوکساسین، مترونیدازول و ماینوسایکلین به نسبت برابرکه جهت از بین بردن باکتری ها استفاده می شود.
نوع مطالعهتجربی
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)دندان های مو لر سوم با ریشه نابالغ
معیار ورود:
۱. دندان اندیکاسیون کشیدن داشته باشد.
۲. فاقد پوسیدگی باشد.
۳. سن بیمار ۱۶ـ۲۴ سال باشد.
۴. بیمار فاقد بیماری سیستمیک باشد.
حجم نمونه و روش محاسبه آنبا توجه به اینکه مداخله بر روی نمونه های یکسان ودر شرایط آزمایشگاهی یکسان انجام می شود ونیز با توجه به مقالات نسبتا مشابه در هر گروه شوینده حداقل۱۰ چاهک محیط کشت در نظر گرفته خواهد شد۴.
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)تصادفی آسان و در دسترس
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)فرم اطلاعاتی در ضمیمه ۱ آورده شده است.
فرم اطلاعاتی شامل اطلاعات مربوط به گروه های مورد مطالعه در زمان های مختلف
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) سلول های بنیادی در این مطالعه از دو دندان مولر سوم نابالغ فک پایین جدا خواهد شد. دندان ها بلافاصله بعد از خارج کردن با محلول استریل سالین فسفاته (PVS) شسته شده و در همین محلول استریل نگهداری می شوند. سپس سلول های بنیادی با استفاده از هضم آنزیمی از اپیکال پاپیلای دندان جدا شده و در سوسپانسیون پلی D لیزین (که یک محیط کشت می باشد) قرار می گیرند. بعد از مشاهدۀ کلونی های سلولی شبه فیبروبلاست، جهت بدست آوردن سلول های بیشتر، سلول ها در محیط کشت حاوی تریپسین دوباره کشت می شوند. این عمل بین 5 تا 8 بار جهت بدست آوردن سلول های بیشتر تکرار می شود.
سپس سلول های بنیادی در چاهک های محیط کشت 24 خانه ای قرار داده شده و بطور تصادفی به گروههای 10 تایی تقسیم شده و تحت تاثیر مواد مورد مطالعه شامل Biopure MTAD Cleanser( Densply Tulsa.USA)
و(tDensply Tulsa.USA) in12 QMix ونرمال سالین و هیپوکلریت سدیم قرار می گیرند و در فواصل زمانی ۱، ۵ و ۱۵ دقیقه میزان سمیت سلولی این مواد با استفاده از روش MTT بررسی خواهد شد.
MTT یا نمک تترازولیوم ماده ای است که توسط میتوکندری ها به فورامازول آبی رنگ تبدیل می-شود. این ماده قادر به عبور از غشای سلول نبوده و در سلول تجمع می یابد. این ماده از قبل با غلظت مطلوب در آزمایشگاه تهیه شده و در فریزر و در دمای 20- درجه نگهداری می شود و قبل از شروع کار جهت گرم شدن، این ماده برای مدت کوتاهی به انکوباتور 37 درجه منتقل و نگهداری می شود. از محلول MTT به میزان 1/0 حجم هر کدام از چاهک های محیط کشت به هر چاهک اضافه می شود و 4 ساعت در انکوباتور قرار داده شده و سپس محلول رویی باقی مانده برداشته می شود و به خانه های پلیت الیزا منتقل شده و با استفاده از Elisa Reader مقدار جذب نوری هر خانه که نمادی از تعداد سلول-های زنده در هر خانه می باشد در زمان های ۱ ، ۵ و ۱۵ دقیقه مورد بررسی قرار می گیرد.
روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)توصیف داده های کمی با میانگین و انحراف معیار نمایش داده می شود. به منظور مقایسه اثر کشندگی شوینده های مختلف بر روی سلول های بنیادی انتهای ریشه در زمان های مختلف از آزمونmeasure Repeated ANOVA و نیز جهت مقایسه اثر کشندگی بین گروه ها(در هر زمان) از آزمون آنالیز واریانس یک طرفه و در صورت لزوم آزمون کروسکال والیس استفاده می شود.
میزان سلول های زنده با قیمانده در گروه و زمان های مختلف
زمان
گروه ۱min ۵min ۱۰min مقدار p برای آزمون
MTAD
QMix
هیپوکلریت سدیم
نرمال
مقدار P برای آزمون
ملاحظات اخلاقی فرم رضایت آگاهانه در ضمیمه شماره ۲ آورده شده است.
بر اساس کد ۱ ازکدهای مصوب کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی رضایت شرکت کنندگان کسب خواهد شد.
بر اساس کد ۳ از کدهای مصوب کمیته کشوری اخلاق در پژو هش های علوم پژشکی کسب رضایت آگاهانه فارغ از هر گونه تطمیع و اغوا خواهد بود.

محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهاجدا سازی سلول های بنیادی از اطراف فولیکول دندانی بسیار مشکل می باشد. از طرفی احتمال مرگ سلول ها و آلودگی میکروبی در طی مراحل کشت سلولی بسیار زیاد می باشد.بدین منظور از افراد متخصص و با تجربه که سابقه انجام این مراحل را دارند استفاده خواهد شد.
کلمات کلیدیstem Cytotoxic, Dental papilla, root canal irrigants,
اثر کشندگی. پاپیلای دندانی.شوینده های داخل کانال.سلول های بنیادی
فهرست منابع و مراجع 1. Hargreaves M.K, Goodis E.H, Tay F. Seltzer and Bender's Dental Pulp. 2nd ed.Germany:Quintessence Pub; 2012.
2. Murray PE, Garcia-Godoy F, Hargreaves KM. Regenerative endodontics: a review of current status and a call for action. J Endod 2007; 33(4): 377-90.
3. Gandhi A, Gandhi T, Madan N. dental pulp stem cells in endodontic research: a promising tool for tooth tissue engineering. RSBO 2011;8(3): 335-40.
4. Ruparel NB, Teixeira FB, Ferraz CC, Diogenes A. Direct effect of intracanal medicaments on survival of stem cells of the apical papilla. J Endod 2012; 38(10): 1372-5.
5. Banchs F, Trope M. Revascularization of immature permanent teeth with apical periodontitis: new treatment protocol? J Endod 2004; 30:196–200.
6. Petrino JA, Boda KK, Shambarger S, Bowles WR, McClanahan SB. Challenges in regenerative endodontics: a case series. J Endod 2010; 36:536–41.
7. Jung IY, Lee SJ, Hargreaves KM. Biologically based treatment of immature permanent teeth with pulpal necrosis: a case series. J Endod 2008; 34:876–87.
8. Shin SY, Albert JS, Mortman RE. One step pulp revascularization treatment of an immature permanent tooth with chronic apical abscess: a case report. Int Endod J 2009; 42:1118–26.
9. Trevino EG, Patwardhan AN, Henry MA, Perry G, Dybdal-Hargreaves N, Hargreaves KM, et al. Effect of irrigants on the survival of human stem cells of the apical papilla in a platelet-rich plasma scaffold in human root tips. J Endod 2011; 37(8): 1109-15.
10. Essner MD, Javed A, Eleazer PD. Effect of sodium hypochlorite on human pulp cells: an in vitro study. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2011; 112(5): 662-6.
11. Ring KC, Murray PE, Namerow KN, Kuttler S, Garcia-Godoy F. The comparison of the effect of endodontic irrigation on cell adherence to root canal dentin. J Endod 2008; 34(12): 1474-9.

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
6251 barresi dar pajoohesh.doc1393/01/30265728دانلود
6251 eemale eslahate pajoohesh.docx1393/01/30121034دانلود
6251 eslahate davari.docx1393/01/30121034دانلود
6251 eslahate shora.docx1393/01/30123878دانلود
6251 komite akhlaq.docx1393/01/30121001دانلود
formate emza 6251.jpg1393/01/30141922دانلود