بررسی پلی مورفیسم Arg753Gln ژن TLR-2و پلی مورفیسم Thr399Ile ژن TLR-4 درافراد مبتلا به آبسه حاد آپیکالی

Investigation of TLR-2 Arg753Gln and TLR-4 Thr399Ile Gene Polymorphisms in Individuals with Acute Apical Abscess


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان:

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 6489
عنوان فارسی طرح بررسی پلی مورفیسم Arg753Gln ژن TLR-2و پلی مورفیسم Thr399Ile ژن TLR-4 درافراد مبتلا به آبسه حاد آپیکالی
عنوان لاتین طرح Investigation of TLR-2 Arg753Gln and TLR-4 Thr399Ile Gene Polymorphisms in Individuals with Acute Apical Abscess
نوع طرح
محل اجرای طرح دانشکده دندانپزشکی
رسته مطالعاتی بنیادی- کاربردی
دانشکده/مرکز دانشکده دندانپزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
نرگس فرهاد ملاشاهیمجری اول دکترای تخصصی nargesfarhadm@gmail.com
ابراهیم میری مقدم(پژوهشگر/استاد راهنما)مجری دوم دکترای تخصصی moghaddam4@yahoo.com
نوا نقیبی nava.naghibi@yahoo.com
الناز بقایی baghaee.elnaz90@gmail.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی پلی مورفیسم Arg753Gln ژن TLR-2و پلی مورفیسم Thr399Ile ژن TLR-4 درافراد مبتلا به آبسه حاد آپیکالی
خلاصه طرح به لاتینInvestigation of TLR-2 Arg753Gln and TLR-4 Thr399Ile Gene Polymorphisms in Individuals with Acute Apical Abscess
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشپریودنتیت آپیکال بیماری التهابی بافتهای پیرامون ریشه است که عمدتا در اثر مواجهه دینامیک فاکتورهای میکروبی و دفاعی میزبان به وجود می آید (1و2). این بیماری مولتی فاکتوریال بوده (3)و عوامل اگزوژن و اندوژن ممکن است در بروز آن نقش داشته باشد. شواهد قابل ملاحظه ای وجود دارد که باکتریها عامل اتیولوژیک اصلی در ایجاد پریودنتیت آپیکال هستند. توکسین های باکتریها و محصولات متابولیکی مضر آنها با خروج از سیستم عفونی کانال ریشه به بافتهای پری آپیکال موجب تحریک پاسخهای ایمنی- التهابی ذاتی می شوند(3و4).
بطور کلی شناسایی پاتوژن از طریق رسپتورهای اختصاصی سیستم ایمنی ذاتی تحت عنوان (PRPS) pattern- recognition receptors صورت می گیرد. این رسپتورها الگوهای مولکولی مرتبط با پاتوژن Pathogen- associated molecular patterns (PAMPS) که بر روی ارگانیسم های مهاجم قرار دارد را شناسایی کرده و از طریق فعال سازی مسیر (NF-KB)nuclear factor_kappa bettaدفاع میزبان آغاز می-گردد. یکی از انواع مولکولهای شناساگر PAMP، TLRS(Toll-like receptors) هستند(5). TLRS یک خانواده 13 عضوی TLR1-13)) از رسپتورهایی هستند که بوسیله ژنهای متفاوت کد می شوند و در اکثر بافتها و انواع سلولها اکسپرس شده و در شناسایی آنتی ژن مشارکت می کنند(6). از بین 13 عضو TLR،TLR2 و TLR4 مهمترین اعضای شناخته شده اند(7). ژن TLR-4 انسان بر روی کروموزوم 9q32-q33 واقع شده است. TLR-4 یک رسپتور اصلی علامت دهی اندوتوکسین را رمزگذاری می کند و بدین ترتیب در شناسایی پاتوژن و فعال سازی ایمنی ذاتی نقش اساسی ایفا می کند(6). TLR-4 قادر به شناسایی لیپوپلی ساکارید باکتریهای گرم منفی، اجزای دیواره سلولی باکتریها و قارچهای مهم نظیر مایکوباکتریوم توبرکلوزیس، آسپرژیلوس Fumigatus،کاندیدا آلبیکنس و اجزای استرس سلولی نظیر پروتئین های heat shock (HSP)، فیبرینوژن و ... می باشد(8).TLR-2 نقش مهمی در شناسایی باکتریهای گرم مثبت و انواع اجزای میکروبی از جمله لیپوتیکوئیک اسید، لیپوپروتئین و پپتیدوگلیکان به عهده دارد(5).

عوامل دیگری می توانند بر شدت بیماری و پاسخ به درمان نقش تعیین کننده داشته باشند. مصرف سیگار، بیماری سیستمیک (دیابت)، عوامل اکتسابی و فاکتورهای ژنتیکی خاص ممکن است دفاع میزبان در مقابل عفونت را تغییر دهند و افراد خاصی را در معرض خطر عفونت شدید قراردهند (11-9 ). تنوعات ژنتیکی ممکن است باعث تغییر پاسخ افراد به چالش های محیطی مشترک شود. یکی از انواع تنوعات ژنتیکی پلی-مورفیسم های ژنتیکی هستند که در بیماری های کمپلکس ایفای نقش می کنند(12).
در شرایطی که آلل های متفاوت از یک ژن در جمعیت یافت شوند، پلی مورفیسم ژنی تشخیص داده می-شود. ساده ترین و شایعترین نوع پلی مورفیسم، single nucleotid polymophism(SNP) است که شامل تغییر یک نوکلئوتید به دیگری می باشد (9 و13). وقوع SNP در ناحیه رمزگذاری (Coding)یک ژن می-تواند منتج به تولید یک پروتئین تغییر یافته گردد که ممکن است به صورت تغییر در عملکرد بروز کند. SNP در ناحیه پیش برنده (promotor) یک ژن ممکن است تنظیم ژن را تغییر دهد که می تواند منتهی به کاهش/مهار بیان ژن و یا بالعکس افزایش بیان ژن شود. چنانچه تولید ژن پلی مورفیک در ارتباط با التهاب یا ترمیم باشد ممکن است پاسخ افرادی که دارای ژنوتیپ های مختلف و حامل آللهای خاص هستند تغییر کند (9).
عمده مطالعات اخیر به ارزیابی نقش بالقوه ژنتیک در رابطه با خطر ایجاد پریودنتیت پری-آپیکال(2و9و14)، تحلیل خارجی آپیکالی ریشه(15)، پوسیدگی (16)و پریودنتیت بزرگسالان(17) پرداخته اند.
پلی مورفیسم های فانکشنال موثر متعددی از ژن TLR-4 با تضعیف انتقال سیگنال LPS مرتبط بوده اند. Schroeder و همکاران اظهار کردند که تنوعات ژنتیکی TLR-4 می تواند به عنوان یک ریسک فاکتور در ایجاد پریودنتیت مزمن ایفای نقش نماید(18).Reddy و همکارانش در یک مطالعه اخیر(سال2010 )که بر روی یک جمعیت ساکن جنوب هند انجام دادند هیچ ارتباطی بین پلی مورفیسم ژن TLR-4 و پریودنتیت مزمن نیافتند(7).
Amaya و همکارانش (سال 2013) در پژوهشی که بر روی 120 بیمار کلمبیایی مبتلا به پریودنتیت آپیکالی مزمن غیر چرکی و حاد چرکی و با هدف تعیین ارتباط پلی مورفیسم ژنهای سیتوکاین های پیش التهابی TNF-A , IL-1B , IL-8 , IL-12B با دو فرم حاد و مزمن پریودنتیت آپیکالی انجام دادند، به نقش محوری IL-8 در بیماری پری آپیکال تاکید کردند(13).

De Sa و همکارانش در یک مطالعه case-control(سال 2007 ) که برروی 45 بیمار مبتلا به آبسه دندانی سمپتوماتیک و 53 بیمار با ضایعه پری آپیکال آسمپتوماتیک در یک جمعیت برزیلی انجام دادند، نقش پلی مورفیسمCD14 IL1B ،IL6 ،IL10 ، TNF A را در آبسه سمپتوماتیک ارزیابی کرده و بر رابطه معنی دار بین پلی مورفیسم ژن IL-6 با سمپتوماتیک بودن آبسه در خانم ها و در افراد بالای 35 سال تاکید کردند. در این مطالعه به ارتباط فاکتورهای ژنتیکی با استعداد به آبسه های دندانی سمپتوماتیک اشاره گردید(19).
با توجه به این واقعیت که عفونت سیستم کانال ریشه و پاسخ ایمنی علیه این عفونت به تنهایی نمی تواند توضیح دهد که چرا یک بیماری مشابه به فرم های کلینیکی متفاوت بروز می کند و با توجه به نقش پلی-مورفیسم ژنی در استعداد بیماری، از اینرو تعیین ژنوتیپ میزبان / باکتری میتواند به عنوان یک شاخص مهم در تعیین ریسک بیماری در افراد High risk باشد(2و13). از آنجایی که شیوع پلی مورفیسم ها و اینتراکشنهای محیط/ ژن در بین جمعیتها متفاوت است، ریسک یک تنوع ژنی خاص برای یک صفت ژنتیکی ممکن است در بین جمعیتهای مختلف تفاوت داشته باشد(7). در مطالعات محدودی پلی مورفیسم ژنهای خاصی ازجمله ژنهای سیتوکاین های پیش التهابی و ضد التهابی با آبسه حاد علامتدار بررسی شده است اما هیچ مطالعه ای نقش پلی مورفیسم ژن TLR با آبسه علامتدار را ارزیابی نکرده است، لذا این مطالعه با هدف ارزیابی ارتباط پلی مورفیسم ژنهای TLR-2,4 با آبسه حاد (علامتدار) آپیکالی در ساکنین یک جمعیت واقع در جنوب شرق ایران طراحی گردیده است.
سوالات و / یا فرضیات پژوهش1- توزیع فراوانی پلی مورفیسم Arg753Gln ژن TLR-2 در گروه بیمار و شاهد با هم متفاوت است.
2- توزیع فراوانی پلی مورفیسم Thr399Ile ژن TLR-4 در گروه بیمار و شاهد با هم متفاوت است.
هدف کلی طرحتعیین پلی مورفیسم Arg753Gln ژن TLR-2و Thr399Ile ژن TLR-4 در افراد مبتلا به آبسه حاد آپیکالی
اهداف اختصاصی1- مقایسه توزیع فراوانی پلی مورفیسم Arg753Gln ژن TLR-2در گروه بیمار و شاهد
2- مقایسه توزیع فراوانی پلی مورفیسم Thr399Ile ژن TLR-4 در گروه بیمار و شاهد
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرحدانشگاههای علوم پزشکی دانشکده های دندانپزشکی
تعریف واژه های تخصصی(TLRs) Toll Like receptors: خانواده ای از پروتئین های سطح سلول های پستانداران هستند که واسطه پاسخ ایمنی علیه عوامل عفونی می باشند. TLR ها ملکول های سطحی روی سلول های eukaryotic هستند که عفونت میکروبی را شناسایی کرده و به آن پاسخ می دهند. TLR ها مشخصات ملکولی مثل لیپوپلی ساکارید در باکتری های گرم منفی و پپتید وگلیکان در ارگانیسم های گرم مثبت و ds RNA ویروس ها و لیپوتیکوئیک اسید قارچ ها را شناسایی می کنند. TLRها به ایمنی ذاتی در شناسایی پاتوژن ها و ایجاد پاسخ ایمنی اکتسابی کمک می کنند(2و6).

پلی مورفیسم ژنی: وقتی رخ می دهد که در یک گونه زیستی بیش از یک آلل در یک locus)) وجود داشته باشد(4).

نوع مطالعهAnalytical observational Case_ Control
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)بیماران مراجعه کننده به بخشهای جراحی و اندودانتیکس دانشکده دندانپزشکی زاهدان
Inclusion Criteria:
1. گروه case: دندان نکروز مبتلا به آبسه حاد آپیکالی که در رادیوگرافی شواهدی از ضخیم شدگی فضای لیگامان پریودنتال تا رادیولوسنسی پری آپیکال را نشان دهد.
2. گروه control: دندان نکروز آسمپتوماتیک مبتلا به بیماری پری آپیکالی مزمن که در رادیوگرافی رادیولوسنسی پری آپیکال را نشان دهد.
Exclusion Criteria :
3. سابقه حضور سینوس ترکت
4. سابقه درد قبلی
5. وجود بیماریهای سیستمیک نظیر: دیابت، هپاتیت، عفونتHIV،کموتراپی، رادیوتراپی، اختلالات خونی، پیوند
6. مصرف داروهای تاثیرگذار بر واکنشهای ایمنی/التهابی شامل کورتیکواستروئید ها و مصرف طولانی مدت NSAIDs.
حجم نمونه و روش محاسبه آنبا توجه به مقالات نسبتا مشابه در هر گروه 50نمونه در نظر گرفته خواهد شد(2و13).
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)بر اساس نمونه گیری آسان افراد گروه مورد و شاهد از نظر سن و جنس همسان خواهند شد.
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)فرم اطلاعاتی در ضمیمه 2
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)-populations:
این مطالعه case-control بر روی 100 بیمار از بین مراجعین به کلینیک جراحی و اندودانتیک دانشکده دندانپزشکی زاهدان انجام خواهد شد. جهت ارزیابی سلامت عمومی افراد پرسش نامه ای در اختیار بیماران قرار می گیرد که موارد زیر به عنوان exclusion criteria در نظر گرفته خواهد شد: دیابت، هپاتیت، عفونتHIV،کموتراپی، رادیوتراپی، اختلالات خونی، پیوند، مصرف داروهای تاثیرگذار بر واکنشهای ایمنی/التهابی شامل کورتیکواستروئید ها و مصرف طولانی مدت NSAIDs (13و19).
برای کلیه بیماران واجد شرایط، هدف از انجام تحقیق توضیح داده شده و فرم رضایت آگاهانه تکمیل خواهد شد. بیماران بر اساس یافته های رادیوگرافیک و تظاهرات کلینیکی به دو گروه case و کنترل وارد خواهند شد. گروه case شامل افرادی با یک دندان مبتلا به آبسه حاد اپیکالی(با منشا پالپی) بوده که در رادیوگرافی شواهدی از ضخیم شدگی فضای لیگامان پریودنتال تا یک ضایعه رادیولوسنت را نشان میدهند. بر این اساس بیماران این گروه افرادی باsign & symptom متوسط تا شدید شامل تورم با یا بدون تظاهرات سیستمیک نظیر تب، بی حالی، لنفادنوپاتی، تندرنس در دق، درجات مختلف لقی، عدم واکنش پالپ به تستهای ترمال و الکتریکی می باشند. بیماران گروه کنترل دارای یک دندان نکروز(عدم پاسخ به تستهای ترمال و الکتریکی) با بیماری پری آپیکال مزمن بوده که آسمپتوماتیک بوده و هیچ سابقه ای از علائم حاد قبلی ندارند(13و19). بیماران هر دو گروه از یک منطقه جغرافیایی و با شرایط اقتصادی اجتماعی مشابه انتخاب شده و از نظر جنس و سن همسان خواهند شد.
در این مطالعه DNA از نمونه های بزاق بیماران و گروه شاهد در شرایط خاص از جمله: 2 ساعت قبل از نمونه گیری ابتدا دندانها مسواک زده شده و هیچگونه خوردن یا آشامیدن یا کشیدن سیگار صورت نگرفته باشد اساس پروتکل های ارائه شده تخلیص می گردد. نمونه های DNA تا زمان انجام آزمایش در شرایط 20- درجه سانتیگراد نگهداری می شوند. پرایمرهای اختصاصی جهت تعیین پلی مورفیسم ژنی به روش PCR طراحی می شود. در مرحله بعد شرایط PCR برای تعیین پلی مورفیسم ها بهینه می شود و در نهایت محصول PCR با الکتروفورز بر روی ژل اگاروز مورد بررسی قرار می گیرد.
پس از نمونه گیری از بیماران اقدامات لازم جهت درمان مناسب اورژانس ویا درمان کانال ریشه انجام خواهد شد.
روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)جهت مقایسه توزیع فراوانی پلی مورفیسم ها از آزمون کای اسکوئر استفاده خواهد شد.
توزیع فاکتورهای مورد مطالعه در گروههای case و control
P value Control
N(%) Case
N(%)
Age(years)
Sex
Male
Female
Genotype(%)
TLR-2
CC
CT
TT
TLR-4
AA
AG
GG
ملاحظات اخلاقی راهنمای عمومی اخلاق در پژوهشهای علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی، کد 13، 15، 16، 25
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهاکم بودن تعداد بیماران مبتلا به آبسه دندانی حاد که در نتیجه آن زمان انجام طرح طولانی تر می گردد.
کلمات کلیدیپلی مورفیسم ژنی- آبسه پری آپیکال- رسپتور Toll-like
Genetic Polymorphism, Periapical Abscess, Toll Like Receptor
فهرست منابع و مراجع
1) Nair PN.Pathogenesis of apical periodontitis and the causes of endodontic failures. Crit Rev Oral Biol Med. 2004 ;15(6):348-81.
2) Menezes-Silva R, Khaliq S, Deeley K, Letra A, Vieira AR. Genetic susceptibility to periapical disease: conditional contribution of MMP2 and MMP3 genes to the development of periapical lesions and healing response. J Endod. 2012 ;38(5):604-7.
3) Stashenko P, Yu SM, Wang CY. Kinetics of immune cell and bone resorptive responses to endodontic infections. J Endod. 1992 ;18(9):422-6.
4) Lin LM, Huang G. Pathology of the periapex. In: Cohen S, Hargreaves KM: Pathways of the pulp, 10th Edition. St. Louis: CV Mosby, 2011: pp. 530-1.
5) Foaud AF, Levin L. Pulpal reaction to caries and dental procedures. in: . In: Cohen S, Hargreaves KM: Pathway of the pulp, 10th Edition. St. Louis: CV Mosby, 2011: pp. 506-7.
6) Wang X, Zhang K, Xiong D. Toll-like receptor 4 polymorphisms and susceptibility to multiple autoimmune diseases: evidence based on pooled analysis. (Centr Eur J Immunol 2013; 38 (3): 380-387.
7) Reddy BH, Jayakumar ND, Akula SR, Sharma R, Kaarthikeyan G, Sankari. Analysis of association between TLR4 Asp299Gly and Thr399Ile gene polymorphisms and chronic periodontitisin a sample of south Indian population. J Indian Soc Periodontol. 2011;15(4):366-70.
8) Mesquita AQ, Rezende CS, Mesquita AJ, Veiga Jardim EA, Kipnis AP .Association of TLR4 Polymorphisms with subclinical mastitis in Brazilian Holsteins. Braz J Microbiol 2012; 43(2): 692–697.
9) Siqueira JF Jr, Rôças IN, Provenzano JC, Daibert FK, Silva MG, Lima KC. Relationship between Fcgamma receptor and interleukin-1 gene polymorphisms and post-treatment apical periodontitis. J Endod. 2009;35(9):1186-92.
10) Kornman KS, Knobelman C, Wang HY. Is periodontitis genetic? The answer may be Yes!. J Mass Dent Soc 2000 ;49(3):26-30.
11) Doyle SL, Hodges JS, Pesun IJ, Baisden MK, Bowles WR.Factors affecting outcomes for single-tooth implants and endodontic restorations. ) J Endod 2007;33(4):399-402.
12) Kinane DF, Hart TC.Genes and gene polymorphisms associated with periodontal disease. Crit Rev Oral Biol Med 2003;14(6):430-49.
13) Amaya MP, Criado L, Blanco B, Gómez M, Torres O, Flórez L, González CI, Flórez O. Polymorphisms of pro-inflammatory cytokine genes and the risk for acute suppurative or chronic nonsuppurative apical periodontitis in a Colombian population. Int Endod J 2013 ;46(1):71-8.
14) Morsani JM, Aminoshariae A, Han YW, Montagnese TA, Mickel A. Genetic predisposition to persistent apical periodontitis. J Endod 2011 ;37(4):455-9.
15) Al-Qawasmi RA, Hartsfield JK Jr, Everett ET, Flury L, Liu L, Foroud TM, Macri JV, Roberts WE. Genetic predisposition to external apical root resorption in orthodontic patients: linkage of chromosome-18 marker. J Dent Res 2003;82(5):356-60.
16) Tannure PN, Küchler EC, Lips A, Costa Mde C, Luiz RR, Granjeiro JM, Vieira AR. Genetic variation in MMP20 contributes to higher caries experience. J Dent 2012 ;40(5):381-6.
17) Kornman KS, di Giovine FS.Genetic variations in cytokine expression: a risk factor for severity of adult periodontitis. Ann Periodontol 1998 ;3(1):327-38.
18) Schröder NW, Meister D, Wolff V, Christan C, Kaner D, Haban V, Purucker P, Hermann C, Moter A, Göbel UB, Schumann RR.Chronic periodontal disease is associated with single-nucleotide polymorphisms of the human TLR-4 gene. Genes Immun 2005;6(5):448-51.
19) de Sá AR, Moreira PR, Xavier GM, Sampaio I, Kalapothakis E, Dutra WO, Gomez RS. Association of CD14, IL1B, IL6, IL10 and TNFA functional gene polymorphisms with symptomatic dental abscesses. Int Endod J 2007;40(7):563-72.

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
proposal.doc1392/10/09353792دانلود
dr n mollashahi(6489) eslahe shora.doc1393/07/08354816دانلود
komite akhlagh.doc1393/07/27372224دانلود