بررسی اثرات عصاره آبی بابونه بر رفتار شبه اضطرابی القاء شده توسط کیندلینگ پنتیلن تترازول در موش صحرائی

Survey of aqueous extract of Matricaria Recutita on anxiety-like behavior induced by pentylenetetrazole kindling in rat


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان: غلامرضا کمیلی

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 6570
عنوان فارسی طرح بررسی اثرات عصاره آبی بابونه بر رفتار شبه اضطرابی القاء شده توسط کیندلینگ پنتیلن تترازول در موش صحرائی
عنوان لاتین طرح Survey of aqueous extract of Matricaria Recutita on anxiety-like behavior induced by pentylenetetrazole kindling in rat
نوع طرح
محل اجرای طرح مدیریت توسعه فناوری سلامت
رسته مطالعاتی تجربی- آزمایشی
دانشکده/مرکز دانشکده پزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
وحید سارانیهمکار کارشناس ارشدvahid.sarani@zaums.ac.ir
غلامرضا کمیلیاستاد راهنمای اول پایان نامه دانشجوییاستاد راهنمامتخصصrkomeili@gmail.com
حامد فنائیاستاد راهنمای دوم پایان نامه دانشجوییاستاد راهنمادکترای تخصصی fanaeih@yahoo.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی اثرات عصاره آبی بابونه بر رفتار شبه اضطرابی القاء شده توسط کیندلینگ پنتیلن تترازول در موش صحرائی
خلاصه طرح به لاتینSurvey of aqueous extract of Matricaria Recutita on anxiety-like behavior induced by pentylenetetrazole kindling in rat
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشصرع شامل گروهی از اختلالات طولانی مدت نورولوژیک است که با حملات تشنجی مشخص می شود. واژه تشنج به معنی یک دوره تحریک غیر عادی و همزمان جمعیت نورونی میباشد که چند ثانیه یا چند دقیقه طول میکشد و در صورتیکه به طور خود به خودی عود کننده باشد صرع نامیده میشود. صرع یکی از شایعترین اختلالات نورولوژیک با یک شیوع تقریبا 5/0 تا یک درصد است(1). حدود 5 تا 10% مردم تا سن 80 سالگی به یک تشنج بدون عامل مشخص مبتلا می شوند و شانس تجربه تشنج بعدی در آنان حدود 40 تا 50% می باشد. دو سوم موارد حملات تشنجی ابتدا با یک تشنج موضعی (کانونی) شروع شده و سپس جنرالیزه می شوند. بروز صرع میتواند بصورت اکتسابی و یا ژنتیکی باشد. وقایعی که باعث صرع اکتسابی میشوند شامل: صدمه مغزی ناشی از ضربه، سکته مغزی، عفونت سیستم عصبی مرکزی، نئوپلاسم، خونریزی داخل مغزی، تشنجهای ناشی از تب و صرع پایدار میباشند.

مکانیسم ایجاد صرع: فعالیت الکتریکی طبیعی نورونهای مغزی ناهماهنگ است. در تشنجات صرعی ناشی از مشکلات مغزی، فعالیت گروهی از نورونهای مغز بصورت غیر طبیعی و هماهنگ افزایش می یابد. انتقال عصبی گلوتاماترژیک و گابارژیک بترتیب ناقلین عمده تحریکی و مهاری سیستم عصبی هستند. عدم تعادل بین انتقال عصبی تحریکی و مهاری مغز که میتواند بوسیله یک کاهش در انتقال گابارژیک و یا یک افزایش در انتقال گلوتاماترژیک تولید شود با ایجاد صرع در بیماران صرعی ارتباط دارد(2). انتقال عصبی گلوتاماترژیک لازمه قطعی برای تغییر حالت به حمله تشنج است در حالیکه فعالیت گابارژیک از تغییر حالت به وقایع شبه تشنجی جلوگیری میکند. مسیرهای کولینرژیک نیز در تولید و انتشار صرع نقش دارند و گزارش شده است که گیرنده موسکارینی M1 نقش مهمی در ایجاد فعالیت صرعی دارد.

انواع تشنج بر اساس منشاء حملات تقسیم بندی شده که به دو صورت موضعی (فوکال) و منتشره (جنرالیزه) در مغز می باشد. نوع منتشره بر اساس اثرات آن بر بدن به انواع مختلفی مانند: تونیک – کلونیک (صرع بزرگ)، Absence (صرع کوچک)، میوکلونیک، کلونیک، تونیک و آتونیک تقسیم بندی می شود. داروهای ضد صرع ممکن است فعالیت ضد تشنجی اشان را بوسیله تقویت انتقال عصبی مهاری و یا مهار انتقال عصبی تحریکی توسط مکانیسمهای مختلف پیش سیناپسی یا پس سیناپسی نشان دهند. با داروهای ضد صرع در دسترس از قبیل فنوباربیتال، فنی توئین، کاربامازپین، سدیم والپورات، بنزودیازپین ها، اتوسوکسیماید و غیره حدود 70 درصد افراد دچار صرع بطور رضایتبخش به کنترل حملات دست می یابند. بنابراین نیاز به داروهای ضد صرع مؤثرتر و ایمن تر هنوز وجود دارد. همچنین با وجود توسعه داروهای جدید، صرع پایدار هنوز به عنوان یک اورژانس بالینی مطرح میشود چون با ناخوشی و مرگ و میر قابل توجهی همراه است و درمان بالینی صرع پایدار و اپی لپتوژنز (صرع زایی) متعاقب آن هنوز به عنوان یک چالش بحرانی مطرح میشود.

مدلهای حیوانی تشنج و صرع یک نقش اساسی در پیشرفت درک مکانیسمهای پایه ایجاد کننده صرع ایفا میکنند و در کشف و تکامل پیش بالینی داروهای ضد صرع جدید مفید میباشند. مدلهای حیوانی مختلف از جمله ایجاد تشنج توسط مواد شیمیایی، در این زمینه استفاده میشوند که دو مدل از آنها عبارتند از: کیندلینگ شیمیایی ناشی از پنتیلن تترازول (PTZ) و القاء صرع پایدار شیمیایی توسط پیلوکارپین(3).

در مدل کیندلینگ صرع لوب گیجگاهی (Temporal Lobe Epilepsy) یک محرک الکتریکی یا شیمیایی زیر سطح تشنجی با تجویز پی در پی باعث ایجاد تشنجهای عمومی ثانویه میشود. یکی از مواد شیمیایی که برای ایجاد کیندلینگ بکار برده میشود PTZ است(4). این ماده کانالهای کلری گابا نوع A را مهار میکند.

شواهدی وجود دارد که کیندلینگ رفتار شبه اضطرابی را در جوندگان افزایش می دهد. تشنج و صرع ممکن است بدنبال وقایعی که پاسخهای التهابی را در مغز القاء می کند، ایجاد شود(5). آنزیم سیکلواکسیژناز نقش کلیدی در متابولیسم اسید آراشیدونیک به پروستانوئیدها دارد(5). بنظر می رسد که فرایندهای التهابی در رفتارهای اضطرابی نیز تاثیر دارند(6). همچنین شواهدی دال بر نقش استرس اکسیداتیو در ایجاد اضطراب وجود دارد(7). لذا بنظر می رسد که مواد آنتی اکسیدان بتوانند میزان اضطراب را کاهش دهند.

بابونه گیاهی است یک ساله و علفی به ارتفاع 20 الی 30 سانتیمتر و از خانواده Asteraceae می باشد. گیاه دارای بویی معطر که در چمن زارها و زمین های شنی می روید. ساقه آن به رنگ سبز مایل به سفید، برگ های آن کوچک متناوب و دارای بریدگی های باریک، نامنظم و پوشیده از کرک است. منشاء اصلی این گیاه نواحی مختلف مدیترانه بوده ولی امروزه در اروپا و نواحی معتدل آسیا بطور وسیعیپراکتدگی پیدا نموده و حتی در امریکا نیز گسترش یافته است. بابونه بطورت سنتی در ایران بعلت داشتن اثرات تب بری، تقویت سیستم ایمنی، خواب آوری، ارام بخشی، ضد دردی و تقویت سیستم عصبی استفاده می شود. نشان داده شده که عصاره بابونه حاوی مواد آنتی اکسیدان می باشد(8). همچنین اثرات نوروپروتکتیو عصاره گیاه بابونه در ایسکمی گلوبال در موش صحرائی گزارش شده است(9). بعلاوه اثر نوروپروتکتیو عصاره متانولی گیاه بابونه در استرس اکسیداتیو ناشی از آلومینیوم فلوراید نشان داده شده است(10).

برای درمان اضطراب از بنزودیازپین ها و باربیتوراتها استفاده می شود اما با توجه به اثرات مضر این مواد شیمیایی تلاش برای یک داروی تسکین دهنده و ضد اضطراب کم ضرر تر ادامه دارد. شواهدی دال بر وجود فلاونوئیدهایی با عملکرد مشابه بنزودیازپین ها و فیتواستروژنها در گیاه بابونه وجود دارد.همچنین فلاونوئیدهای اپیژنین و کرایزین(11) موجود در گیاه بابونه تمایل قوی به گیرنده های بنزودیازپینی دارد. بنابراین بنظر می رسد که گیاه بابونه بتواند آثار ضد اضطرابی نشان دهد(12). در یک کارآزمائی بالینی نشان داده شد که تجویز عصاره بابونه در اختلال اضطرابی جنرالیزه توانست اثرات ضد اضطرابی از خود نشان دهد(13). همچنین در مطالعه دیگری نیز تاثیر عصاره بابونه بر اختلالات اضطرابی جنرالیزه گزارش شده است(14).

با توجه به اینکه اثر بابونه بر میزان اضطراب ناشی از کیندلینگ گزارش نشده است، در این مطالعه به بررسی اثرات ضد اضطرابی عصاره ابی گیاه بابونه در مدل حیوانی پرداخته شده و با فنی توئین مقایسه خواهد شد.





سوالات و / یا فرضیات پژوهشمیزان اضطراب در حیوانات کیندله با سایر حیوانات متفاوت است.
مصرف عصاره بابونه موجب کاهش سطح اضطراب حیوانات می شود.
هدف کلی طرحبررسی اثرات عصاره آبی بابونه بر رفتار شبه اضطرابی القاء شده توسط کیندلینگ پنتیلن تترازول در موش صحرائی
اهداف اختصاصیتعیین میزان اضطراب در گروه کنترل
تعیین میزان اضطراب در گروه کیندله شده (sham operated)
تعیین میزان اضطراب در گروه کیندله شده دریافت کننده عصاره بابونه
تعیین میزان اضطراب در گروه کیندله شده دریافت کننده فنی توئین (کنترل مثبت)
مقایسه میزان اضطراب در گروههای مورد مطالعه
تعیین و مقایسه میزان فعالیت حرکتی در گروههای مورد مطالعه
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرحدانشگاههای علوم پزشکی و مراکز داروسازی
تعریف واژه های تخصصیکیندلینگ: ظاهر شدن مرحله پنجم تشنج در اثر تزریق پنتیلن تترازول در سه بار متوالی
نوع مطالعهجربی Experimental study
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)موشهای صحرائی بالغ نژاد ویستار آلبینو از جنس نر با محدوده وزنی 200 تا 250 گرم.
حجم نمونه و روش محاسبه آنبا توجه به مطالعات قبلی، در هر گروه هشت سر حیوان و در مجموع 40 سر حیوان با مشخصات فوق الذکر
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)قرار گرفتن حیوانات در گروههای مختلف بصورت تصادفی ساده خواهد بود.
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)رفتار حیوانات در طول دوره آزمون با دوربین ثبت و پس از انتقال به کامپیوتر با نرم افزار مخصوص (any maze) مورد تجزیه و تحلیل قرار خواهد گرفت.
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)حیوانات با مشخصات پیشگفت انتخاب و بطور تصادفی در گروههای: شاهد، شم، کنترل مثبت (دریافت فنی توئین با دوز 2/0 میلی گرم بازای کیلوگرم)، دریافت کننده عصاره بابونه (با دوز 30 میلی گرم بازای کیلوگرم) قرار خواهند گرفت. گروه شاهد نرمال سالین (1 ml/animal i.p.) دریافت می کنند.


روش القای کیندلینگ: گروههای مختلف (به جز گروه شاهد) در ساعت معینی پپنتیلن تترازول (دوز زیر تشنجی 40 میلی گرم بازای کیلوگرم) هر 48 ساعت یکبار و بصورت درون صفاقی دریافت میکنند. بعد از تزریق هر حیوان بصورت جداگانه در محفظه پلکسی گلاس با ابعاد 30*30*30 قرار گرفته و رفتار آنان با دوربین ثبت می شود. این عمل تا زمانی که حیوان تشنجات حرکتی کامل را نشان دهند. پاسخ تشنجی حیوان به شکل زیر طبقه بندی خواهد شد: مرحله صفر = عدم پاسخ، مرحله اول = انقباض عضلات صورت و گوشها، مرحله دوم = موج انقباضی بدن، مرحله سوم = پرش های میوکلونیک و ایستادن روی دو پا، مرحله چهارم = افتادن به پهلو، مرحله پنجم = افتادن به پشت و حملات عمومی تونیک – کلونیک. بعد از اینکه سه بار متوالی در اثر تزریق پنتیلن تترازول حیوان مرحله پنجم را نشان داد، بعنوان موش کیندله در نظر گرفته شده و تزریق پنتیلن تترازول پایان می یابد.


در طول این مدت، هر روز حیوانات به مدت پنج دقیقه مورد نوازش قرار خواهند گرفت تا از استرس اضافی در زمان آزمایش جلوگیری شود. پس از القاء کیندلینگ، رفتار اضطرابی حیوانات در دستگاه ماز مرتفع بعلاوه مورد ارزیابی قرار خواهد گرفت. روز آزمایش، به منظور سازگاری، حیوان یک ساعت قبل از ارزیابی اضطراب در اتاق مخصوص قرار خواهد گرفت. تجویز نرمال سالین و عصاره بابونه روز آخر ازمایش45 دقیقه قبل از تزریق پنتیلن تترازول و بصورت درون صفاقی خواهد بود. برای اندازه گیری سطح اضطراب، حیوان در بخش میانی دستگاه ماز و رو به بازوی باز قرار گرفته و به مدت پنج دقیقه رفتارش با دوربین مانیتور می شود. ورود و خروج به هر بازو با ورود چهار دست و پای حیوان در نظر گرفته می شود. درصد ورود به بازوی باز و درصد زمان سپری شده در بازوی باز با فرمول زیر محاسبه می شود: OAE%=OAE/(OAE+CAE) *100 OAT%=OAT/(OAT+CAT) * 100


هرچه درصد ورود به بازوی باز و زمان صرف شده به بازوی باز بیشتر باشد، سطح اضطراب حیوان کمتر است و برعکس. همچنین تعداد ورود به بازوی باز و بسته بعنوان معیار فعالیت حرکتی حیوان در نظر گرفته می شود.


روش عصاره گیری: سرشاخه های گیاه بابونه پس از شناسائی توسط کارشناس هرباریوم، در سایه خشک شده و به پودر خواهد شد. سپس 30 گرم پودر گیاه را در 300 میلی لیتر اب مقطر قرار داده و به مدت 48 ساعت خیسانده شده و با شیکر بهم زده می شود. سپس محلول حاصل با کاغذ صافی شماره 1 صاف شده و در فریزدرایر خشک خواهد شد. پودر باقیمانده در شرایط مناسب تا زمان آزمایشات نگهداری و بعدا در نرمال سالین با دوز مورد نظر حل شده و بصورت درون صفاقی تزریق خواهد شد.





روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)میزان درصد ورود به بازوی باز و درصد زمان سپری شده در بازوی باز برای هر حیوان محاسبه و به نرم افزار SPSS وارد خواهد شد. سپس برای مقایسه میانگین درصد ورود به بازوی باز و میانگین درصد زمان صرف شده در بازوی باز از آزمون کای اسکوار استفاده خواهد شد. همچنین میزان فعالیت حرکتی حیوانات با آزمون آماری student T-test در گروههای مختلف مقایسه خواهد شد.
ملاحظات اخلاقی در طول آزمایش بر اساس پروتکل ژاپن با حیوانات رفتار خواهد شد. همچنین انجام کار به تائید کمیته اخلاق دانشگاه نیز خواهد رسید. چک لیست رفتار با حیوانات آزمایشگاهی مصوب معاونت تحقیقات و فناوری وزات متبوعه نیز تکمیل و مورد توجه قرار خواهد گرفت
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهاتهیه داروها و مواد شیمیائی از خارج از کشور
کلمات کلیدیتشنج، کیندلینگ، پنتیلن تترازول، موش صحرائی
فهرست منابع و مراجع1. Thurman DJ, Beghi E, Begley CE, Berg AT, Buchhalter JR, Ding D, et al. Standards for epidemiologic studies and surveillance of epilepsy. Epilepsia. 2011 Sep;52 Suppl 7:2-26. PubMed PMID: 21899536.
2. Soman S, Korah PK, Jayanarayanan S, Mathew J, Paulose CS. Oxidative stress induced NMDA receptor alteration leads to spatial memory deficits in temporal lobe epilepsy: ameliorative effects of Withania somnifera and Withanolide A. Neurochemical research. 2012 Sep;37(9):1915-27. PubMed PMID: 22700086.
3. Lopes MW, Soares FM, de Mello N, Nunes JC, Cajado AG, de Brito D, et al. Time-dependent modulation of AMPA receptor phosphorylation and mRNA expression of NMDA receptors and glial glutamate transporters in the rat hippocampus and cerebral cortex in a pilocarpine model of epilepsy. Experimental brain research. 2013 Apr;226(2):153-63. PubMed PMID: 23392471.
4 Snehunsu A, Mukunda N, Satish Kumar MC, Sadhana N, Naduvil Narayanan S, Vijay Kapgal K, et al. Evaluation of anti-epileptic property of Marsilea quadrifolia Linn. in maximal electroshock and pentylenetetrazole-induced rat models of epilepsy. Brain injury : [BI]. 2013;27(13-14):1707-14. PubMed PMID: 24215095.
5. Tang XH, Wu XY, Xu L, Fang YX, Wang JH, Zhu GX, et al. Tenidap is neuroprotective in a pilocarpine rat model of temporal lobe epilepsy. Chinese medical journal. 2013;126(10):1900-5. PubMed PMID: 23673107.
6 Patki G, Solanki N, Atrooz F, Allam F, Salim S. Depression, anxiety-like behavior and memory impairment are associated with increased oxidative stress and inflammation in a rat model of social stress. Brain research. 2013 Nov 20;1539:73-86. PubMed PMID: 24096214.
7. Aguiar CC, Almeida AB, Araujo PV, de Abreu RN, Chaves EM, do Vale OC, et al. Oxidative stress and epilepsy: literature review. Oxidative medicine and cellular longevity. 2012;2012:795259. PubMed PMID: 22848783. Pubmed Central PMCID: 3403512.
8. Pereira RP, Fachinetto R, de Souza Prestes A, Puntel RL, Santos da Silva GN, Heinzmann BM, et al. Antioxidant effects of different extracts from Melissa officinalis, Matricaria recutita and Cymbopogon citratus. Neurochemical research. 2009 May;34(5):973-83. PubMed PMID: 18853256.
9. Chandrashekhar VM, Ranpariya VL, Ganapaty S, Parashar A, Muchandi AA. Neuroprotective activity of Matricaria recutita Linn against global model of ischemia in rats. Journal of ethnopharmacology. 2010 Feb 17;127(3):645-51. PubMed PMID: 20025954.
10. Ranpariya VL, Parmar SK, Sheth NR, Chandrashekhar VM. Neuroprotective activity of Matricaria recutita against fluoride-induced stress in rats. Pharmaceutical biology. 2011 Jul;49(7):696-701. PubMed PMID: 21599496.
11. Brown E, Hurd NS, McCall S, Ceremuga TE. Evaluation of the anxiolytic effects of chrysin, a Passiflora incarnata extract, in the laboratory rat. AANA journal. 2007 Oct;75(5):333-7. PubMed PMID: 17966676.
12. Heidari MR, Dadollahi Z, Mehrabani M, Mehrabi H, Pourzadeh-Hosseini M, Behravan E, et al. Study of antiseizure effects of Matricaria recutita extract in mice. Annals of the New York Academy of Sciences. 2009 Aug;1171:300-4. PubMed PMID: 19723069.
13. Amsterdam JD, Li Y, Soeller I, Rockwell K, Mao JJ, Shults J. A randomized, double-blind, placebo-controlled trial of oral Matricaria recutita (chamomile) extract therapy for generalized anxiety disorder. Journal of clinical psychopharmacology. 2009 Aug;29(4):378-82. PubMed PMID: 19593179. Pubmed Central PMCID: 3600416.
14 Ross SM. Generalized anxiety disorder (GAD): efficacy of standardized Matricaria recutita (German chamomile) extract in the treatment of generalized anxiety disorder. Holistic nursing practice. 2013 Nov-Dec;27(6):366-8. PubMed PMID: 24121702.






پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
1 002.jpg1392/12/12445768دانلود
2 001.jpg1392/12/12353260دانلود
3 001.jpg1392/12/12315801دانلود
4 001.jpg1392/12/12609038دانلود
6 001.jpg1392/12/12782566دانلود
9 001.jpg1392/12/12254699دانلود
9 002.jpg1392/12/12410579دانلود
babouneh zeisure-2.pdf1392/12/12202022دانلود
babouneh zeisure-3.pdf1392/12/12179889دانلود
Heidari-2009-Study of antiseizure.pdf1392/12/12131035دانلود
137_334_Payannameh[3].doc1392/12/12407552دانلود
p.doc1392/12/18410624دانلود
p.doc1392/12/21411136دانلود