چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 6592 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی وضعیت آنتی اکسیدان ها و آسیب اکسیداتیو پروتئین ها در بیماران بتا تالاسمی ماژور |
| عنوان لاتین طرح | Antioxidant status and protein oxidative damage in major beta thalasemia |
| نوع طرح | |
| محل اجرای طرح | بیمارستان علی ابن ابیطالب |
| رسته مطالعاتی | مورد شاهدی |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| محمدعلی مشهدی | استاد راهنمای اول پایان نامه دانشجویی | استاد راهنما | فوق تخصص | dralimashhadi@yahoo.com |
| علیرضا نخعی | استاد راهنمای دوم پایان نامه دانشجویی | استاد راهنما | دکترای تخصصی | alireza_nakhaee@yahoo.com |
| مهناز شهرکی پور | مشاور | مشاور آمار | کارشناسی ارشد | mahnaz@gmail.com |
| علی داوری مقدم | مجری | اجراء طرح | متخصص | drdavarimoghaddam@yahoo.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | بررسی وضعیت آنتی اکسیدان ها و آسیب اکسیداتیو پروتئین ها در بیماران بتا تالاسمی ماژور |
| خلاصه طرح به لاتین | Antioxidant status and protein oxidative damage in major beta thalasemia |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | سندرم های بتا تالاسمی یکی از شایعترین هموگلوبینوپاتی هاست که سالیانه تعدادی نوزاد با بیماری بتا تالاسمی ماژور متولد میشوند. تالاسمی ماژور به صورت آنمی شدید در حدود 6 ماهگی تظاهر می یابد که این بیماران نیازمند ترانسفوزیون های مکرر خون هستند. ترانسفوزیون های مکرر خون باعث Overload آهن میشود که این خود باعث عوارض دیگری از جمله عوارض آندوکرین و قلبی میشود.1
آهن یک نقش کاتالیتیک در تولید گونه های اکسیژن واکنشی و تولید رادیکالهای آزاد دارد که منجر به صدمه اکسیداتیو به سلول ها میشود.2 استرس اکسیداتیو ناشی از عدم تعادل بین واکنش های تولیدکننده رادیکال های آزاد و فرآیندهای خنثی کننده این رادیکال هاست. رادیکال های آزاد عموماً ترکیباتی ناپایدار، بسیار واکنش پذیر و مولکول هایی پرانرژی هستند. گونه های فعال اکسیژن(ROS) وگونه های فعال نیتروژن(RNS) که طی فرایندهای متابولیکی نرمال در همه ارگانیزم های هوازی تولید می شوند، نمونه هایی از رادیکال های آزاد هستند. رادیکالهای آزاد میتوانند از طریق حمله به ماکرومولکولهایی از قبیل لیپیدها،کربوهیدراتها و اسیدهای نوکلئیک باعث آسیب اکسیداتیو به بافت های زنده شوند. تحت شرایط فیزیولوژیکی بین تولید رادیکال های آزاد و سیستمهای دفاع آنتی اکسیدانی تعادل وجود دارد. افزایش تولید رادیکال های آزاد ناشی از افزایش قرار گرفتن در معرض اکسیدان های محیطی و افزایش تولید آنها در بدن و کاهش ظرفیت های آنتی اکسیدانی باعث ایجاد استرس اکسیداتیو می شود.3 آنتی اکسیدانها یک نقش مهم و اساسی در حمایت سلول ها از آسیب های اکسیداتیو دارند که این آنتی اکسیدان ها شامل عوامل مختلفی از جمله آنزیمها (گلوتاتیون پراکسیداز، سوپراکسید دیسموتاز، کاتالاز)، مولکولهای بزرگ (فریتین، آلبومین) و مولکول های کوچک (اسیداوریک، گلوتاتیون، بیلیروبین، اسیدآسکوربیک، آلفاتوکوفرول، ویتامین E) است. دفاع سیستم آنتی اکسیدانی با اندازه گیری سطوح آنتی اکسیدان ها در سلول یا پلاسما یا ظرفیت کلی آنتی اکسیدانی(Total antioxidant capacity) ارزیابی می شود.4 حمله اکسیداتیو به پروتئین ها باعث تغییراتی مثل تغییر اسیدهای آمینه پروتئین ها، قطعه قطعه شدن زنجیره پپتیدی، ایجاد اتصالات عرضی دی سولفیدی، تغییر بار الکتریکی و نهایتاً مستعد شدن پروتئین برای پروتئولیز می شود. پروتئین کربونیل یکی از مهم ترین بیومارکرهای اکسیداسیون پروتئین ها بوده و از نظر شیمیایی پایدار می باشند. گروه های پروتئین کربونیل از طریق اکسیداسیون مستقیم اسیدهای آمینه یا در اثر واکنش ثانویه با محصولات اکسیداسیون اولیه قندها و لیپیدها ایجاد می شوند. چنین اثرات اکسیداتیوی در پروتئین ها باعث تغییراتی در ساختار و عملکرد پروتئین ها می شوند.5 گروه های تیول موجود در پروتئین های بدن به عنوان یکی از آنتی اکسیدان های مهم و یکی از اصلی ترین عوامل احیاء کننده داخل سلولی و خارج سلولی می باشند. میزان گروه های تیول موجود در پروتئین ها و توتال تیول موجود در بدن نشان دهنده وضعیت آنتی اکسیدانی بدن می باشد. هرچه تولید رادیکال های آزاد در بدن بیشتر باشد به همان مقدار از میزان تیول احیاء در بدن کاسته می شود. بنابراین سنجش میزان توتال تیول احیاء می تواند در بررسی میزان استرس اکسیداتیو ایجاد شده در بدن مفید باشد.6و7 در بدن انسان تعادل ظریفی بین تولید و حذف گونه های اکسیژن واکنشگر به عنوان پرواکسیدان وجود دارد.8و9 این مطالعه جهت ارزیابی سطح کلی آنتی اکسیدان ها، ارزیابی توازن پرواکسیدان-آنتی اکسیدان (PAB) و میزان اکسیداسیون پروتئین ها در بیماران تالاسمی ماژور طراحی گردید. |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | الف-میزان پروتیین کربونیل افراد دچار تالاسمی ماژور و گروه کنترل اختلاف معنادار دارد.
ب-میزان توتال تیول در افراد دچار تالاسمی ماژور وکنترل اختلاف معنادار دارد. ج-بالانس سیستم آنتی اکسیدانی-اکسیدانی(PAB)در بیماران تالاسمی ماژور و گروه کنترل اختلاف معنادار دارد |
| هدف کلی طرح | بررسی وضعیت آنتی اکسیدان ها و آسیب اکسیداتیو پروتئین ها در بیماران بتا تالاسمی ماژور |
| اهداف اختصاصی | الف)تعیین و مقایسه پروتیین کربونیل(PC) در بیماران تالاسمی ماژور و گروه کنترل
ب)تعیین ومقایسه توتال تیول در بیماران تالاسمی ماژور و گروه کنترل ج)تعیین و مقایسه بالانس پرواکسیدان/اکسیدان(PAB) در بیماران تالاسمی ماژور و گروه کنترل |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | دانشگاه علوم پزشکی زاهدان و واحدهای تابعه. |
| تعریف واژه های تخصصی | Prooxidant/antioxidant balance: برای ارزیابی بالانس اکسیدان - آنتی اکسیدان تعیین مقدار هم اکسیدان و هم آنتی اکسیدان، هر دو ضروری میباشد. تخمین PAB به وسیله اندازه گیری همزمان مقدار پرواکسیدان و ظرفیت آنتی اکسیدانی نسبت به روش بررسی جداگانه اکسیدان ها و آنتی اکسیدان ها ارجحیت دارد.10
جهت اندازهگیری توتال تیول از روش HU11 با مختصری تغییر در نحوه انجام آزمایش استفاده شد. در این روش Dithiobisnitrobenzoic acid (DTNB) توسط گروههای تیول به فرم 2- نیترو– 5- مرکاپتوبنزوئیک اسید احیاء میشود. آنیون 2- نیترو – 5- مرکاپتوبنزوئیک اسید رنگ زرد پر رنگی را ایجاد میکند که شدت رنگ ایجاد شده متناسب با غلظت توتال تیول احیاء میباشد.12 پروتئین کربونیل: جهت اندازهگیری پروتئین کربونیل از متد الیزا که بر اساس روش Bussطراحی خواهد شد استفاده می شود. در این روش نمونة پروتئینی با معرف دینیتروفنیل هیدرازین (DNPH) واکنش داده و جذب پلیت الیزا میشود. سپس با استفاده از اولین آنتیبادی اختصاصی ضد DNPH و دومین آنتیبادی کونژوگه میزان پروتئین کربونیل اندازهگیری میشود.13 |
| نوع مطالعه | Cross-control |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | بیماران تالاسمی ماژور مراجعه کننده به کلینیک هماتولوژی بیمارستان حضرت علی اصغر(ع) که دارای معیارهای ورود به مطالعه و نداشتن معیارهای خروج از مطالعه باشند وارد طرح می شوند. انتخاب گروه کنترل باmatching بر اساس سن و جنس میباشدکه از افراد مراجعه کننده به کلینیکهای داخلی و اطفال بیمارستان حضرت علی اصغر (ع) که هیچ اختلال هماتولوژیک یا بیماری سیستمیک نداشته باشند با در نظر گرفتن معیارهای خروج، به عنوان گروه کنترل انتخاب خواهند شد.
معیارهای ورود به مطالعه: بیمارانی که تشخیص بیماری تالاسمی ماژور آنها بر اساس تظاهرات کلینیکی و الکتروفورز هموگلوبین باشد و تزریق خون به میزان cc/kg 10-15 هر 25-21 روز برای حفظ Hb آنها در حد g/dl 11-10 انجام شود و تحت درمان با دسفروکسامین (DFO) زیر جلدی با دوز mg/kg/daily 60-20 به منظور chelation therapy باشند. معیارهای خروج شامل: الف) مصرف ویتامین ها و مکملهای ویتامینی در دو ماهه اخیر ب) داشتن بیماری حاد در حال حاضر ج) استعمال سیگار د )داشتن بیماریهای التهابی و سیستمیک مثل دیابت، RA |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | با توجه به مطالعات انجام شده3،5،14،حجم نمونه در سطح اطمینان 95%وبا توان آزمون80%به شرح ذیل محاسبه گردیده است.
یعنی حداقل حجم نمونه در هر گروه 29نفر برآورد شده است ولی ما جهت دقت بیشتر در هر گروه 40نفر را مورد بررسی قرار خواهیم داد |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | روش نمونه گیری از بیماران،نمونه گیری غیراحتمالی در دسترس خواهد بود.همسانسازی در گروه کنترل بر اساس سن و جنس انجام خواهد شد. |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | بررسی پرونده های بیماران در بیمارستان حضرت علی اصغر بعمل خواهد آمدوداده ها در فرم اطلاعاتی ضمیمه ثبت خواهد شد. |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | این مطالعه مورد-شاهدی بروی 40 بیمار مبتلا به تالاسمی ماژور و 40 فرد سالم که از لحاظ سن و جنس همسان سازی خواهند شد، طراحی شده است. بیماران مبتلا به تالاسمی ماژور که تشخیص بیماری تالاسمی ماژور آنها بر اساس تظاهرات کلینیکی و الکتروفورز هموگلوبین باشد و تزریق خون به میزان cc/kg 10-15 هر 25-21 روز برای حفظ Hb آنها در حد g/dl 11-10 انجام شود و تحت درمان با دسفروکسامین (DFO) زیر جلدی با دوز mg/kg/daily 60-20 به منظور chelation therapy باشند، بشرطی که معیارهای خروج از مطالعه را نداشته باشند وارد مطالعه میشوند.
افراد سالم از افراد مراجعه کننده به کلینیکهای داخلی و اطفال بیمارستان حضرت علی اصغر (ع) که هیچ اختلال هماتولوژیک یا بیماری سیستمیک نداشته باشند با در نظر گرفتن معیارهای خروج، به عنوان گروه کنترل انتخاب خواهند شد. 2 سی سی خون پس از 12-8 ساعت ناشتایی از هریک از افراد مورد مطالعه گرفته میشود که در گروه بیماران تالاسمی نمونه ها قبل از ترانسفوزیون PC خواهد بود. نمونه های خون به مدت 10 دقیقه با 3000 rpm سانتریفوژ خواهد شد و سپس تا هنگام آنالیز در درجه حرارت 70- درجه سانتی گراد نگهداری خواهد شد. تمامی آزمایشات در آزمایشگاه بیوشیمی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان انجام خواهد شد. |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | با استفاده ازروشهای آمار توصیفی(تنظیم جداول فراوانی،رسم نمودار،تعیین شاخصهای مرکزی و پراکندگی)و روشهای آماری تحلیلی آزمون کولموگروف – اسمیرنوف توزیع آماری متغیرها مورد بررسی قرار می گیرد . مارکرهایی توزیع نرمال داشته باشند با استفاده از آزمون t-test و متغیرهایی که از توزیع نرمال برخوردار نباشند با آزمون آماری غیرپارامتریMan Withney U مقایسه می شوند و P<0/05 معنی دار در نظر گرفته می شود.در ضمن از نرم افزار SPSSاستفاده خواهیم کرد.
بررسی شاخص های استرس اکسیداتیو در بیماران تالاسمی ماژور و افراد سالم گروه بیمار گروه کنترل P- Value بالانس اکسیدان/آنتی اکسیدان(HK-unit) توتال تیول (میکرو مول/میلی لیتر) پروتیین کربونیل (نانو مول بر میلی گرم) |
| ملاحظات اخلاقی | الفـ) بعد از توضیح مطالعه برای شرکتکنندگان، رضایت نامه کتبی از انان اخذ می شود که این رضایت نامه منطبق با اصول Helsinki می باشد (فرم رضایت آگاهانه ضمیمه است).
ب) تمامی بیماران تحت مطالعه از ورودشان به این مطالعه آگاه می شوند، در صورت رضایت آگاهانه وارد مطالعه خواهند شد و کسب رضایت آگاهانه فارغ از هرگونه اجبار، تهدید، تطمیع و اغوا انجام می گیرد. ج) اطلاعات مربوط به روش اجرا، هدف از انجام تحقیق، زیان های احتمالی، فواید، ماهیّت و مدت تحقیق را به میزانی که با آزمودنی ارتباط دارد، به بیمار تفهیم نموده و به سؤالات او پاسخ های قانع کننده داده می شود و مراتب مذکور در رضایت نامه قید می شود. د)ـ تمهیدات لازم از قبیل امکانات پیشگیری از انتقال عفونت و آمادگی برای هر نوع حادثه فراهم می گردد. ه) کلیه اطلاعات فردی محرمانه باقی خواهد ماند و در صورت تصویب توسط کمیته اخلاق در پژوهش دانشگاه اجرا خواهد شد. (مطابق کدهای اخلاقی1،3و17) . و)به بیمار تفهیم می شود که می تواند در هر زمان که مایل باشد، از شرکت در تحقیق منصرف شود و برای ایشان توزیع داده می شود که در صورت انصراف از شرکت در مطالعه هیچ محرومیتی از نظر خدمات درمانی و بیمارستانی تحمیل نخواهد شد. ز) شرکت در این مطالعه هیچ گونه هزینه ی مازاد بر درمان و ارزیابی های لازم برای بیماران ندارد. ح) انجام روش تحقیق مغایر با موازین دینی و فرهنگی بیمار و جامعه نمی باشد. |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | محدودیت خاصی در این مطالعه نخواهیم داشت. |
| کلمات کلیدی | Antioxidant status, protein carbonyl, major beta thalasemia |
| فهرست منابع و مراجع | • 1. Benz, EJ. Disorder of hemoglobin. In: Fauci AS, Braunwald E, Kasper DL, et al. Harrison´s Principle of Internal Medicine. McGraw-Hill, USA; 2012; pp 640-1.
• 2. Ghone RA, Kumbar KM, Suryakar AN, et al. Oxidative stress and disturbance in antioxidant balance in beta thalassemia major. Ind J Clini Biochem 2008; 23:337-40 • 3. Kassab-Chekir A, Laradi S, Ferchichi S, et al. Oxidant, antioxidant status and metabolic data in patients with beta-thalassemia. Clin Chim Acta 2003; 338:79–86. • 4. Joshi W, Leb L, Piotrowski J, et al. Increased sensitivity of isolated alpha subunits of normal human hemoglobin to oxidative damage and crosslinkage with spectrin. J Lab Clin Med 1983; 102:46–52. • 5. Naithani R, Chandra J, Bhattacharjee J, et al. Peroxidative stress and antioxidant enzymes in children with b-thalassemia major. Pediatr Blood Cancer 2006; 46:780–5. • 6. Scott MD, Eaton JW. Thalassemic erythrocytes: Cellular suicide arising from iron and glutathione-dependent oxidation reactions? Br J Haematol 1995; 91:811–9. • 7. Das N, Chowdhury TD, Chattopadhyay A, Datta AG. Attenuation of oxidative stress-induced changes in thalassemic erythrocytes by vitamin E. Pol J Pharmacol 2004; 56:85–96. • 8. Livrea MA, Tesoriere L, Pintaudi AM, et al. Oxidative stress and Antioxidant status in beta thalassemia major: Iron overload and depletion of lipid-soluble antioxidants. Blood 1996; 88:3608-14. • 9. Mulligan M, Althaus B, Linder MC. Non-ferritin, non-heme iron pools in rat tissues. Int J Biochem 1986; 18:791. • 10. Deighton N, Hider RC. Intracellular low molecular weight iron. Biochem Soc Trans 1989;17:490. • 11. Hu ML. Measurement of protein thiol groups and glutathione in plasma. Methods Enzymol. 1994; 233: 380-5. • 12. Sedlak J, Lindsay RH. Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman,s reagent. Anal Biochem 1968; 25:192-205. • 13. Buss IH, Chan TP, Sluis KB, Domigan NM, Winterbourn CC. Protein carbonyl measurement by a sensitive ELISA method. Free Radic Biol Med 1997; 23:361–66. • 14. Şimşek F, Öztürk G, Kemahlı S, et al. Oxidant and antioxidant status in beta thalassemia major patients. Ankara Univ Tip Fak Mec 2005; 58:34-8. |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| proposal thalasemia (2).doc | 1392/11/28 | 276992 | دانلود |
| 8.jpg | 1392/11/28 | 125125 | دانلود |
| nahee.doc | 1392/12/12 | 278016 | دانلود |
| davari.jpg | 1392/12/12 | 187798 | دانلود |
| 6592.doc | 1393/02/20 | 278528 | دانلود |
