بررسی پلی مورفیسم C677T ژن MTHFR)) Methylenetetrahydrofolate reductase در کارسینومای سلول سنگفرشی دهان

Evaluation of C677T polymorphism of Methlenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene in oral squamous cell carcinoma


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان: شیرین سراوانی

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 6734
عنوان فارسی طرح بررسی پلی مورفیسم C677T ژن MTHFR)) Methylenetetrahydrofolate reductase در کارسینومای سلول سنگفرشی دهان
عنوان لاتین طرح Evaluation of C677T polymorphism of Methlenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene in oral squamous cell carcinoma
نوع طرح
محل اجرای طرح دانشکده دندانپزشکی
رسته مطالعاتی کاربردی
دانشکده/مرکز دانشکده دندانپزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
شیرین سراوانیاستاد راهنمای اول پایان نامه دانشجوییاستاد راهنمادکترای تخصصی shirin.saravani@yahoo.com
ابراهیم میری مقدم(پژوهشگر/استاد راهنما)استاد راهنمای دوم پایان نامه دانشجوییاستاد راهنمادکترای تخصصی moghaddam4@yahoo.com
جمال الدین معتضدیانهمکاردانشجودکترای دندانپزشکی motazedian91@gmail.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی پلی مورفیسم C677T ژن MTHFR)) Methylenetetrahydrofolate reductase در کارسینومای سلول سنگفرشی دهان
خلاصه طرح به لاتینEvaluation of C677T polymorphism of Methlenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene in oral squamous cell carcinoma
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشکارسینومای سلول سنگفرشی دهان (OSCC) ششمین بدخیمی شایع در جهان است. با احتساب این که OSCC 90 تا 95 درصد از کل بدخیمی های دهان را شامل می شود، عملا مترادف سرطان دهان در نظر گرفته می شود1. OSCC 2% تا 4% از کل موارد سرطان ها را شامل می شود. در برخی مناطق شیوع سرطان دهان بیشتر است؛ در پاکستان شیوع OSCC به 10% از موارد سرطان ها رسیده است و در هند تقریبا 45% از موارد را شامل می شود. از سال 2004 تا 2009 تقریبا 300000 مورد جدید از سرطان دهان و اوروفارنکس در سراسر جهان کشف شده است و در همین بازه زمانی بیشتر از 7000 نفر به خاطر این سرطان جان خود را از دست دادند. با وجود روش های درمانی مختلف، نرخ بیماری و مرگ و میر تقریبا در 30 سال اخیر، بهبود قابل توجهی نداشته است. به علاوه شیوع OSCC در سفید پوستان جوان 18 تا 44 ساله و به خصوص در میان زنان سفید پوست در حال افزایش است. نرخ امید به زندگی در 5 سال برای بیماران مبتلا به OSCC از 40 تا 50 درصد متفاوت است. با وجودی که حفره ی دهان یک دسترسی آسان برای معاینه ی بالینی فراهم می کند، همچنان اکثر موارد OSCC در مراحل پیشرفته تشخیص داده می شوند. معمول ترین علت آن تشخیص اولیه ی اشتباه یا نادیده گرفتن بیمار یا پزشک است2. بوجود آمدن سرطان دهان یک پروسه ی چند مرحله ای است که به وسیله ی عوامل درونی و محیطی تنظیم می گردد. در این میان مصرف تنباکو و الکل یک نقش اساسی را ایفا می کند. حضور عفونت پایدار ویروس پاپیلومای انسانی (HPV) در این پروسه نیز موثر است. تغییرات اپی ژنتیکی یک فاکتور اصلی دیگر در بوجود آمدن و تنظیم پروسه ی چند مرحله ای سرطان زایی است. تغییرات اپی ژنتیکی عبارت اند از تغییرات وراثتی در بیان ژن بدون تغییر در توالی DNA. DNA Methylation معمول ترین تغییر اپی ژنتیکی است. همچنین DNA hypomethylation، DNA hypermethylation، Loss of imprinting، Histone methylation و Histone deacetylation از جمله تغییرات اپی ژنتیکی هستند که می توانند منجر به آغاز پروسه ی سرطان زایی شوند3.
Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) یک آنزیم است که نقش مهمی در متابولیسم فولات دارد. در انسان فولات یک نقش بنیادی در فراهم کردن گروه های Methyl برای سنتز دئوکسی نوکلئوزید ها و واکنش های Methylation داخل سلولی دارد4. فعال بودن آنزیم MTHFR و فراهم بودن فولات می تواند بر بیان ژن از طریق DNA Methylation و تمامیت ژنوم از طریق سنتز و تعمیر DNA، اثر بگذارد5. MTHFR در فراهم بودن uridylate و thymidylate ها که در سنتز و تعمیر DNA نقش دارند، موثر است. کمبود thymidylate می تواند موجب عدم اتصال uridylate به DNA شود که باعث شکستگی های کنار DNA و آسیب کروموزومی می گردد6. MTHFRR C677T یک تایپ آللی است که دارای جانشینی C→T در نوکلئوتید 677 می باشد5.
de Arruda و همکارانش در سال 2013 در برزیل مطالعه ای با عنوان «پلی مورفیسم MTHFR C677T و DNA methylation سراسری در سلول های اپی تلیالی دهان» انجام دادند. آن ها برای این مطالعه، نمونه های خود را از سلول های اپی تلیالی دهان 54 فرد سالم تهیه کردند. نهایتا تفاوت معناداری در بین ژنوتیپ های MTHFR CC, CT و TT یافت نشد7.
در سال 2013 مطالعه ی دیگری نیز در این زمینه به وسیله ی Addala و همکارانش انجام شد. آن ها رابطه ی پلی مورفیسم C677T در ژن MTHFR و خطر سرطان سلول سنگفرشی دهان در جمعیت جنوب هند را بررسی کردند. در این مطالعه ی case-control، 150 نفر مبتلا به OSCC و 150 نفر به عنوان گروه کنترل شرکت داده شدند و ژنوتیپ آن ها با روش PCR مشخص شد. در نتایج این مطالعه ژنوتیپ هتروزیگوت CT در بین افراد با OSCC به طور معناداری شیوع بیشتری نسبت به گروه کنترل داشت در حالی که ژنوتیپ TT تفاوت معناداری در بین دو گروه نداشت. آن ها بیان کردند که ژنوتیپ CC می تواند وابسته به OSCC باشد. شیوع آلل MTHFR 677T نادر است و ژنوتیپ CT ممکن است با خطر OSCC در ارتباط باشد6.
Galbiatti و همکارانش مطالعه ای با عنوان «پلی مورفیسم و haplotypes در ژن MTHFR و خطر سرطان سلول سنگفرشی سر و گردن» در سال 2012 و در برزیل انجام دادند. 322 نفر با سرطان سلول سنگفرشی سر و گردن و 531 نفر سالم به عنوان گروه کنترل در این مطالعه شرکت کردند. نتایج مطالعه نشان داد که تفاوت معنی داری در فراوانی ژنوتیپهای پلی مورفیسم MTHFR C677T بین گروه کنترل و مبتلایان به سرطان سلول سنگفرشی سر و گردن وجود ندارد. همچنین مشخص شد که پلی مورفیسم MTHFR C677T با سن، جنس، عادات مصرف تنباکو و الکل، پارامترهای هیستوپاتولوژیک کلینیکی مرتبط نیست8.
در سال 2011 مطالعه ای با هدف ارزیابی رابطه و واکنش متقابل ژنوتیپ MTHFR و عادات سیگار کشیدن و سرطان دهان در تایوان به وسیله ی Tsai و همکارانش انجام شد. 620 فرد مبتلا به سرطان دهان و 620 فرد سالم به عنوان گروه کنترل در این مطالعه قرار گرفتند و ژنوتیپ آن ها بررسی شد. ژنوتیپ MTHFR C677T به صورت متفاوتی در بین دو گروه تقسیم شده بود در حالی که ژنوتیپ A1298C در دو گروه تقریبا یکسان توزیع شده بود. آلل T ژنوتیپ MTHFR C677T در گروه کنترل نسبت به گروه بیماران با OSCC بسیار بیشتر بود. ژنوتیپ های MTHFR C677T CT و MTHFR C677T TT رابطه ی کمتری با سیگار کشیدن داشتند. همچنین بیماران با ژنوتیپ MTHFR C677T CT و TT ریسک کمتری برای متاستاز سرطان داشتند. ژنوتیپ MTHFR C677T می تواند اثر فزاینده ای بر سیگار کشیدن در سرطان دهان داشته باشد. آن ها عنوان کردند که ژنوتیپ MTHFR C677T می تواند یک شاخص مفید برای پیش بینی و پیش آگهی سرطان دهان باشد 9.
با توجه به این نتایج ضد و نقیض به نظر می رسد مطالعات بیشتری در جوامع دیگر برای بررسی این مسئله مورد نیاز است. بدین ترتیب هدف از این مطالعه بررسی پلی مورفیسم C677T ژن MTHFR در کارسینومای سلول سنگفرشی دهان می باشد.
سوالات و / یا فرضیات پژوهشتوزیع فراوانی پلی مورفیسم C677Tژن MTHFR در دو گروه کنترل و کارسینومای سلول سنگفرشی دهان باهم متفاوت است.
هدف کلی طرحتعیین پلی مورفیسم C677T ژن MTHFR در کارسینومای سلول سنگفرشی دهان
اهداف اختصاصیمقایسه ی پلی مورفیسم C677T ژن MTHFR در دو گروه کنترل و کارسینومای سلول سنگفرشی دهان
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرحمرکز تحقیقات دندانپزشکی، مرکز تحقیقات ژنتیکی کانسرها
تعریف واژه های تخصصی (MTHFR) Methylenetetrahydrofolate reductase : آنزیمی است که به صورت برگشت ناپذیر واکنش تبدیل 5 و10 متیلن تتراهیدروفولات ردوکتاز به 5 متیل تتراهیدروفولات، که شکل رایج اولیه ی فولات می باشد را کاتالیز می کند. بنابراین این آنزیم نقش مرکزی در تعادل سنتز DNA و متیلاسیون آن ایفا می کند10.
نوع مطالعهمورد شاهدی-تحلیلی
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)تمام نمونه های بیوپسی سرطان اولیه سلول سنگفرشی حفره دهان بر اساس بررسی های پاتولوژیک در بخش پاتولوژی دانشکده دندانپزشکی زاهدان که مقدار بافت باقیمانده آنها در بلوک پارافینی جهت بررسی کافی باشد.
حجم نمونه و روش محاسبه آنتمام نمونه های بیوپسی مورد بررسی شامل تمامی موارد SCC دهانی بخش پاتولوژی دانشکده دندانپزشکی زاهدان است که طی سالهای ۱۳۸۳ تا 1392 جمع آوری شده اند و شامل ۵۰ نمونه می باشند و و گروه کنترل 50 نمونه از نمونه های بافتی که فاقد تشخیص OSCC باشند.
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)سرشماری
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)فرم ثبت اطلاعات (ضمیمه شماره۱)
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)این مطالعه به صورت گذشته نگر طراحی شده است و از نمونه های بیوپسی بیماران مبتلا به سرطان سلول سنگفرشی دهانی موجود در آزمایشگاه پاتولوژی دانشکده دندانپزشکی زاهدان استفاده خواهد شد. گروه کنترل از DNA نمونه های بافتی که که در بخش پاتولوژی باشند و فاقد اختلال سرطانی SCC باشند و از لحاظ سن وجنس با نمونه های ابتلا به OSCC همسان سازی شده است. از بلوک پارافینی مربوط به هر نمونه سه برش جداگانه تهیه خواهد شد و در میکروتیوب های 51/۱ میلی لیتری جهت استخراج DNA به آزمایشگاه فرستاده خواهد شد. DNA نمونه ها توسط کیتهای اختصاصی در طی ۴ مرحله Deparafinization،Protease Digestion ، Nucleic Acid Isolation،Nuclease Digestion and final purification استخراج شده و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی پلی مورفیسم C677T ژن MTHFR با روش ARMS-PCR (Amplification Refractory Mutation System- Polymerase Chain Reaction) مورد ارزیابی کیفی قرار خواهند گرفت.
روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)تمامی اطلاعات استخراج شده با استفاده از نرم افزار SPSS 21 و آزمون chi square مورد تحلیل قرار خواهد گرفت.
جدول- توزیع فراوانی پلی مورفیسم C677T ژن MTHFR در گروه های مورد مطالعه
P value گروه کنترل گروه OSCC گروه مورد مطالعه
پلی مورفیسم ژنی
CC
TT
CT
مجموع
ملاحظات اخلاقی در این مطالعه از نمونه های موجود در آرشیو استفاده خواهد شد و نیازی به کسب رضایت نامه آگاهانه نمی باشدو ملاحظه اخلاقی خاصی ندارد. (کد۱۷)
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهاندارد.
کلمات کلیدیپلی مورفیسم ژنی، متیلاسیون DNA،کارسینومای سلول سنگفرشی
Gene polymorphism, DNA methylation, Squamous cell carcinoma
فهرست منابع و مراجع1. Gonzalez-Ramirez I, Garcia-Cuellar C, Sanchez-Perez Y, Granados-Garcia M. DNA methylation in oral squamous cell carcinoma: molecular mechanisms and clinical implications. Oral Dis 2011; 17(8): 771-8.
2. Markopoulos AK. Current aspects of squamous cell carcinoma. Open Dent J 2012; 6: 126-30.
3. Mascolo M, Siano M, Ilardi G, Russo D, Merolla F, De Rosa G, et al. Epigenetic disregulation in oral cancer. Int J Mol Sci 2012; 13(2): 2331-53.
4. Blount BC, Mack MM, Wehr CM, MacGregor JT, Hiatt RA, Wang G, et al. Folate deficiency causes uracil misincorporation into human DNA and chromosome breakage: implications for cancer and neuronal damage. Proc Natl Acad Sci USA 1997; 94(1): 3290-5.
5. Solomon PR, Selvam GS, Shanmugam G. Polymorphism in ADH and MTHFR genes in oral squamous cell carcinoma of Indians. Oral Dis 2008; 14(7): 633–9.
6. Addala L, Kumar CHK, Reddy.NM, Reddy TPK, Sadhani MD. Association of the C677T polymorphism in the MTHFR gene with risk of oral squamous cell carcinoma in south Indian population. American journal of cancer research and clinical oncology 2013; 1(1): 1-11.
7. de Arruda IT, Persuhn DC, de Oliveira NF. The MTHFR C677T polymorphism and global DNA methylation in oral epithelial cells. Genet Mol Biol 2013; 36(4): 490-3.
8. Galbiatti AL, Ruiz MT, Rodrigues JO, Raposo LS, Maniglia JV, Pavarino EC, et al. Polymorphisms and haplotypes in methylenetetrahydrofolate reductase gene and head and neck squamous cell carcinoma risk. Mol Biol Rep 2012: 39(1): 635–43.
9. Tsai CW, Hsu CF, Tsai MH, Tsou YA, Hua CH, Chang WS, et al. Methylenetetrahydrofolate reductase (mthfr) genotype, smoking habit, metastasis and oral cancer in Taiwan. Anticancer Res 2011; 31(6): 2395-9.
10. Boccia S, Boffetta P, Brennan P, Ricciardi G, Gianfagna F, Matsuo K, et al. Meta- analyses of the methylenetetrahydrofolate reductase C677T and A1298C polymorphisms and risk of head and neck and lung cancer. Cancer Lett 2009; 237(1): 55-61.

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
Final motazedian proposal.doc1392/12/15218624دانلود
Modified final motazedian proposal.doc1393/02/14220672دانلود
Komite akhlagh.doc1393/02/28220672دانلود