چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 6817 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر محافظتی و آنتی اکسیدانی عصاره ریشه ویتانیا کوآگولانس برتغییرات هیستولوژیک ناشی از ایسکمی مغزی در مخچه رت |
| عنوان لاتین طرح | Neuro protective and antioxidant effect of Withania coagulangs root exract on change of histology of rat cerebellum in global cereberal ischemia |
| نوع طرح | |
| محل اجرای طرح | مدیریت توسعه فناوری سلامت |
| رسته مطالعاتی | تجربی- آزمایشگاهی |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| زهرا حیدری | استاد راهنمای اول پایان نامه دانشجویی | انجام تست سمیت سلولی | دکترای تخصصی | histology_iri@yahoo.com |
| حمیدرضا محمودزاده ثاقب | استاد راهنمای دوم پایان نامه دانشجویی | استاد راهنما | دکترای تخصصی | histology@ymail.com |
| مریم سربیشگی درمیان | مشاور | مشاور علمی | دکترای تخصصی | msarbishegi@yahoo.co.in |
| علیرضا نخعی | مشاور | مشاور علمی | دکترای تخصصی | alireza_nakhaee@yahoo.com |
| صدیقه فقیهی | مجری | دانشجو | کارشناس ارشد | sedighe.faghihi2@gmail.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | بررسی اثر محافظتی و آنتی اکسیدانی عصاره ریشه ویتانیا کوآگولانس برتغییرات هیستولوژیک ناشی از ایسکمی مغزی در مخچه رت |
| خلاصه طرح به لاتین | Neuro protective and antioxidant effect of Withania coagulangs root exract on change of histology of rat cerebellum in global cereberal ischemia |
| محل اول بکارگیری نتایج تحقیق | |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | سکته مغزی یکی از علل اصلی ناتوانی طولانی مدت و همچنین یکی از علل مرگ و میر در سراسر جهان می باشد. که سیاست های جدید برای مراقبت های سکته مغزی منجر به بهبود آن شده است (1). در صورت زنده ماندن عوارضی چون فلج ناحیه ای و مشکلاتی در حافظه، فکر کردن، حرف زدن و حرکت کردن را به وجود می آورد (2). سکته ایسکمیک شایعترین نوع سکته می باشد که شامل 85% کلیه سکته های مغزی می باشد (3). ایسکمی در اثر عواملی چون ترومبوز وآمبولی و کاهش خونرسانی سیستمیک به وجود می آید. توقف دائمی یا موقت جریان خون به قسمتی از مغز، در اثر انسداد شریانی سبب بروز سکته مغزی می شود و به دنبال آن آسیب به بافت مغز ایجاد می گردد. ناحیه آسیب دیده به دوبخش مرکزی وحاشیه ای تقسیم می شود. ناحیه مرکزی که در اثر انسداد رگ به وجود آمده و ناحیه هسته سکته نامیده می شود، آسیب برگشت ناپذیر دارد و ناحیه حاشیه ای که در اطراف ناحیه هسته قرار گرفته برگشت پذیر است و تدابیر درمانی بر روی این قسمت متمرکز شده است (4).
مراحل گام به گام گسترش ترومبوز و ایجاد سکته مغزی به شرح زیر است: 1. ترومبوز، از مکان اولیه ایجاد شده در یک شریان اصلی مثل کاروتید، حرکت می کند و در نتیجه باعث قطع خونرسانی به شاخه های جانبی کوچکتر می گردد. 2. ترومبوز یا لخته به آرامی لومن رگ را مسدود می کند و به طور متناوب به ایسکمی اضافه می شود. 3. ادم مغزی در مرکز ضایعه پخش می شود و باعث کاهش عملکرد در منطقه اصلی سکته می شود. 4. شرایط عمومی بیمار تغییر می کند. وضعیت قلبی-تنفسی برای افزایش عملکرد عصبی و تنظیم آب والکترولیت یا تعادل اسید وباز تغییر می کند (5). سکته ایسکمیک می تواند در اثر بیماری های مختلف اتفاق بیافتد. عوامل خطرزای سکته مغزی عبارتند از: سن، جنس، مصرف سیگار در 5 سال گذشته، فشار خون بالا، دیابت، دیس لیپیدمی،فیبریلاسیون دهلیزی و سابقه سکته مغزی گذرا(حمله ایسکمیک) (6). سیستم اعصاب مرکزی، مانند هر اندام دیگری در بدن جنبه هایی از التهاب را از خود نشان می دهد. سلول های اندوتلیال موجود در در سیستم عصبی قادرند واسطه های التهابی از جمله سایتوکین های التهابی، کموکین ها، رادیکال های آزاد و پروستاگلاندین ها را تولید کنند. تولید سایتوکین های پیش التهابی و به خصوص IL-1B و TNFa منجر به التهاب و مرگ نورونی به دنبال ایسکمی می شود. تحقیقات نشان داده اند که بیان mRNA سایتوکین ها پس از ایسکمی مغزی گذرا در موش افزایش می یابد (7). به طور کلی التهاب یک واکنش دفاعی به انواع آسیب های سلولی و بافتی است. التهاب نورونی به منزله ی یک پاسخ ایمنی دربرابر طیف وسیعی از عوامل مضراز جمله حمله پاتوژن ها، آسیب بافتی یا فرآیندهای عصبی که درسیستم عصبی مرکزی وارد می شود، می باشد (8). بافت های با مصرف انرژی بالا مانند مغز، عضله اسکلتی و قلب خیلی آسیب پذیر هستند (9). واقعه اصلی در طی ایسکمی مغزی، تولید رادیکال های آزاد و گونه های واکنشی، که به سبب کاهش اکسیژن بافتی سبب اختلال در عملکرد میتوکندری ها و تولید رادیکال های آزاد می شود. که بخاطر واکنش پذیری بالایشان سبب آسیب به لیپیدها، پروتئین ها و اسید دزوکسی ریبونوکلئیک شده و مرگ نورونی را باعث می شود (10). آنها ضمنا در شکستن سد خونی-مغزی و ایجاد ادم نقش دارند(8). شواهد پژوهشی نشان می دهد، رادیکال های آزاد نقش انکار ناپذیری در تشکیل، گسترش ادم و ضایعات ثانوی مغزی پس از سکته مغزی دارند(10). کاهش فعالیت و ظرفیت آنزیم های آنتی اکسیدانی و افزایش رادیکال های آزاد منجر به وارد شدن آسیب جدی به اجزای تشکیل دهنده سلول نظیرلیپید ها، پروتئین ها و اسید های نوکلئیک شده و در نهایت باعث مرگ سلول می گردد(3). ایسکمی مغزی و یا خونریزی از مغز باعث آتروفی مخچه می شود. اختلال اولیه در مخچه به علت هایپوکسی-ایسکمی در مغز است. اغلب دو طرفه و متقارن در حجم نیمکره های مخچه رخ می دهد. آسیب یک طرفه به نیمکره مغزی با کاهش قابل توجهی در حجم نیمکره مخچه طرف مقابل همراه است (11). مخچه به عنوان یک جزء مهم از مغز در عملکرد حرکتی نقش دارد. در نتیجه، تشخیص مراحل مختلف بیماری و آسیب یکی از اهداف این طرح است (11).مجموعه کاملی از شرایین –مویرگ ها و ورید ها به مغز خون می رسانند. دو شریان ورتبرال در امتداد ساقه مغزی امتداد یافته و تشکیل شریان بازیلار را می دهند که بعد از آن در ناحیه مخچه تقسیم شده و به مخچه و مغز خون رسانی می کند. قوس آئورت یک زوج شریان دیگر را به نام کاروتید چپ و راست تشکیل داده به قسمتهایی از مغز خون می رساند و در ناحیه قاعده مغزی همراه با شرایین ورتبروبازیلار تشکیل حلقه ویلیس می دهد که بخش وسیعی از مغز را خون رسانی می کند (12). آسیب به مخچه در عملکرد شناختی، اجتماعی و رفتاری در بیماران مسن، اختلال ایجاد می کند(11). 73% بیماران سکته مغزی در شش ماهه اول بعد از ترخیص از بیمارستان به علت مشکلات ناشی از اختلالات حسی، حرکتی، شناختی، بینایی و پردازش حسی زمین می خورند (13). در حدود 64% از بیمارانی که سکته مغزی را تجربه کرده اند درجاتی از اختلال شناختی و یک سوم از آنها دچار دمانس مغزی شده اند(13). از این رو ارزیابی عملکرد مخچه این بیماران قبل از طراحی برنامه توانبخشی، ضروری است(11). سلول های پورکینژ( PC) در مخچه، نورون های خروجی از قشر مخچه هستند و به خصوص به آسیب ایسکمیک حساس هستند. به دنبال آسیب و صدمه در مخچه باعث کاهش عملکرد، در رسپتور های گاماآمینوبوتریک اسید(GABA)و باعث حساسیت PC به سمیت ناشی از ایسکمی می شود (14). رسپتور های گابا در واقع اثر مهاری دارند و هایپرپلاریزاسیون آنها در نتیجه آسیب اگزوسیتوتوکسیک است. این گیرنده ها بیان پایینی دارند و بیان آنها در سکته مغزی و ایست قلبی است. همچنین مشاهده شده است که محرومیت از اکسیژن و گلوکز منجر به کاهش سریع و پایدار در گیرنده های واسطه گابا، رسپتور گابا و پروتئین زیر واحد a می شود (14). در مطالعات نشان داده شده در نوزادانی که به انفارکتوس مرکزی مبتلا شده اند رشد مخچه نیز کاهش پیدا کرده بود و لایه ورمیس در طول اولین سال پس از تولد هیچ رشدی نداشته است (15). 1 تا 7 روز بعد از ایسکمی کاهش تراکم نورونی در سلول های عصبی مشهود است. در طی 7 روز بعد از ایسکمی 43% از نورون های هرمی و 68% از سلول های پورکینژ باقی می مانند. سلول های عصبی در نوع تحلیل رفتن با همدیگر متفاوتند. مرگ در نورون های هرمی و سلول های پورکینژ، بعد از ایسکمی به صورت نکروز و در نورون های دانه دار، به صورت آپوتوز اتفاق می افتد(16). تجزیه و تحلیل مخچه به وسیله تصویر برداری، دشوار است. برای چنین ارزیابی هایی تعیین حجم مخچه مورد استفاده قرار می گیرد (15). در سال های اخیر از یک یا دو بخش از یک بافت به عنوان نماینده ای از یک ساختار برای ارزیابی مورفومتریک(گسترش ضایعات و مرگ نورونی) استفاده می شود. تعداد، کوچک شدن سلول های عصبی با دقت و به خوبی انجام نمی شود. علاوه بر این اگر چند بخش از یک بافت به عنوان نماینده ای از کل ساختار استفاده شود توضیح درستی از تعداد سلول های آن ساختار به ما نمی دهد. این اشتباه را از طریق استفاده از روش نمونه گیری سیستماتیک non-biased وتکنیک های استریولوژی می توان جبران کرد. تکنیک های نمونه گیری از طریق استریولوژی اجازه می دهد به دقت، تعداد کل سلول ها را در یک بافت بدست آورد. نمونه ها باید همه چیز های یک ساختار را در بر می گیرد. با این حال تشخیص ساختار های بدون مرز مشخص، دشوار است. که باید برای رسیدن به نتایج دقیق استریو لوژی بر طرف شود (17). استفاده از مدل های حیوانی در سکته های مغزی نقش مهمی در شناسایی مکانیسم ها و عوامل دخیل در پاتوفیزیولوژی سکته مغزی و ارائه روشهای مقدماتی درمانی ومحافظتی جدید دارند. مزیت این مدل ها آن است که امکان ایجاد ایسکمی مغزی تحت شرایط استاندارد فراهم می کند(5). Withania coagulans امروزه بسیاری از ترکیبات طبیعی با خواص آنتی اکسیدانی و ضد میکروبی از گیاهان مختلف جدا شده است. مطالعات زیادی بر روی اثرات عصاره و ترکیبات جدا شده از میوه ها، سبزیجات و گیاهان دارویی برای جلوگیری از اختلالات عصبی خاص، انجام شده است. برخی گیاهان سودمند مثل: زردچوبه، ویتانیاسومنیفرا، جینسینگ، درخت چهل سکه و...که اثرات محافظتی قابل توجهی در انواع اختلالات عصبی دارند، مشخص شده است (18). بسیاری از داروها به صورت صناعی ساخته شده اند که مغز را در برابر آسیب اکسیداتیو محافظت می کنند. اما این داروها عوارض جانبی زیادی دارند. تحقیق در مورد گیاهان دارویی، باعث کشف روشهای نوین، طبیعی و بی خطر در امر پزشکی شده است (18). Withania coagulans متعلق به خانواده سولاناسه یا گیلاس زمستان یکی از با ارزش ترین گیاهان سیستم پزشکی در هندوستان است. این گیاه آرام بخش و ضدتشنج و در رفع اختلالات مختلف عصبی در سالمندان مثل آرتریت، استرس ومشکلات مربوط به رفتار، موثر است. این گیاه به عنوان مکمل غذایی نیز استفاده می شود. عصاره ریشه و برگ این گیاه به عنوان مواد تغذیه ای در زنان باردار و سالمندان مورداستفاده قرار می گیرد. در مادران شیرده، مقدار و حجم شیررا افزایش می دهد. علاوه برآن، میوه ها و دانه های آن در انعقاد پنیر گیاهی مورد استفاده قرار می گیرد. سرشار از پلی فنل و فعالیت آنتی اکسیدانی است که در سلامت انسانها اهمیت دارد (18). درمطالعاتی که بر روی فعالیت آنتی اکسیدانی وآنتی باکتریالی عصاره متانولی 80% از ریشه، برگ و میوه ی این گیاه تهیه شده است. اعلام می دارد که عصاره برگ این گیاه دارای اثرات ضد باکتریایی در مقابل انواع باکتری های بیماری زا از جمله: اشرشیاکلی، پسودوموناس، آئروژینوزا، استافیلوکوک، اورئوس استرپتوکوکموتانس و...است (18). همچنین در مطالعاتی نشان داده شده است که حیواناتی که دچاردیابت بودند. با توجه به اینکه دیابت یک ریسک فاکتور برای سکته مغزی می باشد. بعد از درمان سی روزه با پنیرباد سطح انسولین به طور قابل ملاحظه ای افزایش یافته بود (19). پودر میوه این گیاه را می توان به طور موثر در درمان طولانی مدت و بدون هیچ گونه عوارض جانبی در بیماری دیابت نوع 2 استفاده کرد (20). ارزش دارویی گیاه پنیرباد بر روی خواص آنتی اکسیدانی ریشه ی این گیاه متمرکز شده است. در حال حاضر تحقیقات گسترده ای برای اثرات ضد التهاب، فعالیت قلبی، کولینرژیک و اثرات گیرنده های گابا در سیستم اعصاب مرکزی انجام شده است. توکوفرول a یک آنتی اکسیدان قوی محلول در چربی است. که به راحتی از غشاء سلولی به راحتی عبور می کند. و از مهمترین مهارکننده ها در برابر اثرات مخرب زنجیره های رادیکال های آزاد از پراکسیداسیون لیپیدها به حساب می آید. عصاره ریشه این گیاه حاوی قابل توجهی آنتی اکسیدان است و قدرت آن معادل یک آنتی اکسیدان قوی مثل توکوفرول a است (21). در طب پزشکی هنداین گیاه را در گروه نیرو دهنده های مغز یا جوان کننده مغز قرار می دهند. اگرچه انواع عصاره های پنیرباد به عنوان محافظت نورونی و ضد سرطان شناخته شده است اما در مطالعات آزمایشگاهی تاثیر عصاره برگ، ریشه و میوه این گیاه ناشناخته مانده است(18). باتوجه به اینکه انسداد شریان های کاروتید بار اضافی بر روی شریان ورتبروبازیلار در حلقه ویلیس اعمال می کنند و باعث تغییراتی در مخچه می شود. تغییرات استریولوژیک مخچه برای فهم بهتر این تغییرات به ما کمک می کند و با توجه به اینکه گیاه پنیرباد بومی استان سیستان و بلوچستان است و تا کنون اثر آن بر روی ایسکمی مغزی کار نشده است. بنابراین هدف از این مطالعه تغییرات استریولوژیک در ایسکمی مخچه است. |
| مشکل جاری که سیاست گزار با آن مواجه است کدام است؟ | |
| روش های موجود کدامها هستند؟ | |
| پیشنهاد اول نحوه کاربرد | |
| محل دوم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | تعداد سلول های پورکنژ در واحد حجم در گروه های تجویز پنیرباد وکنترل بایکدیگر تفاوت دارد.
حجم سلول های پورکنژ در گروه های تجویز پنیرباد وکنترل با هم تفاوت دارد. تعداد سلول های آپوپتیک در واحد حجم درگروه های تجویز پنیرباد و کنترل با هم تفاوت دارد. حجم لایه های مولکولار و دانه دارمخچه در گروه های تجویز پنیرباد و کنترل با هم متفاوت است. حجم ورمیس و نیمکره های راست و چپ در گروه تجویز پنیرباد و کنترل با یک دیگر متفاوت است. عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس باعث افزایش فعالیت آنزیم کاتالاز درمخچه موش های صحرایی می گردد . عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس باعث افزایش فعالیت آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز در مخچه موش های صحرایی می گردد. عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس باعث افزایش فعالیت آنزیم سوپراکسید دیسموتاز در مخچه موش های صحرایی می گردد . عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس باعث کاهش میزان مالون دی آلدئید در مخچه موش های صحرایی می گردد . عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس باعث کاهش تعداد سلولهای آپوپتوتیک در سلولهای پورکنژ مخچه موش های صحرایی می گردد . |
| هدف کلی طرح | بررسی اثر محافظتی و آنتی اکسیدانی عصاره ریشه ویتانیا کوآگولانس بر تغییرات هیستولوژیک ناشی از ایسکمی مغزی در مخچه رت |
| منافع و مضرات روشهای موجود کدامند؟ | |
| چرا پیام تحقیق شما حلال مشکل جاری است؟ | |
| اهداف اختصاصی | تعیین و مقایسه تعداد سلول های پورکنژ در واحد حجم مخچه در گروه تجویز پنیرباد و کنترل
تعیین و مقایسه تعداد سلول های پورکنژ تانل مثبت گروه های تجویز پنیر باد و کنترل تعیین و مقایسه حجم سلول های پورکنژ در گروه های تجویز پنیر باد و کنترل تعیین و مقایسه حجم لایه های مولکولار و دانه دار مخچه در گروههای تجویز پنیر باد و کنترل تعیین و مقایسه حجم ورمیس و نیمکره های راست و چپ مخچه در گروه های تجویز پنیر باد و کنترل تعیین اثر عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر میزان فعالیت آنزیم کاتالاز در مخچه تعیین اثر عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر میزان فعالیت آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز در مخچه موش های صحرایی تعیین اثر عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر میزان فعالیت آنزیم سوپراکسید دیسموتاز در مخچه موش های صحرایی تعیین اثر عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر میزان مالون دی آلدئید ( MDA ) مخچه موش های صحرایی |
| پیشنهاد دوم نحوه کاربرد | |
| محل سوم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | |
| پیام تحقیق شما چه منافعی از نظر هزینه، کارایی و بهره وری برای مدیر دارد؟ | |
| برای اجرای راه حل پیشنهادی شما چه موانع و حمایتهایی وجود دارند؟ | |
| تعریف واژه های تخصصی | استریولوژی: تفسیر سه بعدی دوبعدی از مقاطع بافت
ایسکمی: کاهش جریان خون و بدنبال آن کاهش اکسیژن و مواد مغذی آپوتوز: مرگ برنامه ریزی شده سلول ریپرفیوژن: بازگشت مجدد خون پس از ایسکمی |
| پیشنهاد سوم نحوه کاربرد | |
| محل چهارم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| نوع مطالعه | در این مطالعه پژوهش انجام شده تجربی می باشد |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | موش های صحرایی نر نژاد ویستار |
| پیشنهاد چهارم نحوه کاربرد | |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | در این مطالعه 70 سر(7گروه ده تایی) موش نر صحرایی نژاد wistar انتخاب و به صورت تصادفی ساده به 7 گروه تقسیم می گردد. |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | توزیع در گروه ها تصادفی ساده |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | تعیین حجم مخچه توسط روش استریولوژی و تعیین تغییرات بافتی توسط مقاطع رنگ آمیزی شده و میکروسکوپ نوری، تعیین سلول های تانل مثبت توسط کیت تانل و شمارش تعداد سلول ها |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | در این تحقیق از تعداد 70 موش صحرایی نر نژاد ویستار در محدوده وزنی 250-200 گرم و سن 3 الی 4 ماه استفاده می شود . حیوانات در شرایط استاندارد و با دوره روشنایی و تاریکی 12ساعته و دمای 3±21 نگهداری می شوند و دسترسی آزادانه به آب و غذا خواهند داشت .
گروه بندی حیوانات : حیوانات بطور تصادفی انتخاب شده و در 7گروه 10تایی زیر قرار می گیرند : گروه 1: به مدت 30 روز عصاره گیاه ویتانیا کواگولانس را به میزان mg/kg500 از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت القاء ایسکمی گلوبال ریپرفیوژن مغزی قرار می گیرند(22). گروه2 : به مدت 30 روز عصاره گیاه ویتانیا کواگولانس را به میزان 1000mg/kg از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت القاء ایسکمی گلوبال ریپرفیوژن مغزی قرار می گیرند (22). گروه3: به مدت 30 روز عصاره گیاه ویتانیا کواگولانس را به میزان 500mg/kg از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت استرس جراحی بدون مسدود کردن شریان کاروتید مشترک قرار می گیرند . گروه 4: به مدت 30 روز عصاره گیاه ویتانیا کواگولانس را به میزان 1000mg/kg از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت استرس جراحی بدون مسدود کردن شریان کاروتید مشترک قرار می گیرند . گروه 5 : به مدت 30 روز آب مقطر را از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت القاء ایسکمی گلوبال ریپرفیوژن مغزی قرار می گیرند . گروه 6 : به مدت 30 روز آب مقطر را از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت استرس جراحی بدون مسدود کردن شریان کاروتید مشترک قرار می گیرند . گروه7 : کنترل سالم. گروهی که هیچگونه مداخله ای در آن صورت نمی گیرد . عصاره گیری از گیاه ویتانیا کواگولانس: جمع آوری نمونه های ریشه گیاه پنیرباد از گلخانه مرکز پژوهشی گیاهان دارویی و زینتی دانشگاه سیستان و بلوچستان انجام می شود. نمونه ها بعد از جمع آوری با آب بدون یون شسته و در دمای 25° در محیط آزمایشگاه خشک شده و عصاره هیدروالکلی به میزان مورد نیاز تهیه می گردد تعیین خاصیت آنتی اکسیدانی عصاره : تعیین خاصیت آنتی اکسیدانی عصاره ویتانیا کواگولانس با استفاده از فعالیت مهار رادیکالها توسط روش Moon و Terato با کمی تغییرات بر پایه قدرت مهار رادیکال ثابت 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) اندازه گیری می شود . از بوتیلات هیدروکسی تولوئن(BHT) به عنوان کنترل مثبت استفاده می شود(23) . روش ایجاد ایسکمی : جهت بیهوش کردن موشهای صحرایی کلرال هیدرات با دوز 400 میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن به صورت داخل صفاقی تزریق میشود. برشی بطول 2 سانتی متر در جلو گردن حیوان داده عضلات این ناحیه کنار زده شده تا شریان کاروتید مشترک دیده شود. سپس شریان کاروتید مشترک در دو طرف توسط میکروکلمپ به مدت 30 دقیقه به طور موقت مسدود می گردد. 72 ساعت بعد نیمی از حیوانات هرگروه پس از بیهوشی کامل کشته شده و سپس سر حیوان را جدا نموده و سریعاً مغز را از داخل جمجمه بیرون می آوریم و توسط فسفات بافر سرد Phosphat-Buffered-Salin(PBS) شستشو می دهیم . اندازه گیری میزان مالون دی آلدئید (MDA) به روش اسپکتروفتومتری برای اندازه گیری میزان مالون دی آلدئید از روش Satoh استفاده میشود . واکنش مالون دی آلدئید با اسیدتیو باربیتوریک در دمای جوش، منجر به تولید رنگ صورتی می شودکه بوسیله n بوتانول استخراج میگردد و جذب آن در طول موج 530 نانومتر قرائت می گردد(24) . اندازه گیری فعالیت آنزیم کاتالاز اندازه گیری آنزیم کاتالاز بر اساس قابلیت آنزیم جهت شکستن H2O2 با استفاده از روش Aebi انجام می گردد . کاهش جذب در 240 نانومتر محاسبه می شود (25) . اندازه گیری میزان فعالیت SOD فعالیت سوپراکسید دیسموتاز (SOD)با استفاده از کیت کالریمتریکUK, kit no. SOD125). ) RANDOXو بر اساس اکسیداسیون NADPH طبق روش Misra and Fridovich انجام می گردد .تغییرات جذب در 480 نانومتر قرائت می شود(26). اندازه گیری فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز(GPx) روش بکار رفته در اندازه گیری فعالیت آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز با استفاده از کیت کالریمتریک RANDOX (UK, kit no. RS 504) بر اساس روش Paglia and Valentine انجام می گردد. فعالیت آنزیم در کاهش جذب در 340 نانومتر محاسبه و بصورت U/mg بیان می شود، در این روش GSH اکسیدشده را تبدیل به NADPHاکسیداشده می کند که در نهایت توسط آنزیم گلوتاتیون ردوکتاز کاتالیزه می شود(27). فیکساسیون به روش پرفیوژن (Perfusion) برای مطالعات بافتی و تهیه لام، فیکساسیون به روش پرفیوژن ترانس کاردیال انجام میشود. پس از بیهوشی عمیق بلافاصله با برش میانی پوست وجدار قدامی شکم، از طریق بطن چپ حدود 150-100 سی سی از محلول نرمال سالین برای خارج کردن خون از درون رگ ها در مدت زمان 10-5 دقیقه و سپس حدود 300-400 سی سی از محلول فیکساتیو پارافرمالدیید 4 درصد حل شده در بافر فسفات 1/0 مولار(4/7pH=)، به مدت 30-45 دقیقه از رگ ها عبور داده شد . پس از پایان پرفیوژن، سر حیوان جدا ، مغز از مخچه جدا طبق اطلس پاکسینوس(28) علامت گذاری و در همان فیکساتیو postfix می شود. روش انجام رنگ آمیزی نیسل (Nissl staining): به دنبال پرفیوژن ترانس کاردیال، نمونه مغز را به مدت 24-12در فیکساتیوPostfix نموده و به منظور آماده سازی بافتی نمونه ها در دستگاه پروسسور قرار داده می شوند . نهایتاً قالب گیری با پارافین انجام شده و برش گیری کرونال با ضخامت 5 میکرون انجام سپس با محلول رنگ کرزیل ویوله استات (Cresyle violet acetate) 1/0 درصد رنگ آمیزی می شوند . مطالعه میزان مرگ برنامه ریزی شده سلول با استفاده از کیت TUNEL پس از دپارافینه کردن و آب دهی برشهای بافتی ، اسلایدها طبق پروتکل شرکت سازنده کیت به ترتیب با Proteinase K ، 3% H2O2 ومخلوطی از محلولهای Label solution (450µl) و Enzym solution (50µl) انکوبه میشوند .جهت Detection نیز انکوباسیون با محلول POD و نهایتا محلولDiaminobanzidin) )DAB انجام خواهدشد و پس از Counterstain (رنگ زمینه) توسط هماتوکسیلین آب گیری و شفاف سازی ، در آخر نمونه ها مونت خواهند شد . آنالیز های مورفومتریک به منظور شمارش تعداد سلول ها بلوک هایی به ضخامت 100 میکرومتر تهیه کرده وبا روش fractionators optic شمارش دقیق سلول ها انجام می شود. |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | داده های حاصل از این مطالعه با استفاده از نرم افزار SPSS جمع آوری می گردد. جهت تجزیه و تحلیل داده ها از آنالیز واریانس یکطرفه (ANOVA) استفاده شده و جهت تأیید آن از تست های آماری (Tukey) استفاده خواهد شد . |
| ملاحظات اخلاقی | در این تحقیق همه آزمایشات مطابق آئین نامه کمیته اخلاق پژوهشی دانشگاه برای مطالعات حیوانی صورت خواهد گرفت. جراحی ها و نهایتأ کشتن حیوانات تحت شرایط بیهوشی عمیق انجام خواهد شد تا حیوان در طول آزمایش و بعد از آن کمترین درد و رنج را تحمل نماید |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | تاخیر در تامین مواد و مرگ و میر حیوانات |
| کلمات کلیدی | سکته مغزی، ویتانیاکوآگولانس، مخچه، ایسکمی، استریولوژی، وضعیت اکسیدانی- آنتی اکسیدانی |
| فهرست منابع و مراجع | 1. Campos F, Pérez-Mato M, Agulla J, Blanco M, Barral D, Almeida Á, et al. Glutamate excitoxicity is the key molecular mechanism which is influenced by body temperature during the acute phase of brain stroke. PloS one. 2012;7(8):e44191.
2. Moro CH, Gonçalves AR, Longo AL, Fonseca PG, Harger R, Gomes DB, et al. Trends of the Incidence of Ischemic Stroke Thrombolysis over Seven Years and One-Year Outcome: A Population-Based Study in Joinville, Brazil. Cerebrovascular Diseases Extra. 2013;3(1):156-66. 3. Sahan M, Sebe A, Acikalin A, Akpinar O, Koc F, Ay M, et al. Acute-phase reactants and cytokines in ischemic stroke: do they have any relationship with short-term mortality? European review for medical and pharmacological sciences. 2013;17(20):2773-7. 4. Genton E, Barnett H, Fields W, Gent M, Hoak J. XIV. Cerebral ischemia: the role of thrombosis and of antithrombotic therapy. Study group on antithrombotic therapy. Stroke. 1977;8(1):150-75. 5. Agulla J, Brea D, Campos F, Sobrino T, Argibay B, Al-Soufi W, et al. In Vivo Theranostics at the Peri-Infarct Region in Cerebral Ischemia. Theranostics. 2014;4(1):90. 6. Kim J-T, Heo S-H, Park M-S, Chang J, Choi K-H, Cho K-H. Use of Antithrombotics after Hemorrhagic Transformation in Acute Ischemic Stroke. PloS one. 2014;9(2):e89798. 7. Kraft P, Göbel K, Meuth SG, Kleinschnitz C. Glatiramer acetate does not protect from acute ischemic stroke in mice. Experimental & translational stroke medicine. 2014;6(1):4. 8. Hsieh H-L, Yang C-M. Role of Redox Signaling in Neuroinflammation and Neurodegenerative Diseases. BioMed research international. 2013;2013. 9. Scaglia F, Wong L-JC, Vladutiu GD, Hunter JV. Predominant cerebellar volume loss as a neuroradiologic feature of pediatric respiratory chain defects. American journal of neuroradiology. 2005;26(7):1675-80. 10. Nagatani K, Nawashiro H, Takeuchi S, Tomura S, Otani N, Osada H, et al. Safety of intravenous administration of hydrogen-enriched fluid in patients with acute cerebral ischemia: initial clinical studies. Medical gas research. 2013;3(1):13. 11. Biran V, Heine VM, Verney C, Sheldon R, Spadafora R, Vexler ZS, et al. Cerebellar abnormalities following hypoxia alone compared to hypoxic–ischemic forebrain injury in the developing rat brain. Neurobiology of disease. 2011;41(1):138-46. 12. De Cocker LJ, van Veluw SJ, Fowkes M, Luijten PR, Mali W, Hendrikse J. Very Small Cerebellar Infarcts: Integration of Recent Insights into a Functional Topographic Classification. Cerebrovascular Diseases. 2013;36(2):81-7. 13. Dacosta-Aguayo R, Graña M, Fernández-Andújar M, López-Cancio E, Cáceres C, Bargalló N, et al. Structural Integrity of the Contralesional Hemisphere Predicts Cognitive Impairment in Ischemic Stroke at Three Months. PloS one. 2014;9(1):e86119. 14. Kelley MH, Ortiz J, Shimizu K, Grewal H, Quillinan N, Herson PS. Alterations in Purkinje cell GABAA receptor pharmacology following oxygen and glucose deprivation and cerebral ischemia reveal novel contribution of β1‐subunit‐containing receptors. European Journal of Neuroscience. 2013;37(4):555-63. 15. Le Strange E, Saeed N, Cowan FM, Edwards AD, Rutherford MA. MR imaging quantification of cerebellar growth following hypoxic-ischemic injury to the neonatal brain. American journal of neuroradiology. 2004;25(3):463-8. 16. Martin LJ, Sieber FE, Traystman RJ. Apoptosis and necrosis occur in separate neuronal populations in hippocampus and cerebellum after ischemia and are associated with differential alterations in metabotropic glutamate receptor signaling pathways. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 2000;20(1):153-67. 17. Agashiwala RM, Louis ED, Hof PR, Perl DP. A novel approach to non-biased systematic random sampling: A stereologic estimate of Purkinje cells in the human cerebellum. Brain research. 2008;1236:73-8. 18. Alam N, Hossain M, Mottalib MA, Sulaiman SA, Gan SH, Khalil MI. Methanolic extracts of Withania somnifera leaves, fruits and roots possess antioxidant properties and antibacterial activities. BMC complementary and alternative medicine. 2012;12(1):175. 19. Shukla K, Dikshit P, Shukla R, Gambhir JK. The aqueous extract of Withania coagulans fruit partially reverses nicotinamide/streptozotocin-induced diabetes mellitus in rats. Journal of medicinal food. 2012;15(8):718-25. 20. Upadhyay B, Gupta V. A clinical study on the effect of Rishyagandha (Withania coagulans) in the management of Prameha (Type II Diabetes Mellitus). Ayu. 2011;32(4):507. 21. Misra D, Maiti B, Ghosh D. Protection of swimming-induced oxidative stress in some vital organs by the treatment of composite extract of Withania somnifera, Ocimum sanctum and Zingiber officinalis in male rat. African Journal of Traditional, Complementary and Alternative Medicines. 2009;6(4). 22. Chaudhary G, Sharma U, Jagannathan NR, Gupta YK. Evaluation of Withania somnifera in a middle cerebral artery occlusion model of stroke in rats. Clinical and experimental pharmacology and physiology. 2003;30(5‐6):399-404. 23. Moon J-H, Terao J. Antioxidant activity of caffeic acid and dihydrocaffeic acid in lard and human low-density lipoprotein. Journal of agricultural and food chemistry. 1998;46(12):5062-5. 24. Kei S. Serum lipid peroxide in cerebrovascular disorders determined by a new colorimetric method. Clinica Chimica Acta. 1978;90(1):37-43. 25. Bergmeyer H, Gawehn K. Methods of enzymatic analysis. 2nd English ed. New York: Academic. 1974;3. 26. Misra HP, Fridovich I. The role of superoxide anion in the autoxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase. Journal of Biological chemistry. 1972;247(10):3170-5. 27. Paglia DE, Valentine WN. Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidase. The Journal of laboratory and clinical medicine. 1967;70(1):158-69. 28. Paxinos, G., Watson, C., 2007. The rat brain in stereotaxic coordinates. Academic Press/Elsevier, Amsterdam. |
| معرفی پژوهش/ اهداف پژوهش (عین عبارت هدف پروپوزال را کپی نکنید. بلکه با جملاتی که برای مردم قابل فهم باشد (برای سواد حدود پنجم ابتدایی )هدف را برای شرکت کنندگان توضیح دهید.) در تمام این متن در صورتیکه شرکت کننده کودک یا فرد فاقد ظرفیت تصمیم گیری است باید مواردیکه منظور از "من"، فرد شرکت کننده بوده است به "کودک" یا "فرد تحت سرپرستی من" اصلاح شود و مواردیکه منظور از "من"، رضایت دهنده است به من به عنوان "ولی" یا "قیم قانونی" اصلاح شود. | |
| خون گیری (آیا طرح شما نیاز به خونگیری دارد یا خیر) | |
| نحوه همکاری/ مزایا ی طرح (در این بخش برای شرکت کنندگان به زبان ساده توضیح دهید که: چه مداخله ای بر روی آنها صورت میگیرد. چه اقدامات پاراکلینیکی بر روی آنها انجام میشود. چه نمونه ای و با چه حجمی از آنها میگیرید در این مدت چند نوبت مراجعه باید داشته باشند و به چه فواصلی چه اقداماتی را در پیگیری آنها انجام میدهید. (حتی میتوانید سود بالقوه ای که شرکت کنندگان میتوانند از شرکت در این پژوهش ببرند بنویسید. این سود میتواند شرح احتمال درمان یا تشخیص بهتر بیماریشان، دریافت خدمات سلامت رایگان و یا پرداخت مشوق مالی در ازای جبران همکاریشان باشد) | |
| عوارض جانبی (منظور عوارض و میزان احتمال بروز آنها در این مطالعه است) | |
| جبران عوارض احتمالی (برای آنکه شرکت کننده بتواند ارزیابی مناسبی از سود و زیان شرکت در پژوهش شما داشته باشد لازم است بتواند سود و زیان مداخلات معمول و مداخلات این پژوهش را مقایسه کند. به عنوان مثال میزان موفقیت و میزان عوارض هریک را مقایسه کند.) - او باید بداند كه اگر در حين و بعد از انجام پژوهش هم هر مشكلي اعم از جسمي و روحي به علت شرکت در اين پژوهش برایش پيش آمد درمان عوارض، و هزينههاي آن و غرامت مربوطه بر عهده مجري خواهد بود. | |
| هزینه های مربوط به انجام طرح تحقیقاتی (تمام مداخلات پژوهشی باید برای بیمار رایگان باشد و بیمار بداند شامل چه مواردی هستند. ) | |
| روش های جایگزین در صورت عدم تمایل به شرکت در مطالعه چه روش های درمانی برای بیمار ارائه خواهد شد | |
| محرمانه بودن بیمار باید بداندکه دست اندر كاران اين پژوهش، كليه اطلاعات مربوط به او را نزد خود به صورت محرمانه نگهداشته و فقط اجازه دارند نتايج كلي و گروهي اين پژوهش را بدون ذکر نام و مشخصات بیمار منتشر كنند. و كميته اخلاق در پژوهش با هدف نظارت بر رعایت حقوق وی ميتواند به اطلاعات ایشان دسترسي داشته باشد. | |
| پاسخگویی به پرسش ها در این بخش نام و اطلاعات دسترسی فردی از عوامل پژوهش را که بتواند اطلاعات صحیح و کافی در اختیار شرکت کنندگان قرار دهند و در مورد عوارض و نگرانیها راهنمایی لازم را ارائه دهند ذکر شود | |
| حق نپذیرفتن یا انصراف بیمار باید بداند که شرکت اودر اين پژوهش کاملاً داوطلبانه است و مجبور به شرکت در اين پژوهش نيست و در صورت عدم شرکت از مراقبتهاي معمول تشخيصي و درماني محروم نخواهد شد او باید بداند كه حتي پس از موافقت با شركت در پژوهش ميتواند هر وقت كه بخواهد، پس از اطلاع به مجري، از پژوهش خارج شود و خروج اواز پژوهش باعث محرومیت از دریافت خدمات درمانی معمول برای اونخواهد شد. | |
| رضایت او باید بداند که اگر اشکال يا اعتراضي نسبت به دست اندركاران يا روند پژوهش دارد مي تواند با كميته اخلاق در پژوهش دانشگاه تماس گرفته و مشکل خود را به صورت شفاهي يا كتبي مطرح نمايد. در انتهای فرم قید گردد : اينجانب موارد فوقالذکر را خواندم و فهميدم و بر اساس آن رضايت آگاهانه خود را براي شركت در اين پژوهش اعلام ميکنم. اينجانب ……………… خود را ملزم به اجراي تعهدات مربوط به مجري در مفاد فوق دانسته و متعهد ميگردم در تأمين حقوق و ايمني شركت كننده در اين پژوهش تلاش نمايم | |
| پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| 1472-6882-12-175.pdf | 1393/02/10 | 193199 | دانلود |
| cerebellum ischemia2.pdf | 1393/02/10 | 513483 | دانلود |
| 2773-2777.pdf | 1393/02/10 | 117236 | دانلود |
| 9590866a.pdf | 1393/02/10 | 2715397 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805420_0001.jpg | 1393/02/16 | 376183 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805420_0006.jpg | 1393/02/16 | 243302 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805420_0007.jpg | 1393/02/16 | 391541 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805420_0008.jpg | 1393/02/16 | 325157 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805421_0003.jpg | 1393/02/16 | 1151956 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805421_0004.jpg | 1393/02/16 | 1246907 | دانلود |
| SKMBT_C45102120819330.jpg | 1393/02/16 | 191272 | دانلود |
| FORM PROPOSAL ESLAH SHODEH.doc | 1393/02/31 | 435712 | دانلود |
| nahaee.doc | 1393/03/04 | 435712 | دانلود |
