چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 6821 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثرات نوروپروتکتیو عصاره ریشه ویتانیا کواگولانس (پنیر باد) بر سیستم آنتی اکسیدانی و سلولهای استریاتوم موش های صحرایی نر مدل ایسکمی فراگیر ریپرفیوژن |
| عنوان لاتین طرح | The nueroprotective effects of withania coagulant root extract on antioxidant system and striatum cells in global reperfusion in male rats |
| نوع طرح | |
| محل اجرای طرح | مدیریت توسعه فناوری سلامت |
| رسته مطالعاتی | تجربی- آزمایشگاهی |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| حمیدرضا محمودزاده ثاقب | استاد راهنمای اول پایان نامه دانشجویی | استاد راهنما | دکترای تخصصی | histology@ymail.com |
| زهرا حیدری | استاد راهنمای دوم پایان نامه دانشجویی | استاد راهنما | دکترای تخصصی | histology_iri@yahoo.com |
| مریم سربیشگی درمیان | مشاور | مشاور علمی | دکترای تخصصی | msarbishegi@yahoo.co.in |
| فاطمه عابدزاده | مجری | اجراء طرح | fabedzade57@gmail.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | بررسی اثرات نوروپروتکتیو عصاره ریشه ویتانیا کواگولانس (پنیر باد) بر سیستم آنتی اکسیدانی و سلولهای استریاتوم موش های صحرایی نر مدل ایسکمی فراگیر ریپرفیوژن |
| خلاصه طرح به لاتین | The nueroprotective effects of withania coagulant root extract on antioxidant system and striatum cells in global reperfusion in male rats |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | ایسکمی مغزی غالبا به وسیله ی انسداد شریان های مغزی ایجاد می شود، که اگر بر طرف نشود، در طول یک دوره ی کوتاه منجر به آسیب های ایسکمیک جبران نا پذیری خواهد شد. علیرغم پیشرفت در درمان های حاد و پروفیلاکتیک سکته ی مغزی هنوز علت معلولیت های طولانی مدت(500000 تا 700000 نفر در سال) و سومین علت مرگ با میزان(20% تا25%) در آمریکا(1) و در سراسر دنیا(2, 3) و تا سال 2020 به عنوان دومین علت غالب مرگ های در حال پیشرفت خواهد شد(2).
حمله ی ایسکمیک نتیجه ی کاهش موقت یا دائمی در جریان خون یک ناحیه می باشد. در انسان ها حملات ایسکمیک اغلب در مناطقی که توسط شریان مغزی میانی تغذیه می شود اتفاق می افتد(3). بعد از ایسکمی مغزی یا ضایعات تروماتیک سیستم عصبی مرکزی، رها شدن پاتولوژیک گلوتامات، از نورون ها و سلول های گلیال وجود دارد. در شرائط عادی گلوتامات توسط آستروسیت ها برداشت می-شود و از بالا رفتن سمیت تحریکی آن، در فضای خارج سلولی، جلوگیری می شود. رهایش کنترل نشده ی گلوتامات، منجر به تحریک رسپتورهای گلوتامات واساسا رسپتورهای NMDA(N-methyl-D-aspartate)و به هم خوردن تنظیم هموستاز کلسیم می شود. به هر حال در این شرایط بحرانی تحریکی، توانائی عملکرد محافظتی آستروسیت های فعال، مثل برداشت گلوتامات و حذف رادیکال های آزاد در نهایت کاهش و یا حتی معکوس می شود و ممکن است در عوض در ایجاد صدمه-ی نورونی شرکت کند(4). مرگ سلولی در مناطق ایسکمیک، به یک برآیند از پاسخ های پیش مرگ و پاسخ های بقا سلولی در طی ساعتها و حتی روزها مربوط می شود. نورون ها در مراحل نهائی از بین رفتن شان تصویری ترکیبی از آپوپتوز و نکروز را نشان می- دهند(5). مطالعات در سیستم سلولی اثبات کرده، که فعالیت بیش از حد Poly(ADP_Ribose) poly merase باعث مرگ سلولی از طریق مکانیسم های انتقال فاکتورهای القا آپوپتوز، از میتوکندریها به هسته می باشد(6). ایسکمی مغزی یک فعالیت وابسته به زمان را، در سلول های التهابی که شامل نوتروفیل ها، Tcellها، مونوسیت ها و ماکروفاژهاست را فعال می کند. این پاسخ های التهابی باعث از بین رفتن تمامیت سد خونی مغزی، ادم مغزی، مرگ نورونی و هموراژی می گردند (3). از بین انواع مختلف سلول های خونی سفید، نوتروفیل ها اولین سلول هائی هستند، که از مغز ایسکمیک تراوش می شوند. (30 دقیقه تا ساعات کمی پس از ایسکمی فوکال مغزی) سریع ترین قله آنها روز 1 تا 3 است و پس از آن ناپدید و یا به طور چشم گیری سریعا میزان آنها کاهش می یابد(3). ایسکمی مغزی توسط فاکتورهائی، مثل افزایش سن، افزایش فشار خون، سکته ی قبلی و ایست قلبی ایجاد می شود. و عمدتا نتیجه ی آپوپتوز یا مرگ نورونی در مناطقی از مغز که ذاتا آسیب پذیرترند و شامل منطقه یCA1 هیپوکامپ و استریاتوم می باشد، می شود(7). استریاتوم یک هسته ی بزرگ BASAL GANGLIAاست و نه تنها در کنترل حرکات نقش حیاتی دارد بلکه، در اعمال سطح بالای مغز مثل یادگیری و شناخت نیز بسیار مهم می باشد(8, 9). هسته ی دم دار (آن)، واسطه ی ارتباط لب های فرونتال، پاریتال و تمپرال با ساختار های عمقی تر آناتومیکی، توسط قوس های کورتیکو-پالیدو-نیگرا-تالامو-کورتیکال است (10). مطالعات گذشته نشان داده اند که، ضایعات هسته ی دم دار مناطق آناتومیکی هم جوار، مثل پوتامن، کپسول داخلی و ماده ی سفید را هم درگیر می کند(10). ساختار استریاتوم یک ساختار هتروژن است و نورون های استریاتال از نظر آناتومیکی به دو گروه اصلی تقسیم بندی می شوند. نورون های خاردار GABAergic و دیگری نورون های خاردار متوسط که 95% از نورون های استریاتال را تشکیل می دهند(8). نورون های خاردار متوسط در ایسکمی موقت فراگیر مغزی، مثل نورون های هیپوکامپ و سلول های پورکنژ مخچه بسیار آسیب پذیر هستند(8). در مدل های آزمایشگاهی شریان مغزی میانی و مدل های ایسکمی فوکال، حساسیت استریاتوم را که نتیجه ی تغییرات پتانسیل های غشائی و کاهش دسترسی به منابع انرژی است، را گزارش دادند(11). مطالعاتی که از کشت های اولیه استفاده کرده اند، افزایش آسیب پذیری نورون های استریاتال و آستروسیت ها به کلسیم را در مقایسه با سلول های کورتکس مغزی نشان داده اند(11). تحت شرائط مزمن نقص های فسفوریلاسیون اکسیداتیو، نورون های استریاتال، حساس تر از هیپوکامپ یا نورون های کورتیکال هستند(11). اختلال کلینیکی غالب در یک سری از بیماران با ضایعه ی عروقی هسته ی دم دار اختلالات رفتاری و شناختی بود(10). با توجه به پنجره ی درمانی کوتاه مدت این بیماران واثرات جانبی این درمان ها(12) اگرداروهای محافظتی عصبی به صورت خوراکی در دسترس باشند، مطمئن و ارزان هستند و می توانند جهت پیشگیری، در افرادی که در معرض ریسک سکته ی مغزی قرار دارند، برای مقابله با تغییرات بیوشیمیائی ایجاد شده در نتیجه ی انسداد عروقی استفاده شوند و از این طریق از گسترش آسیب های نورونی جلوگیری شود(13). مطالعات در سطح مولکولی نشان می دهد که، آلکالوئیدهای گیاهی، می توانند بر سیستم عصبی مرکزی،شامل سلول های عصبی مغز و نخاع که عملکردهای مختلف بدنی و رفتاری را کنترل می کنند، تاثیر بگذارند(14). در بین گیاهانی که ارزش داروئی دارند، گیاهان جنس ویتانیا (Withania) ازخانواده ی سولانسه Solancea) به علت توانائی های درمانی بالایشان بسیار اهمیت دارند(15).withania Somnifera که به نام های Ashwagnadha،GinsengوWinter cherry نیز شناخته می شود، خواص آنتی اکسیدانی، ضد توموری، ضد استرس، ضد التهاب، تنظیم-کننده ی سیستم ایمنی، خون ساز، ضدپیری، ضد اضطراب، ضد افسردگی و خواص جوان کنندگی دارد. همچنین این گیاه بر رسپتور های میانجی های شیمیائی در سیستم عصبی مرکزی، تاثیرات گوناگونی می-گذارد(16). آنالیز شیمیائی ASHWAGNADHA نشان می دهد که آن، اساسا از لاکتون های استرادیال(که در مجموع وایتانولید نامیده می شوند) و آلکالوئید تشکیل شده است(17). به عنوان یک آنتی اکسیدان WS و مشتقاتش سطوح سوپراکسیددیسموتاز اندوژن و کاتالاز و اسید اسکوربیک را بالا می برند وپراکسیداسیون لیپیدها را کاهش می دهند(17). افزایش در میزان این آنزیم ها بعد از درمان با وایتانولیدها فعالیت آنتی اکسیدانی بهتری را نشان می دهد و مطابق با اثر محافظتی بر بافتهای عصبی می-باشد و خواص داروئی گوناگون آن را در مغز با تاکید بر اثر آنتی اکسیدانی آن، توجیه می کند(18). نتایج پیشنهاد می کنند که ترکیبات فنلی موجود در عصاره های مختلف گیاه، با اثرات آنتی-اکسیدانی آن، ارتباط معنی داری دارد(19). چون توانائی Whitania Somnifera بر سیستم عصبی مرکزی، از طریق خواص آنتی اکسیدانی و ضد التهابی اش ثابت شده است، توانائی اش در مقابله با سکته ی مغزی اجتناب ناپذیر است(13). باتوجه به حساسیت بالای استریاتوم، چه از نظر آسیب پذیری از استرس های اکسیداتیو و چه از نظر عملکردی، ضروری است که این قسمت مورد توجه بیشتری در مطالعات مربوط به ایسکمی مغزی قرار گیرد. از این رو در مطالعه ی حاضر اثر حفاظتی گیاه Whitania Coagulans را که استفاده از آن در طب سنتی ایران ،پاکستان ،افغانستان و هند شرقی مرسوم است(20)، بر استریاتوم رت های مورد مطالعه، با بهره جستن از علم استریولوژی که در واقع تحلیل کمی بافتها در فضای 3بعدی، بااستفاده از مقاطع 2بعدی است(21)، مورد مطالعه قرار می گیرد |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | • عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس باعث افزایش فعالیت آنزیم کاتالاز در استریاتوم موش های صحرایی می گردد.
• عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس باعث افزایش فعالیت آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز در استریاتوم موشهای صحرایی می گردد. • عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس باعث افزایش فعالیت آنزیم سوپراکسیددیسموتاز در استریاتوم موشهای صحرایی می گردد. • عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس باعث کاهش میزان مالون دی آلدئید در استریاتوم موشهای صحرایی می گردد. • تعداد سلولهای تانل مثبت در واحد حجم هسته ی دمدار در گروه تجویز پنیرباد وکنترل با یکدیگر تفاوت دارد. • تعداد سلولهای تانل مثبت در واحد حجم هسته ی پوتامن در گروه تجویز پنیرباد وکنترل با یکدیگر تفاوت دارد. • حجم هسته ی دمدار در واحد حجم در گروه تجویز پنیرباد و کنترل با یکدیگر تفاوت دارد. • حجم هسته ی پوتامن در واحد حجم در گروه تجویز پنیرباد وکنترل با یکدیگر تفاوت دارد. • تعداد سلول های هسته ی دمدار در واحد حجم در گروه تجویز پنیرباد وکنترل با یکدیگر تفاوت دارد. • تعداد سلولهای هسته ی پوتامن در واحد حجم در گروه تجویز پنیرباد و کنترل با یکدیگر تفاوت دارد. |
| هدف کلی طرح | بررسی اثرات نوروپروتکتیو ویتانیا کواگولانس (پنیر باد) بر سیستم دفاع آنتی اکسیدانی و سلولهای استریاتوم رتهای نر به دنبال ایسکمی فراگیر ریپرفیوژن |
| اهداف اختصاصی | • تعیین اثر عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر میزان فعالیت آنزیم کاتالاز در استریاتوم موش های صحرائی نر
• تعیین اثر عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر میزان فعالیت آنزیم گلوتاتیون-پراکسیداز در استریاتوم موش های صحرایی نر • تعیین اثر عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر میزان فعالیت آنزیم سوپراکسید-دیسموتاز در استریاتوم موش های صحرایی نر • تعیین اثر عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر میزان مالون دی آلدئید ( MDA ) استریاتوم موش های صحرایی نر • تعیین اثر عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر تعداد سلولهای تانل مثبت هسته ی دم-دار استریاتوم در واحد حجم در موش های صحرایی نر • تعیین اثر عصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر تعداد سلولهای تانل مثبت هسته ی پوتامن استریاتوم در واحد حجم در موش های صحرایی نر • تعیین اثرعصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر حجم هسته ی دم دار استریاتوم در واحد حجم در موش های صحرایی نر • تعیین اثرعصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر حجم هسته ی پوتامن استریاتوم در واحد حجم در موش های صحرایی نر • تعیین اثرعصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر تعداد سلولهای هسته ی دم دار استریاتوم در واحد حجم در موش های صحرائی نر • تعیین اثرعصاره هیدروالکلی ویتانیا کواگولانس بر تعداد سلولهای هسته ی پوتامن استریاتوم در واحد حجم در موش های صحرایی نر |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | |
| تعریف واژه های تخصصی | بازگشت مجدد خون بعد از ایسکمی:Reperfusion ادم مغزی: تجمع مایع در فضای میان بافتی مغز پس از وقوع سکته مغزی. آپوپتوز:مرگ برنامه ریزی شده ی سلول نکروز:مرگ سلول |
| نوع مطالعه | |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | : موش های صحرایی نر نژاد ویستار |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | در این مطالعه 70سر 7) گروه ده تایی) موش صحرایی نر باوزن 200-250 گرم وسن 3الی 4ماه از بین جمعیت در دسترس در مرکز تحقیقات حیوانات آزمایشگاهی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان انتخاب می گردد و تقسیم در گروه ها بصورت تصادفی ساده خواهد بود |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | در این مطالعه 70سر 7) گروه ده تایی) موش صحرایی نر باوزن 200-250 گرم وسن 3الی 4ماه از بین جمعیت در دسترس در مرکز تحقیقات حیوانات آزمایشگاهی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان انتخاب می گردد و تقسیم در گروه ها بصورت تصادفی ساده خواهد بود . |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | سطح آنتی اکسیدانهای سوپراکسیددیسموتاز ،گلوتاتیون پراکسیداز و کاتالاز با استفاده از کیتهای مخصوص و تعیین تغییرات بافتی با استفاده از میکروسکوپ نوری(رنگ آمیزی نیسل)، سلولهای تانل مثبت توسط کیت تانل و شمارش تعداد سلولها با استفاده از روش استریولوژی و به صورت دستی انجام می شود |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | در این تحقیق از تعداد 70 موش صحرایی نر نژاد ویستار در محدوده وزنی 250-200 گرم و سن 3 الی 4 ماه استفاده می شود. حیوانات در شرایط استاندارد و با دوره روشنایی و تاریکی 12 ساعته و دمای 3±21 نگهداری می شوند و دسترسی آزاد به آب و غذا خواهند داشت.
گروه بندی حیوانات : حیوانات بطور تصادفی انتخاب شده و در 7 گروه 10 تایی زیر قرار می گیرند : گروه1: به مدت 30 روز عصاره گیاه ویتانیا کواگولانس را به میزان500mg/kg ازطریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت القا ایسکمی گلوبال ریپریفیوژن مغزی قرار می گیرند(22). گروه 2 : به مدت 30 روز عصاره گیاه ویتانیا کواگولانس را به میزان1000mg/kg از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت القاء ایسکمی گلوبال ریپرفیوژن مغزی قرار می گیرند(22). گروه 3 : به مدت 30 روز عصاره گیاه ویتانیا کواگولانس را به میزان 500mg/kg از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت استرس جراحی بدون مسدود کردن شریان کاروتید مشترک قرار می گیرند. گروه 4 : به مدت 30 روز عصاره گیاه ویتانیا کواگولانس را به میزان 1000mg/kg از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت استرس جراحی بدون مسدود کردن شریان کاروتید مشترک قرار می گیرند. گروه5 : به مدت 30 روز آب مقطر را از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت القاء ایسکمی گلوبال ریپرفیوژن مغزی قرار می گیرند. گروه6 : به مدت 30 روز آب مقطر را از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و پس از آن تحت استرس بدون مسدود کردن شریان کاروتید مشترک قرار می گیرند. گروه 7 : کنترل سالم. گروهی که هیچگونه مداخله ای در آن صورت نمی گیرد. عصاره گیری از گیاه ویتانیا کواگولانس: جمع آوری نمونه های ریشه گیاه پنیرباد از گلخانه مرکز پژوهشی گیاهان دارویی و زینتی دانشگاه سیستان و بلوچستان انجام می شود. نمونه ها بعد از جمع آوری با آب بدون یون شسته و در دمای 25° در محیط آزمایشگاه خشک شده و عصاره هیدروالکلی به میزان مورد نیاز تهیه می گردد. تعیین خاصیت آنتی اکسیدانی عصاره : تعیین خاصیت آنتی اکسیدانی عصاره ویتانیا کواگولانس با استفاده از فعالیت مهار رادیکالها توسط روش Moon و Terato با کمی تغییرات بر پایه قدرت مهار رادیکال ثابت 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) اندازه گیری می شود. از بوتیلات هیدروکسی تولوئن(BHT) به عنوان کنترل مثبت استفاده می شود(23). روش ایجاد ایسکمی : جهت بیهوش کردن موشهای صحرایی کلرال هیدرات با دوز 400 میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن به صورت داخل صفاقی تزریق میشود. برشی بطول 2 سانتی متر در جلو گردن حیوان داده عضلات این ناحیه کنار زده شده تا شریان کاروتید مشترک دیده شود. سپس شریان کاروتید مشترک در دو طرف توسط میکروکلمپ به مدت 30 دقیقه به طور موقت مسدود می گردد. 72 ساعت بعد نیمی از حیوانات هر گروه پس از بیهوشی کامل کشته شده و سپس سر حیوان را جدا نموده و سریعاً مغز را از داخل جمجمه بیرون می آوریم و توسط فسفات بافر سرد Phosphat-Buffered-Salin(PBS) شستشو می دهیم. پس از جدا نمودن استریاتوم آن را با تریس بافر سرد هموژن می نمائیم. سپس محلول بدست آمده را سانتریفیوژ کرده و محلول رویی را برداشته و میزان مالون دی آلدئید و فعالیت آنزیمهای گلوتاتیون پر -اکسیداز، سوپراکسید دیسموتاز و کاتالاز در این مایع اندازه گیری می شود. اندازه گیری میزان مالون دی آلدئید (MDA) به روش اسپکتروفتومتری برای اندازه گیری میزان مالون دی آلدئید از روش Satoh استفاده می شود. واکنش مالون دی آلدئید با اسیدتیو باربیتوریک در دمای جوش، منجر به تولید رنگ صورتی می شود که به وسیله n بوتانول استخراج میگردد و جذب آن در طول موج 530 نانومتر قرائت می گردد(24). اندازه گیری فعالیت آنزیم کاتالاز اندازه گیری آنزیم کاتالاز بر اساس قابلیت آنزیم جهت شکستن H2O2 با استفاده از روش Aebi انجام می گردد. کاهش جذب در 240 نانومتر محاسبه می شود(25). اندازه گیری میزان فعالیت SOD فعالیت سوپراکسید دیسموتاز (SOD) با استفاده از کیت کالریمتریکUK, kit no. SOD125) ) RANDOXو بر اساس اکسیداسیون NADPH طبق روش Misra and Fridovich انجام می گردد. تغییرات جذب در 480 نانومتر قرائت می شود(26). اندازه گیری فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز(GPx) روش بکار رفته در اندازه گیری فعالیت آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز با استفاده از کیت کالریمتریک RANDOX (UK, kit no. RS 504) بر اساس روش Paglia and Valentine انجام می گردد. فعالیت آنزیم در کاهش جذب در 340 نانومتر محاسبه و بصورت U/mg بیان می شود، در این روش GSH اکسیدشده را تبدیل به NADPHاکسیداشده می کند که در نهایت توسط آنزیم گلوتاتیون ردوکتاز کاتالیزه می شود(27). فیکساسیون به روش پرفیوژن (Perfusion) برای مطالعات بافتی و تهیه لام، فیکساسیون به روش پرفیوژن ترانس کاردیال انجام می شود. پس از بیهوشی عمیق بلافاصله با برش میانی پوست وجدار قدامی شکم، از طریق بطن چپ حدود 150-100 سی سی از محلول نرمال سالین برای خارج کردن خون از درون رگ ها در مدت زمان 10-5 دقیقه و سپس حدود 300-400 سی سی از محلول فیکساتیو پارافرمالدیید 4 درصد حل شده در بافر فسفات 1/0 مولار(4/7pH=)، به مدت 30-45 دقیقه از رگ ها عبور داده شد . پس از پایان پرفیوژن، سر حیوان جدا، مغز خارج شده و طبق اطلس پاکسینوس(28)استریاتوم علامت گذاری و درهمان فیکساتیو postfix می شود. روش انجام رنگ آمیزی نیسل (Nissl staining): به دنبال پرفیوژن ترانس کاردیال، نمونه مغز را به مدت 24-12در فیکساتیوPostfix نموده و به منظور انجام فیکس کردن بافتها نمونه ها در دستگاه پروسسور قرار داده می شوند. نهایتاً قالب گیری با پارافین انجام شده و برش گیری کرونال با ضخامت 5 میکرون انجام سپس با محلول رنگ کرزیل ویوله استات (Cresyle violet acetate) 1/0 درصد رنگ آمیزی می شوند. مطالعه میزان مرگ برنامه ریزی شده سلول با استفاده از کیت TUNEL پس از دپارافینه کردن و آب دهی برشهای بافتی، اسلایدها طبق پروتکل شرکت سازنده کیت به ترتیب با Proteinase K ، 3% H2O2 ومخلوطی از محلولهای Label solution (450µl) و Enzym solution (50µl) انکوبه می شوند. جهت Detection نیز انکوباسیون با محلول PODو نهایتا محلولDiaminobanzidin) )DAB انجام خواهدشد و پس از Counterstain (رنگ زمینه) توسط هماتوکسیلین آب گیری و شفاف سازی ، در آخر نمونه ها مونت خواهند شد. کنترل منفی: به منظور کنترل منفی بر اساس دستورالعمل کیت تعدادی از برشهای تهیه شده تنها با حلال آنزیم بدون وجود آنزیم پوشانده می شوند. بقیه مراحل مانند پروتکل فوق انجام خواهد شد. آنالیزهای مورفومتریک: به منظور شمارش تعداد سلولها در سمت راست استریاتوم از هر بلوک پارافینی 5 مقطع 5 میکرونی با فاصله 30 میکرون تهیه و پس از رنگ آمیزی، عکس گرفته شده و با بزرگنمایی ×400 نورونهای دارای هسته و حدود سلولی مشخص شمارش می گردد. |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | داده های حاصل از این مطالعه با استفاده از نرم افزار SPSS جمع آوری می گردد. جهت تجزیه و تحلیل داده ها از آنالیز واریانس یکطرفه (ANOVA) استفاده شده و از تست تعقیبی (Tukey) استفاده خواهد شد. |
| ملاحظات اخلاقی | کلیه شرایط اخلاقی لازم برای کار با حیوانات آزمایشگاهی مطابق دستورالعمل مصوب رعایت خواهد شد. |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | تاخیر در تامین مواد و مرگ و میر حیوانات |
| کلمات کلیدی | Whitania coagulans,Neo striatum, global Cerebral Ischemia |
| فهرست منابع و مراجع | 1. Wang H, Li W, Zhu S, Li J, D'Amore J, Ward MF, et al. Peripheral administration of fetuin-A attenuates early cerebral ischemic injury in rats. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 2010;30(3):493-504.
2. Chandrashekhar V, Ganapaty S, Ramkishan A, Narsu ML. Neuroprotective activity of gossypin from Hibiscus vitifolius against global cerebral ischemia model in rats. Indian journal of pharmacology. 2013;45(6):575. 3. Jin R, Yang G, Li G. Inflammatory mechanisms in ischemic stroke: role of inflammatory cells. Journal of leukocyte biology. 2010;87(5):779-89. 4. Kataria H, Wadhwa R, Kaul SC, Kaur G. Water extract from the leaves of Withania somnifera protect RA differentiated C6 and IMR-32 cells against glutamate-induced excitotoxicity. PloS one. 2012;7(5):e37080. 5. Chen S-D, Yang D-I, Lin T-K, Shaw F-Z, Liou C-W, Chuang Y-C. Roles of oxidative stress, apoptosis, PGC-1α and mitochondrial biogenesis in cerebral ischemia. International journal of molecular sciences. 2011;12(10):7199-215. 6. Li X, Klaus JA, Zhang J, Xu Z, Kibler KK, Andrabi SA, et al. Contributions of poly (ADP‐ribose) polymerase‐1 and‐2 to nuclear translocation of apoptosis‐inducing factor and injury from focal cerebral ischemia. Journal of neurochemistry. 2010;113(4):1012-22. 7. Li P-F, Zhan H-Q, Li S-Y, Liu R-L, Yan F-L, Cui TZ, et al. Lactuside B decreases aquaporin-4 and caspase-3 mRNA expression in the hippocampus and striatum following cerebral ischaemia-reperfusion injury in rats. Experimental and Therapeutic Medicine. 2014;7(3):675-80. 8. Yoshioka H, Niizuma K, Katsu M, Okami N, Sakata H, Kim GS, et al. NADPH oxidase mediates striatal neuronal injury after transient global cerebral ischemia. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 2011;31(3):868-80. 9. Lovinger DM. Neurotransmitter roles in synaptic modulation, plasticity and learning in the dorsal striatum. Neuropharmacology. 2010;58(7):951-61. 10. Kumral E, Evyapan D, Balkir K. Acute caudate vascular lesions. Stroke. 1999;30(1):100-8. 11. Pickrell AM, Fukui H, Wang X, Pinto M, Moraes CT. The striatum is highly susceptible to mitochondrial oxidative phosphorylation dysfunctions. The Journal of Neuroscience. 2011;31(27):9895-904. 12. Group Nr-PSS. Tissue plasminogen activator for acute ischemic stroke. N Engl J Med. 1995;333:1581-7. 13. Gupta Y, Briyal S, Gulati A. Therapeutic potential of herbal drugs in cerebral ischemia. 2010. 14. Kumar GP, Khanum F. Neuroprotective potential of phytochemicals. Pharmacognosy reviews. 2012;6(12):81. 15. Verma SK, Kumar A. Therapeutic uses of Withania somnifera (Ashwagandha) with a note on withanolides and its pharmacological actions. Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research. 2011;4(1):01-4. 16. Sharma V, Sharma S, Pracheta PR. Withania somnifera: A rejuvenating ayurvedic medicinal herb for the treatment of various human ailments. Int J PharmTech Res. 2011;3:187-92. 17. Choudhary S, Kumar P, Malik J. Plants and phytochemicals for Huntington's disease. Pharmacognosy reviews. 2013;7(14):81. 18. Mirjalili MH, Moyano E, Bonfill M, Cusido RM, Palazón J. Steroidal lactones from Withania somnifera, an ancient plant for novel medicine. Molecules. 2009;14(7):2373-93. 19. Shahriar M, Hossain MI, Sharmin FA, Akhter S, Haque MA, Bhuiyan MA. InVitro Antioxidant and Free Radical Scavenging Activity of Withania Somnifera Root. 20. Trigunayat A, Raghavendra M, Singh R, Bhattacharya A, Acharya S. Neuroprotective Effect of Withania somnifera (WS) in Cerebral Ischemiareperfusion and Long-term Hypoperfusion Induced Alterations in Rats. Journal of natural remedies. 2007;7(2):234-46. 21. Jain SK. A stereological approach to measuring striatal cellular changes in transgenic Huntington's disease rats. 2010. 22. Chaudhary G, Sharma U, Jagannathan NR, Gupta YK. Evaluation of Withania somnifera in a middle cerebral artery occlusion model of stroke in rats. Clinical and experimental pharmacology and physiology. 2003;30(5‐6):399-404. 23. Moon J-H, Terao J. Antioxidant activity of caffeic acid and dihydrocaffeic acid in lard and human low-density lipoprotein. Journal of agricultural and food chemistry. 1998;46(12):5062-5. 24. Kei S. Serum lipid peroxide in cerebrovascular disorders determined by a new colorimetric method. Clinica Chimica Acta. 1978;90(1):37-43. 25. Schmidt E, Bergmeyer H. Methods of enzymatic analysis. Methods of Enzymatic Analysis. 1974. 26. Misra HP, Fridovich I. The role of superoxide anion in the autoxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase. Journal of Biological chemistry. 1972;247(10):3170-5. 27. Paglia DE, Valentine WN. Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidase. The Journal of laboratory and clinical medicine. 1967;70(1):158-69. 28. Paxinos G, Watson C. The rat brain in stereotaxic coordinates: hard cover edition: Academic press; 2006. |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| 408.pdf | 1393/02/10 | 240618 | دانلود |
| molecules-14-02373.pdf | 1393/02/10 | 243893 | دانلود |
| stratum stereology.pdf | 1393/02/10 | 2116330 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805420_0002.jpg | 1393/02/16 | 309538 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805420_0003.jpg | 1393/02/16 | 253913 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805420_0004.jpg | 1393/02/16 | 311417 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805420_0005.jpg | 1393/02/16 | 392616 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805421_0001.jpg | 1393/02/16 | 350697 | دانلود |
| SKMBT_C45102120805421_0002.jpg | 1393/02/16 | 402617 | دانلود |
| porposal eslah shodeh.doc | 1393/02/31 | 460288 | دانلود |
| nahaee.doc | 1393/03/04 | 463360 | دانلود |
