بررسی خواص ضد میکروبی عصاره اتانولی گلسنگ Ramalina hyrcana Sipman برروی سویه های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین و اشرشیاکلی مقاوم به آنتی بیوتیکهای مختلف

Antibacterial activity Ethanol extract of Ramalina hyrcana sipman against methicillin-resistance Staphylococcus aureus and antibiotic resistance E.coli


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان:

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 6880
عنوان فارسی طرح بررسی خواص ضد میکروبی عصاره اتانولی گلسنگ Ramalina hyrcana Sipman برروی سویه های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین و اشرشیاکلی مقاوم به آنتی بیوتیکهای مختلف
عنوان لاتین طرح Antibacterial activity Ethanol extract of Ramalina hyrcana sipman against methicillin-resistance Staphylococcus aureus and antibiotic resistance E.coli
نوع طرح
محل اجرای طرح مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی و گرمسیری
رسته مطالعاتی توصیفی- تحلیلی
دانشکده/مرکز دانشکده پزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز 180

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
محمد بکائیانمجری اول دکترای تخصصی bokaeian.m@gmail.com
سعیده سعیدیهمکارهمکاری در اجرای طرح s.saeedi12@yahoo.com
ناهید سپهری رادهمکارهمکاری در اجرای طرحکارشناسی ارشدnahid.sepehri@gmail.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی خواص ضد میکروبی عصاره اتانولی گلسنگ Ramalina hyrcana Sipman برروی سویه های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین و اشرشیاکلی مقاوم به آنتی بیوتیکهای مختلف
خلاصه طرح به لاتینAntibacterial activity Ethanol extract of Ramalina hyrcana sipman against methicillin-resistance Staphylococcus aureus and antibiotic resistance E.coli
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشگلسنگها در مناطق مختلف جغرافیایی متابولیتهای ثانویه متفاوتی تولید می کنند. این متابولیت ها که اسیدهای گلسنگی نامیده می شوند که به طور معمول بیش از ترکیبات شیمیایی سایر موجودات زنده کاربرد دارند. این تولیدات برون سلولی نامحلول در آب که گاهی تا 30 درصد وزن خشک ریسه را تشکیل می دهند که برروی دیواره سلولی هیف ای قارچی متبلور شده و سپس در سطح ریسه و یا در بافتهای ویژه ذخیره می گردند(1،2). به علاوه گلسنگها از دوران باستان به عنوان داروهای طبیعی استفاده می شدند. این ارگانیسم ها و برخی از ارگانیسم های دریایی دیگر از منابع مهم ترکیبات بیولوژیکی فعال هستند(3). گلسنگها مناطق مختلف می توانند متابولیتهای ثانویه با خواص دارویی مختلفی داشته باشند. با توجه به مصرف گلسنگها در طب سنتی در نواحی متعددی از دنیا، شناسایی گلسنگهای بومی و بررسی اثرات ضدمیکروبی آنها اهمیت خاصی دارد(4).
گلسنگ ها مجموعه متنوعی از متابولیت های ثانویه دارای وزن مولکولی کم را تولید می کنند(5) ،که تنها به وسیله شریک قارچی تولید می شوند(6). اثرات زیستی و دارویی برخی از ترکیبات ثانویه گلسنگ ها به اثبات رسیده است(5). مسیر های بیوسنتزی مختلفی در گلسنگ ها برای تولید متابولیت های ثانویه ی پیچیده، تکامل یافته اند. به نظر می رسد که مسیر بیوسنتزی پلی کتید عاملی برای بیشتر ترکیبات گلسنگی می-باشد(7،8)، در حالی که پولوینیک اسید ها مشتقات مسیر بیوسنتزی شیکمات هستند و دی و تری ترپنوئید ها فراوان یافت شده در گلسنگ ها از طریق مسیر موالونات تشکیل می-شوند(8،9). از شروع قرن 21 میلادی با توجه به اثرات جانبی آنتی بیوتیکهای تجارتی و مقاومت های باکتریایی در برابر آنها، توجه به طب سنتی و استفاده از گیاهان دارویی که یکی از منابع با ارزش در پزشکی به شمار می آیند، افزایش یافت. از طرفی در پی گسترش بیماری های عفونی، شناسایی تعداد گیاهان دارویی و خالص سازی ترکیبات موثر آنها بر درمان بیماری ها می تواند راههای درمانی جدیدی علیه بیماری های عفونی ارائه دهد(10،11). استافیلوکوکوس اورئوس یکی از باکتری های بیماری زایی است که تولید کاتالاز می کند. این باکتری نقش مهمی در بروز مسمومیت های غذایی، عفونتهای چرکی، سیستمیک و بیمارستانی دارد(12). اشرشیاکلی باسیلی گرم منفی و یکی از مهمترین باکتری های خانواده آنتروباکتریاسه و عامل عفونت های بسیاری مانند: سپسیس یا انتشار عمومی عفونت از راه خون، گاستروانتریت، مننژیت نوزادان، عفونت کیسه صفرا و مجاری صفراوی، عفونت زخم، پنومونی، پریتونیت و به خصوص عفونت های ادراری می باشد(13،14). هدف از این مطالعه بررسی خواص ضدمیکروبی عصاره اتانولی گلسنگRamalina hyrcana Sipmanبرروی استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین و اشرشیاکلی مقاوم به آنتی بیوتیکهای مختلف است. Gulluce و همکاران اثر ضد میکروبی عصاره متانولی را ثابت نمودند(15). Rowe و همکاران گزارش نمودند که گلسنگ های بومی ترکیه از جمله Pseudovernia Furfuracea، Evernia prunastri و Alectoria capillaries برروی باکتری های گرم مثبت موثر می باشند، البته برخی از عصاره های گلسنگ از جمله Roccella belangeriana بازدارنده رشد باکتری های گرم مثبت و منفی می باشد(16). Burkholder و همکاران برروی 100 گونه از گلسنگ های امریکا نشان داد که 52 درصد از گلسنگها دارای اثر بازدارندگی برروی باکتری های گرم مثبت هستند، که با نتایج حاصل از مطالعه حاضر همخوانی دارند(17). Vartia گزارش کرد که 149- 75 از گونه ای گلسنگ جنس Finnish بازدارنده رشد باکتری های گرم مثبت و منفی هستند(18). عصاره
verniastrum cirrhatum (Fr.) Hale ex Sipman E این گونه ی فعالیت آنتی باکتریال علیه باکتری های گرم مثبت و گرم منفی و فعالیت ضد قارچی علیه Aspergillus nigra و Aspergillus fumigates نشان داده است. تجزیه و تحلیل فیتو شیمیایی عصاره این گونه گلسنگی، وجود آلکالوئید ها، ساپونین ها، تانن ها و ترپنوئید ها را مشخص کرده است(19). در طی تحقیقات دیگری، اثرات مهاری گلسنگ ها علیه بسیاری از باکتری ها از جمله باسیلوس، سودوموناس، اشریشاکلی، استراپتوکوکوس، استافیلوکوکوس، انتروکوکوس و مایکوباکتریوم که در بالا در مورد آن توضیح داده شد، نشان داده شده است(20).
در مطالعه نخعی مقدم نتایج نشان داد که عصاره های گلسنگ های Rhizoplaca chrysoleuea، Rhizoplaca melanophthalma و L. muralis علیه باکتری های گرم مثبت مورد آزمایش موثر بودند، اما در غلظت 2 میلی گرم در دیسک علیه باکتری های گرم منفی موثر نبوده، حداقل غلظت مهار کنندگی از رشد عصاره متانولی گلسنگ L. muralis که بیشترین اثر را علیه باسیلوس سرئوس 100 میکروگرم بر میلی لیتر، باسیلوس سابتی لیس 200 میکروگرم بر میلی لیتر و استافیلوکوکوس اورئوس 750 میکروگرم بر میلی لیتر بوده است (21). مهرابیان و همکاران اثر چند گلسنگ شمال تهران را علیه باکتری های آلوده کننده کشتهای گیاهی گزارش گردید که گلسنگ های Lepraria membra naceae و xanthoria elegans بر باکتری های مورد آزمایش اثری نداشت(22). در مطالعه شاپوری و همکاران نتایج نشان داد که MIC عصاره استونی گلسنگ Xhantoria elegance SP برای بروسلا آبورتوس و بروسلا ملی تنسیس 5/217 میلی گرم بر میلی لیتر و عصاره اتانولی به ترتیب 47 و 94 میلی گرم بر میلی لیتر است(23).
سوالات و / یا فرضیات پژوهشعصاره اتانولی گلسنگ Ramalina hyrcana Sipman برروی استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به آنتی بیوتیک متی سیلین موثر است.

عصاره اتانولی گلسنگ Ramalina hyrcana Sipman برروی اشرشیاکلی مقاوم به آنتی بیوتیک های مختلف موثر است.
هدف کلی طرحبررسی خواص ضدمیکروبی عصاره اتانولی گلسنگRamalina hyrcana Sipmanبرروی استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین و اشرشیاکلی مقاوم به آنتی بیوتیکهای
اهداف اختصاصی1- تعیین توزیع فراوانی و حساسیت باکتری های اشرشیا کلی و استافیلوکوکوس اورئوس به آنتی بیوتیک های متی سیلین اریترومایسین، تتراسیکلین، سفکسیم، نالیدیکسیک اسید، تتراسیکلین، پنی سیلین ، تری متو پریم
2- تعیین توزیع فراوانی حساسیت باکتری های استافیلوکوکوس اورئوس به عصاره گیاه اتانولی گلسنگRamalina hyrcana Sipman
3- تعیین توزیع فراوانی حساسیت باکتری های اشرشیا کلی به عصاره گیاه اتانولی گلسنگRamalina hyrcana Sipman
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرحنتایج این بررسی می تواند مورد استفاده دانش پژوهان و محققین مرتبط با این مبحث قرار گیرد.
تعریف واژه های تخصصیگلسنگ:گلسنگ ترکیبی از یک قارچ و یک ارگانیسم نورگرااست که می‌تواند یک جلبک (یوکاریوت) و یا یک سیانوباکتری (پروکاریوت) باشد. عضو نورگرا، تولید کننده اصلی است در حالی که قارچ تکیه گاه و سرپناهی برای این عضو فراهم می‌کند.

استافیلوکوکوس اورئوس: کوکسی گرم مثبت و بی‌هوازی اختیاری است که مهمترین گونه در جنس استافیلوکوک از نظر پزشکی محسوب می‌شود.

اشیریشیاکلی: باسیل گرم منفی از خانواده انتروباکتریاسه‌است که بطور شایع در روده جانوران خونگرم وجود دارد. ین باکتری از طریق مسیر مدفوعی-دهانی از یک فرد به فرد دیگر منتقل می‌شود.



نوع مطالعهتوصیفی - تحلیلی
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)ایزوله های بالینی استافیلوکوکوس اورئوس و اشریشیاکلی مقاوم به آنتی بیوتیک جدا شده از نمونه های بالینی بیماران مراجعه کننده به بیمارستان بو علی ، علی بن ابی طالب و نبی اکرم (ع) شهر زاهدان
حجم نمونه و روش محاسبه آنحجم نمونه بر اساس مطالعات مشابه و در مورد هر گونه باکتریایی، 30 عدد در نظر گرفته می شود.

روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)روش نمونه گیری آسان و تارسیدن به تعداد نمونه مورد نظر ادامه می یابد.
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)استفاده از نمونه های بیماران مبتلا به عفونت ادراری مثبت مراجعه کننده به بیمارستان بو علی، نبی اکرم و علی بن ابیطالب (ع) شهر زاهدان که تمامی نمونه ها به آزمایشگاه فرستاده شده و در آنجا بررسی خواهند شد.
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)
تهیه نمونه:
گلسنگها از پارک ملی گلستان جمع آوری شده اند، پس از جمع آوری گیاه، برگ آن در دمای اتاق خشک گردیده و جهت تهیه عصاره با آسیاب خرد می شوند.
تهیه عصاره:
برای تهیه عصاره 20 گرم از پودر گیاه آسیاب شده در 60 میلی لیتر از اتانول 95% قرار داده می شود و به مدت 24 ساعت برروی شیکر قرار می گیرد، بعد از24 ساعت عصاره به وسیله کاغذ واتمن صاف می شود و سپس با استفاده از روتاری( دستگاه خلاء از مرکز) عصاره گیاه تغلیظ می شود، سپس عصاره گیاه خشک شده و وزن می شود. 10 گرم عصاره خشک شده در 2 سی سی DMSO حل می شود و سپس در 4 درجه سانتی گراد در شیشه های استریل نگه داری می شود(24).
تهیه باکتری:
تمام نمونه های بالینی که از بخش های مختلف 3 بیمارستان نبی اکرم، علی بن ابی طالب و بوعلی جمع آوری می شوند، روی محیط های کشت میکروب شناسی شامل بلاد آگار، مک کانکی آگار، EMB آگار و شکلات آگار کشت داده می شوند و با تست های بیوشیمیایی مربوطه(شامل تست کاتالاز، اوره آز و سیمون سیترات برای اشرشیاکلی، کاتالاز و کوآگولاز برای استافیلوکوکوس آرئوس تعیین هویت میشوند.
تعیین حساسیت باکتری به آنتی بیوتیک های مرسوم:
حساسیت سویه های باکتری اشرشیاکلی نسبت به آنتی بیوتیکهای اریترومایسین، تتراسیکلین، سفکسیم، نالیدیکسیک اسید، استافیلوکوکوس آرئوس نسبت به آنتی بیوتیکهای تتراسیکلین، پنی سیلین ، تری متو پریم که از شرکت پادتن طب ایران تهیه شده بودند با استفاده از روش استاندارد دیسک دیفیوژِن کربی- بائر مورد ارزیابی قرار می گیرد. بدین منظور، در ابتدا از تمام سویه های باکتری، غلظت 5/0 مک فارلند (cfu/ml 108×1) در محیط مایع آبگوشتی مولر هینتون تهیه می کنیم.سپس یک سوآب پنبه ای را در داخل شیرابه میکروبی که به غلظت نیم مک فارلند است وارد نموده و مایع اضافی را از سوآب بوسیله چرخاندن آن با فشار به دیواره داخلی لوله می گیریم و سپس سوآب مرطوب را در سطح محیط مولر هینتون آگار بصورت خطوط رفت و برگشت کشت می دهیم و محیط را تقریبا با زاویه 60 درجه چرخانده و دوبار دیگر عمل کشت را تکرارمی نماییم. پس از کشت، پلیت ها را بمدت 5-3 دقیقه در دمای اتاق نگهداشتیم تا مایع اضافی جذب شود. دیسک های آنتی بیوتیک را که قبلا از یخچال بیرون آورده ایم و دمای آن ها به حرارت اتاق رسیده ، توسط پنسی که در الکل قرار گرفته و با شعله استریل و سپس سرد شده است، در سطح پلیت محتوی مولر هینتون آگار که قبلا باکتری ها کشت شده اند ، قرار می دهیم و با پنس کمی دیسک ها را روی محیط فشار می دهیم تا تماس کامل شود. دیسک ها را به فاصله 15 میلی متر از لبه پلیت و 24 میلی متر از مرکز دیسک قرار می دهیم. سپس پلیت ها را در دمای 35 درجه سانتی گراد بمدت 24 ساعت در انکوباتور قرار می دهیم بعد از این مدت منطقه عدم رشد در اطراف دیسک های آنتی بیوتیک را با استفاده از خط کش میلی متری اندازه گیری می کنیم و قطر منطقه عدم رشد را با جدول استاندارد شدکت پادتن طب تفسیر نمودیم.
تعیین حداقل غلظت مهار کننده عصاره:
برای تعیین حداقل غلظت مهار کننده(MIC) عصاره از روش براث دایلوشن استفاده می شود که محیط کشت مورد استفاده در آن مولر هینتون براث می باشد. به طور خلاصه رقت سازی در چاهک در میکروپلیت های 96 خانه ای با غلظت های مختلف انجام می شود، به طوری که به هر چاهک µl 10از اولین غلظت عصاره اضافه می شود و بعد µl10 مولر هینتون براث اضافه می شود، در نهایت µl 10 از سوسپانسیون باکتری با غلظت نیم مک فارلند به چاهک ها اضافه می شود و بعد میکروپلیت ها در دمای 37 درجه سانتی گراد برای 18 تا 24 ساعت قرار داده می شوند. تغییر رنگ بعد از این زمان قابل مشاهده است و اولین غلظتی که تغییر رنگ در آن مشاهده می شود به عنوان MIC( حداقل غلظت مهار کننده) در نظر گرفته می شود.
برای تعیین MIC نانو ذرات تولید شده در عصاره گیاه از محلول تترازولیوم کلراید استفاده می شود به این ترتیب که مقدار 50 میکرولیتر در تمام چاهکهای پلیت ریخته می شود و مجددا به مدت 3 ساعت در گرمخانه انکوبه می شود. یک غلظت بالاتر از آخرین غلظتی که رنگ قرمز تیترازولیوم را به خود گرفته به عنوان MIC نانو ذرات تولیدی در عصاره گیاه برای میکروب در نظر گرفته می شود(25).
معرف رنگی تیترازولیوم کلراید یک معرف رنگی رشد است که برای شمارش کلنی های میکروبی در محیط کشت جامد استفاده زیادی می شود این معرف در حالت اکسید بی رنگ است ولی وقتی توسط میکرواورگانیسم ها احیاء شود به علت تشکیل فورمازان قرمز رنگ می شود.
روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)در پایان مطالعه اطلاعات حاصل از بررسی های آزمایشگاهی، داده ها توسط روش های آماری یعنی میانگین، فراوانی، انحراف معیار با استفاده از جداول و نمودار ها توسط نرم افزار آماری SPSS ver. 18 توصیف می گردد.

ملاحظات اخلاقی ندارد
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهامحدودیت اجرایی وجود ندارد
کلمات کلیدیآنتی باکتریال، عصاره گلسنگ، مقاومت آنتی بیوتیکی
Antibacterial, lichen extract, Antibiotic resistance
فهرست منابع و مراجع1. Huneck S, Schreiber K, Steglich W. Flechteninhaltsstoffe-XCVIII. Struktur des Aspicilins. Tetrahedron 1973; 29 (22): 3687-93.
2. Kirmizigul S, Koz O, Anil H, Icli S. Isolation and structure elucidation of novel natural products from Turkish Lichen. Turk. J. Chem 2003; 27 (4) : 493-500.
3. Celiktas OY, Hames Kocabas EE, Bedir E, Vardar Sukan F, Ozek T, Baser KHC. Antimicrobial activities of methanol extracts and essential oils of Rosmarinus officinalis, depending on location and seasonal variations. Food. Chem 2007; 100 (11) : 553-9.
4. Molnara K, Farkasb E. Current results on biological activities of lichen secondary metabolites. Nat. Forsch. J 2010; 65 (6): 157-73.
5.Candan M, Yilmaz M, Tay T, Kivanc M &Turk H. Antimicrobial activity of extracts of the lichen Xanthoparmelia pokornyi and its gyrophoric and stenosporic acid constituents. Zeitschrift fur Naturforschung C 2006; 61(5/6): 319.
6. Shukla V, Upreti D & Bajpai R. Lichens to Biomonitor the Environment. Springer. 2013.
Seigler DS. Plant secondary metabolism. Springer 1998..7
8. Devaraja G. Lichens: a novel and potential source as antimicrobials for human use. Journal of Phytology 2012; 4(1)
Watson R & Preedy V. Botanical medicine in clinical practice. CABI. 2009..9
10. Alizadeh H, Shapouri R, Shokri R, Dolatyari L. Antimicrobial effects of
Quince (Cydonia oblonga) fruit and seed's extracts on some Dermatoinfectious bacteria. The Quarterly Journal of Biological Sciences 2011; 4(1): 87-92. [Persian]
11. Palambo A, Semple S J. Antibacterial activity of traditional medicinal plants. J. Ethnopharmacol, 2001; 77:151-157
11. Kloos WE. Staphylococcus. In: Topley & Wilson's Microbiology & Microbial
infections.Collier L., Balows A., Sussman M., 9th ed;Vol 2. Arnold Co; USA. 1998:577- 617
12. Alizadeh Taheri P, Navabi B, Shariat M. Neonatal urinary tract infection: clinical response to empirical therapy versus in vitro susceptibility at Bahrami Children's Hospital- Neonatal Ward: 2001-2010. Acta Med Iran 2012; 50(5): 348-52.
9. Khalesi N, Sharaky T, Haghighe M. Prevalence of urinar tract infection in neonates with
prolonged jaundice referred to Aliasghar Hospital in Zahedan (2005). J Qazvin Univ Med Sci. 2007; 11(3): 14-8.
13. Gulluce M, Aslan A, Sokmen M, Sahin F, Adiguzel A, Agar G, Sokmen
A. Screening the antioxidant and antimicrobial properties of the lichens Parmelia saxatilis, Platismatia glauca, Ramalina pollinaria, Ramalina polymorpha and Umbilicaria nylanderiana. Phytomedicine 2006; 13: 515–521.
14. Rowe JG, Saenz MT. Contribution aa’l e’ tudedel’ activitantibactérienne de
queques lichens du suddel’Espagne. Pharmaceutiquefrancaise 1989; 47: 89-
94.
15. Burkholder PR, Evans AW, McVeigh I, Thornton HK. Antibiotic activity of
lichens proceedings on national academic science, USA. 1944; 30(9): 250-255.
16. Vartia KO. Antibiotic effects of lichens and lichen substances.
Diss.Helsinki.Ann. Suppl., 1950 b.30:76-78.
17. Devaraja G. Lichens: a novel and potential source as antimicrobials for human use. Journal of Phytology 2012; 4(1)
18. Cianciotto N P. Legionella: state of the art 30 years after its recognition. Amer Society for Microbiology.2006..
19. Brown FJ, Edward D, Hawkey P, Morrison D, Ridgway G, Towner K. Guideline for the laboratory diagnosis and susceptibility testing of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus. J Antimicrob Chemother 2005; 56:1000-1018.
20. Baron E. J. and Finegold S. M. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology 1990; 171-178.
21- نخعی مقدم م، ذکایی م. شناسایی و بررسی فعالیت ضد باکتریایی پنج گلسنگ بومی جمع آوری شده از حومه شهر مشهدinvitro. فصلنامه علوم زیستی دانشگاه آزاد اسلامی واحد زنجان، 1388، شماره پیاپی 7، جلد 2، شماره 4، 27-33.
22.Mehrabian S, Mirzaei M. Antibacterial effect of five Lichens from north of Tehran on some species of bacteria that infects plant cultures. Iran Biological Journal 1996; 1, 59-72.
(Persian)
23. شاپوری ر، نصیری سمنانی ش، علیزاده ح. اثر ضد میکروبی عصاره گلسنگ (Xhantoria elegance SP) بر بروسلا آبورتوس و بروسلا ملی تنسیس در شرایط آزمایشگاهی و مدل حیوانی. دانشگاه علوم پزشکی زابل. سال پنجم. شماره 3. 1392.
24. Yu JQ, Lei JC, Yu H, Cai X, Zou GL. Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oil of Scutellaria barbata. Phytochemistry 2004; 65: 881–884.
25. Eloff JN. A sensitive and quick micro plate method to determine the minimal
inhibitory concentration of plant extract for bacteria. Planta Med 1998; 64, 711-713.




پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
sorat jalase 001.jpg1393/06/30486730دانلود
rezayatname agahaneh.doc1393/07/2887040دانلود
emza hamkar tarh.jpg1393/07/2837727دانلود
proposal eslah shode.docx1393/07/29115818دانلود