بررسی اثر سیتوتوکسیک مواد مختلف اندودنتیک بر بقای سلولهای فیبروبلاست لثه انسانی

Evaluation of cytotoxic effects of various endodontic material on the survival of human gingival fibroblasts


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان: اسحق علی صابری

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 7058
عنوان فارسی طرح بررسی اثر سیتوتوکسیک مواد مختلف اندودنتیک بر بقای سلولهای فیبروبلاست لثه انسانی
عنوان لاتین طرح Evaluation of cytotoxic effects of various endodontic material on the survival of human gingival fibroblasts
نوع طرح
محل اجرای طرح دانشکده دندانپزشکی
رسته مطالعاتی بنیادی- کاربردی
دانشکده/مرکز دانشکده دندانپزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز 730

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
اسحق علی صابریمجریاستاد راهنمادکترای تخصصی saberiendo@zaums.ac.ir
سیدفاروق قطبی راد دانشجو ghotbifaroogh@yahoo.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی اثر سیتوتوکسیک مواد مختلف اندودنتیک بر بقای سلولهای فیبروبلاست لثه انسانی
خلاصه طرح به لاتینEvaluation of cytotoxic effects of various endodontic material on the survival of human gingival fibroblasts
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشامروزه دندانپزشکی نوین شاهد حضور مواد متنوع و جدید می باشد و رشته اندودنتیکس نیز از این امر مستثنا نمی باشد.علاوه بر کاربرد آسان این مواد و خواص فیزیکی و شیمیایی مناسب باید زیست سازگاری مناسب و حاقل سیتوتوکسیتی بر سلول های انسانی داشته باشد.
مطالات مختلف به بررسی سیتوتوکسیته و زیست سازگاری این مواد با یکدیگر و مواد کانونشنال پرداخته اند۵،۴،۳،۲،۱.
Mineral trioxide aggregate یا (MTA) در سال 1993 به منظور غلبه بر کاستی های سایر مواد پر کننده معرفی شد.patent این محصول در سال 1995 ثبت گشت ۶.
MTA یک پودر حاوی ذرات ریز هیدروفیلیک می باشد که در حضور رطوبت set می گردد.setting time این ماده حدود 4 ساعت می باشد و سه ساعت بعد از مخلوط کردن PH آن به 12.5 می رسد.MTA یک مخلوطی از سه پودر سیمان پورتلند، اکسید بیسموت و Gypsum می باشد.سیمان پرتلند اصلی ترین جزء MTA است که ترکیبی از دی کلسیم سیلیکات ، تری کلسیم سیلیکات ، تری کلسیم آلومینات و تتراکلسیم آلومینو فریت می باشد ۶.
اخیرا یک سمان جدید CEM* یا** NEC شامل ترکیبات متفاوتی از کلسیم (به طور مثال اکسید کلسیم، فسفات کلسیم، کربنات کلسیم،سیلیکات کلسیم، سولفات کلسیم، هیدروکسید کلسیم و کلرید کلسیم ) معرفی شده است.استفاده کلینیکی از ای ن ماده شبیه MTA می باشد.این ماده می تواند در محیط آبی Set (aqueous) گردد.کار کردن با این ماده آسان است و وقتی از آن به عنوان ماده پر کننده انتهای ریشه استفاده می شود سیل مناسب ایجاد می نماید۸،۷.CEM توانایی تولید هیدروکسی آپاتیت توسط یونهای با منشا داخلی خود را دارد ۷.
در مطالعه ای که توسط morimato و همکاران۹ در سال 2012 به منظور مقایسه Biocompatibility اکتاکلسیم فسفات سنتتیک و سرامیک کلسیم فسفات در کاربرد کلینیکی انجام شد میزان سازگاری نسجی این دو ماده توسط آنالیزهای شیمیایی، تفرق اشعه X و اسپکتروسکوپی مادون قرمز ،مورد بررسی قرار گرفت که در آن مشخص شد OCP مانند مواد دیگر مثل هیدروکسی آپاتایت دارای خواص زیست سازگاری می باشد.
در مطالعه ای دیگر که توسط Samara و همکاران۱۰ در سال 2011 به منظور مقایسه اثر سه ماده پر کننده انتهای کانال بر روی پرولیفراسیون و چسبندگی فیبروبلاست های لیگامان پریودنتال انجام شد اثر سه ماده Super EBA, Pro Root MTA,MTA Angelus بر روی پرولیقراسیون و چسبندگی فیبروبلاست های لثه ای با استفاده از Trypan Blue Exclusion بررسی شد.که مشاهده شد Pro Root MTA دارای بیشترین اثر زیست سازگاری بود، در حالیکه Super EBA دارای کمترین اثر زیست سازگاری و بیشترین اثر سایتوتوکسیک بود.زیرا به طور مشخصی از رشد و چسبندگی فیبروبلاست ها جلوگیری میکرد.MTA Angelus از Pro Root MTA سایتوتوکسیک تر بود، هر چند دارای خصوصیات یک اسکافولد عالی را از جهت چسبندگی سلول ها نشان داد.
*Calcium Enriched Material
**Novel Endodontic Cement

در مطالعه دیگری که توسط Asgari و همکاران۱۱ در سال 2012 به منظور مقایسه اثر سایتوتوکسیک دو ماده MTA و CEM cement بر روی فیبروبلاست های لثه انسانی با SEM انجام شد مشخص شد که گسترش و چسبندگی سلول های فیبروبلاست بر روی MTAو CEM cement مشابه و هیچ تفاوت معنا داری بین دو گروه مشاهده نشد.سلول ها پاسخ بیولوژیک مشابهی به هر دو گروه دادند که این امر اثبات کرد که CEM cement به عنوان یک ماده جهت درمان اندودونتیک ،سایتوتوکسیک نمی باشد.
با وجود انجام مطالعاتی در زمینه Biocompatibility، MTA ،CEM cement ، Octa Calcium Phosphat (OCP) ،بطور جداگانه هیچ یک از مطالعات انجام شده به مقایسه Biocompatibility این سه ماده با هم نپرداخته بود، در عین حال هیچ مطالعه ای مبنی بر بررسی اثر سایتوتوکسیک Biodentin بر روی فیبروبلاست انسانی انجام نشده است.لذا بر آن شدیم که در این مطالعه بر بررسی اثر سایتوتوکسیک 4 ماده MTA ، Cem cement، Biodentin، Octa Calcium phosphate بر روی سلول های فیبروبلاست لثه انسانی بپردازیم.
سوالات و / یا فرضیات پژوهش۱ـ اثرMTA در زمانهای مختلف ۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت بر روی سلول های فیبروبلاست لثه انسانی متفاوت می باشد.
۲ـاثر Biodentin در زمانهای مختلف ۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت بر روی سلول های فیبروبلاست لثه انسانی متفاوت می باشد.
۳ـاثر Cem cement در زمانهای مختلف ۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت بر روی سلول های فیبروبلاست لثه انسانی متفاوت می باشد.
۴ـاثر Octa calcium phosphat در زمانهای مختلف ۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت بر روی سلول های فیبروبلاست لثه انسانی متفاوت می باشد.
۵ـاثر سیتوتوکسیک متریال های مختلف در زمان های مختلف۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت بر روی سلول های فیبروبلاست لثه انسانی متفاوت می باشد.
هدف کلی طرحبررسی اثر سیتوتوکسیک متریال های مختلف اندودنتیک OCP, CEM, Biodentin, MTAبر بقای سلول های فیبروبلاست لثه انسانی
اهداف اختصاصی۱ـ بررسی اثرسیتوتوکسیک MTA در زمان های مختلف ۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت بر سلول های فیبروبلاست لثه انسانی
۲ـ بررسی اثرسیتوتوکسیکBiodentinدر زمان های مختلف ۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت بر سلول های فیبروبلاست لثه انسانی
۳ـ بررسی اثرسیتوتوکسیک CEM cement در زمان های مختلف ۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت بر فیبروبلاست لثه انسانی
۴ـ بررسی اثرسیتوتوکسیکOcta calcium phosphatدر زمان های مختلف ۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت بر سلول های فیبروبلاست لثه انسانی
۵ ـمقایسه اثرسیتوتوکسیک MTA,Biodentin,CEM,Octa calcium phosphat در زمان های مختلف ۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت بر سلول های فیبروبلاست لثه انسانی
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرحدانشجویان ودستیاران دندانپزشکی واندودنتیکس ها
تعریف واژه های تخصصی
Cytotoxity: کیفیت کشندگی بر روی سلول های زنده
نوع مطالعهتجربی
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)فیبروبلاست لثه انسانی
حجم نمونه و روش محاسبه آنبا توجه به اینکه مداخله بر روی نمونه های یکسان ودر شرایط آزمایشگاهی یکسان انجام می شود ونیز با توجه به مقالات نسبتا مشابه در هر گروه ازمواداندودنتیک ۶ چاهک در نظر گرفته خواهد شد۱۰.
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)تصادفی ساده و در دسترس
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)بر اساس جدول ضمیمه شماره ۱
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)سلول فیبروبلاست انسانی (human gingival fibroblast) به منظور انجام این تحقیق در محیطی حاوی 10% fetal bovine serum ، penicillin و amphotericin B و streptomycin از انستیتو پاستور ایران تهیه می شود.به منظور تطابق با محیط جدید مجموعه فوق به مدت 48 ساعت در محیط 37 درجه سانتیگراد با شرایط مرطوب 5 درصد CO2 قرار می گیرد.
برای تهیه سلولی در این مطالعه حاوی medium) DMEM 133/8g (Ddulbecco’’s modified eagle’’s 1.1g سدیم پیروات ، 3.7g سدیم بی کربنات، 6.1 میلی گرم پنی سیلین ، ۱۰ میلی گرم استرپتومایسین و 0.02 الی 0.06 گرم Lــ گلوتامین درون آب مقطر ۴ بار تقطیر ریخته می شود.برای اینکه سلول ها به تعداد لازم جهت انجام آزمایش برسد 5 بار تحت passage قرار می گیرد.در هر مرحله از تکثیر برای اطمینان از زنده بودن سلول ها ۱ میلی لیتر از محلول حاوی سلول بر روی لام قرار داده می شود و زنده بودن سلول ها توسط رنگ آمیزی Trypan Biue تایید می گردید. سپس سلول های در چاهک های محیط کشت ۲۴ خانه ای قرار داده شده و بطور تصادفی به گروههای ۶ تایی تقسیم شده و تحت تاثیر مواد مورد مطالعه شاملMTA proRoot(Dentsply maillefer,Switzerland) وBiodentin(Septodent,France) و
CEM(NSK,Japan) و OCP
قرار می گیرند و در فواصل زمانی ۱۶۸،۴۸،۲۴ ساعت میزان سمیت سلولی این مواد با استفاده از روش MTT بررسی خواهد شد.
MTT یا نمک تترازولیوم ماده ای است که توسط میتوکندری ها به فورامازول آبی رنگ تبدیل می شود. این ماده قادر به عبور از غشای سلول نبوده و در سلول تجمع می یابد. این ماده از قبل با غلظت مطلوب در آزمایشگاه تهیه شده و در فریزر و در دمای 20- درجه نگهداری می شود و قبل از شروع کار جهت گرم شدن، این ماده برای مدت کوتاهی به انکوباتور 37 درجه منتقل و نگهداری می شود. از محلول MTT به میزان 1/0 حجم هر کدام از چاهک های محیط کشت به هر چاهک اضافه می شود و۴ ساعت در انکوباتور قرار داده شده و سپس محلول رویی باقیمانده برداشته می شود و به خانه های پلیت الیزا منتقل شده و با استفاده از Elisa Reader مقدار جذب نوری هر خانه که نمادی از تعداد سلول های زنده در هر خانه می باشد در زمان های ۱۶۸،۴۸،۲۴ساعت مورد بررسی قرار می گیرد.
روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)نتایج با استفاده از نرم افزار Spss ارزیابی قرار می گیرد وبرای توصیف داده های کمی با میانگین و انحراف معیار نمایش داده می شود. به منظور مقایسه اثر کشندگی شوینده های مختلف بر روی سلول های بنیادی انتهای ریشه در زمان های مختلف از آزمون measure repeated ANOVA و نیز جهت مقایسه اثر کشندگی بین گروه ها(در هر زمان) ازآزمون آنالیز واریانس یک طرفه و در صورت لزوم آزمون کروسکال والیس استفاده می شود.



میزان سلول های زنده باقیمانده به تفکیک گروه و زمان

زمان
گروه ۲۴ ساعت ۴۸ ساعت ۱۶۸ ساعت مقدار p برای آزمون
MTA
Biodentin
Cem cement
Octa calcium phosphate
مقدار P برای آزمون
ملاحظات اخلاقی
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهاتهیه و خرید، انتقال ، نگهداری فیبروبلاست از انیستیتو پاستور مشکل می باشد.از طرفی احتمال مرگ سلول ها و آلودگی میکروبی در طی مراحل کشت سلولی بسیار زیاد می-باشد.بدین منظور از افراد متخصص و با تجربه که سابقه انجام این مراحل را دارند استفاده خواهد شد.
کلمات کلیدیCytotoxic effect, root canal material, survival of human gingival fibroblasts
بقای سلول های فیبروبلاست ،مواد مختلف اندودنتیک،سیتو توکسیسیته
فهرست منابع و مراجعReferences
1.Camp MA, Jeansonne BG, Lallier T. Adhesion of human fibroblasts to root-end-filling materials. JOE.2003;29(9):602-7.
2.Cupta SK, Saxena P, Pant VA, Pant AB. Adhesion and biologic behavior of human periodontal fibroblast cells to resin ionomer Geristore: a comparative analysis. Dent Traumatol. 2013;29(5):389-93.
3.Zhu Q, Haglund R, Safavi KE, Spangberg LS. Adhesion of human osteoblasts on root-end filling materials. JOE.2000; 26(7):404-6.
4. Safavi KE, Spångberg L, Sapounas G, MacAlister TJ. In vitro evaluation of biocompatibility and marginal adaptation of root retrofilling materials. JOE. 1988;14(11):538-42.
5.Al-Hiyasat, Al-Sa'Eed OR, Darmani H. Quality of cellular attachment to various root-end filling materials.J Appl Oral Sci. 2012;20(1):82-8.
6.Torabinejad M, Hong CU, McDonald F, Pitt Ford TR. Physical and chemical properties of a new root-end fillingmaterial. JOE.1995;21(7):349-53.
7.Asgary S, Eghbal MJ, Parirokh M, Ghoddusi J. Effect of two storage solutions on surface topography of two root-end fillings. Aust Endod J. 2009 ;35(3):147-52.
8.Asgary S, Shahabi S, Jafarzadeh T, Amini S, Kheirieh S. The properties of a new endodontic material.JOE 2008 ;34(8):990-3.
9. Morimoto S, Anada T, Honda Y, Suzuki O. Comparative study on in vitro biocompatibility of synthetic octacalcium phosphate and calcium phosphate ceramics used clinically. Biomed Mater. 2012;7(4):045020.
10.Samara A, Sarri Y, Stravopodis D, Tzanetakis GN, Kontakiotis EG, Anastasiadou E. A comparative study of the effects of three root-end filling materials on proliferation and adherence of human periodontal ligament fibroblasts.JOE. 2011;37(6):865-70.
11.Parirokh M, Asgary S, Eghbal MJ, Kakoei S, Samiee M. A comparative study of using a combination of calcium chloride and mineral trioxide aggregate as the pulp-capping agent on dogs' teeth.JOE. 2011;37(6):786-8.

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
final propozal faroogh(1).doc1393/10/10278528دانلود
komite akhlagh.doc1393/11/26273408دانلود