بررسی اثر اختلالات تیروئیدی بر مارکرهای استرس اکسیداتیو در بافت های پانکراس و کلیه رت

The effect of thyroid dysfunction on oxidative stress markers in pancreas and kidney tissues of rats


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان: علیرضا نخعی

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 7078
عنوان فارسی طرح بررسی اثر اختلالات تیروئیدی بر مارکرهای استرس اکسیداتیو در بافت های پانکراس و کلیه رت
عنوان لاتین طرح The effect of thyroid dysfunction on oxidative stress markers in pancreas and kidney tissues of rats
نوع طرح توسعه ای
محل اجرای طرح مدیریت توسعه فناوری سلامت
رسته مطالعاتی بنیادی
دانشکده/مرکز دانشکده پزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز 366

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
مجتبی سجادیانهمکار sajadiyan.m@gmail.com
علیرضا نخعیمجریاستاد راهنمادکترای تخصصی alireza_nakhaee@yahoo.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی اثر اختلالات تیروئیدی بر مارکرهای استرس اکسیداتیو در بافت های پانکراس و کلیه رت
خلاصه طرح به لاتینThe effect of thyroid dysfunction on oxidative stress markers in pancreas and kidney tissues of rats
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشغده تیروئید یک عضو پروانه ای شکل، با دو لوب، که در قسمت پایین گردن واقع شده است. تیروئید یک غده اندوکرین بزرگ است با وزن 10 تا 30 گرم و دارای برداشت کافی ید در افراد است. غده تیروئید تیروکسین (T4) وتری یدوتیرونین (T3) تولید و ترشح می کند. این هورمونها در تنظیم رشد، متابولیسم، تولید مثل و دیگر فرایندهای فیزیولوژیکی مثل ضربان قلب، فشار خون، دمای بدن و مصرف انرژی نقش دارند. چون عملکرد تیروئید بر بسیاری از اورگانهای بدن تأثیر می گذارد، حفظ عملکرد طبیعی این غده برای سلامتی لازم است(1).در بیماریهای عملکردی تیروئید یک افزایش یا کمبود سطح خونی T3،T4 و یا TSH را داریم(2).
به افزایش غلظت هورمون های تیروئیدی در جریان خون هیپرتیروئیدی گفته می شود و گاهی اوقات "overactive thyroid" نامیده می شود. هیپرتیروئیدی باعث افزایش متابولیسم بدن می شود که علائمی شامل: افزایش ضربان قلب، اظطراب، ضعف، کاهش وزن، اختلال در خواب، لرزش دست، ضعف و گاهی اوقات اسهال ایجاد می کند. ممکن است پوف کردگی اطراف چشم، خشکی، سوزش و در بعضی موارد بیرون زدگی چشم وجود داشته باشد. فرد مبتلا ممکن است حساسیت به نور و اختلالات بینایی را تجربه کند. چون چشم ها به طور معمول حرکت نمی کنند فرد ممکن است به صورت خیره به نظر برسد(3).
در هیپوتیروئیدیسم کاهش عملکرد تیروئید را داریم که علائم آن شامل افزایش وزن بدن، خشکی پوست، یبوست، عدم تحمل سرما، پوست باد کرده، ریزش مو، خستگی و قاعدگی نامنظم در زنان می باشد. هیپوتیروئیدیسم درمان نشده شدید را myxedema گویند که می تواند به اختلالات قلبی، تشنج، کما، منجر شود. در بچه ها هیپوتیروئیدیسم می تواند باعث عقب ماندگی رشد و تاخیر در بلوغ جنسی شود. در نوزادان هم می تواند باعث عقب ماندگی ذهنی شود(3).
غلظت بالای هورمون های تیروئیدی نیز ممکن است متابولیسم اکسیژن در سلول ها را تغییر دهد و تولید رادیکال های آزاد را تحریک کند. در هیپرتیروئیدیسم استرس اکسیداتیو می تواند تولید شود. عدم تعادل بین اکسیدان ها و آنتی اکسیدان ها را استرس اکسیداتیو گویند(4). شواهد بدست آمده نشان می دهد که میزان هیپرمتابولیک در هیپرتیروئیدیسم با افزایش تولید رادیکال های آزاد و میزان پراکسیداسیون ارتباط دارد(5,6) در حالی که میزان هیپومتابولیک ایجاد شده توسط هیپوتیروئیدیسم با کاهش تولید رادیکال های آزاد (7) و تولید پراکسیداسیون لیپید در ارتباط است(8). تغییر در میزان α توکوفرول، گلوتاتیون و کوآنزیم Q و فعالیت آنزیم ها یا آنتی اکسیدانت ها در بافت های مختلف، متفاوت و اغلب مخالف هم یافت شده است(6). به علاوه اثبات شده که هورمون های تیروئیدی که استرس اکسیداتیو را در بافت های هدف القا می کنند، مسئول بعضی از عوارض هیپرتیروئیدیسم تجربی مثل میوپاتی تیروتوکسیوز، آسیب کبدی و تغییر در فعالیت الکتریکی قلب هستند. با این حال شواهد نشان می دهد که در مقایسه با بافت های با تیروئید طبیعی، بافت های هیپرتیروئیدی حجم بالایی از کمپلکس آهن و PUFA ( که حساسیت آنها را به اکسید شدن و هچنین میزان آسیب های اکسیداتیو را افزایش می دهند) وجود دارد(9).

عوامل استرس زا روانی (اضطراب، ترس، ناامیدی، انزوا) فیزیولوژیکی یا متابولیکی (متابولیسم غیر طبیعی) محیطی (آلودگی هوا، تابش، میدان الکترو مغناطیس) فیزیکی (سرما، گرما، تابش شدید، سروصدا، ارتعاش) شیمیایی (سموم، مواد شیمیایی، داروها، مواد مخدر) آسیب شناسی (دیابت ملیتوس، التهاب، سرطان، پیری، ایسکمی، آترواسکلوروز) باعث تولید ROS ها یا گونه های فعال اکسیژن می شوند که پراکسیداسیون لیپید در سلول ها را به طور همزمان افزایش می دهد.ROS ها مولکول های بسیار واکنش پذیر هستند شامل رادیکال های آزاد مثل ، هیدروکسیل(OH-) که دارای یک یا چند الکترون جفت نشده هستند، همچنین شامل ترکیباتی مثل H2O2 که رادیکال آزاد نیستند نیز می باشند. تولید رادیکال های آزاد و دیگر گونه های فعال اکسیژن، دفاع آنتی اکسیدانی درون زا بدن را از بین می برد و به ساختار ماکرو مولکول های سلول آسیب وارد می کند(10-13).
خط اول دفاعی در مقابل O2 و H2O2 آنزیم های آنتی اکسیدان مانند سوپراکسید دیسموتاز (SOD)، کاتالاز (CAT) و گلوتاتیون پراکسیداز (GPX) می باشد. خط دوم دفاعی شامل آنتی اکسیدان هایی مثل گلوتاتیون (GSH)، ویتامین E (به طور عمده αتوکوفرول)، آلبومین، کاراتنوئید ها، فلاونوئیدها، می باشد(8).
O2- در اثر کاهش یک الکترون از اکسیژن ایجاد می شود و تحت اثر آنزیم سوپر اکسید دیسموتاز تولید H2O2 می کند که آن توسط آنزیم کاتالاز یا گلوتاتیون پراکسیداز به H2O شکسته می شود. از طریق واکنش فنتون یا فلز کاتالیزور هابروئیدس، کم شدن یک الکترون از H2O2 منجر به تشکیل واکنش پذیر بالا و رادیکال هیدروکسیل قوی (OH-) می شود. سوپراکسید ممکن است با واکنش دهد و تولید پراکسی نیتریت ( ) کند که خود آن هم یک ROS قوی است(14).
افزایش سطح ROS ها ممکن است باعث ایجاد آسیب های قابل توجهی به پروتیین های سلولی، غشا، و همچنین نوکلئیک اسیدها شود. ROS ها از طریق پراکسیداسیون لیپید غشا باعث ایجاد آسیب به غشا سلولی و غشا اندامک های داخل سلولی می شود(15,16).
تغییر پروتیین ها توسط ROS ها منجر به غیر فعال شدن و دناتوره شدن آنزیم های مهمی می شود(17,18).
شکسته شدن رشته ها درDNA توسط ROSها منجر به موتاسیون و اثرات قابل توجهی در بیان ژن می شود(19,20).
عموما پیری و تغییرات وابسته به سن به اثر طولانی مدتROS ها نسبت داده می شود(21,22). در اثر پراکسیداسیون لیپیدها که توسط حمله ROS ها ایجاد می شود، محصولاتی مانند مالون دی آلدهید (MDA)، مواد واکنش دهنده با باربیتوریک اسید (TBARS) و هیدرو پراکسید (HPS) ایجاد می شوند که قابل اندازه گیری هستند و نیز در اثر پراکسیداسیون پروتیین ها پروتیین کربونیل، و همچنین در اثر اکسیداسیون DNA ، 8 اکسو 7و8 دی هیدرو دی اکسی گوانوزین ( 8-OXO-DG ) ایجاد می شود. اگرچه ROS ها می توانند برای هدف های مفیدی مثل انتقال پیام داخل سلولی مورد استفاده قرار گیرند، اما ROS های تولید شده که بیش از ظرفیت آنتی اکسیدانی سلول هستند باعث ایجاد استرس اکسیداتیو می شود. افزایش بیش از حد ROS ها باعث شیوع سرطان، کاردیوواسکولار و بیماری های آسیب های عصبی می شود(13).
بازنگری متون :
در برسی اقای Paola Venditti و همکارانشان که بر روی اثر تیروئید روی حساسیت اکسیدانت ها و تورم میتوکندری در بافت های رت انجام دادند به این نتیجه رسیدند که میزان پراکسیداسیون لیپیدی و پروتیین کربونیل، به طور قابل توجهی در بافت های هیپوتیروئیدی کاهش پیدا کرده است. ظرفیت آنتی اکسیدانی میتوکندریایی در هیپوتیروئیدی و بافت های دارای تیروئید طبیعی تفاوت قابل ملاحظه ای ندارند در حالی که در بافت های هیپرتیروئیدی کاهش پیدا کرده است. حساسیت به تغییرات اکسیداتیو در محیط آزمایشگاه در میتوکندری بافت های هیپوتیروییدی کاهش و در میتوکندری بافت های هیپرتیروئیدی افزایش یافته است(23).
در برسی که اقای Gredillaو همکارانش بر روی اثر هیپرتیروئیدیسم و هیپوتیروئیدیسم روی پراکسیداسیون لیپیدها، سیستم گلوتاتیون و آسیب اکسیداتیو روی هسته وDNA میتوکندریایی در عضله اسکلتی موش انجام دادند به این نتیجه رسیدند که درin vivo وin vitro پراکسیداسیون لیپیدها در هیپرتیروئیدیسم به طور قابل توجهی افزایش یافته و در هیپوتیروئیدیسم تغییرنکرده است. سیستم گلوتاتیون به واسطه وضعیت تیروئید تغییر پیدا نکرده است. مارکر آسیب اکسیداتیو 8 اکسو 7 و 8 دی هیدرو داکسی گوانوزین در DNA میتوکندریایی تغییر نکرده است (24).
در برسی که آقای Mahfoud Messaraha و همکارانشان، تاثیر هورمون های تیروئیدی روی شکل پراکسیداسیون لیپید و فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدانی قلب و کبد در رت های ویستا انجام گرفت. هیچ اثر قابل توجهی روی پراکسیداسیون لیپید در قلب و کبد رت های هیپوتیروئیدیسم در مقایسه با کنترل ها مشاهده نشد. برعکس در رت های هیپرتیروئیدیسم افزایش پیدا کرده بود. فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز افزایش یافته در رت هایی که از هیپوتیروئیدیسم رنج می برند با کاهش شدید گلوتاتیون در هموژن و افزایش مشخص در فعالیت گلوتاتیون ردوکتاز مرتبط بود. افزایش فعالیت سوپر اکسید دیسموتاز و کاتالاز در هیپرتیروئیدیسم مشاهده شد. نتایج بیان می کند که تغییر فعالیت تیروئید با پراکسیداسیون لیپید و محتوی بافتی آنتی اکسیدان های آنزیمی و غیر آنزیمی ارتباط دارد در نتیجه نتایج نشان می دهد که وقوع ایجاد استرس اکسیداتیو با هیپرتیروئیدیسم ارتباط دارد(25).
در برسی که آقای Mahfoud Messaraha و همکارانشان در سال 2009 بر روی تاثیر اختلال تیروئید روی پراکسیداسیون لیپید کبد و وضعیت آنتی اکسیدانت ها در رت های مورد مطالعه انجام دادند به این نتایج رسیدند که در هیپرتیروئیدیسم محتوی TBARS کبد در مقایسه با هیپوتیروئیدیسم و کنترل، افزایش پیدا کرده بود. فعالیت SOD و CAT و GPX در کبد رت های هیپرتیروئیدی در مقایسه با هیپوتیروئیدی و کنترل ها افزایش پیدا کرده بود. در نتیجه اختلالات تیروئید استرس اکسیداتیو را در کبد ایجاد می کند. نتایج نشان می دهد که وقوع استرس اکسیداتیو در ارتباط با هیپرتیروئیدیسم است(26).
آقایRasim Mogulkoc و همکارانشان آسیب های اکسیداتیو ناشی از هیپرتیروئیدیسم در کلیه و بیضه رت هایی که غده پینه آل آنها برداشته شده بود، برسی کردند و این یافته هارا بدست آوردند که MDA کلیه و بیضه در گروه هیپرتیروئیدی و pinealectomy نسبت به گروه هیپرتیروئیدی با pinealectomy ساختگی و گروه کنترل افزایش قابل ملاحظه ای یافته است. میزان GSH کلیه و بیضه در گروه هیپرتیروئیدی با pinealectomy ساختگی در مقایسه با گروه های دیگر افزایش یافته است، و همچنین میزان GSH در گروه هیپرتیروئیدی با pinealectomy نسبت به گروه کنترل افزایش پیدا کرده. نتایج این مطالعات نشان می دهد که MDA، GSH در کلیه و بیضه به علت هیپرتیروئیدیسم افزایش می یابد و در pinealectomy میزان MDA افزایش یافته در حالی که میزان GSH کاهش پیدا کرده است(27).
آقای Bilvadaa U sawant و همکارانشان در سال 2002 بر روی تغییرات پراکسیداسیون لیپید و خنثی کننده های رادیکال آزاد در کلیه رت های هیپرتیروئیدی و هیپوتیروئیدی مطالعه ای انجام دادند و به این نتایج دست یافتند که میزان پراکسیداسیون بافت در رت های هیپرتیروئیدی بدون تغییر باقی مانده اما در رت های هیپوتیروئیدی افزایش پیدا کرده است. SOD در هر دو گروه نسبت به گروه کنترل کاهش یافته اما در هیپرتیروئیدیسم بیشتر کاهش یافته است. CAT در رت های هیپرتیروئیدی کاهش یافته اما در رت های هیپوتیروئیدی بدون تغییر باقی مانده است.GPX در دو گروه آزمایشی نسبت به گروه کنترل افزایش یافته است در حالی که میزان GSH هم در گروه هیپوتیروئیدی و هم در گروه هیپرتیروئیدی کاهش یافته است و همچنین فعالیت GPX پلاسما در هر دو گروه هیپرتیروئیدی و هیپوتیروئیدی کاهش یافته است. در نتیجه تغییر در استرس اکسیداتیو در کلیه رت های هیپوتیروئیدی و هیپرتیروئیدی با تغییر همزمان در خنثی کننده های رادیکال آزاد است(28).
آقای Rasim Mogulkocو همکارانشان در مطالعه ای، تاثیر هیپرتیروئیدیسم بر روی استرس اکسیداتیو ایجاد شده در بافت های کلیه و بیضه رت و همچنین نقش حفاظتی ملاتونین را مورد ارزیابی قرار دادند و مشاهده کردند که میزان MDA در کلیه و بیضه گروه هیپرتیروئیدیسم نسبت به گروه هیپرتیروئیدی + ملاتونین و گروه کنترل افزایش یافته است و در گروه هیپرتیروئیدی + ملاتونین نسبت به کنترل افزایش بیشتری یافته است. میزان GSH در گروه های هیپرتیروئیدی + ملاتونین افزایش یافته و میزان GSH در گروه هیپرتیروئیدی بیشتر از گروه کنترل افزایش یافته است. نتایج نشان می دهد که هیپرتیروئیدیسم ناشی از تزریق Lthyroxin باعث افزایش استرس اکسیداتیو در کلیه و بیضه می شود. اگرچه ملاتونین استرس را به حد خاصی مهار می کند، اما نمی تواند استرس را درسطح کنترل پایین بیاورد(29).
هدف ما از این پژوهش برسی تغییرات فرایند پراکسیداتیو در بافتهای پانکراس و کلیه رت ها در وضعیت های مختلفی از هورمون تیروئیدی می باشد و همچنین اثرات تغییرات وضعیت تیروئید روی دفاع آنتی اکسیدانی برسی می شود که برای این هدف فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدان و مارکرهای آسیب های اکسیداتیو پروتئین ها و لیپیدها و بعضی از آنتی اکسیدان های غیر آنزیمی و ظرفیت آنتی اکسیدانی را در IN VIVO اندازه گیری می کنیم.
سوالات و / یا فرضیات پژوهش1) آیا میزان فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدان (CAT، SOD، GPX،GR ، G6PD)، گزانتین اکسیداز و مارکرهای استرس اکسیداتیو (مالون دی آلدهید، پروتیین کربونیل، توتال تیول، گلوتاتیون احیا) در پانکراس رت های مبتلا به هیپوتیروئیدیسم متفاوت از رت های سالم است ؟
2) آیا میزان فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدان (CAT، SOD، GPX،GR ، G6PD)، گزانتین اکسیداز و مارکرهای استرس اکسیداتیو (مالون دی آلدهید، پروتیین کربونیل، توتال تیول، گلوتاتیون احیا) در کلیه رت های مبتلا به هیپوتیروئیدیسم متفاوت از رت های سالم است ؟
3) آیا میزان فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدان (CAT، SOD، GPX،GR ، G6PD)، گزانتین اکسیداز و مارکرهای استرس اکسیداتیو (مالون دی آلدهید، پروتیین کربونیل، توتال تیول، گلوتاتیون احیا) در پانکراس رت های مبتلا به هیپرتیروئیدیسم متفاوت از رت های سالم است ؟
4) آیا میزان فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدان (CAT، SOD، GPX،GR ، G6PD)، گزانتین اکسیداز و مارکرهای استرس اکسیداتیو (مالون دی آلدهید، پروتیین کربونیل، توتال تیول، گلوتاتیون احیا) در کلیه رت های مبتلا به هیپرتیروئیدیسم متفاوت از رت های سالم است ؟
هدف کلی طرحتعیین اثر اختلالات تیروئیدی بر روی مارکرهای استرس اکسیداتیو در بافت های پانکراس و کلیه رت.
اهداف اختصاصی1) مقایسه فعالیت های آنزیم کاتالاز (CAT) پانکراس رت ها در گروه های مورد مطالعه.
2) مقایسه فعالیت های آنزیم کاتالاز (CAT) کلیه رت ها در گروه های مورد مطالعه.
3) مقایسه فعالیت های آنزیم سوپراکسید دیسموتاز(SOD) پانکراس رت ها در گروه های مورد مطالعه.
4) مقایسه فعالیت های آنزیم سوپراکسید دیسموتاز(SOD) کلیه رتها در گروه های مورد مطالعه.
5) مقایسه فعالیت های آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز (GPX) پانکراس رت ها در گروه های مورد مطالعه.
6) مقایسه فعالیت های آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز (GPX) کلیه رت ها در گروه های مورد مطالعه.
7) مقایسه فعالیت های آنزیم گلوتاتیون ردوکتاز (GR) پانکراس رت ها در گروه های مورد مطالعه.
8) مقایسه فعالیت های آنزیم گلوتاتیون ردوکتاز (GR) کلیه رت ها در گروه های مورد مطالعه.
9) مقایسه فعالیت های آنزیم گلوکز-6-فسفات دهیدروژناز(G6PD) پانکراس رت ها در گروه های مورد مطالعه.
10) مقایسه فعالیت های آنزیم گلوکز-6-فسفات دهیدروژناز(G6PD) کلیه رت ها در گروه های مورد مطالعه.
11) مقایسه فعالیت های آنزیم گزانتین اکسیداز پانکراس رت ها در گروه های مورد مطالعه.
12) مقایسه فعالیت های آنزیم گزانتین اکسیداز کلیه رت ها در گروه های مورد مطالعه.
13) مقایسه میزان پروتئین کربونیل بافت پانکراس رت ها در گروه های مورد مطالعه.
14) مقایسه میزان پروتئین کربونیل بافت کلیه رت ها در گروه های مورد مطالعه.
15) مقایسه میزان مالون دی آلدئید بافت پانکراس رت ها در گروهای مورد مطالعه.
16) مقایسه میزان مالون دی آلدئید بافت کلیه رت ها در گروهای مورد مطالعه.
17) مقایسه میزان توتال تیول بافت پانکراس رت ها در گروهای مورد مطالعه.
18) مقایسه میزان توتال تیول بافت کلیه رت ها در گروهای مورد مطالعه.
19) مقایسه میزان گلوتاتیون احیا(GH) بافت پانکراس رت ها در گروهای مورد مطالعه.
20) مقایسه میزان گلوتاتیو احیا (GH) بافت کلیه رت ها در گروه های مورد مطالعه.
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح
تعریف واژه های تخصصیتعریف هیپرتیروئیدیسم: غلظت غیر نرمال تیروتروپین سرم همراه با افزایش غلظت T3 و T4 آزاد را هیپرتیروئیدیسم گویند.
تعریف هیپوتیروئیدیسم: کاهش freeT4 سرم و افزایش سطح TSH سرم را هیپوتیروئیدیسم گویند که در آن میزان متابولیسم پایه بدن و دیگر فرایندهای وابسته به هورمون تیروئیدی کاهش میابد.
استرس کسیداتیو: عدم تعادل بین اکسیدان ها و آنتی اکسیدان ها را استرس اکسیداتیو گویند.
نوع مطالعهتجربی (Experimental)
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)موش های صحرایی نژاد ویستار(Rattus norvegicus).
معیار ورود به مطالعه در گروه کنترل (شاهد) طبیعی بودن میزان T3 و T4 و در گروه هیپوتیروئیدی کاهش میزان T3 و T4 و در گروه هیپرتیروئیدی افزایش میزان T3 و T4 می باشد.
حجم نمونه و روش محاسبه آن30 راس رت نژاد ویستار که در سه گروه 10 تایی قرار می گیرند
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)انجام آزمایش بر روی بافت رت ها
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)30 راس موش ویستار نر به وزن gr 20±250 را به مدت یک هفته در شرایط آزمایشگاه قرار می دهیم (12 ساعت در نور و 12 ساعت تاریکی و حداقل رطوبت 40%، دمای°C 2±23) تا اینکه با شرایط محیط سازگاری پیدا کنند. سپس رت ها را به طور تصادفی به 3 گروه تقسیم می کنیم:
گروه اول: شامل 10 رت سالم که دارای تیروئید نرمال هستند که به عنوان کنترل در این گروه قرار می گیرند و از آب و غذای معمولی تغذیه می کنند.
گروه دوم: شامل 10 رت که به آب خوراکی آنها 6-پروپیل2-تیواوراسیل (PTU) با غلظت %05/0 به مدت 45 روز اضافه می کنیم تا هیپوتیروئیدی شوند.
گروه سوم: شامل 10 رت که به آب خوراکی آنها تیروکسین سدیم (L-thiroxin) با غلظت %0012/0 به مدت45 روز اضافه می کنیم تا هیپرتیروئیدی شوند.
در طول دوره طرح هفتگی وزن بدن رت ها را اندازه گیری می کنیم. بعد از 45 روز میزان T3 و T4 در رت های گروه دوم وسوم اندازه گیری می کنیم. اگر در گروه دوم میزان T3 و T4 کاهش پیدا کرده یعنی پروپیل تیواوراسیل باعث القا هیپوتیروئیدیسم در رت ها شده است. همچنین اگر در گروه سوم میزان T3 و T4 افزایش پیدا کرده بود یعنی تیروکسین سدیم باعث القا هیپرتیروئیدیسم در رت ها شده است. بعد از 45 روز پس از اینکه هپوتیروئیدی رت های گروه دوم و هیپرتیروئیدی رت های گروه سوم تایید شد، با رعایت پروتوکل استاندارد کار با حیوانات آزمایشگاهی حیوان را می کشیم و از قلب آن خونگیری انجام می دهیم ودر دور 3000 rpm به مدت 15 دقیقه سانتریفیوژ می کنیم و سرم را جدا می کنیم و تا زمان اندازه گیری پارامترهای بیوشیمیایی در دمای°C70- نگه داری می کنیم.
بافت پانکراس و کلیه رت ها را از بافت های متصل به آنها جدا می کنیم و پس از وزن کردن و آنها را در بافرPBS (50Mmtris، 150mMNaCl، pH=7.4) در دمای °C4 قرار می دهیم. یک گرم از هر ارگان را در 2ml PBS هموژن می کنیم و به مدت 15 دقیقه در دمای °C4 دقیقه سانتریفیوژ می کنیم و سوسپانسیون تا زمان اندازه گیری پارامترها به صورت تازه و در -70C° نگه داری می کنیم. فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدان و مارکرهای آسیب های اکسیداتیو پروتئین ها در سوپرناتانت اندازه گیری می کنیم. کلیه سنجش ها با استفاده از پروتوکل های استاندارد انجام می دهیم.

روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)پس از گرد آوری اطلاعات لازم، داده ها در نرم افزار SPSS ورژن 19 وارد و تجزیه و تحلیل خواهد شد. برای آنالیز و تحلیل داده ها از آزمون های آماری آنالیز واریانس دوطرفه (ANOVA) و تست توکی Tukey (یا در صورتی که متغیرهای مورد مطالعه از توزیع نرمال برخوردار نباشند از معادل ناپارامتری آن) استفاده خواهد شد. سطح معنی داری برای تحلیل داده ها، P<0.05 در نظر گرفته خواهد شد.
ملاحظات اخلاقی نحوه رفتار با حیوانات به تایید کمیته اخلاق دانشگاه خواهد رسید. همچنین فرم " چک لیست کار با حیوانات آزمایشگاهی بر اساس کدهای راهنمای کار با حیوانات ابلاغی وزارت بهداشت" تکمیل و ضمیمه شده است در تمام مراحل، کار با حیوانات آزمایشگاهی بر اساس پروتوکل استاندارد کار با حیوانات آرمایشگاهی عمل خواهد شد
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها-مشکل تهیه مواد و امکان طولانی شدن زمان دریافت آنها
-تلف شدن حیوانات در طول اجرای طرح
کلمات کلیدیهیپرتیروئیدیسم، هیپوتیروئیدیسم، استرس اکسیداتیو
فهرست منابع و مراجع1. Ron E, Brenner A. Non-malignant thyroid diseases after a wide range of radiation exposures. Radiation research. 2010 Dec;174(6):877-88..

2. Duffy BJ, Jr., Fitzgerald PJ. Cancer of the thyroid in children: a report of 28 cases. The Journal of clinical endocrinology and metabolism. 1950 Oct;10(10):1296-308.

3. Ladenson PW, Singer PA, Ain KB, Bagchi N, Bigos ST, Levy EG, et al. American Thyroid Association guidelines for detectionof thyroid dysfunction. Archives of internal medicine. 2000 Jun 12;160(11):1573-5.

4. Weetman AP, Tandon N, Morgan BP. Antithyroid drugs and release of inflammatory mediators by complement-attacked thyroid cells. Lancet. 1992 Sep 12;340(8820):633-6.

5. Fernandez V, Barrientos X, Kipreos K, Valenzuela A, Videla LA. Superoxide radical generation, NADPH oxidase activity, and cytochrome P-450 content of rat liver microsomal fractions in an experimental hyperthyroid state: relation to lipid peroxidation. Endocrinology. 1985 Aug;117(2):496-501.

6. Asayama K, Dobashi K, Hayashibe H, Megata Y, Kato K. Lipid peroxidation and free radical scavengers in thyroid dysfunction in the rat: a possible mechanism of injury to heart and skeletal muscle in hyperthyroidism. Endocrinology. 1987 Dec;121(6):2112-8.

7. Swaroop A, Ramasarma T. Heat exposureand hypothyroid conditions decrease hydrogen peroxide generation in liver mitochondria. The Biochemical journal. 1985 Mar 1;226(2):403-8.

8. Paller MS. Hypothyroidism protects against free radical damage in ischemic acute renal failure. Kidney international. 1986 Jun;29(6):1162-6.

9.Venditti P, Di Stefano L, Di Meo S. Oxidative stress in cold-induced hyperthyroid state. The Journal of experimental biology. 2010 Sep;213(Pt 17):2899-911. .
10. Pekarkova I, Parara S, Holecek V, Stopka P, Trefil L, Racek J, et al. Does exogenous melatonin influence the free radicals metabolism and pain sensation in rat? Physiological research / Academia Scientiarum Bohemoslovaca. 2001;50(6):595-602.

11. Gupta YK, Sharma M, Chaudhary G. Pyrogallol-induced hepatotoxicity in rats: a model to evaluate antioxidant hepatoprotective agents. Methods and findings in experimental and clinical pharmacology. 2002 Oct;24(8):497-500.

12. KALE MK, BHUSARI KPA, 1, UMATHE SN. ROLE OF THYROID HORMONES IN THE GENERATION OFWIDESPREAD OXIDATIVE STRESS. Journal of Cell and Tissue Research 2007;7(1):871-6.
13. Halliwell B, Gutteridge JM. Role of free radicals and catalytic metal ions in human disease: an overview. Methods in enzymology. 1990;186:1-85.
14. Mishra P, Samanta L. Oxidative stress and heart failure in altered thyroid States. TheScientificWorldJournal. 2012;2012:741861. PubMed PMID: 22649319.

15. Rathore N, John S, Kale M, Bhatnagar D. Lipid peroxidation and antioxidant enzymes in isoproterenol induced oxidative stress in rat tissues. Pharmacological research : the official journal of the Italian Pharmacological Society. 1998 Oct;38(4):297-303.

16. Thollon C, Iliou JP, Cambarrat C, Robin F, Vilaine JP. Nature of the cardiomyocyte injury induced by lipid hydroperoxides. Cardiovascular research. 1995 Nov;30(5):648-55.

17. Lockwood TD. Redox control of protein degradation. Antioxidants & redox signaling. 2000 Winter;2(4):851-78.

18. Stadtman E, Levine R. Free radical-mediated oxidation of free amino acids and amino acid residues in proteins. Amino acids. 2003;25(3-4):207-18.

19. Rahman I. Oxidative stress, chromatinremodeling and gene transcription in inflammation and chronic lung diseases. Journal of biochemistry and molecular biology. 2003 Jan 31;36(1):95-109.

20. Konat GW. H2O2-induced higher order chromatin degradation: a novel mechanism of oxidative genotoxicity. Journal of biosciences. 2003 Feb;28(1):57-60.

21. Sinclair DA. Paradigms and pitfalls of yeast longevity research. Mechanisms of ageing and development. 2002 Apr 30;123(8):857-67.

22. Lakatta EG. Arterial and cardiac aging: major shareholders in cardiovascular disease enterprises: Part III: cellular and molecular clues to heart and arterial aging. Circulation. 2003 Jan 28;107(3):490-7.

23.Venditti P, De Rosa R, Di Meo S. Effect of thyroid state on susceptibility to oxidants and swelling of mitochondria from rat tissues. Free radical biology & medicine. 2003 Sep 1;35(5):485-94.

24. Gredilla R, Lopez Torres M, Portero-Otin M, Pamplona R, Barja G. Influence of hyper- and hypothyroidism on lipid peroxidation, unsaturation of phospholipids, glutathione system and oxidative damage to nuclear and mitochondrial DNA in mice skeletal muscle. Molecular and cellular biochemistry. 2001 May;221(1-2):41-8.

25. Messarah M, Boulakoud MS, Boumendjel A, Abdennour C, El Feki A. The impact of thyroid activity variations on some oxidizing-stress parameters in rats. Comptes rendus biologies. 2007;330(2):107-12.

26. Messarah M, BoumendjelA, Chouabia A, Klibet F, Abdennour C, Boulakoud MS, et al. Influence of thyroid dysfunction on liver lipid peroxidation and antioxidant status in experimental rats. Experimental and Toxicologic Pathology. 2010;62(3):301-10.

27. Mogulkoc R, Baltaci AK, Aydin L, Oztekin E, Tuncer I. Pinealectomy increases oxidant damage in kidney and testis caused by hyperthyroidism in rats. Cell biochemistry and function. 2006 Sep-Oct;24(5):449-53.

28. Sawant BU, Nadkarni GD, Thakare UR, Joseph LJ, Rajan MGR. Changes in lipid peroxidation and free radical scavengers in kidney of hypothyroid and hyperthyroid rats. Indian journal of experimental biology. 2003;41(11):1334-7.

29. Mogulkoc R, Baltaci AK, Oztekin E, Aydin L, Tuncer I. Hyperthyroidism causes lipid peroxidation in kidney and testis tissues of rats: protective role of melatonin. Neuro endocrinology letters. 2005 Dec;26(6):806-10.

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
proposal 3 finally.docx1393/08/27181626دانلود
kidney25.pdf1393/08/27982496دانلود
kidney26.pdf1393/08/27109524دانلود
kidney25.pdf1393/08/27982496دانلود
The Role of Thyroid Hormones as Inductors of.pdf1393/08/271447793دانلود
sajadian-1 Dr. Nakhaie(proposal eslah shode metodology).docx1393/09/03173507دانلود
proposal of sajadian (final correction).docx1393/09/09168818دانلود
nahaee.docx1393/09/09144211دانلود