بررسی تغییرات سطح sRANKL و osteoprotegerin بزاقی در حین حرکت ارتودنتیک

Survey of changes in salivary level of sRANKL and osteoprotegerin through orthodontic tooth movment


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان: فریبا شهری

کلمات کلیدی: -

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 7089
عنوان فارسی طرح بررسی تغییرات سطح sRANKL و osteoprotegerin بزاقی در حین حرکت ارتودنتیک
عنوان لاتین طرح Survey of changes in salivary level of sRANKL and osteoprotegerin through orthodontic tooth movment
نوع طرح کاربردی
محل اجرای طرح دانشکده دندانپزشکی
رسته مطالعاتی کاربردی
دانشکده/مرکز دانشکده دندانپزشکی زاهدان
زمان اجرا -روز 246

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
فریبا شهریمجریاستاد راهنمادکترای تخصصی shahri_fa@yahoo.com
محمد سوختانلومشاور soukhtanloom@mums.ac.ir
عاطفه عطایی دانشجو majid_67_a@yahoo.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی تغییرات سطح sRANKL و osteoprotegerin بزاقی در حین حرکت ارتودنتیک
خلاصه طرح به لاتینSurvey of changes in salivary level of sRANKL and osteoprotegerin through orthodontic tooth movment
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشدر حین حرکت ارتودنتیک دندان ریمادلینگ PDL و استخوان آلوئول ایجاد می شود که ناشی از استرس های مکانیکال وارد شده دندان است3-1. میزان و محل وارد شدن این استرس های مکانیکال ممکن است بر روی پاسخ های سلولی تاثیر بگذارد. حرکت ارتودنتیک دندان از یک الگوی مشخص در سه فاز زمانی تبعیت می کند.
فاز اولیه: 24 ساعت تا دو روز پس از وارد شدن نیرو که نشانگر جابجایی سریع دندان داخل PDL یا خمش استخوان آلوئولار است4و5.
فاز خفته: حدود 20-4 روز به طول می انجامد و شامل حرکت کند دندان یا حتی عدم جابجایی آن به دلیل هیالینیزاسیون ناشی از فشار PDL است.
فاز تسریع: حرکت دندان به صورت تدریجی یا ناگهانی افزایش قابل توجهی می یابد که در مورد به علت حذف بافت هیالینیزه تشکیل شده در فاز دوم است4.
مطالعات تجربی در مدل های حیوانی نشانگر یک فاز چهارم بعد از حرکت سریع دندان نیز می باشند که با نام فاز خطی شناخته می شود. این فاز بعد از چهل روز از بکار گیری نیرو و حرکت ارتودنتیک دندان رخ می دهد و احتمالا به علت تحلیل استخوان می باشد6و7.
هر فاز به وسیله پاسخ های مشخص بافتی کنترل می شود که شامل تولید precursor های استئوبلاست ها و استئوکلاست ها و همچنین انفیلتراسیون و کموتاکسی سلول های التهابی است8. استرس های مکانیکی ایجاد شده توسط وسایل ارتودنسی باعث تو لید بیولوژیکی مواد فعال کننده ای همچون سایتو کاین ها و آنزیم ها توسط سلول های پریودنتال می شوند که در ریمادلینگ بافت همبندی نقش دارند. این مواد را می توان به صورت غیر تهاجمی در انسان توسط بررسی تغییرات اجزا مایع شیار لثه ای (CGF) مورد ارزیابی قرار داد9و10. گروهی از سلول ها در این پروسه ریمادلینگ نقش دارند که فعالیت آنها از طریق آزمون های بیوشیمیایی که مارکر های دخیل در ریمادلینگ استخوان را مشخص می کند، قابل تخمین است13-11.
از میان این مارکر ها receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL) و osteoprotegerin (OPG) تنظیم کننده های کلیدی ریمادلینگ استخوان در حین حرکت ارتودنتیک دندان هستند3و14و17. RANKL توسط استئوبلاست، استرومال و لنفوسیت های T فعال تولید میشود18و19. این پروتئین از آنجا که فاکتور اساسی برای تشکیل، اتصال، فعال شدن و زنده ماندن استئوکلاست ها می باشد، در تحلیل و از دست دادن استخوان نقش دارند20و21. RANKL با فعال کردن رسپتور مخصوص خودش بنام RANK که روی سلول های استئوکلاست و دندرتیک قرار دارد، باعث ایجاد آبشاری از سیگنال ها می شود22.RANKL به صورت دو ایزوفرم sRANKL و mRANKL تولید می شود. mRANKL پروتئینی است که در غشا سلولی استئوکلاست ها جا می گیرد، در حالی که sRANKL به صورت مولکول های محلول تولید شده و نشانگر شرایط پاتولوژیک و غیر فیزیولوژیک است23. بیان شده است که RANKL وقتی توسط سلولهای اجدادی استئوبلاست تحت تاثیر قرار بگیرد از نوع mRANKL و وقتی توسط لنفوسیت ها T فعال تحت تاثیر قرار بگیرد از نوع sRANKL می باشد21. اثرات RANKL به وسیله ی OPG تولید شده توسط استئوبلاست ها، سلول های خونی و ایمنی خنثی می شود. OPG مانع انجام مرحله نهایی تمایز و فعال شدن ماتریکس استئوکلاست ها می شود و آپپتوز استئوکلاست ها را القا می کند. در نتیجه ریمادلینگ استخوان به وسیله تعادل بین باندینگ RANKL به رسپتورش و تولید OPG کنترل می شود24.
اگر چه مطالعات انسانی14و25و26 و حیوانی3-1،15،17و29-27 متعددی در رابطه با ارتباط RANKL و OPG با ریمادلینگ استخوان و ریشه در برخی زمان های حرکت ارتودنتیک دندان انجام شده است، ولی هنوز اطلاعاتی زیادی در رابطه با تغییر سطوح این دو بیومارکر در طول فاز های مختلف حرکت ارتودنتیک دندان در انسان نداریم.
Nishijima و همکارانش در سال 2005، سطح RANKL و OPG را در مایع شیار لثه ای در حین حرکت دندان ها در 10 بیمار اندازه گیری کردند. آنها مشاهده نمودند که در 24 ساعت اول بعد از اعمال نیرو، در دندان های کانین سمت مورد مداخله نسبت به سمت کنترل، سطح sRANKL به طور چشمگیری افزایش و سطح OPG مقدار زیادی کاهش داشته است. ولی قبل اعمال نیرو، یک ساعت و 168 ساعت بعد اعمال نیرو سطح این مارکر ها در دو سمت تفاوت قابل ملاحظه ای نداشت. این مطالعه ی آزمایشگاهی نشان دهنده افزایش چشمگیر ترشح sRANKL و کاهش قابل ملاحظه OPG در سلول های پریودنتال بود. آنها به این نتیجه رسیدند که تغییرات سطوح این دو مارکر در پاسخ به فشار در تحلیل استخوان موثر است25.
Kim و همکارانش در سال 2006 در مطالعه ای روی موش های صحرایی، میزان بیان ژن RANKL در PDL دندان های تحت نیروهای ارتودنسی را بررسی کردند. آنها مشاهده نمودند که در ناحیه تحت فشار، سلول های PDL شروع به تولید مداوم RANKL می کنند، در حالیکه میزان افزایش تعداد استئوکلاست ها قابل ملاحظه نیست. در نهایت آنها این گونه نتیجه گرفتند که علاوه بر تولید RANKL، سایتوکاین های دیگر نیز نقش مهمی در بالانس ریمادلینگ استخوان آلوئولار مجاور ناحیه فشار بازی می کنند28.
Dunn و همکارانش در سال 2007 به بررسی تاثیر تزریق OPG در حرکت دندان های موش های صحرایی پرداختند. آنها در مزیال دندان مولر اول ماگزیلا 39 رت که توسط فنر Niti حرکت مزیالی انجام می داد، هر هفته دوبار OPG-FC با دو دوز متفاوت ( 0.5 mg/kg, 5.0 mg/kg ( تزریق می کردند. آنها مشاهده نمودند که دوز 5.0 mg/kg باعث کاهش آشکار حرکت مزیالی مولر و تعداد استئوکلاست ها در سمت مورد مداخله می شود. البته دوز 0.5 mg/kg نیز حرکت مزیالی مولر را بطور معنی داری کاهش داد. در نهایت آنها نتیجه گرفتند که تزریق OPG به موش های صحرایی در حین حرکت دندان از استئوکلاستوژنز و در نتیجه حرکت دندان در نواحی مورد نظر جلوگیری می کند15.
Lijun Tan و همکارانش در سال 2009 در مطالعه ای به بررسی فرضیه ارتباط بین افزایش حرکت دندان و سطح RANKL و OPG در موش های صحرایی پرداختند. آنها مشاهده نمودند که در موش های صحرایی در سمت کشش میزان بیان OPG و در سمت فشار میزان بیان RANKL افزایش می یابد. نسبت OPG به RANKL با حرکت دندان، بخصوص طی روزهای 7 تا 14 بعد اعمال نیرو که فاز خطی می باشد، منطبق بود. در نهایت آنها نتیجه گرفتند که افزایش سرعت حرکت دندان در موش های صحرایی وابسته به بیان متفاوت OPG و RANKL می باشد30.
Brooker و همکارانش در سال 2009 در مطالعه مداخله ای روی یک موش صحرایی ، به بررسی مارکرهای مولکولی در حرکت ارتودنسی اولیه دندان پرداختند. آنها میزان پروتئین های KI-67 ، Runx2 و RANKL را 3 و 24 ساعت بعد شروع درمان ارتودنسی توسط رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی اندازگیری کردند. آنها مشاهده کردند که میزان KI-67 و RANKL پس از 3 ساعت از اعمال نیرو در سمت مورد فشار الیاف پریودنتال افزایش می یابد، در حالی که میزان Runx2 که نشانگر پیش ساز های استئوبلاست ها می باشد، پس از 24 ساعت در ناحیه کشش افزایش می یابد. آنها نتجه گرفتند که وجود اولیه RANKL نشانگر درگیری سلول ها در ایجاد سیگنال های استئوکلاستوژنز در فاز اولیه می باشد29.
Yamaguchi در سال 2009 پس از مطالعه مروری خود در مورد نقش RANK ، RANKL و OPG در واکنش بافت پریودنتال نسبت به نیروهای ارتودنسی، مشاهده نمود که میزان RANKL و نسبت RANKL به OPG در GCF به طور قابل ملاحظه ای افزایش می یابد. مطالعات invivo نیز بیانگر وجود RANKL و RANK در بافت های پریودنتال حین حرکت دندان مولر در موش های صحرایی بودند. سلول های PDL احتمالا تحت استرس هایی مکانیکال از طریق افزایش بیان RANKL، استئوکلاستوژنز را القا می کنند. در نهایت آنها نتیجه گرفتند که، این عقیده که سیستم های RANK ، RANKL و OPG نقش مهمی در حرکت دندان ها در ارتودنسی ایفا می کنند، منطقی است16.
Serjio و همکارانش در سال 2012 به بررسی ارتباط بین سطح بزاقی تنظیم کنندهای ریمادلینگ استخوانی sRANKL و OPG با شرایط کلینیکی پریو دنتال پرداختند. در این مطالعه 97 فرد با پریودنتیت مزمن به عنوان نمونه و 43 فرد نرمال به عنوان کنترل حضور داشتند. آنها مشاهده نمودند که در افراد دارای پریودنتیت مزمن نسبت به افراد سالم، sRANKL و نسبت sRANKL به OPG افزایش می یابد، در حالی که OPG کاهش یافته بود. در نهایت آنها نتیجه گرفتند که اگرچه سطح بزاقی sRANKL و OPG و نسبت آنها نمایانگر میزان و شدت مشکل پریودنتال می باشد، ولی برخی از عوامل بیولوژیک مستعد کننده مثل افزایش سن و عادت سیگار کشیدن در افراد مستعد، ممکن است باعث افزایش تخریب بافت در افراد با پریودنتیت مزمن بشوند31.
Moreno و همکارانش در مطالعه ای در سال 2013 به بررسی تغییرات سطح بزاقی OPG و sRANKL در طی درمان ارتودنسی پرداختند. در این مطالعه 20 بیمار سالم که سابقه ی بیماری سیستمیک خاصی نداشتند و نیاز به درمان ارتودنسی ثابت داشتند مورد مطالعه قرار گرفتند. برای بررسی سطح پروتئین ها از بزاق غیر تحریکی افراد مورد مطالعه در 5 مرحله نمونه گیری انجام گردید. بعد از بررسی نتایج به این نتیجه رسیدند که غلظت بزاقی sRANKL و OPG و نسبت آنها با فازهای مختلف حرکت ارتودنتیک دندان ارتباط دارد. به گونه ای که مقادیر متوسط sRANKL افزایش قابل توجه، مقادیر متوسط OPG روند کاهشی زیادی و نسبت sRANKL به OPG نیز افزایش قابل ملاحظه ای را در طول فاز های درمانی پس از فعال کردن اپلاینس های ارتودنسی نشان می دهد32.
تا حالا تعداد زیادی از مطالعات، به بررسی حرکت ارتودنسی دندان طی یک دوره کوتاه می پرداختند که معمولا مربوط به دو فاز اول حرکت دندان می باشد. در حالی که بیش ترین حرکت کلی دندان طی دو فاز نهایی تسریع و خطی انجام می گیرد8و32. به همین دلیل طول دوره مطالعه ما طوری تعیین شده است که هر چهار فاز حرکت دندان را مورد پوشش قرار بدهد.
از طرف دیگر اکثر مطالعات انسانی مربوط به بیولوژی حرکت ارتودنسی دندان، تنها به بررسی تغییرات مدیاتور های دخیل در ریمادلینگ استخوان آلوئول بعد از اعمال نیرو های مشابه وثابث اکستروزیو و اینتروزیو می پردازند، در حالی که در شرایط کلینیکی واقعی این نیروها عامل اصلی حرکت دندان نیستند و میزان نیرو ها نیز طی دوره درمان ثابت نیست و به مرور کاهش می یابد34و35. از این رو ما در این مطالعه تغییرات sRANKL و OPG را قبل و بعد اعمال نیرو توسط یک آرچ وایر انعطاف پذیر NITI در مرحله اول درمان ارتودنسی مورد بررسی قرار می دهیم. نیروی continus آرچ وایر فعال ما در طول درمان به دلیل مرتب شدن تدریجی دندان ها کاهش می یابد و بررسی تغییرات مدیاتور ها دقیقا در شرایط کلینیکی انجام می شود.
از آنجا که مدیاتور های مختلف مرتبط با ریمادلینگ استخوان به طور مرتب از مایع شیار لثه ای به داخل بزاق ریخته می شوند، بزاق غیر تحریکی کامل می تواند یک جایگزین آسان برای نمونه های مایع شیار لثه ای در بررسی این مدیاتور ها باشد36.
این مطالعه با هدف بررسی تغییرات غلظت بزاقی مولکول های RANKL و OPG و نسبت آنها در 5 جلسه فالوآپ به دنبال وارد کردن نیروهای ارتودنتیک (مطابق با فاز های مختلف حرکت دندان ) انجام می شود.
سوالات و / یا فرضیات پژوهش1- آیا میزان غلظت بزاقی sRANKL در فازهای مختلف حرکت دندان یکسان است؟
2- آیا میزان غلظت بزاقی OPG در فازهای مختلف حرکت دندان یکسان است؟
3- آیا نسبت sRANKL به OPG در بزاق، طی فازهای مختلف حرکت دندان یکسان است؟
هدف کلی طرحتعیین تغییرات سطح sRANKL و osteoprotegerin بزاقی در حین حرکت ارتودنتیک
اهداف اختصاصی1- تعیین و مقایسه میزان غلظت بزاقی sRANKL در فازهای مختلف حرکت دندان
2- تعیین و مقایسه میزان غلظت بزاقی OPG در فازهای مختلف حرکت دندان
3- تعیین و مقایسه نسبت sRANKL به OPG در بزاق، در فازهای مختلف حرکت دندان
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرحندارد
تعریف واژه های تخصصیحرکت دندان : تصحیح محل نادرست دندان توسط روش های ارتودنسی37.
الیاف پریودنتال : بافت همبند فیبروزی است که ریشه دندان را احاطه می کند و آن را به استخوان آلوئول متصل می کند38.
بزاق : مایعی شفاف و ویسکوز که توسط غدد بزاقی و موکوسی دهان ترشح می شود39.
receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL) : یک پروتئین غشایی از خانواده TNF که نقش مهمی در تمایز و فعال کردن استئوکلاست دارد40.
osteoprotegerin (OPG) : یک جز ترشحی از خانواده رسپتور TNF که مانع استئوکلاستوژنز می شود41.
Tooth movement: Orthodontic techniques used to correct the malposition of a single tooth37.
Periodontal Ligament : The fibrous connective tissue surrounding the tooth root, separating it from and attaching it to the alveolar bone38.
Saliva : The clear, viscous fluid secreted by the salivary glands and mucous glands of the mouth39.
receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL) : A transmembrane protein belonging to the tumor necrosis factor superfamily. It plays an important role in regulating osteoclast differentiation and activation40 .
osteoprotegerin (OPG) : A secreted member of the TNF receptor superfamily that negatively regulates osteoclastogenesis41.

نوع مطالعهکار آزمایی بالینی
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)معیار ورود به مطالعه

1 – عدم سابقه کشیدن دندان های دائمی
2 – نیاز به درمان ارتودنسی ثابت، بدون نیاز به کشیدن دندان و درمان های جراحی دیگر، بدون سابقه کشیدن دندان
3 – عدم مشکل پریودنتال در سیستم دندانی ( عمق پروب کمتر از 3 میلی متر در کل دندان ها، عدم وجود علایم bone loss در کلیشه های رادیوگرافی، عدم وجود بیش از 10 درصد نواحی که BOP(Bleeding On Probing) مثبت دارند و عدم وجود ادم و قرمزی لثه )
4 – عدم وجود سابقه بیماری سیستمیک خاصی
5 – بیمار دختر بین 14 تا 20 سال
6 – پر کردن فرم رضایت آگاهانه شرکت درمطالعه


معیار خروج از مطالعه
1 – عدم پر کردن فرم رضایت آگاهانه شرکت درمطالعه
2 – حاملگی در طی درمان
3 – سابقه مصرف الکل و دخانیات
4 – سابقه درمان ارتودنسی و ارتوپدیک قبلی
5 – وجود هرگونه مشکل سیستمیکی که روی بافت پریو دنتال و متابولیسم استخوان اثرگذار باشد، از قبیل: بیماری های گوارشی مرتبط با تغذیه و متابولیسم مواد مصرفی، اختلالات اندوکرین، سیستم ایمنی و بافت همبندی
6 – افراد تحت دارو درمانی برای کنترل برخی اختلالات از قبیل: بیماری های قلبی عروقی، تعویض مفصل، هپارین درمانی مزمن، مصرف مزمن کورتیکواستروئیدها، درمان های غیر تحلیلی استخوان با بیسفسفونات ها و هورمون ها
7 – استفاده از آنتی بیوتیک ها، کورتیکواستروئیدها و داروهای ضد التهاب در 3 ماه گذشته
8 – درمان های پریودنتال در 6 ماه گذشته

حجم نمونه و روش محاسبه آنبا توجه به اینکه مطالعه مشابه مناسبی که از آن بتوان برای تعیین حجم نمونه استفاده نمود، یافت نگردید لذا با توجه به نادر بودن بیماران حائز شرایط ورود به مطالعه و کمبود زمان، تعداد 20 بیمار وارد مطالعه خواهند شد و در صورت لزوم توان مطالعه اعلام می گردد.42
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)نمونه گیری از نوع غیر احتمالی و مبتنی بر هدف می باشد.
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)روش جمع آوری داده ها میدانی و ابزار گردآوری داده ها چک لیست و مشاهده می باشد.





فرم شماره یک و فرم شماره دو ضمیمه شده است.




روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)این مطالعه روی 20 بیمار دخترسالم، که نیازمند درمان ارتودنسی ثابت، بدون کشیدن دندان می باشند، دربخش ارتودنسی دانشکده دندانپزشکی مشهد انجام می شود. همه شرکت کنندگان قبل از شروع مطالعه، برای اطمینان از مناسب بودن طرح درمان ارتودنسی ثابت بدون نیاز به کشیدن، توسط یک متخصص ارتودنسی مورد ارزیابی قرار می گیرند. شرکت کنندگان بطور خصوصی برای بدست آوردن اطلاعات دموگرافیک و پزشکی مصاحبه می شوند و حفره دهان آنها برای بررسی سلامتی پریودنتال وپاتولوژیک مورد معاینه قرار می گیرد، سپس همه این اطلاعات در پرونده بیماران ثبت می شود. همه افراد شرکت کننده در مطالعه آموزش های بهداشت دهان و دندان، شامل نحوه استفاده از مسواک، نخ دندان و مسواک بین دندانی را دریافت می کنند. دانشجو مراحل درمان را به تفصیل برای شرکت کنندگان توضیح می دهد و سپس رضایت نامه آگاهانه توسط شرکت کننده یا والدین و سرپرستان افراد کمتر از 18 سال قبل از شرکت در مطالعه اخذ می شود.
وقتی مراحل تشخیص و طرح درمان کامل شد، پیش ازشروع درمان ثابت، از همه بیماران بصورت ناشتا، به عنوان نمونه بزاق پایه، 5 میلی لیتر بزاق غیر تحریکی در یک لوله سانتریفیوژ استریل پلاستیکی 50 میلی لیتری (Greiner Bio-one, Frickenhausen, Germany) توسط دانشجو گرفته می شود. هیچگونه دهانشویه ضد میکروبی و کارهای بهداشت دهان از قبیل مسواک زدن قبل از نمونه گیری نباید انجام شود. بلافاصله بعد از انجام نمونه گیری، تمام نمونه ها در یک محفظه دارای یخ نگهداری می شوند و در مدت زمان کمتر از 10 دقیقه به آزمایشگاه تخصصی بیوشیمی دانشکده پزشکی مشهد منتقل می شوند. دانشجو تمام نمونه های بزاق را در دمای 4 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه در 800 × g (IEC Centra CL2 centrifuge; Thermo Electron, Milford, Mass) سانتریفیوژ و جدا سازی می نماید. سپس مواد شناور شده بر روی سطح نمونه را جمع آوری نموده و به حجم های 500 میکرولیتری تقسیم می کند. نمونه در دمای -75 تا زمان جمع آوری کلیه نمونه ها نگهداری می شود .
در درمان ارتودنسی ثابت آنها، براکتهای Damon 3 self-ligating با اسلات 0.022 inch برای فکین آنها باند می گردد. در هر فرد مولرهای اول با تیوب های مربوطه باند می گردند. از یک آرچ وایر روند 0.014 inch NiTi Cupper در مرحله alignment ابتدایی استفاده می گردد.در طی مطالعه از هیچگونه درمان کمکی مانند لینگوال آرچ، بایت پلن یا الاستیک های اینترماگزیلاری استفاده نمی گردد.
نمونه های این طرح افرادی هستند که به درمان ارتودنسی ثابت بدون کشیدن دندان نیاز دارند و از آنجایی که در دانشکده دندانپزشکی زاهدان ارتودنسی ثابت انجام نمی شود جهت نمونه گیری هماهنگی های لازم با دانشکده دندانپزشکی مشهد صورت گرفته است. از طرف دیگر چون مدت زمان بین نمونه گیری و سانتریفیوژ کردن نمونه ها محدود است این امکان در دانشکده دندان پزشکی زاهدان فراهم نیست. با توجه به مشکلات مطرح شده، این طرح در دانشکده دندانپزشکی مشهد انجام می شود.
پس از شروع درمان ثابت و اعمال نیرو به سیستم دندانی، نمونه های بزاقی دیگر مثل روش نمونه گیری قبل از درمان، در فاز ها ی مختلف یعنی 24 تا 48 ساعت( initial phase )، 2 هفته( lag phase )، 5 هفته( acceleration phase ) و 8 هفته( linear phase ) بعد از شروع درمان جمع آوری و سانتریفیوژ می شوند. در طول این دو ماه هیچ گونه دوباره فعال سازی دستگاه نباید انجام شود. سطح بزاقی sRANKL و OPG از طریق گرفتن آزمایش ELISA-base با استفاده از کیت های تجاریAmpli sRANKL human ELISA and OPG ELISA (Immunodiagnostic Systems, Fountain Hills, Ariz) طبق دستورات کارخانه سازنده، اندازه گیری می شوند. برای اندازه گیری این مارکرها از بزاق سانتریفیوژ شده و غلیظ که قبلا جمع آوری شده بود، استفاده می شود. حداکثر غلظت هر دو پروتئین 15 دقیقه بعد از افزودن 50 میکرولیتر محلول stop، توسط یک Microplate reader که روی nm 460 تا nm 620 تنظیم شده است، مشخص می شود.
بر اساس ادعای کارخانه سازنده در مورد حساسیت این ارزیابی ها، حداقل دوز قابل تشخیص برای sRANKL حدود pg/mL 4/0 و برای OPG حدود pg/mL 8/2 می باشد. این آزمایشات سطح کلی فرم غیر باند شونده و آزاد این دو پروتئین و فرم sRANKL-OPG complex را اندازه گیری می کنند.
روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)در توصیف داده ها از جداول و نمودارهای مناسب جهت بیان شاخصهای آماری استفاده خواهد شد و در تحلیل داده ها از آزمونهای آنالیز واریانس با اندازه های تکراری و یا معادل ناپارامتری آن استفاده خواهد شد.

زمان اندازه گیری قبل نصب دستگاه 24 ساعت بعد نصب 48 ساعت بعد نصب 2هفته بعد نصب

متغیر وابسته Mean±S.D Mean±S.D Mean±S.D Mean±S.D

غلظت sRANKL

غلظت OPG



ملاحظات اخلاقی براساس راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی، کد های 1 تا 11 مربوط به قسمت راهنمای عمومی و کدهای 1 تا 5 فصل چهارم ( زیست بانک ها ) مربوط به قسمت راهنمای اختصاصی رعایت خواهد شد. فرم شماره سه ضمیمه شده است.
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهاهمکاری ضعیف بیمار و هرگونه شکستگی یا دباند شدن دستگاه ارتودنسی که با آموزش بیمار و دقت کافی هنگام نصب دستگاه کنترل می شود.
محدودیت در نگهداری نمونه ها قبل از سانتریفیوژ که با انجام نمونه گیری در محل ازمایشگاه و سانتریفیوژ فوری این مشکل برطرف می شود.
محدودیت در نگهداری کیت های الیزا بیشتر از 11ماه که توسط تخمین مدت زمان جمع آوری داده ها و سپس سفارش کیت این محدودیت برطرف می شود.
کلمات کلیدیحرکت دندان، الیاف پریودنتال، بزاق، receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL) ، osteoprotegerin (OPG)
فهرست منابع و مراجع1. Kanzaki H, Chiba M, Takahashi I, Haruyama N, Nishimura M, Mitani H. Local OPG gene transfer to periodontal tissue inhibits orthodontic tooth movement. J Dent Res 2004; 83:920-5.
2. Kanzaki H, Chiba M, Arai K, Takahashi I, Haruyama N, Nishimura M, et al. Local RANKL gene transfer to the periodontal tissue accelerates orthodontic tooth movement. Gene Ther 2006; 13:678-85.
3. Tan L, Ren Y, Wang J, Jiang L, Cheng H, Sandham A, et al. Osteoprotegerin and ligand of receptor activator of nuclear factor kappaB expression in ovariectomized rats during tooth movement. Angle Orthod 2009;79:292-8.
4. Burstone CJ. The biomechanics of tooth movement. In: Kraus BS, Riedel RA, editors. Vistas in orthodontics. Philadelphia: Lea & Febiger; 1962. p. 197-213.
5. Baumrind S. A reconsideration of the propriety of the “pressuretension” hypothesis. Am J Orthod 1969;55:12-22.
6. van Leeuwen EJ, Maltha JC, Kuijpers-Jagtsman AM. Tooth movement with light continuous and discontinuous forces in beagle dogs. Eur J Oral Sci 1999;107:468-74.
7. von B€ohl M, Maltha JC, Von Den Hoff JW, Kuijpers-Jagtman AM. Focal hyalinization during experimental tooth movement in beagle dogs. Am J Orthod Dentofacial Orthop 2004;125:615-23.
8. Krishnan V, Davidovitch Z. Cellular, molecular, and tissue-level reactions to orthodontic force. Am J Orthod Dentofacial Orthop 2006;129:469.e1-32.
9. Griffiths GS, Moulson AM, Petrie A, James IT. Evaluation of osteocalcin and pyridinium crosslinks of bone collagen as markers of bone turnover in gingival crevicular fluid during different stages of orthodontic treatment. J Clin Periodontol 1998;25:492–8.
10. Iwasaki LR, Haack JE, Nickel JC, Reinhardt RA, Petro TM. Human interleukin-1b and interleukin-1 receptor antagonist secretion and velocity of tooth movement. Arch Oral Biol 2001;46:185–9.
11. Camacho P, Kleerekoper M. Biochemical markers of bone turnover. In: Favus MJ, editor. Primer on the metabolic bone diseases and disorders of mineral metabolism. 6th ed. Washington, DC: ASBMR Press; 2006. p. 127-30.
12. Pellegrini GG, Gonzales CM, Somoza JC, Friedman SM, Zeni SN. Correlation between salivary and serum markers of bone turnover in osteopenic rats. J Periodontol 2008;79:158-65.
13. Mulcahy LE, Taylor D, Lee TC, Duffy GP. RANKL and OPG activity is regulated by injury size in networks of osteocyte-like cells. Bone 2011;48:182-8.
14. Kawasaki K, Takahashi T, Yamaguchi M, Kasai K. Effects of aging on RANKL and OPG levels in gingival crevicular fluid during orthodontic tooth movement. Orthod Craniofac Res 2006;9: 137-42.
15. Dunn MD, Park CH, Kostenuik PJ, Kapila S, Giannobile WV. Local delivery of osteoprotegerin inhibits mechanically mediated bone modeling in orthodontic tooth movement. Bone 2007;41:446-55.
16. Yamaguchi M. RANK⁄RANKL⁄OPG during orthodontic tooth movement. Orthod Craniofac Res 2009;12:113-9.
17. Nakano Y, Yamaguchi M, Fujita S, Asano M, Saito K, Kasai K. Expressions of RANKL/RANK and M-CSF/c-fms in root resorption lacunae in rat molar by heavy orthodontic force. Eur J Orthod 2011;33:335-43.
18. Yasuda H, Shima N, Nakagawa N, Yamaguchi K, Kinosaki M, Mochizuki S, et al. Osteoclast differentiation factor is a ligand for osteoprotegerin/osteoclastogenesis - inhibitory factor and is identical to TRANCE/RANKL. Proc Natl Acad Sci USA 1998;95: 3597-602.
19. Udagawa N, Takahashi N, Jimi E, Matsuzaki K, Tsurukai T, Itoh K, et al. Osteoblasts/stromal cells stimulate osteoclast activation through expression of osteoclast differentiation factor/RANKL but not macrophage colony-stimulating factor: receptor activator of NF-kappa B ligand. Bone 1999;25:517-23.
20. Suda T, Takahashi N, Udagawa N, Jimi E, Gillepsie MT, Martin TJ. Modulation of osteoclast differentiation and function by the new members of the tumor necrosis factor receptor and ligand families. Endocr Rev 1999;20:345-57.
21. Schoppet M, Preissner KT, Hofbauer LC. RANK ligand and osteoprotegerin: paracrine regulators of bone metabolism and vascular function. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2002;22:549-53.
22. Yasuda H, Shima N, Nakagawa N, Yamaguchi K, Kinosaki M, Goto M, et al. A novel molecular mechanism modulating osteoclast differentiation and function. Bone 1999;25:109-13.
23. Nakashima T, Kobayashi Y, Yamasaki S, Kawakami A, Eguchi K, Sasaki H, et al. Protein expression and functional difference of membrane-bound and soluble receptor activator of NF-kappaB ligand: modulation of the expression by osteotropic factors and cytokines. Biochem Biophys Res Commun 2000;275: 768-75.
24. Theoleyre S, Wittrant Y, Tat SK, Fortun Y, Redini F, Heymann D. The molecular triad OPG⁄RANK⁄ RANKL: involvement in the orchestration of pathophysiological bone remodeling. Cytokine Growth Factor Rev 2004;15:457-75.
25. Nishijima Y, Yamaguchi M, Kojima T, Aihara N, Nakajima R, Kasai K. Levels of RANKL and OPG in gingival crevicular fluid during orthodontic tooth movement and effect of compression force on releases from periodontal ligament cells in vitro. Orthod Craniofac Res 2006;9:63-70.
26. Yamaguchi M, Aihara N, Kojima T, Kasai K. RANKL increase in compressed periodontal ligament cells from root resorption. J Dent Res 2006;85:751-6.
27. Shiotani A, Shibasaki Y, Sasaki T. Localization of receptor activator of NFkappaB ligand, RANKL, in periodontal tissues during experimental movement of rat molars. J Electron Microsc 2001;50: 365-9.
28. Kim T, Handa A, Iida J, Yoshida S. RANKL expression in rat periodontal ligament subjected to a continuous orthodontic force. Arch Oral Biol 2007;52:244-50.
29. Brooks PJ, Nilforoushan D, Manolson MF, Simmons CA, Gong SG. Molecular markers of early orthodontic tooth movement. Angle Orthod 2009;79:1108-13.
30. Ren Y, Maltha JC, Kuijpers-Jagtman AM. Optimum force magnitude for orthodontic tooth movement: a systematic literature review. Angle Orthod 2003;73:86-92.
31. Lijun Tan, Yijin Ren, Jun Wang, Lingyong Jiang, Hui Cheng, Andrew Sandham. Osteoprotegerin and Ligand of Receptor Activator of Nuclear Factor kappaB Expression in Ovariectomized Rats during Tooth Movement. Angle Orthod 2009;79:292–298.
32. Sergio I, Diana M, Eliana M, Sandra M, María C. Association of salivary levels of the bone remodelling regulators sRANKL and OPG with periodontal clinical status. Journal of Clinical Periodontology 2012;39:1132–1140.
33. Frodge BD, Ebersole JL, Kryscio RJ, Thomas MV, Miller CS. Bone remodeling biomarkers of periodontal disease in saliva. J Periodontol 2008;79:1913-9.
34. Iwasaki LR, Haack JE, Nickel JC, Reinhardt RA, Petro TM. Human interleukin-1b and interleukin-1 receptor antagonist secretion and velocity of tooth movement. Arch Oral Biol 2001;46:185-9.
35. Perinetti G, Varvara G, Salini L, Tet_e S. Alkaline phosphatase activity in dental pulp of orthodontically treated teeth. Am J Orthod Dentofacial Orthop 2005;128:492-6.
36. Gloria Moreno, Diana G, Sergio I. Time-related changes in salivary levels of the osteotropic factors sRANKL and OPG through orthodontic tooth movement. Am J Orthod Dentofacial Orthop 2013;143:92-100.
37. www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh. United Stata: medical subject headings[1997]. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh/?term=tooth+movement.
38. www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh. United Stata: medical subject headings[1973]. Available from:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh/?term=periodontal+ligament.
39. www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh. United Stata: medical subject headings[2008]. Available from:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh/?term=Saliva.
40. www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh. United Stata: medical subject headings[2009]. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh/?term=rankl+protein.
41. www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh. United Stata: medical subject headings[2007]. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh/?term=osteoprotegerin.
42. Turpin D, Huang G, Searching For Evidence In Clinical Practice. In: Dolan J, Hebbard K, Dumas J, editor. Current Principles and Techniques. 5th ed. United States of America: Linda Duncan; 2012. P 1039-1050.

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
proposal.doc1394/02/15365056دانلود
proposal.pdf1394/02/15616090دانلود
komite akhlagh.doc1394/02/19369664دانلود
proposal eslah shode komite akhlagh.doc1394/03/18372736دانلود
proposal eslah shode komite akhlagh.pdf1394/03/18779917دانلود