بررسی فراوانی ژن های etA, etB در سویه های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین جدا شده از بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان با روش Multiplex PCR

The frequency of entA , entB genes in methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from educcatinal haspitals of Zahedan by Multiplex PCR


چاپ صفحه 		پژوهان
صفحه نخست سامانه		 مجری و همکاران
مجری و همکاران		 اطلاعات تفضیلی
اطلاعات تفضیلی		 دانلود
دانلود 		علوم پزشکی زاهدان
علوم پزشکی زاهدان

مجریان: محمد بکائیان

کلمات کلیدی:

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد طرح 7183
عنوان فارسی طرح بررسی فراوانی ژن های etA, etB در سویه های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین جدا شده از بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان با روش Multiplex PCR
عنوان لاتین طرح The frequency of entA , entB genes in methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from educcatinal haspitals of Zahedan by Multiplex PCR
نوع طرح بنیادی-کاربردی
محل اجرای طرح مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی و گرمسیری
رسته مطالعاتی توصیفی- مقطعی
دانشکده/مرکز دانشگاه علوم پزشکی
زمان اجرا -روز 180

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
محمد بکائیانمجریاجراء طرحدکترای تخصصی bokaeian.m@gmail.com
حامد طهماسبی گزل ابدالهمکارهمکاری در اجرای طرحکارشناس ارشدh.tahmasebi87@yahoo.com
جواد ادبیهمکارهمکاری در اجرای طرحکارشناس ارشدjadabi1384@yahoo.com

اطلاعات تفضیلی
hide/show

عنوان متن
خلاصه طرح به فارسی بررسی فراوانی ژن های etA, etB در سویه های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین جدا شده از بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان با روش Multiplex PCR
خلاصه طرح به لاتینThe frequency of entA , entB genes in methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from educcatinal haspitals of Zahedan by Multiplex PCR
بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهشتوکسین ها موادی هستند که توسط موجودات زنده از جمله حیوانات، گیاهان، باکتری ها و قارچها تولید می شوند(1)توکیسنهای تولید شده توسط باکتری ها یکی از شایع ترین مواردی است که می توانند در کنار سایر عوامل بیماری زای باکتریایی، باعث بروز یا تشدید بیماری شود(2, 3). از جمله بیماری های ایجاد شده توسط توکسینهای باکتریایی سندرم فلسی شدن پوست (staphylococcus aureus scalded skin syndrome) SSSS است که توسط باکتری استافیلوکوک اورئوس ایجاد می شود(4). این توکسین در سال 1876 توسط یک پزشک آلمانی معرفی شد(5) تا سال 1961 به دلیل شباهت ضایعات این بیماری به ضایعات حاصل از سوختگی، این بیماری را toxic epidermal necrolysis می نامیدند(6). SSSS معمولا در کودکان تازه متولد شده و گاها افراد بالغ پدیدار می شود و با ضایعات پوستی بسیار شدید که حاصل واکنش سیستم ایمنی با توکسین اکسفولیاتیو(Exfoliative Toxin) ET است، همراه می باشد (5, 7).
توکسین اگزفولیاتیو از جمله پروتئینهای ترشحی خارج سلولی است که توسط بسیاری از سویه های مختلف استاف اورئوس تولید می شود(8). این توکسین که دارای انواع مختلف A ،B ، C ، D و E می باشد جز سوپر آنتی ژنها طبقه بندی می شوند(9, 10). مطالعات نشان داده است که بین 4 تا 40 درصد از استافیلوکوکهای اورئوس دارای توانایی تولید ET می باشند(11, 12). در بین توکسینهای اکسفولیاتیو استافیلوکوک اورئوس، نوع A و B از عوامل بسیار مهم در ایجاد ضایعات پوستی به شمار می روند که موجب بروز بیماری SSSمی شود(13). میزان فراوانی این دو توکسین در جهان متفاوت است(14). بطوریکه توکسین غالب در ایالت متحده و اروپا ETA و توکسین غالب در ژاپن ETB می باشد(15). در برخی مطالعات انجام شده در ایران نیر ETA توکسین غالب معرفی شده است(12, 16). تولید این توکسینهای پروتئینی را ژنهای خاصی کد می کنند که وجود یا عدم وجود آن در سویه های استافیلوکوک اورئوس دارای اهمیت است(17, 18).
ژنهای کد کننده ETA و ETB به ترتیب eta و etb می باشند که اولی یک ژن کروموزومال و دومی یک ژن پلازمیدی است(18, 19). جابجایی و تحرک ژنی بین سویه های مختلف به وفور دیده شده است و ژن عامل بیماری می تواند به سویه های غیرمهاجم منتقل شده و باعث تهاجمی شدن آنها شود(13). توکسینهای اکسفولیاتیو می توانند در مواردی، قدرت تهاجم برخی سویه های استافیلوکوک اورئوس را افزایش دهند که استافیلوکوک اورئوس مقاوم به متی سیلین(Methicillin Resistant Staphylococcus aureus) یاMRSA در چند مورد گزارش شده است که دارای قدرت تهاجمی بیشتری به واسطه توکسین اگزفولیاتیو بوده است(20)
MRSA یکی از رایجترین سویه های استافیلوکوک اورئوس در ایجاد عفونت بیمارستان هاست که پیوسته پزشکان را با مشکلاتی در زمینه درمان مواجه می کند(21). اولین موردMRSA در سال 1950گزارش شد و از سال 1980 در بیمارستانها اندمیک شد(22). شیوع بالای این سویه در نمونه های بالینی باعث اهمیت روز افزون این باکتری در سالهای اخیر شده است(23). در یک بررسی انجام شده در سال 2006 در آمریکا، مشخص شد این باکتری سهم بسیار بالایی در ایجاد عفونتهای ناشی از بستری افراد در بیمارستان را دارد(24). فراوانی سویه های MRSA در کشورهای آسیایی نظیر چین، کره و تایوان بیش از 70درصد، در آمریکاری شمالی بیش از 50درصد، در اروپا20درصد و در ایران حدود 50 درصد می باشد(25). MRSA علاوه بر ایزوله های مربوط به انسان، از ایزوله های مربوط به مرغداری ها هم جدا شده است که مطالعۀ رحیمی و همکاران در سال 2012 آن را تاید می کند(26). MRSA علاوه بر بیمارستان، در جامعه هم قابل ردیابی است که این مورد خطر گسترش این سویه را بیش از پیش اقزایش می دهد(27). به طور کلی MRSA در بیمارستانهای همه کشورها بجز اسکاندیناوی و هلند اندمیک شده است که مطالعه بر روی این سویه را به یک موضوع مهم جهانی تبدیل کرده است(28).
بالا بودن شیوع بیمارستانی MRSA در دنیا و اهمیت تشخیص این سویه در سیر درمان و جلوگیری از تجویز بی مورد آنتی بیوتیک، اهمیت تشخیص این سویه های بیش از پیش مطرح می شود. از این رو روشهای سنجش باید دارای حساسیت و اختصاصیت بالایی داشته باشد(29). روش های مختلفی برای شناسایی MRSA وجود دارد که از آن جمله می توان به تکثیر ژن mecA توسط PCR و بررسی الگوی مقاومت به اگزاسیلین و سفوکسیتین توسط روش دیسک دیفیوژن اشاره کرد(30). در آزمایشگاه های بالینی معمولا از روشهای فنوتیپی برای تشخیص MRSA استفاده می شود که حساسیت بالایی ندارند و فاکتورهای مختلفی مانند زمان انکوباسین، دمای انکوباسیون، آنتی بیوتیک بتا لاکتام مورد تست، PH محیط کشت و غلظت نمک، تاثیر زیادی در بیان ژن مقاومت و در نتیجه شناسایی باکتری دارد(30) از این رو تست هایی که بر اساس تشخیص ژنوتیپی می باشند، دقت بیشتری نسبت به روش های فنوتیپی دارند. ژن mecA در استاف اورئوس به خوبی حفظ شده و تشخیص این ژن توسط PCR به عنوان روش استاندارد طلایی مطرح است(31) برای جداسازی ET هم می توان از روشهای فنوتیپی و ژنوتیپی کمک گرفت. روشهای فنوتیپی معمولا توکسین موجود در خون را مورد شناسایی قرار می دهند و وابسته به ترشح شدن توکسین به داخل خون می باشد. مشکل این روش در بروز تاخیر در شناسایی سویه های عامل تولید توکسین می باشدکه نمی توان قبل از بروز بیماری آن را از بیمار جدا کرد. اما روشهای مولکولی به بررسی ژن های etA و etB در سویه های جدا شده می پردازند و می توان با قطعیت بالا سویه های دارای توانایی تولید ET را شناسایی کرد. بصورت فنوتیپی روش Enzyme-Linked Immunosorbent Assayیا (ELISA) دارای حساسیت مناسبی است که در کنار روش مولکولی می توان از ان استفاده کرد(32). برای شناسایی ژن های etA و etB هم از روش معمول PCR استفاده می شود که دارای حساسیت بالایی می باشد(33)
در مواقعی که بررسی دو یا چند مورد مطالعه قرار می گیرد می توان از تکنیک های PCR استفاده کرد تا در کنار سرعت بخشیدن به کار، دقت و نتیجه را هم افزایش داد . multiplex PCR تکنیکی است که به کمک آن می توان دو یا چند ژن را بطور همزمان مورد مطالعه قرار داد(32). برای شناسایی ژن تولید کننده توکسین اگرفولیاتیو و ژن عامل مقاومت به متی سیلین در استافیکوکهای اورئوس می توان از این روش استفاده کرد(34) در این روش حساسیت بهتری نسبت به PCR دارد، به طوری که در مطالعه Sabouni و همکاران میزان فراوانی ژنetA و etB به ترتیب حدود12 و 9درصد گزارش شده است(35) در بررسی ژن mecA هم این روش دارای حساسیت مناسبی است و در مطالعات Khosravi و همکاران که در سال 2014 در اهواز انجام شد، در مقایسه به روشهای معمول مبتنی بر PCR دارای ارزش تشخیصی بالاتری می باشد(36)
در سویه های استافیلوکوک اورئوس می توان جابجایی ژنها بین سویه های مختلف دید(32) در مطالعات Oana Dumitrescu و همکاران هم گزارشهایی مبنی بر جابجایی ژنهای eta و etb بین سویه های مقاوم به آنتی بیوتیک از جمله سویه های MRSA داده شده است که افزایش بیماری زایی را پی داشته است(37). همچنین طی مطالعاتی که D. Grumann و همکاران انجام دادند مشخص شد که بیشتر سویه های استافیلوکوک اورئوس مقاوم به آنتی بیوتیک توانایی بیشتری در بیماری زایی و ایجاد ضایعات وابسته به توکسینهای ترشحی دارند. در تحقیقات انجام شده توسط Kozo Yoneda’ و همکاران هم نشان داده شد که بیشتر سویه های مقاوم به آنتی بیوتیک توانایی بالاتری در بروز ضایعات وابسته به توکسین اکسفولیاتیو دارند(38). این جابجایی های ژنتیکی زمانی بیشتر اهمیت پیدا می کنند که سویه های بیمارستانی MRSA می توانند به جامعه راه پیدا کنند و سویه های موجود در جامعه را نیز به مهاجم تبدیل کنند(39). بررسی های P. Holochova و همکاران هم نشان دهنده قابل گردن بودن ژنهای عامل این توکسین در بین سویه ها می باشد(9). همچنین طی تحقیقات Shamez Ladhani صحت بروز تهاجم بیشتر در سویه های MRSA مورد بررسی قرار گرفته است(8). در بررسی های Roohollah Zarei Koosha و همکاران هم نشان داده شده است که مقاومت به متی سیلین می تواند یک عامل موثر در بروز و بیان ژن های etA و etB و و بدنبال آن ترشح توکسین اگزفولیاتیو باشد(16).
از سویی دیگر طی مطالعات مختلفی که انجام شده شیوع بیش از پیش سویه های مهاجم ترشح کننده توکسین اگزفولیاتیو را می توان مشاهده کرد(40-48)
با توجه به شناسایی به موقع و سریع سویه های استافیلوکوک اورئوس دارای ژنهای تولید کننده توکسینهای خطرناک از جمله توکسین اگزفولیاتیو، تشخیص به موقع و سریع این سویه ها و درمان به موقع آنها از شیوع موارد مهاجم به درون جامعه جلوگیری می کند(49). از طرفی با توجه به بررسی های انجام شده در سالهای اخیر و رشد و نفوذ سویه های استافیلوکوک اورئوس دارای ژنهای مهاجم به جامعه، کنترل آن بیش از پیش حس می شود. از این رو با تشخیص سویه های خطرساز توسط ردیابی ژنهای کد کننده توکسین اگزفولیاتیو خصوصا ژنهای eta و etb توسط روشهای مولکولی مبتنی بر واکنش زنجیره ایی پلیمراز( Polymerase Chain Reaction )PCR می توان از بروز ضایعات پوستی شدید در بیماران بستری شده در بیمارستان که بعضا دارای نقص سیستم ایمنی هستند، جلوگیری کرد.
سوالات و / یا فرضیات پژوهش1. توزیع فراوانی استافیلوکوکهای اورئوس دارای ژن etA در شهر زاهدان چگونه است؟؟؟
2. توزیع فراوانی استافیلوکوکهای اورئوس دارای ژن etB در شهر زاهدان به چه صورت است؟؟؟
3. توزیع فراوانی استافیلوکوکهای اورئوس دارای ژنهای etA وetB چه ارتباطی با استافیلوکوکهای اورئوس مقاوم به متی سیلین در شهر زاهدان دارد؟
هدف کلی طرحتعیین فراوانی ژن های etA, etB در سویه های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین جدا شده از بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان با روش Multiplex PCR
اهداف اختصاصی1. تعیین توزیع فراوانی استافیلوکوکهای اورئوس دارای ژن etA دربیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان
2. تعیین توزیع فراوانی استافیلوکوکهای اورئوس دارای ژن etB در بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان
3. تعیین رابطه بین فراوانی استافیلوکوکهای اورئوس دارای ژنهای etA وetB با استافیلوکوکهای اورئوس مقاوم به متی سیلین در بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان
سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرحمراکز خدمات بهداشتی-درمانی وابسته به دانشگاه علوم پزشکی زاهدان
تعریف واژه های تخصصیسوپر آنتی ژن: زﻣﺎﻧیکﻪ ﺳیﺴﺘﻢ ایﻤﻨی ﺑﺎ یک ﺁﻧﺘی ژن واﺑﺴﺘﻪ ﺑﻪ ﺗیﻤﻮس ﺑﺮﺧﻮرد ﻣی کند ﺗﻨﻬﺎ ﺑﺨﺶ کوچکی از ﻟﻤﻔﻮﺳیﺘﻬﺎیT ﻗﺎدر ﺑﻪ ﺗﺸﺨیﺺ و ﻓﻌﺎل ﺷﺪن هستند . اﻣﺎ ﺗﻌﺪادی ﺁﻧﺘی ژن وﺟﻮد دارﻧﺪ که ﻗﺎدرﻧﺪ ﺑﺨﺶ ﺑﺰرﮔی از ﺟﻤﻌیﺖT ﻟﻤﻔﻮﺳیﺖ را ﻓﻌﺎل کنند(تا٢۵درﺻﺪ). ﺑﻪ ایﻦ آنتی ژﻧﻬﺎ ﺳﻮﭘﺮ ﺁﻧﺘی ژن می گویند.
multiplex PCR: تکنیکی برای همانندسازی مصنوعی DNA که شرایط لازم برای تحقیق برروی ژنوم موجود را فراهم می کند که می توان دو یا چند ژن را بطور همزمان مورد برری قرار داد(34)
نوع مطالعهتوصیفی-تحلیلی
جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند)نمونه های مختلف بالینی( ادرار، خون، زخم، ترشحات مخاط و ...) جمع آوری شده از آزمایشگاه بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان
معیار ورود: میکروبی بودن نمونه های مورد بررسی .
معیار خروج: غیر میکروبی بودن نمونه ها(نمونه های انگلی و .... )
حجم نمونه و روش محاسبه آنطبق مطالعات انجام شده حجم نمونه سویه120تعیین شده است(32)
روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود)نمونه های غیرتصادفی در دسترس
روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود)نمونه های جدا شده ، پس از تشخیص گونه توسط روش های تشخیص میکروبی، جهت تعیین فنوتیپی مقاومت به متی سیلین و هم چنین شناسایی ژنهای etA و etBمورد بررسی قرار می گیرند.(فورم مورد نظر پیوست شده است).
روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود)پس از جمع آوری نمونه از بخشهای مختلف بیمارستان های آموزشی وابسته به دانشگاه علوم پزشکی زاهدان، آنها را بر روی محیطهای بلادآگاد(Merck) حاوی5درصد خون گوسفند کشت داده و کلنیهای شبه به کلنی های استاف را استخراج کرده و بعد از این مرحله، برای تعیین نوع جنس و گونه باکتری از روشهای گرم، کاتالاز، کواگولاز، DNase، تخمیر قند مانیتول استفاده می شود که در نهایت 190نمونه استافیلکوک اورئوس جداسازی خواهد شد(50) سپس برای تایید تست های بیوشیمایی از تست های ژنوتیپی مبنتی بر PCR استفاده خواهد شد. MultiPelex PCR تکنیکی است که در آن می توان چند ژن را به طور هم زمان مورد بررسی قرار داد. در این مطالعه برای MultiPelex PCR دو ست پرایمر طبق رفرنس مورد نظر(32) تعیین شد. که ست اول مربوط به ژن femA و ست دوم مربوط به ژنهای mecA و etA و etB می باشد.
برای یافتن ژن های مورد بررسی ابتدا باید DNA باکتری را استخراج کرد. برای دقت بخشیدن به کار از کیتهای استراج DNA استفاده می شودکه این روش کمی گرانتر اما دقت بالاتری دارد. برای استخراج DNA روشهای متفاوتی وجود دارد روش جوشاندن از مقرون به صرفه ترین روشهاست. اما در مقابل استخراج توسط کیت دارای ضریب خطای بالاتری می باشد. برای استخراج DNA از کیت استخراج ژنوم( No: K-3032 شرکت Bioneer کره جنوبی ) استفاده می شود. ایزوله ها را در محیط (LB) Luria Broth کشت داده وبه مدت 24 ساعت در دمای 37 درجه، انکوبه می کنیم. سپس 1 سی سی از کشت باکتری مورد نظر را در میکروتیوب ریخته و با دور 4500 به مدت 10 دقیقه سانتریفوژ می کنیم. مایع رویی را دور می ریزیم و 100 میکرولیتر G+ Prelysis buffer و 20 میکرولیتر لیزوزیم به رسوب مورد نظر اضافه کرده و خوب مخلوط می کنیم. بعد از این کار در دمای 37 درجه به مدت 30 دقیقه انکوبه می کنیم. سپس 10 میکرولیتر آنزیم ریبوتیناز به آنها اضافه می کنیم و بعد از مخلوط کردن آنها، در دمای 55 درجه به مدت 30 درجه انکوبه می کنیم. سپس مطابق دستور العمل کیت مورد نظر به ترتیب بافر لیز کننده و Precipitation solution ، انتقال به تیوب جدید و اضافه کردن محلول شستشو و Elution buffer مایع حاوی DNA بدست خواهد آمد. به منظور تایید DNA استراج شده از نمونه ها، DNA نمونه های را در اگارز 10درصد الکتروفورز می کنیم. DNA های بدست آمده در دمای -20 درجه برای انجام PCR موقتا ذخیره سازی خواهند شد.(51).

با کمک تکنینک MultiPelex PCR با استفاده از پرایمر (تهیه شده از شرکت تکاپوزیست) bp 132برای ژن femA به بررسی ژنوتیپی استافیلوکوک اورئوس می پردازیم.

تمامی پرایمرها از شرکت تکاپوزیست تهیه می شوند) که بعنوان مارکر تشخیصی ژنتیکی استافیلوکوک اورئوس می باشد، ساخته شده و نمونه ها با روش زنجیره ایی پلیمراز (PCR) مورد بررسی قرار خواهند گرفت و تایید گرفت.
بعد از تعیین جنس و گونه باکتری، با استفاده از روشهای فنوتیپی ژنوتیپی به تعیین استاف اورئوسهای مقاوم به متی سیلین( Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus) MRSA می پردازیم.
در این مطالعه به دلیل بالا بودن حساسیت و ویژگی دو دیسک آنتی بیوتیکی اوگزاسیلین و سفوکسیتین( شرکت MAST انگلستان) در کنار مقرون به صرفه بودن ، از این دو روش برای تعیین فنوتیپی استفاده خواهد شد(31)
در روش دیسک انتشاری ابتدا یک سوسپانسیون باکتری از کشت 12 یا 24ساعته با کدورتی معادل 5/0 مک فارلند تهیه می کنیم و از این سوسپانسیون روی محیط مولر هیلتون(Merck) کشت می دهیم. سپس دیسکهای اوگزاسیلین1 میلی گرم و سفوکسیتین 30میلی گرم را با یک پنس استریل بر روی محیط قرار داده و به مدت 24ساعت آن را داخل انکوباتور قرار میدهیم. در صورتی که قطر هاله ایجاد شده نسبت به دیسک اگزاسیلین بیشتر از 21 میلی متر و نسبت به دیسک سفوکسیتین بیشتر از 13 میلی متر باشد به عنوان به عنوان استاف اورئوس حساس به متی سیلین در نظر گرفته خواهند شد و در صورتی که قطر هاله نسبت به دیسک اگزاسیلین کمتر از 21 میلی متر و نسبت به دیسک سفوکسیتین کمتر از 13 میلی متر باشد، نمونه استاف اورئوس مقاوم به متی سیلین گزارش خواهد شد. این روش ، روش توصیه شده ی انیستیتو استاندارد آزمایشگاه بالینی(National Clinical Laboratory Institute) می باشد. در این روند شناسایی از سویه ATCC33591 به عنوان سویه استاندارد کنترل مثبت و از سویه استاندارد ATCC25923 برای کنترل منفی استفاده خواهد شد(30)
در کنار روش فنوتیپی، روش ژنوتیپی از قدرت تشخیصی بالاتری برخوردار است و به عنوان گلداستاندارد تعیین MRSA ها در کارهای تحقیقی کاربرد دارد.
برای یافتن ژن mecA جهت تعیین MRSA هم به این صورت عمل می شود:
200میکرومول ترکیبات دی اوکسی نوکلئورید تری فسفات، 5میکرولیتر از بافر 10برابر غلیظ شده(100mM Tris-HCl [pH 8.3], 500 mM KCl)، 1.5میلی مول MgC2 ، 20 پیکوکول از پرایمر مورد نظر ، U2.5 هم Taq DNA Polymeras و نسبت 10 به 1000 نانوگرم از DNA الگو. و در نهایت با 50میکرولیتر آب مقطر به مخلوص اضافه می کنیم.
از پرایمر زیر برای ردیابی ژنmecA استفاده خواهد شد:


برای یافتن ژن etA هم از پرایمر زیر استفاده خواهد شد:

برای یافتن ژن etB هم از پرایمر زیر استفاده خواهد شد:


روش تجزیه، تحليل و توصیف داده‌ها (نمونه‌اي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی)با استناد به روشهای آمار توصیفی، یعنی تنظیم جداول فراوانی، رسم نمودار، تعیین شاخص درصد، داده ها پس از ورود به نرم افزار SPSS ، تجزیه و تحلیل خواهند شد.

ملاحظات اخلاقی کدهای دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهشهای علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی:
1-2-3-4-5-7-8-10-11-14-19-20-25-26-27-28-29-30-31
محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنهامشکل تهیه مواد و امکان طولانی شدن دریافت آنها که تا زمان تصویب پروپوزال اقدامات اولیه و هماهنگی با شرکتهای مربوطه صورت می گیرد.
کلمات کلیدیStaphylococcal scalded-skin syndrome/ etA/etB/MRSA
فهرست منابع و مراجع1. Ranjbar R. A review of different methods used for detection of toxins. Journal of Military Medicine. 2008;10(1):1-10.
2. Brewer JD, Hundley MD, Meves A, Hargreaves J, McEvoy MT, Pittelkow MR. Staphylococcal scalded skin syndrome and toxic shock syndrome after tooth extraction. Journal of the American Academy of Dermatology. 2008;59(2):342-6.
3. Macias ES, Pereira FA, Rietkerk W, Safai B. Superantigens in dermatology. Journal of the American Academy of Dermatology. 2011;64(3):455-72; quiz 73-4.
4. Piémont Y, Piémont E, Gérard D. Fluorescence studies of thermal stability of staphylococcal exfoliative toxins A and B. FEMS microbiology letters. 1986;36(2–3):245-9.
5. Ladhani S. Understanding the mechanism of action of the exfoliative toxins of Staphylococcus aureus. FEMS Immunol Med Microbiol. 2003;39(2):181-9.
6. Ladhani S, Cameron J, Chapple DS, Garratt RC, Joannou CL, Evans RW. A novel method for rapid production and purification of exfoliative toxin A of Staphylococcus aureus. FEMS microbiology letters. 2002;212(1):35-9.
7. Grumann D, Nubel U, Broker BM. Staphylococcus aureus toxins--their functions and genetics. Infection, genetics and evolution : journal of molecular epidemiology and evolutionary genetics in infectious diseases. 2014;21:583-92.
8. Ladhani S, Joannou CL, Lochrie DP, Evans RW, Poston SM. Clinical, Microbial, and Biochemical Aspects of the Exfoliative Toxins Causing Staphylococcal Scalded-Skin Syndrome. Clinical Microbiology Reviews. 1999;12(2):224-42.
9. Holochová P, Růžičková V, Dostálová L, Pantůček R, Petráš P, Doškař J. Rapid detection and differentiation of the exfoliative toxin A-producing Staphylococcus aureus strains based on ϕETA prophage polymorphisms. Diagnostic microbiology and infectious disease. 2010;66(3):248-52.
10. Chung JW, Karau MJ, Greenwood-Quaintance KE, Ballard AD, Tilahun A, Khaleghi SR, et al. Superantigen profiling of Staphylococcus aureus infective endocarditis isolates. Diagnostic microbiology and infectious disease. 2014;79(2):119-24.
11. Vancraeynest D, Hermans K, Haesebrouck F. Prevalence of genes encoding exfoliative toxins, leucotoxins and superantigens among high and low virulence rabbit Staphylococcus aureus strains. Veterinary microbiology. 2006;117(2–4):211-8.
12. Hamid Kazemian EGR, Alireza Japoni-nejad, Mohsen Rezazade, Mahsa Tabibnejad. . The frequency of etA etB, tsst-1virulence genes in community associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from Arak University of Medical Sciences. 2012.
13. Tristan A, Ferry T, Durand G, Dauwalder O, Bes M, Lina G, et al. Virulence determinants in community and hospital meticillin-resistant Staphylococcus aureus. The Journal of hospital infection. 2007;65 Suppl 2:105-9.
14. Sakurai S, Suzuki H, Hata T, Yoshizawa Y, Nakayama R, Machida K, et al. A novel positive regulatory element for exfoliative toxin A gene expression in Staphylococcus aureus. Microbiology (Reading, England). 2004;150(Pt 4):945-52.
15. Vath GM, Earhart CA, Rago JV, Kim MH, Bohach GA, Schlievert PM, et al. The Structure of the Superantigen Exfoliative Toxin A Suggests a Novel Regulation as a Serine Protease. Biochemistry. 1997;36(7):1559-66.
16. Koosha RZ, Fooladi AA, Hosseini HM, Aghdam EM. Prevalence of exfoliative toxin A and B genes in Staphylococcus aureus isolated from clinical specimens. Journal of infection and public health. 2014;7(3):177-85.
17. Adesiyun AA, Lenz W, Schaal KP. Exfoliative toxin production by Staphylococcus aureus strains isolated from animals and human beings in Nigeria. Microbiologica. 1991;14(4):357-62.
18. Lee CY, Schmidt JJ, Johnson-Winegar AD, Spero L, Iandolo JJ. Sequence determination and comparison of the exfoliative toxin A and toxin B genes from Staphylococcus aureus. Journal of bacteriology. 1987;169(9):3904-9.
19. Johnson WM, Tyler SD, Ewan EP, Ashton FE, Pollard DR, Rozee KR. Detection of genes for enterotoxins, exfoliative toxins, and toxic shock syndrome toxin 1 in Staphylococcus aureus by the polymerase chain reaction. Journal of Clinical Microbiology. 1991;29(3):426-30.
20. Ito Y, Toda K, Shimazaki M, Nakamura T, Funabashi Yoh M, Morita E. Staphylococcal scalded-skin syndrome in an adult due to methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Journal of Infection and Chemotherapy. 2002;8(3):256-61.
21. Tenover FC. VRSA, VISA, and GISA: The dilemma behind the name game. Clinical Microbiology Newsletter. 2000;22(7):49-53.
22. Quirk M. First VRSA isolate identified in USA. The Lancet Infectious Diseases. 2002;2(9):510.
23. Agnoletti F, Mazzolini E, Bacchin C, Bano L, Berto G, Rigoli R, et al. First reporting of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) ST398 in an industrial rabbit holding and in farm-related people. Veterinary microbiology. 2014;170(1-2):172-7.
24. Taylor AR. Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus Infections. Primary Care: Clinics in Office Practice. 2013;40(3):637-54.
25. Khazaei S, Pourtahmaseby P, Kanani M, Madani SH, Malekianzadeh E. Staphylococcus Aureus Resistance to Vancomycin: A Six Years Survey,(2006-2012) {Farsi}. Medical Journal of Tabriz University of Medical Sciences and Health Services. 2013;35:40-5.
26. Musharrafieh R, Tacchi L, Trujeque J, LaPatra S, Salinas I. Staphylococcus warneri, a resident skin commensal of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) with pathobiont characteristics. Veterinary microbiology. 2014;169(1-2):80-8.
27. Sfeir M, Obeid Y, Eid C, Saliby M, Farra A, Farhat H, et al. Prevalence of Staphylococcus aureus methicillin-sensitive and methicillin-resistant nasal and pharyngeal colonization in outpatients in Lebanon. American journal of infection control. 2014;42(2):160-3.
28. Khalili MB, Moshref M, Sharifi M, Sadeh M, Sazmand A. Prevalence Of Staphylococcus Aureus (SA) And Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA) In Personnel Of Operation Room Of Shahid Sadoughi Hospital, Yazd, Iran Payavard Salamat. 2013;6(5):392-402.
29. Soltani B, Taghavi Ardakani A, Moravveji A, Erami M, Haji Rezaei M, Moniri R, et al. Risk Factors for Methicillin Resistant Staphylococcus aureus Nasal Colonization of Healthy Children. Jundishapur J Microbiol. 2014;7(9):e20025.
30. M R, MR, PA, MG. Diagnostic value of cefoxitin susceptibility test compared with other diagnostic methods of methicillin resistant Staphylococcus aureus Feyz, Journal of Kashan University of Medical Sciences. 2013;17(4):394-9.
31. Rezazadeh M, RYM, Hs, Ghaznavi-Rad E. Comparison of Disk Diffusionand "PCR" methods for determination of Methicillin- resistant Staphylococcus Aureus (MRSA) strains Arak University of Medical Sciences. 2014;17(3):280-9.
32. Mehrotra M, Wang G, Johnson WM. Multiplex PCR for Detection of Genes for Staphylococcus aureus Enterotoxins, Exfoliative Toxins, Toxic Shock Syndrome Toxin 1, and Methicillin Resistance. Journal of Clinical Microbiology. 2000;38(3):1032-5.
33. Daghistani HI, Issa AA, Shehabi AA. Frequency of nasal and wound isolates of Staphylococcus aureus associated with TSST-1 production in Jordanian population. FEMS Immunology and Medical Microbiology. 2000;27(2):95-8.
34. Hwang SY, Kim SH, Jang EJ, Kwon NH, Park YK, Koo HC, et al. Novel multiplex PCR for the detection of the Staphylococcus aureus superantigen and its application to raw meat isolates in Korea. International Journal of Food Microbiology. 2007;117(1):99-105.
35. Sabouni FM, Shima Bahador, Abbas Pourakbari, Babak Sadeghi, Reihaneh Hosseinpour Ashtiani, Mohammad Taghi Haghi Nikmanesh, Bahram Mamishi, Setareh. Virulence Factors of Staphylococcus aureus Isolates in an Iranian Referral Children's Hospital. Osong Public Health and Research Perspectives. 2014;5(2):96-100.
36. Montazeri EA, Khosravi AD, Jolodar A, Ghaderpanah M, Azarpira S. Identification of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) strains isolated from burn patients by multiplex PCR. Burns. (0).
37. Dumitrescu O, Dauwalder O, Gillet Y, Vandenesch F, Etienne J, Lina G, et al. Les infections communautaires à Staphylococcus aureus en pédiatrie : émergence des staphylocoques dorés résistants à la méticilline d’origine communautaire. Revue Francophone des Laboratoires. 2008;2008(407):71-80.
38. Yoneda K, Kusunoki T. Unexpectedly prolonged colonization of exfoliative toxin A (ETA)-producing methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in infants. Journal of Dermatological Science. 1998;16, Supplement 1(0):S194.
39. Lee SC, Lee CW, Shih HJ, Chiou MJ, See LC, Siu LK. Clinical features and risk factors of mortality for bacteremia due to community-onset healthcare-associated methicillin-resistant S. aureus. Diagnostic microbiology and infectious disease. 2013;76(1):86-92.
40. Yamasaki O, Yamaguchi T, Sugai M, Chapuis-Cellier C, Arnaud F, Vandenesch F, et al. Clinical manifestations of staphylococcal scalded-skin syndrome depend on serotypes of exfoliative toxins. Journal of clinical microbiology. 2005;43(4):1890-3.
41. Ladhani S. Recent developments in staphylococcal scalded skin syndrome. Clin Microbiol Infect. 2001;7(6):301-7.
42. Tokajian S, Haddad D, Andraos R, Hashwa F, Araj G. Toxins and Antibiotic Resistance in Staphylococcus aureus Isolated from a Major Hospital in Lebanon. ISRN Microbiology. 2011;2011:812049.
43. Acland KM, Darvay A, Griffin C, Aali SA, Russell-Jones R. Staphylococcal scalded skin syndrome in an adult associated with methicillin-resistant Staphylococcus aureus. The British journal of dermatology. 1999;140(3):518-20.
44. Humphreys H. Role of enterotoxins and toxic shock syndrome toxin in systemic staphylococcus aureus infection. Infectious Diseases Newsletter. 1993;12(3):17-20.
45. Sasahara T, Yoshimura A, Takaoka E, Amagai E, Gomi H, Takahashi N, et al. P14.17 Staphylococcal Scalded Skin Syndrome Outbreak Due to Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus in the Neonatal Care Unit. Journal of Hospital Infection.64:S78.
46. Sato H, Matsumori Y, Tanabe T, Saito H, Shimizu A, Kawano J. A new type of staphylococcal exfoliative toxin from a Staphylococcus aureus strain isolated from a horse with phlegmon. Infect Immun. 1994;62(9):3780-5.
47. Walden A, Harriet H, Alyaqoobi M. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus toxic shock syndrome. Journal of Infection. 2008;56(2):161-2.
48. Jamart S, Denis O, Deplano A, Tragas G, Vandergheynst A, De Bels D, et al. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus Toxic Shock Syndrome. Emerging Infectious Diseases. 2005;11(4):636-7.
49. Oyake S, Oh-i T, Koga M. Staphylococcal scalded skin syndrome developing during burn treatment. J Dermatol. 2001;28(10):557-9.
50. Mradaneh SSSKKA. Antibiotic Resistance Pattern of Staphylococcus aureus Strains Isolated from Personnel of Jahrom Hospitals in 2012. Armaghane-danesh, Yasuj University of Medical Sciences Journal. 2013;18(10).
51. ghorbani Tazhandare S, Imani Fooladi AA, Nourani MR. Prevalence of methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus By Disk Diffusion And Molecular Methods In ICU And Emergency Sections In One Of Educational Hospital Tehran. Urmia Medical Journal. 2013;24(2):110-20.

پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
Multiplex PCR for Detection of Genes forStaphylococcus aureus Enterotoxins, Exfoliative Toxins, Toxic Shock Syndrome Toxin 1, and Methicillin Resistance.pdf1393/11/261494025دانلود
Prevalence of exfoliative toxin A and B genes in Staphylococcus aureus isolated from clinical specimens.pdf1393/11/27731810دانلود
Prevalence of genes encoding exfoliative toxins, leucotoxins and superantigens among high and low virulence rabbit Staphylococcus aureu.pdf1393/11/27137897دانلود
Grant.DR Bokaeian.JPG1394/02/2088771دانلود
Tarh EntA & EntB.doc1394/02/20489984دانلود
Tarh EntA & EntB.eslah shode final.doc1394/05/17534016دانلود
Eslahat tarh.docx1394/05/1716833دانلود
Tarh EntA & EntB.eslah shode final 2.doc1394/06/26535040دانلود