چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 7216 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی موتاسیونهای ژن DHFRدر پلاسمودیوم ویواکس به روش PCR-RFLP ازایزوله های مناطق مالاریا خیز استان سیستان و بلوچستان |
| عنوان لاتین طرح | Investigation of DHFR gene Mutations in Plassmodium vivax by PCR-RFLP on Isolates from malarious areas of Sistan&Baluchestan Province |
| نوع طرح | کاربردی |
| محل اجرای طرح | مدیریت توسعه فناوری سلامت |
| رسته مطالعاتی | مقطعی- توصیفی |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز | 360 |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| هادی میراحمدی | استاد راهنمای اول پایان نامه دانشجویی | اجراء طرح | دکترای تخصصی | hmirahmadi59@gmail.com |
| احمد مهرآوران | مشاور | مشاور طرح | دکترای تخصصی | ahmadmehravaran55@gmail.com |
| مریم رفیع | همکار | اجراء طرح | Maryam1202@yahoo.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | بررسی موتاسیونهای ژن DHFRدر پلاسمودیوم ویواکس به روش PCR-RFLP ازایزوله های مناطق مالاریا خیز استان سیستان و بلوچستان |
| خلاصه طرح به لاتین | Investigation of DHFR gene Mutations in Plassmodium vivax by PCR-RFLP on Isolates from malarious areas of Sistan&Baluchestan Province |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | مالاریا مشکل بهداشتی ۴٠٪جمعیت جهان (حدود۲٫۴میلیاردنفر) محسوب میشود واین بیماری در کشورهای گرمسیری ونیمه گرمسیری واقع در آفریقا –آسیاوامریکای لاتین انتشار دارد. (١)در ایران 2 استان جنوب شرقی شامل سیستان و بلوچستان ٬هرمزگان و همچنین مناطق گرمسیری جنوب کرمان جزو مناطق اندمیک محسوب میشوند٬ بطوری که مجموع جمعیت در مناطق مالاریا خیز جنوب شرق ایران حدود ٦٪جمعیت کشور بوده ودر حالیکه بیشتر از ٧٥٪موارد انتقال مالاریا در همین مناطق روی میدهد (١٫١٣).
مقاومت دارویی بزرگترین چالش درمبارزه علیه مالاریا است.مقاومت دارویی مالاریا در بسیاری از نقاط جهان گسترش یافته ودرمان آنرا بطور فزاینده ای مشکل کرده است(۱).در مناطق مختلف دنیا از داروهای4و8 آمینوکینولین(کلروکین وپریماکین)–کینین –آنتی فولاتها –آرتمیزینین –هالوفنترین وغیره برعلیه مالاریای ویواکس استفاده میشود(١).از گروه ترکیبات دارویی آنتی- فولات میتوان به ترکیبات ممانعت کننده دی هیدرو فولات رودکتاز(DHFR) پریمتامین اشاره کرد. این دارو کلاٴدر مسیربیوسنتز فولات ممانعت ایجاد میکند(١٧ ١٫.(پریمتامین اکنون بصورت ترکیب با سولفادوکسین(S-P)بعنوان دو دارویی هستند که باهم اثر سینرژیک دارند .مقاومت به پریمتامین در انگلهای مالاریا مانند پلاسمودیوم ویواکس منجر به موتاسیونهایی در ژن کد کننده دهیدروفولات ردوکتاز(PVDHFR ) میشود٬ این موتاسیونها در نتیجه تغییرهای آمینو اسیدی در جایگاه فعال آنزیم بوجود می آید که در اثر آن افینیتی دارو کاهش می یابد(٣٫٥). موتاسیونهای ژن Dhfrدر هر دو گونه پلاسمودیوم ویواکس وفالسیپاروم اکنون بعنوان مارکرهایی برای ارزیابی فشار دارویی آنتی فولات در فیلد استفاده میشود(٣). موتاسیونها میتوانند یک –دو-سه وچهارگانه مشاهده شوندکه بستگی به سطح مقاومت دارو دارد(٢و١٤). چون هر دو انگلP.V وP.F دارای همان هدف آنزیمی هستند.پس موتاسیون در ژن DHFR در هر دو انگل P.VوP.F ایجاد مقاومت میکند(٢٫١٢). مقاومت به پریمتامین در ویواکس با دو تا از موتاسیونهای S58R وS117N ژن دهیدروفولات رودکتازPVDHFR))همراه است که با موتاسیونهای S59R وS108N ژنPFDHFR همولوگ هستند که بترتیب اسید آمینه آرژنین بجای سرین وآسپارژین بجای سرین قرار میگیرد٬البته لازم به ذکر است که موتاسیون در کدون 117با جانشینی تره اونین بجای سرین نیز میتواند رخ دهد(٢٫١١). درجه مقاومت به پریمتامین درP.v با اضافه شدن هر موتاسیون در ژن dhfr افزایش می یابد و بطور کسترده انگل های مقاوم در P.v یک موتاسیونS117N/T راحمل میکنند(٣٫٩).اطلاعات بدست امده درinvitro وinvivo روی موتاسیونهای ژن PVDHFR اکنون اشکارا رابطه ما بین مقاومت پریمتامین واین موتاسیونها را ثابت کرده است(٣٫٥٫١٥). نتایج محکمی بدست آمده است که کدون117و 58 مقاومت به پریمتامین را دربردارد وکدون57 سپس به این کدونها اضافه میشود(٥). در مبتلایان بهP.V با ایجاد موتاسیونهای چهار گانه در ژن Pvdhfr (57L-58R-61T-117T)قادر نیستند انگل رابا داروی پریمتامین پاک کنند(٢٫١٦). بنظر میرسدکه آنتی فولاتهای استفاده شده برای درمان P.f (پلاسمودیوم فالسیپاروم ) موتاسیونهای P.V را نیز تحت تاثیر قرار میدهد به این منظور استفاده با دقت آنتی فولاتها درکنترل توسعه مقاومت Cross-Species باید اعمال شود(٢). در تایلند محصولات PCR ژن Pvdhfr 32 نمونه پلاسمودیوم ویواکس از بیماران مورد برسی قرار گرفتند نمونه ها 53%موتاسیون دوگانه و47% موتاسیون سه گانه رادر ژن Pvdhfrرانشان دادند نسبت کاهش انگل در نمونه هایی که موتاسیونهای سه گانه را نشان دادند نسبت به نمونه هایی که موتاسیون دو گانه را نشان دادند پائینتر بود بنابراین موتاسیونهای سه نقطه ای در ژن PVDHFR در موقعیت کدونهای 57- 58 و117 با سطح بالایی از مقاومت S-P در پلاسمودیوم ویواکس همراه میباشد (٥). موتاسیونهای احتمالی دیگری نیز میتوانند در ژن Pvdhfrبروز یابند که در مقاومت علیه پریمتامین شرکت داشته باشندکه هنوز هم تحت مطالعه میباشند(٣). موتاسیون نوظهور در موقعیت کدون 33L فقط در 4تا از 9 نمونه ماداگاسکار و Comros landمشاهده شد٬ چون داروهای ضد مالاریایی بطور گسترده در این نواحی استفاده میشوند موتاسیون در کدون 33 ممکن است ارتباطی با مقاومت دارویی نداشته باشداما بیشتر منعکس کننده منبع جغرافیایی ایزوله های P.Vباشد(٥٫١٢). موتاسیون درکدون 33L نقش کمی درمقاومت به پریمتامین دارد(١٥). آنالیز هایinvitro آشکار کرده است که موتاسیون نوظهور در کدون T61M یک فاکتورمهم شرکت کننده در مهار ژن DHFRبوسیله پریمتامین است موتاسیونهای سه گانه در ژن دهیدروفولات ردوکتاز(57L+58R+117T)270 برابر مقاومت به پریمتامین رانشان داد درحالیکه موتاسیونهای چهارگانه در این ژن(57L+58R+61M+117T) مقاومت به پریمتامین را بیش از 500 برابرنشان داد(٩). طبق مطالعه ایی که در کشور هند انجام شد نمونه هایی پلاسمودیوم ویواکس که از نواحی مختلف جغرافیایی قاره هند جمع آوری شده بود سکانس شدند و این سکانسها با نمونه سکانس Wildtype(X98123) مقایسه شدند اکثریت ایزوله های موتانت موتاسیونهای دوگانه را درموقعیت کدونهای 58R و 117N نشان دادند که با مقاومت پریمتامین ارتباط دارد. اما فقط (19% ) نمونه ها موتاسیون های دوبل (دوگانه)را در کدونهای 57Lو 58Rنشان دادند، دو تا از ایزوله ها موتاسیونهای چهارگانه (57L+58R+61M+117T) رانشان دادند(٧). در سریلانکا S-P(سولفادوکسین- پریمتامین) به ندرت برای درمان پلاسمودیوم ویواکس استفاده میشود ، فراوانی و تنوع بالای موتاسیونهای Pvdhfr غیر منتظره بوده و نشان داد که علیرغم سطح پائین فشار دارویS-P ظهور مقاومت دارویی وجود دارد(٨). در اندونزی آللی که موتاسیونهای Quadruple 57L+58R+61M+117T))رانشان داده بود باخطر بالایی از نقص درمانی همراه بود(٩). مطالعات انجام شده بوسیله Hastingsو Sibleyنشان داد که موتاسیون منفرد در کدون117مقدار IC50 برای پریمتامین را بیشتر از ٨٠ برابرافزایش داد ودر شرایط همراهی با موتاسیون صورت گرفته در کدون 58 این دوکدون بیش از ٤٠٠برابرمقاومت به پریمتامین را ایجادمیکند(١٠). با توجه به موارد مذکور٬ مطالعات بیشتری در آینده مورد نیاز میباشد تا ارتباط مابین موتاسیونهای نقطه ای و مقاومت پریمتامین در پلاسمودیوم ویواکس روشن شود. درواقع ارتباط احتمالی بیشتری ما بین موتاسیونهای نقطه ای و مقاومت پریمتامین وجود دارد و مطالعات بر پلی مورفیسم وسیع در سکانس ژنPvdhfr اشاره دارد(١٢).در موردضرورت بکار گیری روشهای مولکولی آنچه باید از بیماران موجود در منطقه به مرکز تحقیقاتی برسد مقدار جزئی از خون محتوی انگل پلاسمودیوم میباشد که میتوان از سر انگشت بیماران اقدام به خون گیری نموده وبا توجه به مقدار جزئی خون میتوان آن را روی تکه ای از کاغذ صافی گرفته و پس از ثبت مشخصات بیمارآن را توسط پست یا سایرعوامل به آزمایشگاه مولکولی در هر نقطه از کشور وحتی دنیا رساندبه این ترتیب چندین مشکل و معضل موجود در روشهای قبلی از جمله نیاز به در اختیاربودن بیمار برای مدت طولانی(28روز)٬نیاز به گرفتن خون زیاد،راه اندازی امکانات کشت پلاسمودیوم وغیره تماما مرتفع شده وبه این ترتیب میتوان مناطق وسیعتری را با تعداد نمونه بیشتر تحت بررسی مقاومت دارویی قرار داده ودر واقع اپیدمیولوژی مولکولی مالاریا و مقاومت دارویی را درمنطقه موردنظر بطور مستمرتعیین واز نتایج آن استفاده کرد٬ با عنایت به مطالب فوق به نظر میرسد در مجموع روشهای مولکولی PCR (NESTED-RFLP,…)میتوانند بعنوان روش انتخابی برای انواع مطالعات مالاریا از جمله در مطالعات تعیین وضعیت مقاومت دارویی بکار رود(٦). تکنیک PCR–RFLP مزایای زیادی در مقایسه با دیگر تکنیکهای مولکولی دارد : قدرت ،سرعت ،سادگی،قابل تجدید بودن ، هزینه نسبتا کم واستفاده از موادغیر رادیو اکتیو از مزایای این روش میباشد(٤).روش PCR-RFLPبرای ردیابی موتاسیونها روشی عملی-سودمند وساده میباشدومیتوان آنرادر اغلب آزمایشگاههای تحقیقاتی در کشورهای اندمیک مالاریای پلاسمودیوم ویواکس بکار برد(٥و٤ ). با توجه به بررسی متون وبیان مسئله میتوان گفت که در کشورهایی که فنسیدار (S-P)به میزان زیادی برای درمان پلاسمودیوم فالسیپاروم بکار میرود درجات نسبتا بالایی از مقاومت به این دارو در پلاسمودیوم ویواکس نیز ظاهر شده است لذا در چنین موقعی ودر صورت همزیست بودن (Coexist)این دو انگل باهم٬ویا بطور ذاتی٬ پلاسمودیوم ویواکس نیزبا بروز دادن موتاسیونهایی در خطر مقاومت به این داروقرار خواهد گرفت(٢٫١٢٫١٧). در کشورما نیزداروی فنسیداربعنوان خط دوم درمان مالاریای فالسیپاروم بکار میرود. (١٨ ). لذادر چنین شرایطی P.Vمیتواند درمعرض فشار دارویی ناشی از مصرف S-Pبرعلیه پلاسمودیوم فالسیپاروم قرار گیرد. از این رو نمایان سازی این موتاسیونها در ایزوله های پلاسمودیوم ویواکس که از مناطق مختلف کشور جمع آوری میشوند در مانیتورینگ داروهای ضد مالاریا همچون (S-P) وهمچنین الگوی مقاومت دارویی در این انگل مفید خواهد بود٬ لذا در چنین شرایطی ما تصمیم گرفتیم که موقعیت های موتاسیون روی ژن Pvdhfr و اثر آن روی مقاومت دارویی S-P رابه روش مولکولی مورد مطالعه قرار بدهیم ونقاطی که بیشتر تحت تاثیر موتاسیون قرار میگیرد موتاسیون نوظهورکدون 61M به همراه کدونهای57L+58R+117T)) ژن دهیدرو فولات ردوکتازپلاسمودیوم ویواکس را از نظرفراوانی وتائید موتاسیون درایزوله های پلاسمودیوم ویواکس مناطق مختلف کشورموردمطالعه قرار دهیم، این اهداف بعد از نمونه برداری از شهرهای مالاریا خیز جنوب کشور وبدست آوردن نمونه های مثبتDNA انگل پلاسمودیوم ویواکس به روش مولکولی مورد بررسی قرار خواهد گرفت. |
| مشکل جاری که سیاست گزار با آن مواجه است کدام است؟ | |
| محل اول بکارگیری نتایج تحقیق | |
| پیشنهاد اول نحوه کاربرد | |
| چارچوب و فلسفه پژوهش و پارادایم | |
| روش های موجود کدامها هستند؟ | |
| منافع و مضرات روشهای موجود کدامند؟ | |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | 1- فراوانی موتاسیون در کدون57 ژن Pvdhfrدر تعدادی از ایزوله های پلاسمودیوم ویواکس مناطق مالاریا خیز استان سیستان و بلوچستان چقدر است؟
2- فراوانی موتاسیون در کدون58 ژن Pvdhfr در تعدادی از ایزوله های پلاسمودیوم ویواکس مناطق مالاریا خیزاستان سیستان و بلوچستانچقدر است؟ 3- فراوانی موتاسیون در کدون61 ژن Pvdhfr در تعدادی از ایزوله های پلاسمودیوم ویواکس مناطق مالاریا خیزاستان سیستان و بلوچستانچقدر است؟ 4- فراوانی موتاسیون در کدون117 ژن Pvdhfr در تعدادی از ایزوله های پلاسمودیوم ویواکس مناطق مالاریا خیز استان سیستان و بلوچستان چقدر است؟ |
| هدف کلی طرح | تعیین موتاسیونهای ژن DHFRدر پلاسمودیوم ویواکس به روش PCR-RFLP از ایزوله های مناطق مالاریا خیزاستان سیستان و بلوچستان |
| محل دوم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| پیشنهاد دوم نحوه کاربرد | |
| اهداف اختصاصی | 1-تعیین فراوانی موتاسیون نقطه ای درجایگاه کدون57 ژن PVDHFRدرتعدادی از ایزوله های پلاسمودیوم ویواکس ازمناطق مالاریا خیز استان سیستان و بلوچستان
2--تعیین فراوانی موتاسیون نقطه ای درجایگاه کدون58 ژن PVDHFR در تعدادی از ایزوله های پلاسمودیوم ویواکس از مناطق مالاریا خیز استان سیستان و بلوچستان 3-تعیین فراوانی موتاسیون نقطه ای درجایگاه کدون61 ژن PVDHFR درتعدادی از ایزوله های پلاسمودیوم ویواکس از مناطق مالاریا خیز استان سیستان و بلوچستان 4- تعیین فراوانی موتاسیون نقطه ای درجایگاه کدون117 ژن PVDHFRدرتعدادی از ایزوله های پلاسمودیوم ویواکس ازمناطق مالاریا خیز استان سیستان و بلوچستان |
| چرا پیام تحقیق شما حلال مشکل جاری است؟ | |
| پیام تحقیق شما چه منافعی از نظر هزینه، کارایی و بهره وری برای مدیر دارد؟ | |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | بکار گیری نتایج حاصله در جهت تدوین پروتکل درمانی مالاریای ویواکس در سطح کشور |
| محل سوم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| اهداف كاربردی | |
| پیشنهاد سوم نحوه کاربرد | |
| تعریف واژه های تخصصی | تک یاخته های بیماریزای خون Plasmodium vivax:P.v
Plasmodium falciparum:P.f دهیدرو فولات ردوکتاز DHFR سولفادوکسین- پریمتامین S-P RFLP is a technique in which organism may by differentiated by analyse of patterns derived from cleavage of their DNA RFLP(Restriction fragment length polymorphism) |
| برای اجرای راه حل پیشنهادی شما چه موانع و حمایتهایی وجود دارند؟ | |
| نوع مطالعه | توصیفی- مقطعی |
| محل چهارم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| پیشنهاد چهارم نحوه کاربرد | |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | مراجعه کنندگان به درمانگاههای روستایی و مراکز درمانی شهری مناطق مالاریا خیز استان سیستان بلوچستان که ابتلاشان به پلاسمودیوم ویواکس طی آزمایش اولیه به اثبات رسیده است تحت مطالعه خواهد گرفت |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | ٥٠نفر از بیماران مراجعه کننده به درمانگاههای روستایی و مراکز درمانی شهری مناطق مالاریا خیز استان سیستان بلوچستان |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | 5 میلی لیتراز خون کسانی که در آزمایش اولیه میکروسکوپی ابتلاشان به پلاسمودیوم ویواکس تائید شده است را در لوله های حاوی EDTAریخته وپس از ثبت مشخصات با حفظ زنجیره سرما به آزمایشگاه مربوطه منتقل مینمائیم |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | 1.روش میکروسکوپی تهیه ی لام از فرد مشکوک 2.روش مولکولی PCR – RFLP |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | تعداد ٥٠نفر از مراجعه کنندگان به درمانگاههای روستایی و مراکز درمانی شهری مناطق مالاریا خیز استان سیستان بلوچستان که ابتلاشان به پلاسمودیوم ویواکس طی آزمایش اولیه به اثبات رسیده است تحت مطالعه خواهد گرفت.
١-جمع آوری نمونه: 5 میلی لیتراز خون کسانی که در آزمایش اولیه میکروسکوپی ابتلاشان به پلاسمودیوم ویواکس تائید شده است را در لوله های حاوی EDTAریخته وپس از ثبت مشخصات با حفظ زنجیره سرما به آزمایشگاه مربوطه منتقل مینمائیم ۲-بررسی میکرو سکوپی نمونه های جمع آوری شده: ٢ـ۱-روش مستقیم میکروسکوپی: از نمونه های خون روی لام گسترش ضخیم و نازک تهیه کرده بعد میگذاریم تا خشک شود گسترش نازک را با متانول فیکس کرده ولی کسترش ضخیم نیازی به فیکس ندارد٬بعد با استفاده از رنگهای گروه رومانوفسکی شامل گیمسا –ریت –لیشمن –فیلد وغیره میتوانیم لام را رنگ آمیزی بکنیم ٬در اینجا با استفاده از رنگ گیمسا به مقدار لامهایمان رنگ تهیه میکنیم. ازمحلول غلیظ گیمسا به مقدار ٢-١قطره برای هر میلی لیتر اب مقطر خنثی استفاده میکنیم . محلول فوق را به مدت ٣٠-٢٠دقیقه بر روی لام حاوی گسترش ضخبم و نازک ریخته پس از مدتی با آب مقطر خنثی شستشو داده وپس از خشک شدن با استفاده از روغن ایمرسیون (١٠٠x) به جستجوی انگل می پردازیم . ٣-انجام مراحل مولکولی : ٣-١-استخراج DNAپلاسمودیوم ویواکس از نمونه هاDNA: ژنومیک از یک میلی لیتر خون مبتلایان به P.V با استفاده از روش پروتئینازK٫SDS٫CTAB استخراج میشود(١٩) . ٣-٢-مرحله PCR نمونه:ازپرایمرها برای تکثیر قطعه ژنی Pvdhfr استفاده میکنیم که با استفاده از سکانس ژنPvdhfr-ts طراحی شده است Gen Bank accession no.x98123) )(٣٫٥). در دور اول واکنش تمام ژن Pvdhfr-ts)) bp 1872با استفاده از جفت پرایمرهای: VDT-OF(5-ATGGAGGACCTTTCAGATGTATTTGACATT-3) OR(5-GGCGGCCATCTCCATGGTTATTTTATCGTG-3) - VDT بکمک آنزیم TaqDNA polymerase از طریق PCR ( در میکرو تیوب حاوی پرایمرآنزیم –بافر dNTP وDNA )مورد تکثیرقرار میدهیم وسپس محصول این واکنش را برای دور دوم تکثیر مرحلهnested)) یعنی611bp از711bp ژنPVdhfr با استفاده از جفت پرایمرهای: VDT-OF٬ VDT NR:( 5-TCACACGGGTAGGCGCCGTTGATCCTCGTG-3) مورد استفاده قرار میدهیم.(٥) لازم به ذکر است که بخاطر این که آنزیم AluIدرروی قطعه 611bp چندین جایگاه برش دارد ونمیتوان موقعیت کدون 58 راروی این قطعه مشخص کرد بهمین خاطریک قطعه238bp را ازروی محصول دور اول واکنش برای رد یابی موتانت کدون 58 با استفاده ازجفت پرایمر: VDT-OF&VDF-NR58 (5-GGTACCTCTCCCTCTTCCACTTTAGCTTCT-3) تکثیرمیدهیم.(٥)برای ردیابی موقعیت کدون 61 ما باید ازروی محصول اول واکنش با استفاده ازجفت پرایمرهای: (3VDF13NF(5-GACCTTTCAGATGTATTTGACATTTACGGC- وVDF-NR58 یک قطعه 232bp را تکثیر وبا استفاده از آنزیم TSP451جایگاه موتان را ردیابی کنیم (٣٫٥). قطعات ژن تکثیر یافته را بر روی ژل اگاروز برده وپس از الکتروفورزبا اتیدیوم بروماید رنگ آمیزی نموده وسپس زیر UV مشاهده میکنیم (٥) . منشای پرایمرها از مطالعات قبلی الگو برداری شده است از آب مقطر بعنوان کنترل منفی و از ژن های موتان یا وایلدPvdhfr کلون شده میتوان به عنوان کنترل مثبت استفاده کرد. 4-3:مرحله RFLP : برای ردیابی موتاسیونهای مورد بررسی ژن PVdhfr آنزیمهای محدود الاثرذیل: 1-XmnI: برای ردیابی موتاسیون در کدون57 2- :AluI برای ردیابی موتاسیون در کدون 58 3-Tsp451:برای ردیابی موتاسیون در کدون 61 4- :PvuIIبرای ردیابی موتاسیون در کدون117 بکار میروند. (5و4و3). این آنزیمها را بر روی قطعات PCR (611bp-238bp-232bp)اضافه کرده و مدت ٣ساعت در 37درجه سانتیگراد انکوبه میکنیم(٣و٥). قطعات مورد نظر برایRFLP (611bp&238bp&232bp) میباشدلازم به ذکر است که آنزیم AluI روی قطعه238bp اضافه میشود(٥). وآنزیم TSP451روی قطعه 232bp اضافه میشود(٣). 5-3: الکتروفورزبرروی ژل آگاروز انجام میشودوسپس ژل با اتیدیوم برومایدمورد رنگ آمیزی قرار میگیرد٬ باندها بوسیله Ultraviolet transilluminationآشکار میشود(٤٫٥ ). با برسی برش و عدم برش وبررسی تعداد و اندازه باندها روی قطعات مورد نظر نقاط موتاسیون وWildمشخص خواهد شد. |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | داده ها برای آنالیزهای آماری با نرم افزارهای SPSS و STATA یا EPILNTO با استفاده از آزمون کای – اسکوئر با سطح اطمینان 95 درصد مورد تجزیه و تحلیل توصیفی قرار می گیرد. |
| ملاحظات اخلاقی | با کد های ( 1، 2، 3، 4، 5، 7، 10، 11، 12، 13، 14، 15، 16، 17، 18، 19، 20، 21، 22، 23، 25، 26، 27، 28، 29، 30 و 31) همچنین در این پژوهش کدهای اخلاقی زیر از دفتر چه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران راهنمای عمومی با کد های (1، 2، 3، 4، 5، 6، 7، 8، 9، 10 ، 11 و 12) |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | 1- یکی دیگر از منابع خطا، خطای ابزار می باشد. فقط از دستگاههایی استفاده خواهد شد که قبلا توسط کارشناسان بخش کالیبره و استاندارد شده باشند(روایی آنها مورد تایید باشد).
2- مشکل در حصول تعداد نمونه مثبت در مدت زمان پیش بینی شده که سعی می شود با مسافرت به مناطق اندمیک و جمع آوری نمونه از افراد در معرض خطر نمونه های آلوده به تعداد کافی دست آید. 3- مشکلات احتمالی در زمینه تهیه مواد مولکولی 4- احتمال ناکار آمد شدن نمونه های خونی جمع آوری شده که بدین منظور نمونه های جمع آوری شده میبایست در شرایط مناسب و سریع جهت آزمایش به آزمایشگاه منتقل و آزمایش می شوند. |
| کلمات کلیدی | هیدروفولات ردوکتاز-سیستان و بلوچستان - پلاسمودیوم ویواکس |
| فهرست منابع و مراجع | 1-دکترحامدی. یعقوب:مقاومت دارویی در ایران،مجله دانشگاه علوم پزشکی هرمزگان،سال دهم،شماره دوم،صص99-93 2-Mohammad Tauqeer Alam,1 Hema Bora,1 Praveen K. Bharti,2 Muheet A. Saifi,3 Manoj K. Das,4 Vas Dev,5 Ashwani Kumar,6 Neeru Singh,2 Aditya P. Dash,7 Brahmananda Das,8 Wajihullah,3 and Yagya D. Sharma: Similar Trends of Pyrimethamine Resistance-Associated Mutations in Plasmodium vivax and P. falciparum. Antimicrob Agents Chemother. 2007 March; 51(3): 857–863. 3-Imwong, M., Pukrittakayamee, S., Renia, L., Letourneur, F., Charlieu, J.P., Leartsakulpanich, U., Looareesuwan, S., White, N.J., Snounou, G., 2003. Novel point mutations in the N.J., Snounou, G., 2003. Novel point mutations in the dihydrofolate reductase gene of Plasmodium vivax: evidence for sequential selection by drug pressure. Antimicrob. Agents.47:1514-1521 4- Tahar, R., Eldin de Pécoulas, P., Mazabraud, A., Basco, L.K., 1998. Plasmodium vivax: rapid detection by polymerase chainreaction and restriction fragment length polymorphism of the key mutation in dihydrofolate reductase-thymidylate synthasegene associated with pyrimethamine resistance. 89,343-346 5-Poirriez, J., White, N.J., Snounou, G., 2001. Association of genetic mutations in Plasmodium vivax dhfr with resistance to sulfadoxine-pyrimethamine: geographical and clinical correlates. Antimicrob. Agents Chemother. 45, 3122–3127 6-Eskandarian.A.A,Nahrevanian.H:1384.Malarialogy and Malaria Parasites,98-109 7-Suminder Kaur, Surendra K. Prajapati, Kavitha Kalyanaraman, Asif Mohmmed, Hema Joshi and Virander S. Chauhan,2006.Plasmodium vivax dihydrofolate reductase point mutations from the Indian subcontinent.acta tropica.97:174-180 8-Mette L Schousboe1, Rupika S Rajakaruna2, Ali Salanti Hapuarachchige C Hapuarachchi3, Gawrie NL Galappaththy4, Ib C Bygbjerg1,Priyanie H Amerasinghe5, Flemming Konradsen1 and Michael Alifrangis.2007. Island-wide diversity in single nucleotide polymorphisms of the Plasmodium vivax dihydrofolate reductase and dihydropteroate synthetase genes in Sri Lanka. Journal malaria.6:28(1-6) 9-. Hastings, M. D., K. M. Porter, J. D. Maguire, I. Susanti, W. Kania, M. J. Bangs, C. H. Sibley, and J. K. Baird. 2004. Dihydrofolate reductase mutations in Plasmodium vivax from Indonesia and therapeutic response to sulfadoxine plus pyrimethamine. J. Infect. Dis. 189:744–750. 10-Hstings MD,Sibley CH. Pyrimethamine and WR99210 exert opposing selection on dihydrofolate reductase from Plasmodium vivax. Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 October 1; 99(20): 13137–13141. 11-philippe Eldin pecoulas,K.basco,Rachida tahar,taoufik Ouatas,Andre Mazabraud,1998.Analysis of the plasmodium vivax dihydrofolat reductase-thymidylate synthase gene sequrnce.Gene 211:177-18 12-Eldin de Pécoulas, P., Tahar, R., Ouatas, T., Mazabraud, A., Basco, L.K., 1998b. Sequence variations in the Plasmodium vivax dihydrofolate reductase-thymidylate synthase gene and their relationship with pyrimethamine resistance. Mol. Biochem parasitology.92:265-273 13-Beljaev AE.the malaria situation in the WHO eastern Mediterranean region.Med parasitol(mosk).2000;2:12-15 14-Matthews DA, Alden RA, Bolin JT, Freer ST, Hamlin R, Xuong N, Kraut J, Poe M, Williams M, Hoogsteen K.1977. Dihydrofolate reductase: x-ray structure of the binary complex with methotrexate.science 197:452-455 15-Leartsakulpanich U, Imwong M, Pukrittayakamee S, White NJ, Snounou G, Sirawaraporn W, Yuthavong Y.2002. Molecular characterization of dihydrofolate reductase in relation to antifolate resistancein Plasmodium vivax.mol.biochem.parasitol.119:63-73 16-Tjitra E, Baker J, Suprianto S, Cheng Q, Anstey NM..2002Therapeutic efficacies of artesunate-sulfadoxine-pyrimethamine and chloroquine-.sulfadoxine-pyrimethamine in vivax malaria pilot studies: relationship to Plasmodiumvivax dhfr mutations.antimicrob.agents chemoter.46:3947-3953 17-Gregson A, Plowe CV.2005. Mechanisms of resistance of malaria parasites to antifolates.pharmacol.Rev.57:117-145 18-Edrissian GH, Afshar A, Sayedzadeh A, Mohsseni G, Satvat MT. Assessment of the respons in vivo and in vitro of Plasmodium falciparum to sulfadoxine-pyrimethamine in the malarious areas of Iran. J Trop Med Hyg 1993; 96:237–40. 19-Dick van sollingen et al.1994.DNA fingerprinting of mycobacterium tuberculosis. Methods enzyme.235:196-205 |
| معرفی پژوهش/ اهداف پژوهش (عین عبارت هدف پروپوزال را کپی نکنید. بلکه با جملاتی که برای مردم قابل فهم باشد (برای سواد حدود پنجم ابتدایی )هدف را برای شرکت کنندگان توضیح دهید.) در تمام این متن در صورتیکه شرکت کننده کودک یا فرد فاقد ظرفیت تصمیم گیری است باید مواردیکه منظور از "من"، فرد شرکت کننده بوده است به "کودک" یا "فرد تحت سرپرستی من" اصلاح شود و مواردیکه منظور از "من"، رضایت دهنده است به من به عنوان "ولی" یا "قیم قانونی" اصلاح شود. | |
| خون گیری (آیا طرح شما نیاز به خونگیری دارد یا خیر) | |
| نحوه همکاری/ مزایا ی طرح (در این بخش برای شرکت کنندگان به زبان ساده توضیح دهید که: چه مداخله ای بر روی آنها صورت میگیرد. چه اقدامات پاراکلینیکی بر روی آنها انجام میشود. چه نمونه ای و با چه حجمی از آنها میگیرید در این مدت چند نوبت مراجعه باید داشته باشند و به چه فواصلی چه اقداماتی را در پیگیری آنها انجام میدهید. (حتی میتوانید سود بالقوه ای که شرکت کنندگان میتوانند از شرکت در این پژوهش ببرند بنویسید. این سود میتواند شرح احتمال درمان یا تشخیص بهتر بیماریشان، دریافت خدمات سلامت رایگان و یا پرداخت مشوق مالی در ازای جبران همکاریشان باشد) | |
| عوارض جانبی (منظور عوارض و میزان احتمال بروز آنها در این مطالعه است) | |
| جبران عوارض احتمالی (برای آنکه شرکت کننده بتواند ارزیابی مناسبی از سود و زیان شرکت در پژوهش شما داشته باشد لازم است بتواند سود و زیان مداخلات معمول و مداخلات این پژوهش را مقایسه کند. به عنوان مثال میزان موفقیت و میزان عوارض هریک را مقایسه کند.) - او باید بداند كه اگر در حين و بعد از انجام پژوهش هم هر مشكلي اعم از جسمي و روحي به علت شرکت در اين پژوهش برایش پيش آمد درمان عوارض، و هزينههاي آن و غرامت مربوطه بر عهده مجري خواهد بود. | |
| هزینه های مربوط به انجام طرح تحقیقاتی (تمام مداخلات پژوهشی باید برای بیمار رایگان باشد و بیمار بداند شامل چه مواردی هستند. ) | |
| روش های جایگزین در صورت عدم تمایل به شرکت در مطالعه چه روش های درمانی برای بیمار ارائه خواهد شد | |
| محرمانه بودن بیمار باید بداندکه دست اندر كاران اين پژوهش، كليه اطلاعات مربوط به او را نزد خود به صورت محرمانه نگهداشته و فقط اجازه دارند نتايج كلي و گروهي اين پژوهش را بدون ذکر نام و مشخصات بیمار منتشر كنند. و كميته اخلاق در پژوهش با هدف نظارت بر رعایت حقوق وی ميتواند به اطلاعات ایشان دسترسي داشته باشد. | |
| پاسخگویی به پرسش ها در این بخش نام و اطلاعات دسترسی فردی از عوامل پژوهش را که بتواند اطلاعات صحیح و کافی در اختیار شرکت کنندگان قرار دهند و در مورد عوارض و نگرانیها راهنمایی لازم را ارائه دهند ذکر شود | |
| حق نپذیرفتن یا انصراف بیمار باید بداند که شرکت اودر اين پژوهش کاملاً داوطلبانه است و مجبور به شرکت در اين پژوهش نيست و در صورت عدم شرکت از مراقبتهاي معمول تشخيصي و درماني محروم نخواهد شد او باید بداند كه حتي پس از موافقت با شركت در پژوهش ميتواند هر وقت كه بخواهد، پس از اطلاع به مجري، از پژوهش خارج شود و خروج اواز پژوهش باعث محرومیت از دریافت خدمات درمانی معمول برای اونخواهد شد. | |
| رضایت او باید بداند که اگر اشکال يا اعتراضي نسبت به دست اندركاران يا روند پژوهش دارد مي تواند با كميته اخلاق در پژوهش دانشگاه تماس گرفته و مشکل خود را به صورت شفاهي يا كتبي مطرح نمايد. در انتهای فرم قید گردد : اينجانب موارد فوقالذکر را خواندم و فهميدم و بر اساس آن رضايت آگاهانه خود را براي شركت در اين پژوهش اعلام ميکنم. اينجانب ……………… خود را ملزم به اجراي تعهدات مربوط به مجري در مفاد فوق دانسته و متعهد ميگردم در تأمين حقوق و ايمني شركت كننده در اين پژوهش تلاش نمايم | |
| تخصص | |
| عنوان پیام پژوهشی ( حداکثر 20 کلمه) | |
| پیام کلیدی (حداکثر 80 کلمه) | |
| متن پیام پژوهشی ( حداکثر240 کلمه) | |
| اهمیت موضوع(50 کلمه) | |
| مهمترین نتایج طرح به زبان غیر تخصصی(70 کلمه) | |
| موارد کاربرد نتایج طرح (80 کلمه) | |
| تأثیرات و کاربردها | |
| محدودیتهای شواهد چه بودند؟ | |
| آیا این خبر میتواند از نظر اجتماعی، سیاسی، فرهنگی، بهداشتی، ارزش های دینی و قوانین سازمان غذا و دارو، تبعاتی داشتهباشد؟ | |
| در صورتی که این طرح منتج به مقاله شده است لینک مقاله درج شود | |
| منابع و مراجع : حداکثر چهار مرجع اصلی استفاده شده در طرح تحقیقاتی مورد نظر را ذکر نمایید | |
| پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی | به پرسشنامه نیاز نیست |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| 111 001.jpg | 1393/11/17 | 478318 | دانلود |
| 111 002.jpg | 1393/11/17 | 505516 | دانلود |
| 111 003.jpg | 1393/11/17 | 441561 | دانلود |
| 111 004.jpg | 1393/11/17 | 371123 | دانلود |
| 111 005.jpg | 1393/11/17 | 451848 | دانلود |
| propozal.docx | 1393/11/19 | 117181 | دانلود |
| final recheck.docx | 1393/12/13 | 200544 | دانلود |
| recheck - 2.docx | 1393/12/16 | 132790 | دانلود |
| nahaee.docx | 1393/12/18 | 109784 | دانلود |
| Final recheck(94.7.18).docx | 1394/07/18 | 201008 | دانلود |
| proposal eslah shode komite akhlagh.docx | 1394/07/18 | 198591 | دانلود |
