چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 7217 |
| عنوان فارسی طرح | شناسایی گونه ها و تایپ ملکولی لیشمانیا در افراد مبتلا به لیشمانیازیس جلدی با هدف قراردادن ژنهایITS-rDNA و سایتوکرومb در شهرستان زاهدان |
| عنوان لاتین طرح | Detection of species and molecular typing of leishmania in suspected patients of cutaneous leishmaniasis by targeting ITS-rDNA and cytochrome b in zahedan district |
| نوع طرح | کاربردی |
| محل اجرای طرح | مدیریت توسعه فناوری سلامت |
| رسته مطالعاتی | توصیفی- مقطعی |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز | 365 |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| احمد مهرآوران | مجری اول | استاد راهنما | دکترای تخصصی | ahmadmehravaran55@gmail.com |
| هادی میراحمدی | مجری دوم | استاد راهنما | دکترای تخصصی | hmirahmadi59@gmail.com |
| حسین انصاری | مشاور | مشاور آمار | دکترای تخصصی | smithepi@gmail.com |
| نسرین رضایی | همکار | nasrinrezaee1723@gmail.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | شناسایی گونه ها و تایپ ملکولی لیشمانیا در افراد مبتلا به لیشمانیازیس جلدی با هدف قراردادن ژنهایITS-rDNA و سایتوکرومb در شهرستان زاهدان |
| خلاصه طرح به لاتین | Detection of species and molecular typing of leishmania in suspected patients of cutaneous leishmaniasis by targeting ITS-rDNA and cytochrome b in zahedan district |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | لیشمانیازیس یکی از بیماریهای مشترک بین انسان وحیوان میباشدکه به سه شکل جلدی (سالک)،احشایی (کالازار ) وجلدی مخاطی بروزمیکند .عامل لیشمانیازیس جلدی تک یاخته ای ازگروه تاژکداران ، خانواده تریپانوزماتیده وجنس لیشمانیا بوده که به وسیله گزش پشه ناقل ازخانواده پسیکودیده،زیرخانواده فلبوتومینه ازمخازن حیوانی ( عمدتاًجوندگان وگوشتخواران اهلی و وحشی) وانسانی به فردسالم منتقل می شود وعلائم آن به صورت زخمهایی است که میتواندتایکسال روی بدن (صورت،دست،پاو...) باقی بمانند (1و2). لیشمانیازیس جلدی (سالک) یکی از ده بیماری مهم انگلی مناطق گرمسیری دنیا است که سازمان جهانی بهداشت مطالعه و انجام تحقیقات درباره جنبه های مختلف آنرا توصیه کرده و مورد حمایت قرار داده است. گستردگی بیماری درتمام قاره های جهان به جز استرالیا و اقیانوس منجمد شمالی مشهود است ودرحال حاضرلیشمانیازیس در 88 کشورجهان (66 کشور از دنیای قدیم و 22 کشور از دنیای جدید) در قارههای آسیا ، اروپا ، آفریقا و آمریکا دیده میشودکه در میان این کشورها 72 کشور در حال توسعه و 13 کشورکمترتوسعه یافته وجود دارد. در تعدادی ازکشورهای توسعه یافته در اروپا نیز لیشمانیازیس کم و بیش شیوع دارد. سالهای عمر مفید از دست رفته بعلت ناتوانی های ناشی از آن (Disability-Adjusted Life Years) درحدود 2 میلیون سال می باشد (3و4و5). سالیانه در جهان 5/1-1 میلیون نفر به نوع جلدی و 500 هزار نفر به نوع احشائی لیشمانیازیس مبتلا می شوند وجمعیتی در حدود 350 میلیون نفر در جهان در معرض خطر ابتلا به این بیماری قرار دارند. 90 % از موارد لیشمانیازیس جلدی جهان از کشورهای افغانستان ، الجزایر ، برزیل ، ایران ، پرو ، عربستان و سوریه گزارش می شود . در این بین ایران و عربستان بیشترین میزان شیوع بیماری را دارند. این بیماری یکی از مهمترین و شایعترین بیماریهای بومی ایران و دومین بیماری انگلی قابل سرایت به وسیله بندپایان بعد از مالاریا است که به دو نوع شهری و روستایی دیده میشود .سالانه حدود 20 هزار مورد لیشمانیازیس جلدی ازنقاط مختلف کشورگزارش میشود که البته میزان واقعی آنرا چند برابر میزان گزارش شده تخمین میزنند (6و7) . شیوع لیشمانیازیس جلدی در ایران رو به افزایش بوده ،به طوری که تعداد موارد مثبت سال 1384 در مقایسه با سال 1380 حدود 105 درصد افزایش داشته است. شیوع این بیماری در استانهای خوزستان ، خراسان ، فارس ، اصفهان وکرمان بالا می باشد و استانهایی نظیر ایلام ، یزد و بوشهر دارای بالاترین فراوانی موارد جدید در سالهای اخیر بوده اند . بطورکلی استانهایی نظیر یزد ، بوشهر، خراسان ، فارس ، ایلام ، خوزستان و اصفهان با متوسط بروز 166 مورد درصد هزار نفر بالاترین میزان بروز بیماری در کشور را دارند و استانهای غربی وشمال غربی کشور دارای کمترین میزان بروز سالک (کمتراز 10 مورد درصد هزار نفر) درکشور هستند (8-13). در سالیان اخیر این بیماری در برخی مناطق کشور به دلیل افزایش نسبی درجه حرارت ، توسعه مکانیزه شدن کشاورزی و افزایش سطح زیرکشت ، مهاجرت افراد غیرمصون به مناطق آلوده ،کویر زدایی ،گسترش سریع و بدون برنامه شهرها و روستاها ، تغییرات محیط زیست و مهاجرت مخازن انگل به مناطق جدید و نبود یک واکسن موثر برای پیشگیری رو به افزایش گذاشته است. این بیماری به علت اهمیت بهداشتی سالها مورد توجه سازمان بهداشت جهانی بوده است و بخش تحقیقات بیماریهای گرمسیری سازمان بهداشت جهانی (TDR) این بیماری را در زمره سه بیماری اول (تریپانوزوم آفریقایی، دانگو لیشمانیازیس ها) و جزو بیماریهای نوپدید و غیر قابل کنترل قرارداده است(1). در سالهای گذشته مطالعات بسیار و ارزنده ای راجع به همه گیرشناسی، ناقلین ، مخازن و تعیین هویت انگل لیشمانیا و عوامل لیشمانیازیس توسط محققین و اساتید دانشگاهها در کشور و از جمله انستیتو پاستور ایران انجام شده که نتایج حاصل از این پژوهشها در مجلات داخل وخارج از کشور منعکس شده است.دراغلب بررسی ها از روشهای متداول مورفولوژیکی ومیکروسکوپی استفاده شده است(14).در این پژوهشها فقط بر روی آلودگیهای لپتومونادی وآماستیگوتی مطالعه می شد و انگل دقیقا جدا وتایپ نمی گردید. در ایران گونه های انگل لیشمانیا به عنوان عامل بیماری لیشمانیازیس جلدی با توجه به علائم کلینیکی ، تمرکز جغرافیایی ، مخازن حیوانی اختصاصی ،آلودگی های آزمایشگاهی به مخازن حیوانی یا ناقل ، توسط سرولوژی وگاهی با مونوکلونال آنتی بادی در بیماران ، کاراکتری زه شده است. تشخیص آلودگی های لیشمانیایی بابه کارگیری روشهای بیوشیمیایی یا مولکولی معدود بوده است. ازسوی دیگراستفاده ازروشهای مولکولی نیز بعضاً در حد انجام PCR و مشاهده باند مربوطه در ژل محدود شده است و بهره گیری ازروشهای پیشرفته همچون تعیین توالی نوکلئوتیدی ژن مورد مطالعه و آنالیز های مولکولی و فیلو ژنتیک در تعیین هویت انگل لیشمانیا ، به ندرت بکارگرفته شده است و در صورت انجام نیز از تعداد معدودی نمونه استفاده گردیده است (14و15). در حال حاضر با وجود بروز بالای بیماری در استان ، هویت انگل در برخی کانونهای جدید اندمیک استان مشخص نشده است ، لذا در این تحقیق ، طیف نسبتاً بالایی از نمونه های انسانی از استان زاهدان جمع آوری ، هم به روش میکروسکوپی و هم ملکولی در حد تعیین توالی ژنهای مورد نظر و آنالیز های فیلوژنتیکی عامل بیماری ، مورد مطالعه قرارگرفته تا هویت انواع انگل لیشمانیا ، استرین، هاپلوتایپ وجمعیت در این منطقه در انسان بطورقطعی تعیین وتأییدگردد. |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | 1- توزیع فراوانی بیماران برحسب (استرین ) انگلی چگونه است؟
2- توزیع فراوانی بیماران بر حسب محل جهش ژنی چگونه است؟ 3-توزیع فراوانی بیماران بر حسب محل ضایعه چگونه است؟ 4-توزیع فراوانی بیماران بر حسب سن چگونه است؟ 5-توزیع فراوانی بیماران بر حسب جنس چگونه است؟ 6-آیا گونه جدیدی ازانگل لیشمانیا در این مطالعه شناسائی میشود؟ فرضیات پژوهش: 1-استرین انگلی با محل جهش ژنی رابطه دارد. |
| هدف کلی طرح | <شناسایی گونه ها وتایپ ملکولی لیشمانیا در افراد مشکوک به لیشمانیازیس جلدی با هدف قراردادن ژنهایITS-rDNA وسایتوکرومb در شهرستان زاهدان |
| اهداف اختصاصی | 1-تعیین توزیع فراوانی بیماران برحسب (استرین ) انگلی
2-تعیین توزیع فراوانی بیماران بر حسب محل جهش ژنی 3-تعیین توزیع فراوانی بیماران بر حسب محل ضایعه 4-تعیین توزیع فراوانی بیماران بر حسب سن 5-تعیین توزیع فراوانی بیماران بر حسب جنس 6-تعیین رابطه بین استرین انگلی و محل جهش ژنی |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | 1- استفاده از نتایج طرح در برنامه ریزی و کنترل بیماری لیشمانیازیس جلدی در شهرستان زاهدان 2- معرفی روشهای جدید مولکولی جهت تشخیص قطعی گونه های لیشمانیا در انسان و استفاده از این روشها در مراکز دانشگاهی، تحقیقاتی و آزمایشگاه ها و مراکز بهداشتی درمانی کشور . |
| تعریف واژه های تخصصی | ندارد |
| نوع مطالعه | این تحقیق توصیفی از نوع توصیفی مقطعی می باشد. |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | بیماران مراجعه کننده به مرکز تحقیقات عفونی و گرمسیری،آزمایشگاه مرکزی و آزمایشگاه رزم جومقدم شهرستان زاهدان . |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | برای تعیین حجم نمونه از فرمول زیر استفاده می شود:
N = Z2P (1-P) / D2 در این فرمول مقدارZ در سطح اعتماد 95%، سطح خطای 5% ، 96/1می باشد. با میزان شیوع (P) 10% در افراد مشکوک ودقت( D (0/029 ، نمونه 410خواهیم داشت و در کل 82 نمونه مثبت جمع آوری می گردد. |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | ازبیماران مراجعه کننده به مرکز تحقیقات عفونی و گرمسیری،آزمایشگاه مرکزی و آزمایشگاه رزم جومقدم شهرستان زاهدان نمونه برداری انجام خواهد شد.
|
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | فرم اطلاعاتی بصورت زیر خواهد بود: جزئیات مربوط به مشخصات فردی، نوع زخم، تعداد و محل ضایعات، نتایج مشاهده میکروسکوپی و آزمایش مولکولی کد بیمار جنس سن شغل محل سکونت میزان تحصیلات تعداد ضایعه محل ضایعه نوع زخم مدت ابتلا درجه مشاهده میکروسکوپی نتیجه PCR |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | نمونه های جمع آوری شده به آزمایشگاه گروه انگل شناسی دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان منتقل می شود. نمونه های فیکس شده با متانول، با رنگ گیمسا رنگ آمیزی شده و زیر میکروسکوپ نوری با درشت نمایی هزار برابر از نظر وجود جسم لیشمن مورد بررسی قرار خواهد گرفت و به همراه آن بخشی از نمونه های برداشت شده به محیط کشت N.N.Nتلقیح و برای تکثیر سریع و ازدیاد به محیط کشت RPMI-1640 همراه با 10 درصد سرم جنین گوساله غیر فعال شده به عنوان مکمل انتقال داده خواهد شد. به منظور جداسازی و ایزولاسیون انگل لیشمانیا از نمونه های انسانی در شرایط in vitro وin vivo از محیط کشت آزمایشگاهی و انتقال آن به حیوان حساس (موشهای سفید Balb/c) استفاده می نماییم. به منظور بررسی نمونه ها در شرایط آزمایشگاهی همزمان از محیط کشت دوفازی N.N.N و محیط منوفازیک اشنایدرSchneider ́́s تکمیل شده با سرم جنین گاوFBS %10-20 (Fetal Bovine Serum) استفاده می نمائیم . محیط های کشت را بعد از انکوباسیون در C 25-22 درجه سانتی گراد با میکروسکوپ معکوس (Invert) هر روز بررسی نموده و در صورت وجود پروماستیگوتهای متحرک در محیط کشت یک Subculture در محیط کشت جدید انجام می دهیم پس از تکثیر انگل در محیط های فوق در فاز stationary از محیط کشت پروماستیگوتها را برداشت نموده و با دو بار شستشو با نرمال سالین وPBS (2 × 5 دقیقه در 4000 دور) رسوب حاصل را به موشهای سفید Balb/c تزریق می نمائیم. در صورت وجود قارچ و یا باکتری در محیط کشت ایزوله را به صورت زیر جلدی در ناحیه پای (Foot-pad) حیوان حساس آزمایشگاهی تزریق نموده و پس از 10-7 روز از محل تزریق آسپیره نموده و به محیط کشت اختصاصی منتقل می نمائیم (25و26). استخراج DNA : برای استخراج DNA از دو روش استفاده می شود که این روشها عبارتند از : 1- روش فنل کلرو فرم 2- روش استخراج DNA به روش کیت تعیین غلظت DNA جهت تخمین مقدار DNA از دو روش انجام می پذیرد: تعیین غلظت با دستگاه - UV Spectrophotometer و تخمین غلظت نمونه های DNA از روش الکتروفورز استفاده میشود. اندازه گیری میزان DNA به روش UV Spectrophotometer : مقدارlµ 10 از DNA هر ایزوله به نسبت 1 به 100 با آب مقطر دوبار تقطیر استریل رقیق میگردد سپس میزان OD (Optical Density ) آن با طول موج 260 نانومتر با استفاده از دستگاه UV Spectrophotometer اندازه گیری میشود . هر واحد در OD 260 تقریبا برابر 50 میکرو گرم بر میلی لیتر DNA دو رشته ای می باشد .با استفاده ازفرمول l/ml= OD260×dilution rate µ Concentration نسبت OD 260،DNAاستخراج شده به 280 OD اندازه گیری میشود .اگر این نسبت ≤8/1 بود DNA دارای نا خالصی مثل بقایای فنل و RNA میباشد و اگراین نسبت≥8/1 DNA خالص و اگر میزان این نسبت >2 بود DNAنا خالص و حاوی پروتئین زیاد میباشد و لذا در چنین مواردی کار استخراج DNA مجددا تکرار می گردد. روش انجام الکتروفورز : در مرحله اول لازم است که ژل با درصد مناسب تهیه گردد. برای تهیه ژل معمولا" هر چه تعداد جفت بازهای DNA یا محصول PCR زیاد باشد غلظت ژل را کمتر می گیرند تا حرکت جفت بازها در داخل ژل به آسانی انجام گردد و بر عکس هر چه تعداد جفت بازها در DNA یا محصول PCR کمتر باشد غلظت ژل را بالا می گیرندبعد از پایان یافتن زمان الکتروفورز، با دستگاه تابش اشعه ماوراء بنفش (UV Transilluminator) باند های احتمالی مشاهده می شود. در صورت نیاز از ژل با دستگاه Photodocumentary عکس تهیه می گردد. در موقع ران کردن محصول PCR جهت تعیین سایز باند ایجاد شده و همچنین در موقع ران کردن نمونه DNA استخراج شده جهت حصول اطمینان از تهیه صحیح ژل آگارز لازم است از سایز مارکر استفاده گردد. PCR در این مطالعه در این قسمت برای تکثیر ژنها با PCR از روش Nested PCR روی ژن ITS-rDNAاستفاده می شود. دلیل اینکه ما از ITS استفاده میکنیم این است که چون یکی از بهترین بخشهای ژنوم که جهت تشخیص گونه های نزدیک ( یعنی گونه هایی که با استفاده از خصوصیات مورفولوژیک نمی توان آنها را از هم تمییز داد ) خانواده های ژنهای تکراری در ژنوم است و ژن DNA یکی از شناخته شده ترین بخشهای ژنوم جهت افتراق گونه ها میباشد . این ژن حدود 100 تا 5000 بار در ژنوم, البته بسته به گونه موجود زنده تکرار شده است . هر تکرار متشکل از مناطق کد کننده 28S,5.8S,18S می باشند.حد فاصل مناطق کد کننده قطعاتی وجود دارد که ترجمه نمی شوند به آنها Internal Transcribed Spaces (ITS ) میگویند .حد فاصل مناطق کد کننده 5.8 S و 18Sقطعه ITS1 و حد فاصل مناطق 5.8 Sو 28S قطعه ITS2 قرار دارد.این مناطق بر خلاف مناطق کد کننده تنوع بین گونه ای بیشتری نشان میدهند و میتوان برای تفکیک گونه ها از آنها استفاده کرد .در این مطالعه پرایمرهایی که توسط دکتر پرویزی و همکارانش استفاده و طراحی شده است استفاده می گردد و در صورت لزوم پرایمر های جدیدی طراحی می گردد. محصول PCR بدون کلون کردن و بطور مستقیم تعیین توالی می گردند تا مجموعه هاپلوتایپهای اختصاصی گونه ها و استرین های لیشمانیا را تشخیص دهیم. برای تکثیر ژنها با PCRدر دو مرحله و در دو میکروتیوب مجزا استفاده می گردد. در مرحله اول PCR از جفت پرایمرهای قسمت انتهائی (3´) از ژن ((SSU rRNA به نام پرایمر(forward primer) IR1 و قسمت انتهائی (5´) از ژن ( (LSU rRNA به نام پرایمر (reverse primer) IR2 استفاده می گردد. در مرحله دوم از (Nested-PCR) پرایمر از روی هم افتادن ITS2 و قسمت انتهائی (3´) از ژن ((SSU rRNA به نام پرایمر (forward primer) ITS1F و نیز از پرایمر که از روی هم افتادن ITS2 و قسمت انتهائی (5´) از ژن ((LSU rRNA طراحی شده است به نام پرایمر (reverse primer) ITS2R با استفاده می شود اولین مرحله واکنش تکثیر مجموعا 20 میکرولیتر است.واکنش تکثیر DNA در داخل میکروتیوپ مخصوص با دیواره نازک انجام می گیرد و در داخل دستگاه PCR قرار داده می شود. از برنامه دمائی مربوطه استفاده می شود. مرحله دوم یعنی Nested-PCR در یک میکروتیوپ مجزا و واکنش تکثیر که مجموعا 20 میکرولیتر و با محتویات و حجم و مقدار مشابه مرحله اول است جز اینکه از پرایمرهای ITS1F و ITS2R و نیز یک میکرولیترازمحصول PCRمرحله اول استفاده می شود. وقتی جفت پرایمرهای ITS1F و ITS2R در اولین Nested-PCR مورد استفاده قرار می گیرد، اندازه قطعات DNA حدودا bp 1100 خواهد بود اما توالی قسمت(3´) با تعیین توالی مستقیم و بدون کلون کردن قابل خواندن نیست که به دلیل تغییر و اختلاف طول و اندازه منطقه میکروساتالایت ژن ITS می باشد. بنابراین مرحله دوم Nested-PCR با استفاده از پرایمر مستقیم ITS1F و با یک پرایمر معکوس جدید طراحی شده بنام ITS2R4 اصلاح می شود. این پرایمر در قسمت انتهائی (5´) ژن ITS2 می باشد. 19 نوکلئوتید از 20 تا در توالی پرایمر با توالی که از پروماستیگوتهایی که ما کشت خواهیم داد از استرین رفرانس لیشمانیا میجر سازمان بهداشت جهانی (MHOM/SU/73/5ASKH) و نیز با توالی همانند و مشابه (conserved) لیشمانیا دونووانی، لیشمانیا اینفانتوم، لیشمانیا تروپیکا، لیشمانیا میجر، لیشمانیا تورانیکا و لیشمانیا جربیلی در بانک ژنی GenBank کاملا مشابه است.مابقی همه جزئیات کارهای تجربی مشابه Nested-PCR قسمت اول خواهد بود بجز 5/1 میکرولیتر از DNA جداسازی و خالص سازی شده لیشمانیا میجر از محیط کشت و یا DNA جداسازی و خالص سازی شده از جونده که به مرحله اول PCR اضافه می گردد. برای تکمیل پروسه ژن ITS-rDNA محصول PCR بطور مستقیم تعیین توالی می شود تا مجموعه های هاپلوتایپهای گونه ها و استرین های لیشمانیا را تشخیص دهیم (23و24). در مواردی که کیفیت نمونه برای سکانس کردن مناسب نباشد یا آلودگی میکس دیده شود ونیز باند دیده شده بر روی ژل آگارز به همراه اسمیر فراوان باشد نمونه را تحت آنزیم Bus R1 به روش RFLPتعیین گونه می گردد. یک منطقه پلی مورفیسم میکروساتالایت DNA با تکرار AT در قسمت انتهائی (5´) توالی ژن ITS2 در ردیف توالی لیشمانیای ما در ژن ITS- rDNA تشخیص داده شده است. بر اساس این ردیف توالی یک جفت پرایمر برای تکثیر یک قطعه کوچک که شامل تکرار AT میکروساتالایت نیز بوده است توسط دکتر پرویزی و همکاران طراحی شده است. همچنین میکروساتالایت DNA با تکرار GT در قسمت قطعه (5´) توالی ژن ITS2 بوده است. Nested PCR برای این قطعه کوچک نیز در تیوپ مجزا مجددا انجام می شود و از جفت ITSmF1 (forward) که در قسمت انتهائی (5´) توالیITS2 است و پرایمر معکوسITSmR2 (reverse) که در بین ITS2قرار دارد استفاده می شود. برای ارتباط تکاملی بین افراد ، جمعیت، گونه های مختلف لیشمانیا وآنالیز فیلوژنتیکی در حد هاپلوتایپ و استرین از ژنوم میتوکندریایی بالاخص سیتوکرومb استفاده می شود. این ژن در لیشمانیا از دو منطقه تشکیل شده است. منطقه ویرایش یافته که در قسمت ́ 5با 22-24 جفت باز ومنطقه ویرایش نیافته که در قسمت ́ 3 با 1065 جفت باز مشخص می شود. در این مطالعه از یک جفت پرایمربا نام LCBF1, LCBR2 استفاده می شود. مرحله واکنش تکثیر مجموعا 50 میکرولیتر است(17). آنالیزهای مولکولی کلیه محصولات PCR بطور مستقیم و بدون کلون کردن تعیین توالی خواهند شد جهت وارد کردن توالی DNA برای تمام نمونه ها وتنظیم توالی و مطابقت کردن نوکلئوتیدها با کروماتوگرافی هر نمونه، از نرم افزارSequencherTm 4.4 software برای PCاستفاده می شود. برای آنالیزهای فیلوژنتیکی نیز از نرم افزار MEGA بهره گرفته خواهد شد (27). |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | داده ها برای آنالیزهای آماری با نرم افزار SPSS با سطح اطمینان 95 درصد موردتجزیه و تحلیل توصیفی قرار می گیرد و جهت تجزیه و تحلیل داده ها از آزمانهای توصیفی (شاخص های مرکزی و پراکندگی )استفاده می نماییم برای تحلیل داده ها از آزمون کای اسکوئر استفاده خواهد شد. |
| ملاحظات اخلاقی | در این پژوهش کدهای اخلاقی زیر از دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی با کدهای (1،2،3،4،5،7،10،11،12،13،14،15،16،17،18،19،20،21،22،23،25،26،27،28،29،30،31) و همجنین در این پژوهش کدهای اخلاقی زیر از دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی جمهوری اسلامی ایران راهنمای عمومی با کدهای(1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11) رعایت شده است |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | دیر رشد بودن برخی از گونه های لیشمانیا در محیط کشت، موارد وارده بیماری از کشور های مرزی به استان زاهدان، حجم بالای نمونه های مثبت در این مطالعه و آلودگی در روش های ملکولی از محدودیت ها و خطاهای مطالعه محسوب می شود. برای جلوگیری از عدم رشد برخی از گونه های دیررشد از محیط های کشت اصلاح شده استفاده شود، برای موارد وارده بیماری از کشور های مرزی فرم اطلاعاتی به دقت پر شودو برای جمع آوری حجم بالای نمونه تعداد دفعات فیلد در منطقه باید بالا باشد. |
| کلمات کلیدی | لیشمانیا میجر/ تروپیکا،سیتوکرومb،،ITS-rDNAوDiagnostic nested PCRs |
| فهرست منابع و مراجع | 1- Baily, M. S., Lockwood, D. N. J., 2007. Cutaneous Leishmaniasis.Clinics in Dermathology. 25, 203-211.
2- Pourmohammadi, B., Motazedian, M.H., Kalantari,M.,2008.Rodent infection with Leishmania in a new focus of human cutaneous Leishmaniasis,in northen Iran. Ann. Trop. Med. Parasitol, Vol.102,(2):127-133. 3. World Health Organization. WHO Tech Rep Ser No. 701. 1984. Expert committee: the leishmaniasis:2-4. 4. World Health Organization. WHO Tech Rep Ser No. 793. 1990. Expert committee: epidemiological aspects. Control of the leishmaniasis: 41-46. 5. Ashford RW. Leishmaniasis reservoirs and their significance in control. Clin Dermatol 1996; 14 (5): 523-532. 6. Leishmaniasis and leishmania/HIV co-infection.In: WHO report on global surveillance of epidemic-prone infectious diseases, WHO/CDS/CSR/ISR/2000.1: 121–127. 7. Yaghoobi-Ershadi MR, Zahraei-Ramezani AR, Akhavan AA, Jalali-Zand AR. Rodent control operations against zoonotic cutaneous leishmaniasis in rural Iran. Ann Saudi Med 2005; 25 (4):309-312. 8-Athari A, Jalallu N. [Epidemiological survey ofcutaneous leishmaniasis in Iran 2001-2005]. Sci J Isfahan Univ Med Sci 2006;24(82):8-13 (Persian). 9- Javadian E, Nadim A, Tahvildari A, Assefi V.Epidemiology of cutaneous leishmaniasis in Korassan Iran. Bull Soc Pathol Exot Filiales.1976;69(2):140–143. 10- Moaddeb A, Gettner S, Ardehali S. Studies on the causative agent of cutaneous leishmaniasis in Shiraz Iran. Iran J Med Sci. 1993;18 (1,2):28–33. 11-. Salimi MA. Clinical and epidemiological comparison on the cutaneous leishmaniasis in the city and villages of Isfahan.Iran J Public Health.2000;2(4):214–219. 12-. Nadim A, Seyedi RMA. A brief review of the epidemiology of various types of leishmaniasis in Iran.Acta Med Iran. 1971;8(4):99–106. 13-.Islamic Republic of Iran Ministry of Heath &Medical Education.[Principles of disease prevention and surveillance]. Tehran: Center for disease control 2007:249-255(Persian). 14- Jahani MR, Gharavi MJ, Hadi Shirzad H. Passive Detection of Cutaneous Leishmaniasis in Police Personnel Deployed in the Provinces of Isfahan, Ilam, Bushehr Khorasan and Khuzestan, Iran. Iranian J Publ Health, 32( 3):2003:23-27. 15- Nadim A . Leishmaniasis in: epidemiology and control of prevalent diseases in Iran. Edited by Azizi, F. et al. Endocrine and Metabolism research center, 2nd ed., 2000: 524-34. 16- Mirzaei A, Rouhani S, Taherkhani H, Farahmand M, Kazemi B, Hedayati M, Baghaei A, Davari B, Parvizi, P. Isolation and detection of Leishmania species among naturally infected Rhombomis opimus, a reservoir host of zoonotic cutaneous leishmaniasis in Turkemen Sahara, North East of Iran. Experimental Parasitology, 2011:129: 375–380. 17-Yutaka A, Minoru O, Chomar K, Yu-ichi Y, Hirotomo K, Jorge D, Tatsuyuki M, Eduardo A.L, Yoshihisa H, Hiroshi U. Phylogenic analysis of the genus Leishmania by cytochrome b gene. Experimental Parasitology, 2009: 121(4): 352–361. 18- Tashakori M, Amer Al-Ja. Katrin K, Gabriele S. Multilocus microsatellite typing shows three different genetic clusters of Leishmania major in Iran. Microbes Infect, 13(11): 2011: 937-42. 19- Maraghi S, Samarbaf Zadeh A, Sarlak AA, Ghasemian M, Vazirianzadeh B. Identification of Cutaneous Leishmaniasis Agents by Nested Polymerase Chain Reaction (Nested-PCR) in Shush City, Khuzestan Province, Iran. Iranian J Parasitol:.2,(3): 2007:13-15. 20- Saki J, Meamar AR, Oormazdi H, Akhlaghi L, Maraghi S, Mohebali M, Khademvatan S , E Razmjou. Mini-Exon Genotyping of Leishmania Species in Khuzestan Province Southwest Iran. Iranian J Parasitol, 5(1): 2010: 25-34. 21- Chomar K, Yutaka A, Yu-ichi Y, Hirotomo K, Abdul M, Farooq R, Muhamad Z, Jun M, Jorge D., Minoru O, Ken K, Yoshihisa H, Hiroshi U. Polymorphisms of cytochrome b gene in Leishmania parasites and their relation to types of cutaneous leishmaniasis lesions in Pakistan. Journal of Dermatology 2008; 35: 76–85. 22- Tashakori, M., Kuhls, K., Al-Jawabreh, A., Mauricio, I., Schönian, G., Farajnia, S., Alimohamadian, M.H., 2006. Leishmania major: Genetic heterogeneity of Iranian isolates by single-strand conformation polymorphism and sequence analysis of ribosomal DNA internal transcribed spacer. Acta Trop. 98, 52-58. 23- Parvizi, P., Mauricio, I., Aransay, A.M., Miles, M.A., Ready, P.D., 2005. First detection of Leishmania major in peridomestic Iranian sandflies: comparison of nested PCR of nuclear ITS ribosomal DNA and semi-nested PCR of minicircle kinetoplast DNA. Acta Trop. 93, 75-83. 24- Parvizi, P., Ready, P.D. (2008). Nested PCRs of nuclear ITS-rDNA fragments detect three Leishmania species of gerbils in sanflies from Iranian Foci of zoonotic cutaneous leishmaniasis. Tropical Medicine and International Health Journal, 13, 1159-1171. 25- Schönian, G., El Fari, M., Lewin, S., Schweynoch, C., Presber, W., 2001. Molecular epidemiology and population genetics in Leishmania. Med. Microbiol. Immunol. 190, 61-63. 26- Ready, P.D., Smith, D.F. & Killick-Kendrick, R. (1988). DNA hybridizations on squash-blotted sandflies to identify both Phlebotomus papatasi and infecting Leishmania major.Medical and Veterinary Entomology2, 109-116. 27 - Higgins, D.G., Thomson, J.D., Gibson, T.J., 1997. CLUSTAL W Multiple Sequence Alignment Program,Version 1.7.:www.sgi.com/chembio/ resources /clustalw. |
| معرفی پژوهش/ اهداف پژوهش (عین عبارت هدف پروپوزال را کپی نکنید. بلکه با جملاتی که برای مردم قابل فهم باشد (برای سواد حدود پنجم ابتدایی )هدف را برای شرکت کنندگان توضیح دهید.) در تمام این متن در صورتیکه شرکت کننده کودک یا فرد فاقد ظرفیت تصمیم گیری است باید مواردیکه منظور از "من"، فرد شرکت کننده بوده است به "کودک" یا "فرد تحت سرپرستی من" اصلاح شود و مواردیکه منظور از "من"، رضایت دهنده است به من به عنوان "ولی" یا "قیم قانونی" اصلاح شود. | |
| خون گیری (آیا طرح شما نیاز به خونگیری دارد یا خیر) | |
| نحوه همکاری/ مزایا ی طرح (در این بخش برای شرکت کنندگان به زبان ساده توضیح دهید که: چه مداخله ای بر روی آنها صورت میگیرد. چه اقدامات پاراکلینیکی بر روی آنها انجام میشود. چه نمونه ای و با چه حجمی از آنها میگیرید در این مدت چند نوبت مراجعه باید داشته باشند و به چه فواصلی چه اقداماتی را در پیگیری آنها انجام میدهید. (حتی میتوانید سود بالقوه ای که شرکت کنندگان میتوانند از شرکت در این پژوهش ببرند بنویسید. این سود میتواند شرح احتمال درمان یا تشخیص بهتر بیماریشان، دریافت خدمات سلامت رایگان و یا پرداخت مشوق مالی در ازای جبران همکاریشان باشد) | |
| عوارض جانبی (منظور عوارض و میزان احتمال بروز آنها در این مطالعه است) | |
| جبران عوارض احتمالی (برای آنکه شرکت کننده بتواند ارزیابی مناسبی از سود و زیان شرکت در پژوهش شما داشته باشد لازم است بتواند سود و زیان مداخلات معمول و مداخلات این پژوهش را مقایسه کند. به عنوان مثال میزان موفقیت و میزان عوارض هریک را مقایسه کند.) - او باید بداند كه اگر در حين و بعد از انجام پژوهش هم هر مشكلي اعم از جسمي و روحي به علت شرکت در اين پژوهش برایش پيش آمد درمان عوارض، و هزينههاي آن و غرامت مربوطه بر عهده مجري خواهد بود. | |
| هزینه های مربوط به انجام طرح تحقیقاتی (تمام مداخلات پژوهشی باید برای بیمار رایگان باشد و بیمار بداند شامل چه مواردی هستند. ) | |
| روش های جایگزین در صورت عدم تمایل به شرکت در مطالعه چه روش های درمانی برای بیمار ارائه خواهد شد | |
| محرمانه بودن بیمار باید بداندکه دست اندر كاران اين پژوهش، كليه اطلاعات مربوط به او را نزد خود به صورت محرمانه نگهداشته و فقط اجازه دارند نتايج كلي و گروهي اين پژوهش را بدون ذکر نام و مشخصات بیمار منتشر كنند. و كميته اخلاق در پژوهش با هدف نظارت بر رعایت حقوق وی ميتواند به اطلاعات ایشان دسترسي داشته باشد. | |
| پاسخگویی به پرسش ها در این بخش نام و اطلاعات دسترسی فردی از عوامل پژوهش را که بتواند اطلاعات صحیح و کافی در اختیار شرکت کنندگان قرار دهند و در مورد عوارض و نگرانیها راهنمایی لازم را ارائه دهند ذکر شود | |
| حق نپذیرفتن یا انصراف بیمار باید بداند که شرکت اودر اين پژوهش کاملاً داوطلبانه است و مجبور به شرکت در اين پژوهش نيست و در صورت عدم شرکت از مراقبتهاي معمول تشخيصي و درماني محروم نخواهد شد او باید بداند كه حتي پس از موافقت با شركت در پژوهش ميتواند هر وقت كه بخواهد، پس از اطلاع به مجري، از پژوهش خارج شود و خروج اواز پژوهش باعث محرومیت از دریافت خدمات درمانی معمول برای اونخواهد شد. | |
| رضایت او باید بداند که اگر اشکال يا اعتراضي نسبت به دست اندركاران يا روند پژوهش دارد مي تواند با كميته اخلاق در پژوهش دانشگاه تماس گرفته و مشکل خود را به صورت شفاهي يا كتبي مطرح نمايد. در انتهای فرم قید گردد : اينجانب موارد فوقالذکر را خواندم و فهميدم و بر اساس آن رضايت آگاهانه خود را براي شركت در اين پژوهش اعلام ميکنم. اينجانب ……………… خود را ملزم به اجراي تعهدات مربوط به مجري در مفاد فوق دانسته و متعهد ميگردم در تأمين حقوق و ايمني شركت كننده در اين پژوهش تلاش نمايم | |
| پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| proposal.docx | 1393/11/25 | 878282 | دانلود |
| tif.doc | 1393/12/23 | 423936 | دانلود |
| proposal eslah shode.doc | 1394/02/08 | 1085440 | دانلود |
| proposal eslah shode8.doc | 1394/02/08 | 1324032 | دانلود |
| Article1.pdf | 1394/02/08 | 400491 | دانلود |
| Article2.pdf | 1394/02/08 | 485501 | دانلود |
| Article3.pdf | 1394/02/08 | 1203383 | دانلود |
| nahaee2.doc | 1394/02/09 | 1085440 | دانلود |
| proposal eslah shode komeyteye akhlagh.doc | 1394/02/29 | 1324032 | دانلود |
