چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 7682 |
| عنوان فارسی طرح | تعیین بار انگلی از بافتهای مختلف آلوده مدل موش توکسوپلاسموز حاد با استفاده از روش Real-Time QPCR |
| عنوان لاتین طرح | Determine the parasitic load of different tissues infected mouse model of acute toxoplasmosis using Real-time QPCR method |
| نوع طرح | بنیادی-کاربردی |
| محل اجرای طرح | مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی و گرمسیری |
| رسته مطالعاتی | بنیادی- کاربردی |
| دانشکده/مرکز | مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی و گرمسیری |
| زمان اجرا -روز | 210 |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| محمد جعفری مدرک | همکار | تدوین طرح | دکترای تخصصی | mjafari547547@yahoo.com |
| سینا سکندرپور | همکار | اجراء طرح | sina_sekandarpour87@yahoo.com | |
| هادی میراحمدی | مجری | تدوین طرح | دکترای تخصصی | hmirahmadi59@gmail.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | تعیین بار انگلی از بافتهای مختلف آلوده مدل موش توکسوپلاسموز حاد با استفاده از روش Real-Time QPCR |
| خلاصه طرح به لاتین | Determine the parasitic load of different tissues infected mouse model of acute toxoplasmosis using Real-time QPCR method |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | توکسوپلاسما گوندی یک انگل متعلق به اپی کمپلکسا با انتشار جهانی است و از آلوده کننده های مهم پزشکی تمام سلولهای هسته دار پستانداران است(1). توکسوپلاسما گوندی انگل داخلی سلولی اجباری و مشترک بین انسان وحیوانات است.گربه به عنوان میزبان اصلی و سایر پستانداران و پرندگان بعنوان میزبان واسط مورد هجوم این تک یاخته قرار می گیرند(2, 3). در افراد دارای ایمنی کامل ، توکسوپلاسموزیس معمولاً فاقد علامت است یا به صورت تظاهرات پوستی (بثورات جلدی) آدنوپاتی در نوزادانی که از طریق مادرزادی آلوده می شوند و بیماران با نقص ایمنی مانند مبتلایان به ایدز(Acquired immunodeficiency syndrome: AIDS ) و دریافت کنندگان عضو پیوندی ، توکسوپلاسموزیس، ممکن است تهدیدکننده زندگی آن ها باشد(4). تخمین زده شده است که تقریبا'هرساله 225000 مورد جدید در ایالت متحده گزارش میشود تصور میکنند که 50% موارد انتقال مربوط به خوردن غذاهایی میشود که انگل در داخل آنها زنده مانده است(5). علاوه بر این 4000بیمار ایدزی هرسال در ایالت متحده مبتلا به آنسفالیت توکسوپلاسمایی میشوند واز نقطه نظر اقتصادی،عفونت توکسوپلاسما گوندی اثر منفی شدیدی روی جامعه داردکه به علت مواردی مثل افزایش هزینه های درمان، شیمی درمانی بیماران ایدزی، آزمایش سرولوژیکی برای زنان باردار، مراقبت بیمار،از دست دادن باروری و درمان مادران وکودکان آلوده می باشد(5).بروز آلودگی اکتسابی جدید به میزان خطر آلوده شدن در منطقه مورد نظر و مقدار جمعیتی که قبلا آلوده نشده اند بستگی دارد. لذا، اطلاع دقیق از میزان شیوع توکسوپلاسموز درهر منطقه ضروری است(6). توکسوپلاسما می تواند از طریق خوردن ااوسیستهای موجود درغذا یا آب وبا توسط مصرف کیستهای بافتی موجود در گوشت خام یا نپخته به اشخاص انتقال یابد که گوشت خوک مهمترین منبع گوشتی از نظر توکسوپلاسما گوندی در ایالت متحده وگوشت بره مهمترین منبع در سراسر جهان است(5). توکسوپلاسما قادر است در میزبان مهره دار گوناگونی دوره تکامل خود را طی کنداما میزبان نهایی آن گربه خانگی وانواع خاصی ازدیگر اعضای گربه سانان است(6). تفاوت های آشکار بین میزان شیوع توکسوپلاسموز در مناطق مختلف به دلیل پراکندگی جغرافیائی آب و هوا یا رژیم و عادات غذایی بر عامل بیماری است، چرا که توکسوپلاسموز در نواحی خشک کمترین شیوع و در نواحی گرم و مرطوب بالاترین شیوع را دارد(7). با توجه به عوارض و ضایعات جبران ناپذیر در افرادی با ایمنی سرکوب شده و در نوزادان متولد شده، تشخیص توکسوپلاسموز یس و متعاقب آن درمان، ضروری است(8, 9). انگل به سه شکل ااوسیست،تاکی زوئیت و برادی زوئیت وجود دارد که ااوسیست شکل انتقالی انگل وتاکی زوئیت شکلهایی هستند که به سرعت تکثیر می شوند و مسئول گسترش آغازین عفونت وتخریب بافتها هستند در حالی که برادی زوئیتها به آهستگی تکثیر یافته و کیست تشکیل می دهند (6, 10). اشکال بیماری به صورت حاد،تحت حاد،مزمن وعود بیماری می باشد(11-13). در مدت عفونت حاد توکسوپلاسما گوندی کیستهای درون بافتی را در مغز وعضلات ایجاد می کند،اکثر عفونتهای اولیه بدون نشانه هستند اما بعضی اشکال مزمن نشانه دار مثل عفونتهای چشمی وعفونتهای انتشار یافته وجود دارد .زمانی که عفونت اولیه در مدت بارداری اتفاق می افتد میتواند منجربه ناهنجاریهای شدید نوزادی وعوارض چشمی در جنین شود.در بیماران آلوده به HIVمقادیرپایین TCD4+اجازه فعالسازی دوباره عفونت نهفته وتکثیر دوباره انگل را میدهد ومنجر به بیماری نشانه داری مثل توکسوپلاسموریس مغزی میشود(14). در ایران نیز این انگل شیوع داشته ومیزان آلودگی به توکسوپلاسما در استانهای جنوبی کشور کمتر از مناطق شمالی بوده است.از مهمترین راههای پیشگیری ممانعت از خوردن کیستهای آلوده کننده وجلوگیری از تماس با ااوسیستهای دفع شده از گربه می باشد(15). اخیرا'تلاشها برای حذف این انگل در بعضی از قسمتهای جهان موفقیت آمیز بوده است اما ثابت شده است که بسیار پرخرج می باشد امروزه بعضی از داروها مثل اسپیرامایسین، اریترومایسین وآزیترومایسین برای درمان توکسوپلاسموزیس وجود دارند اما این داروها نمی توانند به تنهایی کاملا' این انگل را حذف کنند ودرجه تاثیر آنها خیلی پایین است بنابراین پیدا کردن یک روش جدید برای درمان توکسوپلاسموزیس مهم می باشد(16). همان طور که از واژه بر می آید مفهوم Real time PCR مشاهده ای لحظه به لحظه یک فرایند می باشد.در این سامانه یک رنگ فلورسانت نقش دارد که در هر سیکل تقسیم از خود نور مرئی صاتع می نماید که توسط آشکارگر شناسایی و ثبت می شود(17).اولین بار در سال 1992 higuchi و همکاران با اضافه کردن اتیدیوم بروماید به مخلوط PCR جزء پیشگامان این تکنیک بودند(18).از کاربرد Real time PCR می توان به بررسی بیان ژن،تاثیر دارو درمانی،تعیین Load عوامل عفونی،ژنوتیپینگ و موارد بسیار دیگر می باشد(19, 20). چنانچه Real time PCR در حال حاضر به عنوان تکنیکی برای سنجش کمی توکسوپلاسما در اندام های موش در نظر گرفته می شود(21-23). در مطالعه انجام شده توسط Ahmad Daryani و همکاران که در سال 2014 در شمال ایران انجام شد، که بار انگلی در بافت های متفاوت موش آلوده به انگل توکسوپلاسما که توسط آنتی ژن انگل ایمن زایی در انها انجام شده بود و با استفاده از روش Real time PCR قطعه ای ژنی B1 انگل مورد سنجش قرار گرفت، بعد از انجام آزمایش و بررسی بار انگلی در بافت های مختلف اینگونه بیان شد که بار انگل در بافت ها به مقدار قابل توجهی کاهش یافته این امر نشان دهنده حساسیت روش Real time PCR برای تشخیص انگل در بافت های مختلف و موثر بودن واکسن پیشنهادی بود است(24). در مطالعه انجام شده توسط Olgica Djurkovic´ -Djakovic و همکاران که در سال 2012 در صربستان انجام شد، که بار انگلی در بافت های مختلف موش بعد از ایمن زایی، به روش Real time PCR مورد بررسی قرار گرفت و اینچنین بیان شد که در پایان دوره 49 روزه میزان بار انگلی در بافت مغز بسیار بالا بوده و بافت کبد از DNA انگل به صورت کامل پاک شده است(25). در مطالعه انجام شده توسط Ahmad Daryani و همکاران که در سال 2014 در شمال ایران انجام ش، بار انگلی در بافت های متفاوت موش آلوده به انگل توکسوپلاسما گندی با روش مولکولی Real time QPCR با هدف هدف قرار دادن ژن B1 انگل مورد سنجش قرار گرفت، بعد از انجام آزمایش و بررسی بار انگلی در بافت های مختلف اینگونه بیان شد که بار انگل در بافت ها طحال و کلیه به میزان قابل توجهی افزایش یافت بود(26). |
| محل اول بکارگیری نتایج تحقیق | |
| مشکل جاری که سیاست گزار با آن مواجه است کدام است؟ | |
| روش های موجود کدامها هستند؟ | |
| پیشنهاد اول نحوه کاربرد | |
| محل دوم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| منافع و مضرات روشهای موجود کدامند؟ | |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | 1) گرایش بافتی و بار انگلی انگل توکسوپلاسما گندی در بافت های مغز، کبد، کلیه، طحال، قلب، ماهیچه، چشم، خون موش آلوده به توکسوپلاسموزیس حاد بعد از 24 ساعت چگونه است؟ 2) گرایش بافتی و بار انگلی انگل توکسوپلاسما گندی در بافت های مغز، کبد، کلیه، طحال، قلب، ماهیچه، چشم، خون موش آلوده به توکسوپلاسموزیس حاد بعد از 48 ساعت چگونه است؟ 3) گرایش بافتی و بار انگلی انگل توکسوپلاسما گندی در بافت های مغز، کبد، کلیه، طحال، قلب، ماهیچه، چشم، خون موش آلوده به توکسوپلاسموزیس حاد بعد از 72 ساعت چگونه است؟ 4) گرایش بافتی و بار انگلی انگل توکسوپلاسما گندی در بافت های مغز، کبد، کلیه، طحال، قلب، ماهیچه، چشم، خون موش آلوده به توکسوپلاسموزیس حاد یک روز قبل از مرگ چگونه است؟ |
| هدف کلی طرح | تعیین بار انگلی و گرایش بافتی انگل توکسوپلاسما گندی از بافت های مختلف مدل موشی آلوده به توکسوپلاسموزیس حاد به روش Real-time QPCR |
| اهداف اختصاصی | 1) بررسی گرایش بافتی و بار انگلی انگل توکسوپلاسما گندی در بافت های مغز، کبد، کلیه، طحال، قلب، ماهیچه، چشم، خون موش آلوده به توکسوپلاسموزیس حاد بعد از 24 ساعت 2) بررسی گرایش بافتی و بار انگلی انگل توکسوپلاسما گندی در بافت های مغز، کبد، کلیه، طحال، قلب، ماهیچه، چشم، خون موش آلوده به توکسوپلاسموزیس حاد بعد از 48 ساعت 3) بررسی گرایش بافتی و بار انگلی انگل توکسوپلاسما گندی در بافت های مغز، کبد، کلیه، طحال، قلب، ماهیچه، چشم، خون موش آلوده به توکسوپلاسموزیس حاد بعد از 72 ساعت 4) بررسی گرایش بافتی و بار انگلی انگل توکسوپلاسما گندی در بافت های مغز، کبد، کلیه، طحال، قلب، ماهیچه، چشم، خون موش آلوده به توکسوپلاسموزیس حاد یک روز قبل از مرگ |
| چرا پیام تحقیق شما حلال مشکل جاری است؟ | |
| پیشنهاد دوم نحوه کاربرد | |
| محل سوم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| پیام تحقیق شما چه منافعی از نظر هزینه، کارایی و بهره وری برای مدیر دارد؟ | |
| اهداف كاربردی | |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | با توجه به تفاوت نتایج ثبت شده توسط محققین در تعیین بار انگل و گرایش بافتی انگل توکسوپلاسما با اطلاعات ثبت شده در منابع انگل شناسی نتایج نشان دهنده این می باشد که تا به امروز اطلاعات دقیق و قابل اطمینانی راجع به محل دقیق بیشترین حضور انگل در بافت در دسترس نمی باشد همچنین مطالعات قبل بیشتر با استفاده از تکینک های غیر اختصاصی و بررسی تراکم و شمارش انگل در بافت های مختلف توسط میکرسکوپ بوده است که خطا های بسیاری دارد، لیکن با پیشرفت تکنیک های مولکولی و توانایی دست یابی به کمیت دقیق انگل شرایط تحقیقات در ردیابی دقیق محل حضور انگل در بافت های مختلف محیا شده است. نتایج این طرح در مسیر تحقیق های آینده در بررسی تاثیر دارو و واکسن های جدید بر انگل و تعیین بهترین بافت برای تشخیص این تاثیرات موثر می باشد. |
| تعریف واژه های تخصصی | توکسوپلاسما گوندی : یک تک یاخته انگلی داخل سلولی اجباری از شاخه آپی کمپلکسا است که قادر به آلودگی انسان و طیف وسیعی از حیوانات خونگرم می باشد. توکسوپلاسموزیس: بیماری ایجاد شده توسط توکسوپلاسما گوندی که در جنین بصورت سقط یا ناهنجاری های مادرزادی و در افراد ایمونوساپرس بصورت درگیری سیستم اعصاب مرکزی ، آنسفالیت و حتی مرگ دیده می شود. تاکی زوئیت : فرم فعال و تکثیر شونده توکسوپلاسما گوندی که به تمامی سلولهای هسته دار میزبان حمله کرده ودر مرحله حاد بیماری دیده می شود. برادی زوئیت : فرم غیر فعال با تکثیر آهسته توکسوپلاسما گوندی که در داخل کیست نسجی ودر مرحله مزمن بیماری دیده می شود. اووسیست : فرم حاصل از سیکل جنسی انگل در روده گربه که با مدفوع دفع شده و باعث آلودگی میزبانان واسط می شود. واکنش زنجیره پلی مراز (PCR) : در زیست شناسی ملکولی واکنش زنجیره پلی مراز روشی است برای تکثیر یک یا چند نسخه از یک قطعه ملکول DNA که موجب تولید میلیونها نسخه از یک توالی خاص DNA می گردد. این روش متکی بر چرخه حرارتی ، شامل چرخه هایی از اعمال حرارت و سردکردن واکنش برای ذوب و نسخه برداری آنزیمی ملکول DNA است Real-time PCR: یک روش PCR می باشد که همان طور که از معنی واژه بر می آید مشاهده لحظه به لحظه یک فرآیند می باشد. در این روش در هر سیکل از واکنش نور مرئی توسط یک رنگ فلورسانس ساطع می شود که توسط آشکارگر این نور شناسایی و ثبت می شود. |
| برای اجرای راه حل پیشنهادی شما چه موانع و حمایتهایی وجود دارند؟ | |
| پیشنهاد سوم نحوه کاربرد | |
| محل چهارم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| نوع مطالعه | تجربی(Experimental) |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | موش های آزمایشگاهی نژاد BALB/c معیار ورود موش های ماده دارای سن 8-6 هفته و وزن 25-20 گرم |
| پیشنهاد چهارم نحوه کاربرد | |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | با بررسی حجم نمونه در مطالعات قبل(22, 24) حجم نمونه در این مطالعه مطابق این تحقیقات پیش بینی شد که تعداد 30 سر موش ماده (موش های نر به علت پرخاشگری و حمله نزاع با هم باعث مجروح و در نهایت مرگ موش ها می شوند و همچنین همخواری در بین گروه های موش های نر وجود دارد که این خصوصیت علت صرف نظر کردن از این جنس در تحقیق می باشد ) نژاد BALB/C در 5 گروه به صورت تصادفی تقسیم می شوند. |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | برای انجام آزمایشات ، حیوانات به طور تصادفی در 5 گروه (30 موش) قرار خواهند گرفت. |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | انجام آزمایش بر روی بافت های مغز، کبد، کلیه، قلب، طحال،ماهیچه، قلب، چشم و خون موش |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | تکثیر و نگهداری انگل: مواد لازم برای تکثیر و نگهداری انگل شامل 10 سر موش سوری، بافر فسفات سالین(PBS)،پنی سیلین،آب مقطر 1000 سی سی ابتدا بافر را تهیه و به PH 7.4-7.2 می رسانیم سپس محلول را اتوکلاو کرده و بعد از پایین آمدن دما به آن 100unit/ml پنی سیلین به آن اضافه می کنیم و تا زمان انجام آزمایش در یخچال نگهداری خواهد شد. تکثیر انگل در موش انجام می شود به این ترتیب که ابتدا تاکی زوییت سویه RH توکسوپلاسما به صورت جامد تهیه می کنیم. جهت حذف ماده نگهدارنده یک بار با محلول PBS شست و شو داده و سپس با دو پاساژ متوالی داخل صفاقی در موش سوری انگل احیا می شود. برای تکثیر و نگهداری انگل به هر موش cc ۵/۰ مایع صفاقی حاوی102 تاکی زوییت زنده و u/ml۱0۰ پنی سیلین به طور داخل صفاقی تلقیح می شود. پس از گذشت ۳ الی ۴ روز حفره صفاقی موشهای آلوده باcc ۵ بافر PBS سرد شست و شو و تاکی زوییتها جمع آوری می شدند. سپس در میکروتیوپهای 1.5 سی سی تقسیم و در 20- درجه سانتی گراد نگهداری خواهد شد.برای حذف ماکروفاژهای صفاقی 5 سی سی PBS را به انگل بدست امده اضافه می کنیم و به مدت 10 دقیقه در دور800 دور سانتریفوژ می کنیم و مایع رویی را تخلیه می کنیم این عمل را 3 بار تکرار می کنیم.بعد از شستشو با شمارش تعداد انگل با لام نئوبار رسوب باقی مانده در ویال های کوچک تقسیم می شود و در 20- درجه سانتی گراد نگهداری خواهد شد. آلوده سازی موش ها: تمام موش های BALB/c توسط تاکی زوئیتهای سویه RH توکسوپلاسما گوندی به میزان عدد به صورت داخل صفاقی موش ها آلوده می شوند. گروه ها: تعداد 30 سر موش ماده نژاد Balb/c با سن 8- 6 هفته و وزن 25-20 گرم که به مدت یک هفته در شرایط محیطی( با درجه حرارت 2±23 سانتی گراد، 12 ساعت نور 12 ساعت تاریکی، رطوبت 40 درصد)قرار می دهیم تا سازگاری پیدا کنند. بعد از سازگاری موش ها با محیط تمام موش ها آلوده شدند و به طور تصادفی موش ها را به 5 گروه 6 تایی تقسیم می کنیم.که گروه ها شامل: گروه کنترل منفی: گروه کنترل منفی که انگل دریافت نکرده. گروه اول: موش های این گروه 24 ساعت بعد از آلوده شدن کشته می شوند. گروه دوم: موش های این گروه 48 ساعت بعد از آلوده شدن کشته می شوند. گروه سوم: موش های این گروه 72 ساعت بعد از آلوده شدن کشته می شوند. گروه چهارم: موش های این گروه یک روز قبل از مردن کشته می شوند.(در مطالعات انجام شده از قبل در صورت تزریق 10000 تاکی زوئت تمام موش ها در روز 6 مرده لزا روز قبل از مرگ را روز 5 در نظر می گیریم اما دیگر علائم از قبیل کز کردن، بی حالی، گوشه گیری و ژولیدگی موها نشان از شدت آلودگی موش و احتمال مرگ موش را نشان خواهد دارد). کشتار موش ها: در پایان هر روز(روز اول،دوم،سوم،یک روز قبل از مردن) 5 موش از هر گروه کشته می شود(طبق دستورالعمل کار با حیوانات آزمایشگاهی)سپس بافت های مورد نظر بعد از تشریح جدا، وزن شده و با سرم فیزیولوژی کامل شستشو شده تا خون آنها کامل خارج شود تا در صورت وجود آلودگی،آلودگی از بافت باشد سپس بافت ها را درمحلول PBS گذاشته وهموژن شده. بررسی میزان بار انگل: پس از پایان مرحله کار با حیوانات ازمایشگاهی و جدا کردن بافت ها و هموژن کردن بافت های مورد نظر و تهیه سوپرناتانت و نگهداری در 70- سپس توسط کیت استخراج DNA QIAGEN،DNA هر نمونه با استفاده از پروتکل کیت استخراج می شود(تعداد 5 موش از هر گروه کشته می شود از هر موش 8 بافت جدا می شود که در کل تعداد بافت برای استخراج 160 بافت می باشد) در ادامه پرایمر ها برای قطعه ژنی RE انگل توکسوپلاسما گندی طراحی خواهد شد و توسط دستورالعمل های استانداردReal-time PCR بار انگلی توکسوپلاسما گندی در بافت های مورد نظر مورد بررسی قرار می دهیم. Real time QPCR: پس از کشت انگل در صفاق موش سوری انگل توسط محلول PBS سه مرتبه شسته خواهد شد، در ادامه توسط لام نئوبار تعداد 1000000 تاکی زوئیت شمارش شده خواهد شد و توسط کیت تخصصی QIAGEN به صورت دقیق استخراج DNA شده، در ادامه از این استخراج به عنوان نمونه مرجع برای مراحل تهیه رقت ها استفاده خواهد شد. ژن B1 انگل توکسوپلاسما در کل ژنم 35 بار تکرار شده است بخاطر تکرار زیاد این ژن رقت ها به صورت10/1 و از رقت 1000000 تا 1 در 6 رقت تهیه خواهد شد. تمام نمونه ها از نمونه های استاندارد و نمونه های مجهول به صورت دو تایی گذاشته خواهد شد. PCR: واکنش در حجم 50 میکرولیتر تهیه خواهد شد(4) : master mix: 25µl 2x forward primer : 2µl reverse primer : 2µl Template DNA : 5µl DW : 16µl Total volume : 50µl |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | پس از گرد آوری اطلاعات لازم,داده ها در نرم افزار spss نسخه 18 وارد و تجزیه و تحلیل خواهد شد.آزمون های آماری شامل آنالیز واریانس دو طرفه (ANOVA) |
| ملاحظات اخلاقی | نحوه رفتار با حیوانات به تایید کمیته اخلاق دانشگاه خواهد رسید.همچنین فرم چک لیست کار با حیوانات آزمایشگاهی بر اساس کد های راهنمای کار با حیوانات ابلاغی وزارت بهداشت تکمیل و زمیمه شده است در تمام مراحل,کار با حیوانات آزمایشگاهی بر اساس پروتوکول استاندارد کار با حیوانات آزمایشگاهی عمل خواهد شد. |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | مشکل تهیه مواد و امکان طولانی شدن زمان دریافت آنها تلف شدن حیوانات در طول اجرا طرح یکی از خطاهای احتمالی، خطای فرد مشاهده گر در قرائت نتایج می باشد . برای برآورد اثر آن ، محقق بر روی 50 نمونه از دو فرد مشاهده گر به طور مستقل استفاده می کند و هر کدام از این افراد نتایج را بدون اطلاع از یکدیگر ثبت می نمایند. در نهایت با محاصبه ضریب توافق کاپا ، میزان توافق دو مشاهده گر تعیین می گردد و در صورتی که ضریب توافق کاپا بالای 95٪ باشد ، خطای مشاهده گر قابل تحمل خواهد بود.. یکی دیگر از منابع خطا، خطای ابزار می باشد. فقط از دستگاههایی استفاده خواهد شد که قبلا توسط کارشناسان بخش کالیبره و استاندارد شده باشند(روایی آنها مورد تایید باشد). درضمن برای بررسی پایایی (تکرار پذیری) نتایج ، آزمون Real time PCR بر روی نمونه ها به مدت شش ماه تکرار می گردد و هر بار نتایج ثبت می گردد. |
| کلمات کلیدی | Toxoplasmosis Real time QPCR Tissue |
| فهرست منابع و مراجع | 1. Mesquita RT, Ziegler AP, Hiramoto RM, Vidal JE, Pereira-Chioccola VL. Real-time quantitative PCR in cerebral toxoplasmosis diagnosis of Brazilian human immunodeficiency virus-infected patients. Journal of medical microbiology. 2010 Jun;59(Pt 6):641-7. 2.Dubey JP. Strategies to reduce transmission of Toxoplasma gondii to animals and humans. Veterinary parasitology. 1996 Aug;64(1-2):65-70. 3.Dubey JP, Frenkel JK. Toxoplasmosis of rats: a review, with considerations of their value as an animal model and their possible role in epidemiology. Veterinary parasitology. 1998 May;77(1):1-32. 4. Lin MH, Chen TC, Kuo TT, Tseng CC, Tseng CP. Real-time PCR for quantitative detection of Toxoplasma gondii. Journal of clinical microbiology. 2000 Nov;38(11):4121-5. 5. Jauregui LH, Higgins J, Zarlenga D, Dubey JP, Lunney JK. Development of a real-time PCR assay for detection of Toxoplasma gondii in pig and mouse tissues. Journal of clinical microbiology. 2001 Jun;39(6):2065-71. 6.Black MW, Boothroyd JC. Lytic cycle of Toxoplasma gondii. Microbiology and molecular biology reviews : MMBR. 2000 Sep;64(3. 7.Swierzy IJ, Muhammad M, Kroll J, Abelmann A, Tenter AM, Luder CG. Toxoplasma gondii within skeletal muscle cells: a critical interplay for food-borne parasite transmission. International journal for parasitology. 2014 Feb;44(2):91-8. 8.Kadri D, Crater AK, Lee H, Solomon VR, Ananvoranich S. The potential of quinoline derivatives for the treatment of Toxoplasma gondii infection. Experimental parasitology. 2014 Oct;145:1 9.Duhey JP, Whitesell LE, Culp WE, Daye S. Diagnosis and treatment of Neospora caninum--associated dermatitis in a red fox (Vulpes vulpes) with concurrent Toxoplasma gondii infection. Journal of zoo and wildlife medicine : official publication of the American Association of Zoo Veterinarians. 2014 Jun;45(2):454-7. 10.Ding JQ, Wu K, Tan F, Chen XG. [Establishment of an in vitro tachyzoite-bradyzoite interconversion system for Toxoplasma gondii]. Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University. 2010 Apr;30(4):668-71.. 11.D'Angelo JG, Bordon C, Posner GH, Yolken R, Jones-Brando L. Artemisinin derivatives inhibit Toxoplasma gondii in vitro at multiple steps in the lytic cycle. The Journal of antimicrobial chemotherapy. 2009 Jan;63(1):146-50. PubMed PMID: 18988681. 12.Lopes AP, Dubey JP, Darde ML, Cardoso L. Epidemiological review of Toxoplasma gondii infection in humans and animals in Portugal. Parasitology. 2014 Nov;141(13):1699-708. 13.Dubey JP, Jones JL. Toxoplasma gondii infection in humans and animals in the United States. International journal for parasitology. 2008 Sep;38(11):1257-78. 14.Ueno N, Lodoen MB, Hickey GL, Robey EA, Coombes JL. Toxoplasma gondii-infected natural killer cells display a hypermotility phenotype in vivo. Immunology and cell biology. 2014 Dec 23. 15.Jafari R, Sadaghian M, Safari M. Seroprevalence of Toxoplasma gondii Infection and Related Risk Factors in Tabriz City, Iran, 2008. Journal of research in health sciences. 2012;12(2):119-21.. 16.Murakami Y, Hoshi M, Hara A, Takemura M, Arioka Y, Yamamoto Y, et al. Inhibition of increased indoleamine 2,3-dioxygenase activity attenuates Toxoplasma gondii replication in the lung during acute infection. Cytokine. 2012 Aug;59(2):245-51. 17.Notarangelo FM, Wilson EH, Horning KJ, Thomas MA, Harris TH, Fang Q, et al. Evaluation of kynurenine pathway metabolism in Toxoplasma gondii-infected mice: implications for schizophrenia. Schizophrenia research. 2014 Jan;152(1):261-7. 18.Selseleh M, Modarressi M, Shojaee S, Mohebali M, Eshraghian M, Selseleh M, et al. Brain Tissue Cysts in Infected Mice with RH-Strain of Toxoplasma gondii and Evaluation of BAG1 and SAG1 Genes Expression. Iranian journal of parasitology. 2013 Jan;8(1):40-6. 19.Martins-Duarte ES, de Souza W, Vommaro RC. Toxoplasma gondii: the effect of fluconazole combined with sulfadiazine and pyrimethamine against acute toxoplasmosis in murine model. Experimental parasitology. 2013 Mar;133(3):294-9. 20.Martins-Duarte ES, Lemgruber L, de Souza W, Vommaro RC. Toxoplasma gondii: fluconazole and itraconazole activity against toxoplasmosis in a murine model. Experimental parasitology. 2010 Apr;124(4):466-9. 21.Aksoy U, Marangi M, Papini R, Ozkoc S, Bayram Delibas S, Giangaspero A. Detection of Toxoplasma gondii and Cyclospora cayetanensis in Mytilus galloprovincialis from Izmir Province coast (Turkey) by Real Time PCR/High-Resolution Melting analysis (HRM). Food microbiology. 2014 Dec;44:128-35. 22.Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Bio/technology. 1992 Apr;10(4):413-7. 23.Costa JG, Carneiro AC, Tavares AT, Andrade GM, Vasconcelos-Santos DV, Januario JN, et al. Real-time PCR as a prognostic tool for human congenital toxoplasmosis. Journal of clinical microbiology. 2013 Aug;51(8):2766-8. 24. Daryani A, Sharif M, Dadimoghaddam Y, Souteh MB, Ahmadpour E, Khalilian A, et al. Determination of parasitic load in different tissues of murine toxoplasmosis after immunization by excretory-secretory antigens using Real time QPCR. Experimental parasitology. 2014 Aug;143:55-9. 25. Djurkovic-Djakovic O, Djokic V, Vujanic M, Zivkovic T, Bobic B, Nikolic A, et al. Kinetics of parasite burdens in blood and tissues during murine toxoplasmosis. Experimental parasitology. 2012 Jul;131(3):372-6. 26. Dadimoghaddam Y, Daryani A, Sharif M, Ahmadpour E, Hossienikhah Z. Tissue tropism and parasite burden of Toxoplasma gondii RH strain in experimentally infected mice. Asian Pacific journal of tropical medicine. 2014 Jul;7(7):521-4. |
| پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی | |
| معرفی پژوهش/ اهداف پژوهش (عین عبارت هدف پروپوزال را کپی نکنید. بلکه با جملاتی که برای مردم قابل فهم باشد (برای سواد حدود پنجم ابتدایی )هدف را برای شرکت کنندگان توضیح دهید.) در تمام این متن در صورتیکه شرکت کننده کودک یا فرد فاقد ظرفیت تصمیم گیری است باید مواردیکه منظور از "من"، فرد شرکت کننده بوده است به "کودک" یا "فرد تحت سرپرستی من" اصلاح شود و مواردیکه منظور از "من"، رضایت دهنده است به من به عنوان "ولی" یا "قیم قانونی" اصلاح شود. | |
| خون گیری (آیا طرح شما نیاز به خونگیری دارد یا خیر) | |
| نحوه همکاری/ مزایا ی طرح (در این بخش برای شرکت کنندگان به زبان ساده توضیح دهید که: چه مداخله ای بر روی آنها صورت میگیرد. چه اقدامات پاراکلینیکی بر روی آنها انجام میشود. چه نمونه ای و با چه حجمی از آنها میگیرید در این مدت چند نوبت مراجعه باید داشته باشند و به چه فواصلی چه اقداماتی را در پیگیری آنها انجام میدهید. (حتی میتوانید سود بالقوه ای که شرکت کنندگان میتوانند از شرکت در این پژوهش ببرند بنویسید. این سود میتواند شرح احتمال درمان یا تشخیص بهتر بیماریشان، دریافت خدمات سلامت رایگان و یا پرداخت مشوق مالی در ازای جبران همکاریشان باشد) | |
| عوارض جانبی (منظور عوارض و میزان احتمال بروز آنها در این مطالعه است) | |
| جبران عوارض احتمالی (برای آنکه شرکت کننده بتواند ارزیابی مناسبی از سود و زیان شرکت در پژوهش شما داشته باشد لازم است بتواند سود و زیان مداخلات معمول و مداخلات این پژوهش را مقایسه کند. به عنوان مثال میزان موفقیت و میزان عوارض هریک را مقایسه کند.) - او باید بداند كه اگر در حين و بعد از انجام پژوهش هم هر مشكلي اعم از جسمي و روحي به علت شرکت در اين پژوهش برایش پيش آمد درمان عوارض، و هزينههاي آن و غرامت مربوطه بر عهده مجري خواهد بود. | |
| هزینه های مربوط به انجام طرح تحقیقاتی (تمام مداخلات پژوهشی باید برای بیمار رایگان باشد و بیمار بداند شامل چه مواردی هستند. ) | |
| روش های جایگزین در صورت عدم تمایل به شرکت در مطالعه چه روش های درمانی برای بیمار ارائه خواهد شد | |
| محرمانه بودن بیمار باید بداندکه دست اندر كاران اين پژوهش، كليه اطلاعات مربوط به او را نزد خود به صورت محرمانه نگهداشته و فقط اجازه دارند نتايج كلي و گروهي اين پژوهش را بدون ذکر نام و مشخصات بیمار منتشر كنند. و كميته اخلاق در پژوهش با هدف نظارت بر رعایت حقوق وی ميتواند به اطلاعات ایشان دسترسي داشته باشد. | |
| پاسخگویی به پرسش ها در این بخش نام و اطلاعات دسترسی فردی از عوامل پژوهش را که بتواند اطلاعات صحیح و کافی در اختیار شرکت کنندگان قرار دهند و در مورد عوارض و نگرانیها راهنمایی لازم را ارائه دهند ذکر شود | |
| حق نپذیرفتن یا انصراف بیمار باید بداند که شرکت اودر اين پژوهش کاملاً داوطلبانه است و مجبور به شرکت در اين پژوهش نيست و در صورت عدم شرکت از مراقبتهاي معمول تشخيصي و درماني محروم نخواهد شد او باید بداند كه حتي پس از موافقت با شركت در پژوهش ميتواند هر وقت كه بخواهد، پس از اطلاع به مجري، از پژوهش خارج شود و خروج اواز پژوهش باعث محرومیت از دریافت خدمات درمانی معمول برای اونخواهد شد. | |
| رضایت او باید بداند که اگر اشکال يا اعتراضي نسبت به دست اندركاران يا روند پژوهش دارد مي تواند با كميته اخلاق در پژوهش دانشگاه تماس گرفته و مشکل خود را به صورت شفاهي يا كتبي مطرح نمايد. در انتهای فرم قید گردد : اينجانب موارد فوقالذکر را خواندم و فهميدم و بر اساس آن رضايت آگاهانه خود را براي شركت در اين پژوهش اعلام ميکنم. اينجانب ……………… خود را ملزم به اجراي تعهدات مربوط به مجري در مفاد فوق دانسته و متعهد ميگردم در تأمين حقوق و ايمني شركت كننده در اين پژوهش تلاش نمايم |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| Tarh real time dr.jafari mablaghe jadid 70000000.doc | 1394/10/15 | 380928 | دانلود |
| 7682.jpg | 1398/09/10 | 327747 | دانلود |
