چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 7692 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر ضد قارچی عصاره اتانولی و آبی گیاه پنج انگشت بر ایزوله های بالینی واژینال کاندیدا آلبیکنس در مقایسه با فلوکونازول |
| عنوان لاتین طرح | Investigation of Antifugnal activity of the ethanolic and aqueous extract leaf herb vitex agnus castus against clinical vaginal isolates of Candida albicans in comparison with fluconazole, In Vitro study |
| نوع طرح | کاربردی |
| محل اجرای طرح | دانشکده پیراپزشکی |
| رسته مطالعاتی | مطالعه تجربی (Experimental)(مطالعه کمی) |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز | 360 |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| مهدیه شفقت | مجری دوم | اجراء طرح | کارشناسی ارشد | medical.zahedan@gmail.com |
| ناصر کیخا | مجری اول | اجراء طرح | دکترای تخصصی | Nasserkeikha@yahoo.com |
| سیدمحمد موسوی | همکار | استخراج عصاره ها | کارشناسی ارشد | smm9080@yahoo.com |
| اناهیتا عارفی | همکار | همکاری در تهیه پودر گیاه | پزشکی عمومی | anahita.a995@yahoo.com |
| ارمین عارفی | همکار | ایجاد هماهنگی | پزشکی عمومی | armin.arefi72@gmail.com |
| ناهید سپهری راد | همکار | انجام تستهای آزمایشی بر روی نمونه ها | کارشناسی ارشد | nahid.sepehri@gmail.com |
| مهدیه موسوی | همکار | همکاری در اجرای طرح | نامعلوم | m.mousavi@uoz.ac.ir |
| مهدیه مودی | همکار | تدوین طرح | کارشناسی ارشد | mahdiyehmodi@yahoo.com |
| فرشید کشاورزی | همکار | تدوین طرح | کارشناسی ارشد | keshavarzifarshid@gmail.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | بررسی اثر ضد قارچی عصاره اتانولی و آبی گیاه پنج انگشت بر ایزوله های بالینی واژینال کاندیدا آلبیکنس در مقایسه با فلوکونازول |
| خلاصه طرح به لاتین | Investigation of Antifugnal activity of the ethanolic and aqueous extract leaf herb vitex agnus castus against clinical vaginal isolates of Candida albicans in comparison with fluconazole, In Vitro study |
| محل اول بکارگیری نتایج تحقیق | |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | گونه های کاندیدا از شایع ترین عوامل ایجاد کننده عفونت های قارچی می باشند که بیماری های ناشی از آنها در تمام نقاط جهان شیوع دارند. افزایش عفونت های کاندیدیایی بویژه آلبیکنس به فرم های کلینیکی مختلف و اغلب در افراد دارای اختلالات زمینه ای بروز می یابد (1). کاندیدا آلبیکنس در اغلب موارد عامل ایجاد کننده اشکال مختلف بالینی می باشد و این قارچ فرصت طلب عامل طیف وسیعی از عفونت های قارچی در افراد سالم و افراد دچار نقص سیستم ایمنی می باشد . این مخمر، فلورنرمال پوست، جلد و مخاط بوده و دارای قدرت بیماریزایی زیادی در نواحی خاصی از بدن همچون حفره دهان، دستگاه گوارش، کشاله ران و واژن در افراد سالم می باشد [2و3].کاندیدا آلبیکنس به عنوان دومین عامل در ایجاد عفونت های قارچی فرصت طلب و در ایجاد بیماریهای حاد و تحت حاد و مزمن می تواند نقش مهمی داشته باشد و از طریق کلونیزاسیون در قسمت مختلف بدن ایجاد بیماری کند در موارد نادری و بخصوص در مراحل آخر بیماری های ناتوان کننده سیستم ایمنی ، در معتادان به مواد مخدر ، جراحی ها ، استفاده از کاتترهای داخل وریدی ، جایگیری دریچه های مصنوعی قلب ، شانت های مایع مغزی نخاعی و سوندهای ادراری می تواند باعث ایجاد عفونت سیستمیک و خطرناکی همچون اندوکاردیت ، مننژیت و کاندیدمیا شود که در اغلب موارد کشنده است [2و4] . در تحقیقات انجام شده در آمریکای مرکزی در سالهای 2003-1993 در 637 بیمار تحت مطالعه ، کاندیدا آلبیکنس عامل 36% عفونت های خونی در افراد مبتلا با تومورهای بدخیم بوده است [5] . از طرف دیگر کاندیدا آلبیکنس می تواند عفونت های سطحی و یا مزمن را در افراد سالم نیز سبب شود که مثال بارز آن واژینال کاندیدیازیس می باشد. در سه دهه گذشته، میزان بروز عفونت های تهاجمی قارچی رو به افزایش بوده است. یکی از این عفونت های قارچی عفونت های دستگاه ژنیتال زنان می باشد که افزایش روزافزون آن در کلینیک های بالینی مشاهده می شود (6). عفونت های واژن از شایع ترین مشکلات زنان در ایالات متحده آمریکا محسوب می شود به طوری که سالانه حدود 13 میلیون کاندیدیازیس ولوواژینال در آمریکا گزارش می گردد. به علاوه گزارش ها نشان می دهد که میزان بروز این بیماری در طی دهه گذشته در آمریکا و اروپا افزایش یافته است (7و 8).واژنیت یک بیماری متداول ناحیه ژنیتال است که هرساله حدود ده میلیون از مراجعات پزشکی را به خود اختصاص می دهد. شایع ترین عوامل ایجاد کننده ی واژنیت ها باکتری ها بوده و کاندیدا آلبیکنس به عنوان دومین عامل مسبب این عفونت ها محسوب می شود (9). عفونت های قارچی واژن در 85-95 درصد بیماران ناشی از کاندیدا آلبیکنس بوده و در مابقی موارد کاندیدا گلابراتا و کاندیدا تروپیکالیس مسئول ایجاد بیماری هستند (11و10). از آن جایی که در غالب موارد واژنیت همراه با گرفتاری فرج است، لذا شایع ترین علامت واژنیت کاندیدیایی (در بیش از 90% موارد) خارش و سپس سوزش واژن و فرج است (12)از آنجایی که ارائه روش های جدید درمانی در طب، روش های درمان سرطان، افزایش بکارگیری روش های تهاجمی پزشکی، استفاده گسترده از آنتی بیوتیک ها و کورتونها ، ظهور HIV و ایدز، افزایش استفاده از کاتترهای درون رگی و ادراری، جراحی ها، مسئله نوزادان نارس، بدخیمی های هماتولوژیک ، حوادث و سوانح همچون تروما و سوختگی ، افزایش جمعیت افراد بستری در بخش های مراقبت ویژه ، توسعه و گسترش مقاومت به فلوکونازول و مصرف گسترده و بی رویه آزول ها ، باعث افزایش جمعیت در معرض خطر برای کسب عفونت های قارچی و افزایش بروز عفونت های قارچی سیستمیک و به ویژه کاندیدیازیس گردیده است و گسترش مقاومت های دارویی آزول در میان استرین های کاندیدا آلبیکنس به عنوان یک مشکل مهم پزشکی محسوب می شود [8].محدودیت استفاده از داروهای ضد قارچی مناسب و مؤثر و افزایش عفونت های کاندیدا با افزایش مقاومت دارویی همراه بوده و نیاز به کشف عوامل جدید و بهتر برای درمان عفونت های با عامل کاندیدا آلبیکنس می باشد. انسان در تمام دوران گذشته به منظور درمان برخی بیماری ها چاره ای جز استفاده از گیاهان نداشته است، با توجه به اینکه در سالهای اخیر استفاده از داروهای شیمیایی و سنتزی به شدت رواج یافت، اما آثار زیان بار آنها بر زندگی، سبب گرایش مجدد انسان ها به گیاهان دارویی گردید. بطوریکه مرکز سلامت جهانی تخمین زده است که بالاتر از 80 درصد از مردم هنوز بر روی درمانهای سنتی تکیه دارند، گیاهان دارویی یکسری از منابع بسیار مهم بعنوان محافظت کننده زندگی برای اکثریت جمعیت جهان می باشد. یکی از موارد در علوم زیستی و پزشکی مقاومت باکتریایی و قارچی است تا جایی که میزان مقاوت برخی از این باکتریها به داروهای شیمیایی، بیش از 90 درصد است (13). اولین بار الکساندر فلمینگ، زیست شناس و گیاه شناس معروف به بررسی مقاومت باکتریها پرداخت و در این راستا موفق به کسب جایزه نوبل در سال 1945 گردید (14). در حال حاضر در مواردی که مقاومت دارویی ایجاد می شود با تغییر دارو به مقابله با باکتری ها و قارچ های بیماری زا پرداخته می شود (15). از سوی دیگر، طی سالیان متمادی داروهای طبیعی به خصوص گیاهان دارویی در برخی موارد تنها وسیله درمان محسوب می شدند و در عین حال مواد اولیه آنها در صنعت داروسازی مورد استفاده قرار می گرفت (16-17-18-19). خانواده نعناعیان (Lamiaceae) در طب سنتی ایران همواره مورد استفاده بوده اند. 81 گونه از این خانواده در ایران استفاده دارویی دارند که بیشتر به عنوان تقویت کننده و برای درمان نفخ و سوءهاضمه و عفونت های میکروبی و قارچی بوده است(19). ترکیبات موجود در گیاهان این خانواده به طور عمده شامل فلاونوییدها و ترکیبات پلی فنولی می باشند(20-21). Vitex (پنج انگشت) از خانواده Lamiaceae، گیاهانی درختی یا درختچه ای، برگها متقابل، معمولا پنجه ای با 3 تا 8 برگچه، برگچه ها به ندرت تحلیل رفته و منفرد، گل آذین گرزن، گلها به رنگهای آبی، بنفش یا ارغوانی. پرچم ها 4 عدد، (22). این گیاه ویتکس دارای 250 گونه، چند ساله، برگریز، با ارتفاع 1 تا 6 متر، بسیار معطر، در زیستگاههای مرطوب، زیستگاههای ساحلی و عمدتا در خاک های شنی وجود دارند. وجود این گیاه در ارتفاع 1200 متر از سطح دریا نیز گزارش شده است (23). در ایران گیاه ویتکس نیز می روید که با نام پنج انگشت یا فلفل بیابانی شناخته می شده است، میوه رسیده و خشک آن شامل دو گلیکوزید، ایریدویید آگنوساید و آکوبین می باشد که حاوی فلاونویید ها و برخی روغن های ضروری است، فلاونویید این گیاه خاصیت فیتواستروژنی گیاه را اثبات می کند. ترکیبات اسانس میوه این گیاه حاوی سینئول پینن هستند، دم کرده سرشاخه های گلدار گیاه بعنوان ضد تشنج در اختلالات عصبی استفاده می شده است. همچنین گزارش شده که عصاره این گیاه به نگهداری حافظه و یادگیری کمک می کند (24). در اسانس گونه های Vitex آلفا-پینن، سابینین و لیمونن ترکیبات شاخص می باشند و در همه گونه ها با در صد بالا حضور دارند، در اکثر گونه ها منوترپنوییدها ترکیبات غالب اسانس را تشکیل می دهند. بررسی های انجام شده حضور 4 گونه V. agnus-castus، V. negundo، V. trifolia، V. pseudo-negundo در ایران را نشان می دهد (25). از میان ترکیبات موجود در عصاره گیاه، ویتکسین و ایزوویتکسین فلاونول های اصلی محلول در آب محسوب می شوند. ار برگ گیاه، ایریدوییدهای اوکوبین و آگنوزید به عنوان ترکیب مرجع برای کنترل کیفی ساخت فراورده های این گیاه استفاده می کنند، (26-27-28). از میوه آن، ایریدویید گلیکوزیدها ( آکوبین و آگنوزید) ، فلاوون ها (کاسیتسین، کمپفرول و کوئرستین) و ویتکسی – لاکتون را جدا کرده اند. ترکیب اخیر تمایل بالایی برای اتصال به گیرنده های دوپامینی نشان داده است. این ترکیب شبه دوپامینی سبب مهار آزادسازی پرولاکتین پایه و تحریک شده توسط thyrotropin-releasing hormone) TRH (می شود. (29-30-31). گیاه دارویی پنج انگشت از دیر باز مورد نظر بوده، با توجه به دیدگاههای جدید در مطالعات رده بندی مبنی بر استفاده از روش های فیلوژنتیکی، موقعیت و جایگاه خانواده آن تغییر کرده و در خانواده نعناعیان یا Lamiaceae قرار گرفته است (32). از گیاه پنج انگشت در زمان یونان باستان بعنوان درمان درد، تورم، التهاب، سردرد و روماتیسم استفاده می شده است (33). استفاده دارویی از پنج انگشت به قرن ها پیش برمی گردد، اولین گزارشات از استفاده دارویی به چهار قرن پیش از میلاد برمی گردد که در آن زمان برای درمان بیماری های رحم بکار می رفته است. این گیاه برای درمان بیماریهای هورمونی زنان بکار رفته و تنظیم کننده هورمونی است (34). از این گیاه به طور وسیعی در درمان ناراحتی های پستان، استفاده شده است (35). بعضی از پزشکان از این گیاه در 3 ماهه اول بارداری برای جلوگیری از سقط جنین در بیمارانی که دچار کمبود پروژسترون هستند استفاده می کنند (36-37-38). ترکیبات پلی فنلی گرفته شده از این گیاه از قبیل فلاونوئیدها به عنوان ترکیبات ضدسرطانی عمل کرده و دارای فعالیت القاکنندگی آپوپتوز در سلول های سرطانی می باشد این گیاه پایین آورنده سطح کلسترول خون بوده و از پوکی استخوان نیز پیشگیری می کند(39). از جمله دیگر تحقیقاتی که بر روی این گیاه انجام شده است می توان به این موارد اشاره کرد، Saka و همکاران به بررسی مقایسه ای ترکیبات شیمیایی اسانس دو گیاهVitex agnus-castus L. (VAC), و Thymus syriacus پرداختند در این تحقیق ترکیبات اصلی اسانس این گیاه(VAC) را. 1,8-Cineole (14.25%) ، Sabinene (11.54%), ، و ترکیبات Thymus syriacus ر ا thymol (40.61%) and p-Cymene (20.40%). بیان کردند(40). Nwachukwu و Uzoeto در سال 2010 در نیجریه خاصیت آنتی میکروبیال عصاره گیاه Vitex doniana بررسی نمودند که باکتریهای مورد استفاده , Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus بود و بیشترین میزان فعالیت آنتی میکروبی در عصاره استون در مقابل S. typhi (19.71mm), و در رابطه با عصاره متانولی E. coli (14.61mm) نشان داده شد (41). Chhabra, Kulkarni در تحقیقی که در سال 2014 در هند انجام شد. مکانیسم عمل ضد التهابی عصاره های مختلف گیاه پنج انگشت را اثبات نمودند و مشخص کردند که فعالیت ضد التهابی می تواند به دلیل وجود فلاونوییدها در عصاره گیاه و تنظیم التهاب با کاهش قابل توجهی از TNF-α و IL-6 توسط ماکروفاژها، انجام شود و اطلاعات نشان داد عصاره متانولی در برگ پنج انگشت می تواند به عنوان عامل ضد التهابی موثر استفاده شود(42) . Shengjergji و همکاران در آلبانی در سال 2014 به بررسی ترکیبات شیمیایی وخاصیت آنتی باکتریایی عصاره میوه پنج انگشت پرداختندو دراین تحقیق از روش دیسک دیفیوژن و از باکتریهای استاندارد Salmonella enteritidis و Escherichia coli، Staphylococcus aureus استفاده گردید و عصاره میوه فعالیت قویتری در برابر باکتری Staphylococcus aureus نشان داد (42-43). Asdadi وهمکاران فعالیت ضد قارچی عصاره دانه گیاه پنج انگشت در سال 2014 را بررسی نمودند که در این تحقیق تاثیر عصاره گیاه بر روی چهار قارچ Candida albicans و Candida dubliniensis و Candida glabrata وCandida krusei انجام گردید و تاثیر ضد قارچی عصاره گیاه را تثبیت کردند(44). Jelodar و Askari تأثیر عصاره هیدروالکلی میوه گیاه پنج انگشت بر تغییرات هورمونهای جنسی در سندرم تخمدان پلی کیستیک القایی در موش صحرایی را مطالعه نمودند مصرف عصاره این گیاه موجب افزایش سطح سرمی هورمون پروژسترون و کاهش هورمون تستوسترون در حیوانات مبتلا به PCOS (از اختلالات مهم سیستم تولید مثلی) گردید. عصاره گیاه پنج انگشت سبب بهبود وضعیت هورمونهای تستوسترون و پروژسترون در مدل حیوانی PCOS گردید(45). Ramezani و همکاران تاثیر عصاره هیدروالکلی را میوه گیاه پنج انگشت در مهار درد و التهاب در موش کوچک آزمایشگاهی بررسی نمودند، یافته ها مشخص نمود، تمام دوزهای عصاره اثر ضد التهابی قابل ملاحظه ای را در مهار التهاب گوش، ناشی از گزیلن در مقایسه با گروه شاهد نشان داد. هیچ یک از دوزها درد حاد ایجاد شده توسط فرمالین را در فاز اول مهار نکردند ولی در فاز دوم دوزهای 265، 365، 465 و 565 میلی گرم بر کیلوگرم به طور معنی داری درد مزمن را کاهش دادند(46). با توجه به اینکه در مطالعات گذشته تا کنون، تقریبا تحقیق جامعی در رابطه با تاثیر برگ گیاه پنج انگشت انجام نشده است. در این تحقیق سعی می شود از یک سو به میزان اثر عصاره اتانولی و عصاره آبی گیاه پنج انگشت بر روی ایزوله های بالینی و استاندارد قارچ کاندیدا آلبیکنس و از سوی دیگر به مقایسه اثر ضد قارچی عصاره اتانولی و عصاره آبی گیاه پنج انگشت پرداخته می شود. بنابراین با توجه خصوصیات دارویی این گیاه مطالعه آنتی فانگال امری ضروری به نظر می رسد. |
| مشکل جاری که سیاست گزار با آن مواجه است کدام است؟ | |
| روش های موجود کدامها هستند؟ | |
| پیشنهاد اول نحوه کاربرد | |
| محل دوم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | -آیا عصاره آبی و اتانولی گیاه پنج انگشت موجب مهار رشد ایزوله های واژینال کاندیدا آلبیکنس می شود؟ 2-آیاعصاره آبی و اتانولی گیاه پنج انگشت اثراتی مشابه با فلوکونازول در مهار رشد کاندیدا آلبیکنس دارند؟ فرضیه ها/ پیش فرض ها: 1-عصاره آبی و اتانولی گیاه پنج انگشت سبب جلوگیری از رشد کاندیدا آلبیکنس در ایزوله های واژینال می شود. 2-عصاره آبی و اتانولی گیاه پنج انگشت اثراتی مشابه فلوکونازول را در ایزوله های واژینال کاندیدا آلبیکنس دارد. |
| هدف کلی طرح | تعیین اثر ضد قارچی عصاره اتانولی و آبی گیاه پنج انگشت بر ایزوله های بالینی واژینال کاندیدا آلبیکنس در مقایسه با فلوکونازول |
| منافع و مضرات روشهای موجود کدامند؟ | |
| چرا پیام تحقیق شما حلال مشکل جاری است؟ | |
| اهداف اختصاصی | 1-تعیین MIC عصاره اتانولی گیاه دارویی پنج انگشت بر علیه ایزوله های واژینال کاندیدا 2- تعیین MIC عصاره آبی گیاه دارویی پنج انگشت بر علیه ایزوله های واژینال کاندیدا 3-مقایسه میزان حداقل غلظت ممانعت کنندگی از رشد (MIC ) عصاره اتانولی و عصاره آبی گیاه دارویی پنج انگشت بر علیه ایزوله های واژینال کاندیدا 4- تعیین MIC داروی فلوکونازول بر علیه ایزوله های واژینال کاندیدا آلبیکنس. 5- تعیین MIC مخلوط مساوی ( 50% ) عصاره اتانولی و عصاره آبی گیاه دارویی پنج انگشت بر علیه ایزوله های واژینال کاندیدا آلبیکنس |
| پیشنهاد دوم نحوه کاربرد | |
| محل سوم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | مراکز بهداشتی و درمانی، تولید کنندگان گیاهان دارویی |
| پیام تحقیق شما چه منافعی از نظر هزینه، کارایی و بهره وری برای مدیر دارد؟ | |
| برای اجرای راه حل پیشنهادی شما چه موانع و حمایتهایی وجود دارند؟ | |
| تعریف واژه های تخصصی | Vitex. agnus-castus نام علمی گیاه پنج انگشت است |
| پیشنهاد سوم نحوه کاربرد | |
| محل چهارم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| نوع مطالعه | تجربی |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | با توجه به اینکه ایزوله های بالینی از مطالعات قبلی موجود می باشند نیازی به معیار ورود و خروج نمی باشد. |
| پیشنهاد چهارم نحوه کاربرد | |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | با توجه به مطالعات مشابه تعداد 30 ایزوله بالینی تایید شده کاندیدا آلبیکنس با روش مولکولی PCR-RFLP که موجود در آرشیو آزمایشگاه قارچ شناسی مرکز تحقیقات عفونی از مطالعات قبلی می باشد به همراه گونه استاندارد کاندیدا آلبیکنس ATCC10231 استفاده می شود. |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | - تهیه سوسپانسیون سلول های مخمری در این تحقیق از قارچ کاندیدا آلبیکنس سویه استاندارد (ATCC10231) تهیه شده از مرکز پژوهشهای علمی-صنعتی و ایزوله های بالینی کاندیدا آلبیکنس جدا شده از واژینیت کاندیدیایی استفاده شد. ابتدا ایزوله های بالینی واژینال در محیط SC به مدت 48 ساعت در انکوباتور با دمای 37 درجه سانتی گراد قرار داده شدند. پس از گذشت زمان انکوباسیون و رشد مخمرهای کاندیدا، از آنها سوسپانسیون سلولی تهیه شد. بدین ترتیب که ابتدا در یک میکروتیوب 5/1 میلی لیتری مقدار 1000 میکرولیتر بافر فسفات سالین (PBS) 2/7=pH استریل ریخته شده، سپس با آنس استریل شده مقدار کمی از کلنی های رشد یافته روی محیط SC در PBS مخلوط می شود، پس از مخلوط شدن مخمرها در بافر، با استفاده از لام نئوبار سوسپانسیونی معادل 103×1 سلول در هر میلی لیتر تهیه شد. 3- تعیین حداقل غلظت مهارکنندگی (MIC) با استفاده از روش میکرو براث دایلوشن عصاره اتانولی و آبی برگ گیاه دارویی پنج انگشت و داروی فلوکونازول در ایزوله های بالینی کاندیدا آلبیکنس در این آزمایش از میکروپلیت 96 خانه ای استفاده شد. ابتدا درون چاهک ها 100 میکرولیتر محیط کشت RPMI1640 ریخته شد. غلظت های متوالی از عصاره اتانولی و آبی برگ گیاه دارویی پنج انگشت و داروی فلوکونازول تهیه و سپس 100 میکرولیتر از سوسپانسیون سلول مخمری از هر کدام از سویه های کاندیدا با تراکم 103×1 سلول در هر میلی لیتر به آن اضافه می گردد. این آزمون به صورت سه بار تکرار انجام شد (28). پلیت 96 خانه ای در انکوباتور شیکردار 35 درجه سانتیگراد با سرعت 150 دور در دقیقه به مدت 48 ساعت گذاشته شد. پس از طی زمان انکوباسیون 10 میکرولیتر از محتویات چاهک ها بر روی پلیت های حاوی محیط SC کشت و در دمای 35 درجه سانتیگراد به مدت 48 ساعت انکوبه گردید. سپس بر اساس شمارش تعداد کلنی های رشد کرده از هر یک از رقت های عصاره اتانولی و آبی برگ گیاه دارویی پنج انگشت و فلوکونازول نسبت به گروه کنترل، مقادیر حداقل غلظت مهار کنندگی از رشد و حداقل غلظت کشندگی قارچ بدست آمد. |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | نمونه گیری آسان و در دسترس |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | 1-جمع آوری مواد گیاهی: پس از بررسی های میدانی گیاه پنج انگشت از 10 کیلومتری زابل به نهبندان جمع آوری و پس از شناسایی در هرباریوم دانشکده علوم دانشگاه زابل، برگ ها از ساقه جدا و در سایه خشک می شوند. آماده سازی عصاره اتانولی و آبی گیاه پنج انگشت: عصاره گیری توسط اتانول: برای تهیه عصاره اتانولی، 30گرم از پودر خشک شده برگ گیاه پنج انگشت را با 150 ml اتانول 100 درصد مخلوط کرده و برای مدت 48 ساعت در دمای اتاق بر روی دستگاه شیکر قرار می دهیم تا ترکیبات موثره گیاه به طور کامل جدا شود. در مرحله بعد نمونه مورد نظر را از کاغذ صافی عبور داده و سپس حلال آن، در دمای C◦ 45 به مدت یک ساعت به آرامی تبخیر شده و عصاره تغلیظ شده را بدست می آوریم. عصاره گیری توسط آب: به منظور تهیه عصاره آبی از برگ گیاه پنج انگشت، 30 گرم از نمونه پودر شده در 100 ml آب مقطر را در یک ارلن 250 ml می ریزیم. پس از آن ارلن را برای مدت 48 ساعت در دمای اتاق بر روی دستگاه شیکر قرار می دهیم، در مرحله بعد نمونه مورد نظر را از کاغذ صافی عبورمی دهیم(47) 2- جمع آوری نمونه های بالینی: با استفاده از 20 نمونه کاندیدا آلبیکنس تأیید شده به روش مولکولی PCR-RFLP موجود در آرشیو آزمایشگاه قارچ شناسی مرکز تحقیقات بیماری های عفونی زاهدان 2- تهیه سوسپانسیون سلول های مخمری در این تحقیق از قارچ کاندیدا آلبیکنس سویه استاندارد (ATCC10231) تهیه شده از مرکز پژوهشهای علمی-صنعتی و ایزوله های بالینی کاندیدا آلبیکنس جدا شده از واژینیت کاندیدیایی استفاده شد. ابتدا ایزوله های بالینی واژینال در محیط SC به مدت 48 ساعت در انکوباتور با دمای 37 درجه سانتی گراد قرار داده شدند. پس از گذشت زمان انکوباسیون و رشد مخمرهای کاندیدا، از آنها سوسپانسیون سلولی تهیه شد. بدین ترتیب که ابتدا در یک میکروتیوب 5/1 میلی لیتری مقدار 1000 میکرولیتر بافر فسفات سالین (PBS) 2/7=pH استریل ریخته شده، سپس با آنس استریل شده مقدار کمی از کلنی های رشد یافته روی محیط SC در PBS مخلوط می شود، پس از مخلوط شدن مخمرها در بافر، با استفاده از لام نئوبار سوسپانسیونی معادل 103×1 سلول در هر میلی لیتر تهیه شد. 4- تعیین حداقل غلظت مهارکنندگی (MIC) با استفاده از روش براث میکرو دایلوشن عصاره آبی و الکلی پنج انگشت و داروی فلوکونازول در ایزوله های بالینی کاندیدا آلبیکنس در این آزمایش از میکروپلیت 96 خانه ای استفاده شد. ابتدا درون چاهک ها 100 میکرولیتر محیط کشت RPMI1640 ریخته شد. غلظت های متوالی از عصاره آبی و الکلی و داروی فلوکونازول تهیه و سپس 100 میکرولیتر از سوسپانسیون سلول مخمری از هر کدام از سویه های کاندیدا با تراکم 103×1 سلول در هر میلی لیتر به آن اضافه می گردد. این آزمون به صورت سه بار تکرار انجام شد (28). پلیت 96 خانه ای در انکوباتور شیکردار 35 درجه سانتیگراد با سرعت 150 دور در دقیقه به مدت 48 ساعت گذاشته شد. پس از طی زمان انکوباسیون 10 میکرولیتر از محتویات چاهک ها بر روی پلیت های حاوی محیط SC کشت و در دمای 35 درجه سانتیگراد به مدت 48 ساعت انکوبه گردید. سپس بر اساس شمارش تعداد کلنی های رشد کرده از هر یک از رقت های عصاره ابی و اتانولی گیاه پنج انگشت و فلوکونازول ن، مقادیر حداقل غلظت مهار کنندگی از رشد و حداقل غلظت کشندگی قارچ بدست می آید. |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | تمام اطلاعات بدست امده به نرم افزار SPSS وارد می شود. نتایج با استفاده از آزمون های توصیفی شامل فراوانی درصد و جداول و نمودارهار توصیف شده و برای مقایسه میانگین MIC بین گروههای مورد بررسی از ازمون آنالیز واریانس یکطرفه و در صورت معنی داری از تست های تکمیلی برای تعیین گروههای متفاوت از یکدیگر استفاده می شود و در صورتی که شرایط توزیع نرمال در گروهها برقرار نباشد از ازمون های ناپارامتری مناسب مانند کروسکال والیس و یا من ویتنی استفاده می شود. سطح معناداری 0/5 >P در نظر گرفته می شود. |
| ملاحظات اخلاقی | با توجه به اینکه از نمونه های بالینی تایید شده موجود در آزمایشگاه قارچ شناسی به همراه نمونه استاندارد استفاده می شود نیاز به رعایت کد اخلاقی خاصی وجود ندارد |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | 1-غیر دسترس بودن مواد 2- روش صحیح در حین عصاره گیری |
| کلمات کلیدی | عصاره-گیاه دارویی پنج انگشت-ضد قارچی |
| فهرست منابع و مراجع | 1- Martin, DS. and C.P. Jones, Further studies on the practical classification of the monilias. Jurnal of bacteriology, 1940; 39C5: P.609 – 630. 2- Calderone, R.A. and C.J. Clancy, candida and candidiasis. VOL.1.2002; ASM Press Washington, DC.. 3- Ahmad khan MS, Ahmad I, Owais M, shahid M, Musarrut J. Virulence and pathogenicity of fungual pathogens with special reference to candida albicans. Combating fungal in fection 2010; 2: 21 – 45. 4- Hawser SP, Julia Daug Las L. Biofilm formation by candida species on the surface of chather materials in vitro. Infect and immunity 1994; 62 (3): 915 – 921. 5- Hachem R, Hanna H, Kontoyiannis D, Jiany Y, Rood I. The changing Epidemiology of invasive candidiasis American society. Rev 2008; 112: 2493 – 9. 6- Bornett, J.A, A history of research on yeast 8: taxonomy. Yeast, 2004; 21 (14): P. 1141 – 1191. 7. Llovera Suarez V, Perurena Lancha MR. Identification of yeasts in pap smears: clinical characteristics associated with candidiasis. J Rev Cubana Med Trop 2004 Jan-Apr; 56(1): 21-5. 8. Ray D, Goswami R, Dadhwal V, Goswami D, Baneriee U, Kochupillai N. Prolonged (3-month) mycological cure rate after boric acid suppositories in diabetic women with vulvovaginal candidiasis. J Infect 2007; 55(4): 374-7. 9. Heredia G, Garca SD. Prevalence of vaginalcandidiosis in pregnant women. Identification of yeasts and susceptibility to antifungal agents. Rev Argent Microbiol 2006; 38(1):9-12. 10. Puri KJ, Madan A, Bajaj K. Incidence of various causes of vaginal discharge among sexually active females in age group 20-40 years. Indian J Dermatol Venereol Leprol. 2003; 69(2):122-5 11. Andrist LC. Vaginal Health and infections.J JOGNN 2001; 30(3): 306-15. 12. Sobel JD.Vaginitis. J NEJM 1997; 337(26): 1896-903 13-Khosravi A, Malecan M. Effects of Lavandulastoechas extracts on staphylococcus aureus and other gram negative bacteria. The Journal of Qazvin University of Medical Sciences (2004); 29: 3-9. 14.Diggins F. The true history of the discovery of penicillin by Alexander Fleming Biomedical Scientist (Originally published in the Imperial College School of Medicine Gazette). London: Insititute of Biomedical Sciences; March 2003. 15.Neu HC. The crisis of antibiotic resistance. Science (1992); 257:1061-69. 16-Fabrican DS, Farnsworth NR: The value of plants used in traditional medicine for drug discovery. Environ Health Perspect (EHP) 2001; 109: S69-75. 17. Fransworth NR. The role of ethnopharmacology in drug development. Ciba Found Symp 1990; 154: 2-11. 18.Weckesser S, Engel E, Simon B, Wittmer A, Pelz K, Schmepp CM. Screening of plant extracts for antimicrobial activity against bacteria and yeast with dermatological relevance. Phytomedicine 2007; 14: 508-16. 19-سلیم پور فهیمه، مازوجی علی، مظهر سیده فلور، برزین گیتی ( 1392). مقایسه خواص ضد باکتریایی اسانس چهار گونه گیاه دارویی مریم گلی ،دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی شهید بهشتی دوره 37 ، شماره 4، زمستان 1392 ، صفحات 205 تا 210 20-Naghibi F, Mosaddegh M., Mohammadi Motamed M., Ghorbani A.Labiatae Family in folk Medicine in Iran: from Ethnobotany to Pharmacology. Iran J Pharm Res (IJPR) (2005);2:63-79. 21- Zargari A. Medicinal Plants. Tehran: Tehran University Press; (1994). 22- Balali P, Soodi M, Saeidnia S. Protective effects of some medicinal plants from Lamiaceae family against beta-amyloid induced toxicity in PC12 cell , Tehran University Medical Journal, October (2012); Vol. 70, No. 7: 402-409 23- جم زادزیبا، (1391).فلور ایران. تیره نعنا (Lamiaceae). موسسه تحقیقات جنگلها و مراتع کشور. شماره 76. 24- Dogan y, Ay G, Kozuharova E. A study on the anatomical characteristics of Vitex agnus-castus . PHYTOLOGIA BALCANICA 14 (1): (2008). 97 –101 25- Honari N, Pourabolli I, Hakimi zadeh E, Shamsizadeh A, Amin F, Allatavakoli M. 2012. Effect of Vitex Agnus-Castus Extract on Learning and Memory in Ovariectomized Rats J Mazand Univ Med Sci 2012; 22(93): 2-10 . 26- Azimi R, Jamzad Z, Sefidkon F and akhshi-Khaniki GH. The Potential value of phytochemical and micromorphological characters in taxonomic treatment of genus vitex L. (Lamiaceae) . iran journ . Bot. 12 (1) 27- Ramesh P., Ramachandran Nair, A. G. & Subramanian, S. S. Flavonglycosides of Vitex trifolia. Fitotrapia, (1986). 57, 282 – 283. 28- Webster D., Lu j. & Chen S. Activation of the μ-opiate receptor by Vitexagnus-castus methanol extracts: Implicationfor its use in PMS. Journal of Ethnopharmacology, (2006). 106 (2), 216-221. 29- Bahrebar M, Bohaoddini A, Bahrebar A, Taherianfard M, Razavi Motlagh M, Bahrebar A. Study of the Effects of Vitex agnus-castus Leaf Extract on the Serum Concentration of Cholesterol and Triglyceride in Male RatsFood Technology & Nutrition / Fall (2010) / 7 / No. 4 30- Merz P. G., Gorkow C. & Schrödter A. The effects of a special Agnus castus extract (BP1095E1) on prolactin secretion in healthy male subjects. Exp Clin Endocrinol Diabetes, (1996). 04 (6), 447-453. 31- Brown D. J., Pizzorno J. E. & Murray, M. T. Vitex agnus castus (chastetree). Text Book of natural medicine, 2nd edNew York, Churchill Livingstone, (1999). 1019- 1024. 32 -جم زاد، ز.(1385). فلور ایران، تیره شاه پسند Verbenaceae ، جلد 52، چاپ اول، انتشارات موسسه تحقیقات جنگل ها و مراتع کشور، صفحات 3-4. 33- Upton, R. (Ed.). Chaste Tree Fruit, Vitex agnus-castus: Standards of Analysis, Quality Control, and Therapeutics. American Herbal Pharma Pharmacopoeia, Santa Cruz, CA(2001). 34- Cossuta D, Simndi E, Vagi J, Hohmann A, Prech I. Supercritical fluid extraction of Vitex agnus castus fruit. J Supercritical Fluids. (2008); 47: 188–94. 35- Roemheld-Hamm B. Chasteberry. Am Fam Phys. (2005); 72(5): 821-4. 36- Daniele C, Thompson Coon J, Pittler MH, Ernst E. Vitex agnus castus :a systematic review of adverse events. Drug Saf. (2005); 28(4): 319-32. 37 Dugoua JJ, Seely D, Perri D, Koren G, Mills E. Safety and efficacy of chastetree (Vitex agnus castus) during pregnancy and lactation. Can J Pharmacol. (2008); 15: 74-9. 38- Ramezani M, Amin GH and Jalili A. Antinociceptive and anti-inflammatory effects of hydroalcoholic extract of Vitex agnus castus fruit in mice 39- Afarin H, Dakhili M, Zolfaghari M.. Comparison of Antimicrobioal Effect of Essential Oil of Vitex agnus - Castus with Common Antibiotics Invitro Qom University of Medical Sciences Journal. (2015). Vol.9, No.3, 40- Saka F, Karabet F, Daghestani M, Soukkarieh Ch.2015, Composition, in Vitro Antioxidant and Antileishmanial activities of Vitex agnus-castus L. and Thymus syriacus Boiss. Essential Oils. International Journal of ChemTech Research (2015);Vol.8, No.8, pp 53-60 41- Nwachukwu E, Uzoeto N. Antimicrobial activities of leaf of vitex doniana and cajanus cajan on some Bacteria. Researcher. (2010);2(3) 42- Chhabra G.S, Kulkarni K.S. Evaluation of anti-inflammatory activity of Vitex agnus castus leaves. Quantitative analysis of flavonoids as possible active constituents. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry (2014); 3 (1): 183-189 43-Dervishi-Shengjergji D, Papajani V, Hamiti X, Nuro A, Kika B. Antibacterial Activity and Chemical Composition of Vitex agnus castus Fruits Essential Oils from Mbishkodra, Albania J. Int. Environmental Application & Science,(2014) Vol. 9(4): 521-424 44- Asdadi A, Hassani L, Chebli B, Moutaj R, Gharby S, Harhar H, Salghi R, Hadek M. Chemical Composition and Antifungal Activity of Vitex agnus-castus l. Seeds Oil Growing in Morocco, J. Mater. Environ. Sci. 5 (3) (2014) 823-830 45- Jelodar and Askari. 2012. Effect of Vitex agnus-castus fruits hydroalcoholic extract on sex hormones in rat with induced polycystic ovary syndrome (PCOS). Physiology and Pharmacology, 16 (1), 62-69 46- Ramezani M, Amin GH and Jalili A. Antinociceptive and anti-inflammatory effects of hydroalcoholic extract of Vitex agnus castus fruit in mic 47-Moradi A., Ebrahimipour G, Karkhane M, Marzban A.Surveying the Antioxidant and the Antimicrobial Effects of Aqueous and Ethanolic Extractof Rumex Alveollatus L. on In-vitro Indicator Microorganisms. Journal of Fasa University of Medical Sciences l Winter 2015 ; 4 l: No.4 |
| معرفی پژوهش/ اهداف پژوهش (عین عبارت هدف پروپوزال را کپی نکنید. بلکه با جملاتی که برای مردم قابل فهم باشد (برای سواد حدود پنجم ابتدایی )هدف را برای شرکت کنندگان توضیح دهید.) در تمام این متن در صورتیکه شرکت کننده کودک یا فرد فاقد ظرفیت تصمیم گیری است باید مواردیکه منظور از "من"، فرد شرکت کننده بوده است به "کودک" یا "فرد تحت سرپرستی من" اصلاح شود و مواردیکه منظور از "من"، رضایت دهنده است به من به عنوان "ولی" یا "قیم قانونی" اصلاح شود. | |
| خون گیری (آیا طرح شما نیاز به خونگیری دارد یا خیر) | |
| نحوه همکاری/ مزایا ی طرح (در این بخش برای شرکت کنندگان به زبان ساده توضیح دهید که: چه مداخله ای بر روی آنها صورت میگیرد. چه اقدامات پاراکلینیکی بر روی آنها انجام میشود. چه نمونه ای و با چه حجمی از آنها میگیرید در این مدت چند نوبت مراجعه باید داشته باشند و به چه فواصلی چه اقداماتی را در پیگیری آنها انجام میدهید. (حتی میتوانید سود بالقوه ای که شرکت کنندگان میتوانند از شرکت در این پژوهش ببرند بنویسید. این سود میتواند شرح احتمال درمان یا تشخیص بهتر بیماریشان، دریافت خدمات سلامت رایگان و یا پرداخت مشوق مالی در ازای جبران همکاریشان باشد) | |
| عوارض جانبی (منظور عوارض و میزان احتمال بروز آنها در این مطالعه است) | |
| جبران عوارض احتمالی (برای آنکه شرکت کننده بتواند ارزیابی مناسبی از سود و زیان شرکت در پژوهش شما داشته باشد لازم است بتواند سود و زیان مداخلات معمول و مداخلات این پژوهش را مقایسه کند. به عنوان مثال میزان موفقیت و میزان عوارض هریک را مقایسه کند.) - او باید بداند كه اگر در حين و بعد از انجام پژوهش هم هر مشكلي اعم از جسمي و روحي به علت شرکت در اين پژوهش برایش پيش آمد درمان عوارض، و هزينههاي آن و غرامت مربوطه بر عهده مجري خواهد بود. | |
| هزینه های مربوط به انجام طرح تحقیقاتی (تمام مداخلات پژوهشی باید برای بیمار رایگان باشد و بیمار بداند شامل چه مواردی هستند. ) | |
| روش های جایگزین در صورت عدم تمایل به شرکت در مطالعه چه روش های درمانی برای بیمار ارائه خواهد شد | |
| محرمانه بودن بیمار باید بداندکه دست اندر كاران اين پژوهش، كليه اطلاعات مربوط به او را نزد خود به صورت محرمانه نگهداشته و فقط اجازه دارند نتايج كلي و گروهي اين پژوهش را بدون ذکر نام و مشخصات بیمار منتشر كنند. و كميته اخلاق در پژوهش با هدف نظارت بر رعایت حقوق وی ميتواند به اطلاعات ایشان دسترسي داشته باشد. | |
| پاسخگویی به پرسش ها در این بخش نام و اطلاعات دسترسی فردی از عوامل پژوهش را که بتواند اطلاعات صحیح و کافی در اختیار شرکت کنندگان قرار دهند و در مورد عوارض و نگرانیها راهنمایی لازم را ارائه دهند ذکر شود | |
| حق نپذیرفتن یا انصراف بیمار باید بداند که شرکت اودر اين پژوهش کاملاً داوطلبانه است و مجبور به شرکت در اين پژوهش نيست و در صورت عدم شرکت از مراقبتهاي معمول تشخيصي و درماني محروم نخواهد شد او باید بداند كه حتي پس از موافقت با شركت در پژوهش ميتواند هر وقت كه بخواهد، پس از اطلاع به مجري، از پژوهش خارج شود و خروج اواز پژوهش باعث محرومیت از دریافت خدمات درمانی معمول برای اونخواهد شد. | |
| رضایت او باید بداند که اگر اشکال يا اعتراضي نسبت به دست اندركاران يا روند پژوهش دارد مي تواند با كميته اخلاق در پژوهش دانشگاه تماس گرفته و مشکل خود را به صورت شفاهي يا كتبي مطرح نمايد. در انتهای فرم قید گردد : اينجانب موارد فوقالذکر را خواندم و فهميدم و بر اساس آن رضايت آگاهانه خود را براي شركت در اين پژوهش اعلام ميکنم. اينجانب ……………… خود را ملزم به اجراي تعهدات مربوط به مجري در مفاد فوق دانسته و متعهد ميگردم در تأمين حقوق و ايمني شركت كننده در اين پژوهش تلاش نمايم | |
| پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|
