چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 7700 |
| عنوان فارسی طرح | کاربرد و مقایسه تکنیک تکثیر هم دما به واسطه لوپ (LAMP) با Nested-PCRدر تشخیص آلودگی به مالاریا از گسترش خونی تهیه شده در افراد مراجعه کننده به مراکز بهداشتی و درمانی |
| عنوان لاتین طرح | Application and Comparison of Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) technique with Nested-PCR Assays for the Diagnosis of Malaria by Blood Smear Taken From Patients Referred to Health Centers |
| نوع طرح | بنیادی-کاربردی |
| محل اجرای طرح | مدیریت توسعه فناوری سلامت |
| رسته مطالعاتی | تجربی- آزمایشگاهی |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز | 362 |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| اعظم شهرکی پور | همکار | دانشجو | کارشناسی ارشد | azamshahrakipour@gmail.com |
| مهناز شهرکی پور | مشاور | مشاور آمار | کارشناسی ارشد | mahnaz@gmail.com |
| هادی میراحمدی | استاد راهنمای اول پایان نامه دانشجویی | استاد راهنما | دکترای تخصصی | hmirahmadi59@gmail.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | کاربرد و مقایسه تکنیک تکثیر هم دما به واسطه لوپ (LAMP) با Nested-PCRدر تشخیص آلودگی به مالاریا از گسترش خونی تهیه شده در افراد مراجعه کننده به مراکز بهداشتی و درمانی |
| خلاصه طرح به لاتین | Application and Comparison of Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) technique with Nested-PCR Assays for the Diagnosis of Malaria by Blood Smear Taken From Patients Referred to Health Centers |
| محل اول بکارگیری نتایج تحقیق | |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | انگل مالاریامتعلق به سلسله: Eukaryota،کینگدام:Archezoa،شاخه:Apicomplexa رده:Haematozea،راسته:Haemosporida،زیرراسته:Haemosporina خانواده:Plasmodiidae،جنس:Plasmodium میباشد. در این زیر راسته تمامی گونه ها در بیشتر دوره زندگی ،انگل درون سلولی اجباری بوده ودارای دو میزبان می باشند. میزبان مهره دار که در آن تولید مثل غیر جنسی انگل صورت می گیرد را میزبان واسط گویندومیزبان غیر مهره دار یا حشره خونخوار را میزبان قطعی گویند.ویژگی بارز شاخه اپی کمپلکسا حضورکمپلکس راسی است که در مراحل خاصی از زندگی آنها تظاهر یافته وشامل میکرونم،حلقه های قطبی،راپتری وکونوئید است.انگل مالاریادارای156 گونه آلوده کننده در پستانداران،پرندگان وخزندگان است .عوامل ایجاد کننده مالاریای انسانی شامل پنج گونه(پلاسمودیوم فالسی پاروم ،پلاسمودیوم ما لاریه ،پلاسمودیوم اووال،پلاسمودیوم ویواکس،پلاسمودیوم ناولزی)است. (1) تظاهرات این بیماری به صورت عفونت حاد و در بیشتر مواقع وخیم و گاها با دوره طولانی همراه با تب متناوب به همراه حمله های روده ای ،آنمی و بزرگی طحال بروز مینماید. به علت آنمی و بروز عود های مکرر اتلاف نیروی کار ایجاد شده و این امر در وضعیت اقتصادی و کشاورزی و فعالیت های مدنی تاثیر گذار میباشد. در حال حاضر بیشتر از 90 کشور در دنیا جزء کشور های مالاریا خیز محسوب شده که حدود نیمی از آنها کشورهای آفریقایی میباشند که به علت فقر فرهنگی و اقتصادی در این مناطق شدت و حجم بروز بیماری افزایش میابد.با وجود بهبود وضعیت اقتصادی و اجتماعی در کشور های درگیر در سالهای اخیر و اجراء برنامه های مبارزاتی علیه بیماری از تعداد این کشور های در معرض خطر کاسته شده ولی تعداد موارد بروز بیماری و مرگ و میر ناشی از آن متاسفانه هنوز به حدی است که میبایست آن را به عنوان یک معضل و مشکل بهداشتی مورد توجه قرار داد .(2) مالاریا یکی از شایعترین بیماریهای عفونی در مناطق گرمسیر جهان است وبه دلیل اهمیت آن از نظر بهداشتی ودرمانی به عنوان یکی از شش بیماری مهم پژوهشی سازمان بهداشت جهانی تحت عنوان Tropical disease researchمطرح میباشد. در بیش از 107 کشور جهان این بیماری اندمیک می باشد .هرسال 207 میلیون نفر با ظهور علائم بالینی مالاریا به این بیماری مبتلا میگردند گفته میشود در هر ثانیه 10 مورد مالاریا در کشورهای در حال توسعه جهان پدیدار می شود.)3و4) سالیانه 627 هزار میلیون مرگ از مالاریا اتفاق می افتد که 90 % آن کودکان آفریقایی هستند هر روز 3000 نفر از مالاریا می میرند ومالاریا به تنهایی سبب بیش از 70% مرگ ومیر کودکان در جهان سوم میباشد. (3و4)پلاسمودیوم فالسی پاروم وپلاسمودیوم ویواکس مهمترین انگل های ایجاد کننده مالاریا در انسان محسوب میشوند.(5 ) پلاسمودیوم ویواکس حدود 80 میلیون مورد مالاریا را در جهان ایجاد میکند .(6) این بیماری از دیر باز در کشور ما شیوع داشته وهمواره برنامه های کنترل مالاریا مطرح بوده است بر طبق آمارمرکز مدیریت بیماریهای وزارت کشور از سال 2008 تا کنون تعداد موارد مالاریا در ایران کاهش داشته است .اکثر موارد ابتلا مربوط به 3 استان جنوبی کشور شامل سیستان وبلوچستان،هرمزگان وجنوب کرمان بوده است .موارد ابتلا در سال 2014 در استان سیستان وبلوچستان 521مورد گزارش گردیدکه87.7%پلاسمودیوم ویواکس 10.94%پلاسمودیوم فالسی پاروم و1.36%مربوط به موارد میکس ویواکس وفالسی پاروم میباشد.(7) اگر چه بیماری ناشی از پلاسمودیوم ویواکس در مقایسه با فالسی پاروم میزان مرگ ومیر کمتری دارد اما دارای اثرات اقتصادی واجتماعی زیادی دارد.(5) عفونت پلاسمودیوم ویواکس با توجه به عودهای مکرر ووجود گزارش های اخیر مبنی بر نقش ویواکس در ایجاد علائم مالاریای سخت وفقدان داروی مناسب برای گونه های مقاوم مشکلات موجود را بارزتر ونمایان تر میکند.(8و9و10) با توجه به اهمیت بیماری مالاریا تشخیص سریع ودقیق موارد مالاریا در کمتر از 48 ساعت ضروری میباشد.در ایران آزمون استاندارد جهت تشخیص انگل در نمونه های خونی همانند سایر کشورهاتشخیص میکروسکوپی انگل در گسترش خونی رنگ آمیزی شده با گیمسا می باشد.از مزایای این روش در صورتی که توسط تکنسین مجرب وآموزش دیده شود تمایز مراحل تکاملی انگل ،تعیین تعداد انگل میباشد از سایر محاسن این روش راحت بودن وعدم نیاز به تجهیزات گران قیمت میباشد. از معایب این روش میتوان به حساسیت نسبتا کم آن (توانایی تشخیص 5-10 انگل در هر میکرولیتر خون)که تحت تاثیر عواملی چون مهارت تکنسین وکیفیت موادمیباشد اشاره کرد.(11و12) با توجه به گزارشا تی مبنی بر میزان بالای اشتباه در تشخیص میکروسکوپی مالاریا در ایران در سالهای اخیر (13و14)بخصوص در موارد میکس پلاسمودیوم فالسی پاروم وویواکس که نیاز به درمان رادیکال برای ویواکس دارد میتوان برای تشخیص مالاریااز شناسایی DNA انگل در نمونه خون بیمار با تکنیکهای متنوع pcrاستفاده کرد. تکثیر هم دما به واسطه لوپLAMP)) یکی از تست های تکثیر اسید نوکلئیک است که جهت تکثیر DNAبا حساسیت واختصاصیت بالا به منظور شناسایی پاتوژنهایی نظیر ویروسها ،باکتریهاوتک یاخته هاوقارچها استفاده شده است.(15و16و17)اخیرا گزارش شده که تکنیک LAMPدر تشخیص عفونت های انگلی مانند مالاریابسیار قدرتمند است(16) بعلاوه تکنیک LAMPدر کشورهایی با منابع ضعیف که دارای حداقل امکانات هستند یک روش خوب به شمار میآید زیرا نیاز به تجهیزات گرمایی ویژه ا ی ندارد وسریع ودقیق وحساس است .(17) درتکنیک LAMPبا استفاده از 4 الی 6 پرایمرمخصوص که 6 تا 8 ناحیه مشخص از DNA الگو را شناسایی می کنند و یک DNA پلیمراز با خاصیت جانشینی رشته، DNA را با اختصاصیت، کارایی و سرعت بالا تکثیر می نماید. (18)این روش می تواند تا 10⁹ کپی را در مدت زمانی کمتر از یک ساعت تحت شرایط هم دمایی (C°63 تا C°65) تکثیر کند. یک انکوباتور ساده مثل بن ماری یا یک بلوک حرارتی برای تکثیر DNA کافی است.( 19) محصولات واکنش LAMP از طریق الکتروفورز بر روی ژل آگارز رنگ شده با اتیدیوم بروماید ومشاهده باندهای چندگانه با الگوی نردبانی شکل، دیدن فلورسانس سبزرنگ بدلیل وجود سایبر گرین I در لوله های واکنش زیر نور UV و مشاهده چشمی رسوب سفید رنگ منیزیم پیروفسفات در لوله های واکنش قابل تشخیص هستند. (20)موارد فوق استفاده از LAMP را بعنوان یک تست سریع و دقیق و ساده در شرایط فیلد ممکن می سازد. |
| مشکل جاری که سیاست گزار با آن مواجه است کدام است؟ | |
| روش های موجود کدامها هستند؟ | |
| پیشنهاد اول نحوه کاربرد | |
| محل دوم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | 1-توزیع فراوانی مالاریا با استفاده از تکنیک میکروسکوپی چقدر است؟ 2-توزیع فراوانی مالاریا با استفاده ازتکنیکNested-PCR چقدر است؟ 3-توزیع فراوانی مالاریا با استفاده از تکنیک LAMP چقدر است؟ 4-حساسیت وویژگی تکنیکهای Nested-PCRوLAMPوروش میکروسکوپی چقدر است؟ |
| هدف کلی طرح | کاربرد و مقایسه تکنیک تکثیر هم دما به واسطه لوپ (LAMP) باNested- PCR در تشخیص آلودگی به مالاریا از گسترش خونی تهیه شده در افراد مراجعه کننده به مراکز بهداشتی و درمانی |
| منافع و مضرات روشهای موجود کدامند؟ | |
| چرا پیام تحقیق شما حلال مشکل جاری است؟ | |
| اهداف اختصاصی | 1-تعیین توزیع فراوانی مالاریابا استفاده از تکنیک میکروسکوپی بر روی گسترش خونی تهیه شده از افراد مراجعه کننده به مراکز بهداشتی -درمانی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان (شهرستان زاهدان)در 6 ماهه اول سال 1395 . 2-تعیین توزیع فراوانی مالاریا با استفاده از تکنیک Nested-PCRبر روی گسترش خونی تهیه شده از افراد مراجعه کننده به مراکز بهداشتی-درمانی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان(شهرستان زاهدان ) در 6 ماهه اول سال 1395. 3-تعیین توزیع فراوانی مالاریا با استفاده ازتکنیک LAMPبر روی گسترش خونی تهیه شده از افراد به مراکز بهداشتی درمانی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان (شهرستان زاهدان )در 6 ماهه اول سال 1395. 4-تعیین حساسیت وویژگی تکنیک های Nested-PCRوLAMPوروش استاندارد میکروسکوپی |
| پیشنهاد دوم نحوه کاربرد | |
| محل سوم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | 1-استفاده از نتایج طرح در برنامه ریزی و کنترل بیماری مالاریا در استان سیستان و بلوچستان 2-معرفی روش های جدید مولکولی جهت تشخیص قطعی مالاریا در انسان و استفاده از این روش ها در مراکز دانشگاهی، تحقیقاتی و آزمایشگاه ها و مراکز بهداشتی درمانی کشور |
| پیام تحقیق شما چه منافعی از نظر هزینه، کارایی و بهره وری برای مدیر دارد؟ | |
| برای اجرای راه حل پیشنهادی شما چه موانع و حمایتهایی وجود دارند؟ | |
| تعریف واژه های تخصصی | 1-پلاسمودیوم ویواکس: تک یاخته انگلی داخل سلولی از شاخه آپیکمپلکساوخانواده پلاسمودیده که قادر به ایجاد مالاریای سه –یک خوش خیم درانسان میباشد 2-پلاسمودیوم فالسیپاروم:تک یاخته انگلی داخل سلولی از شاخه آپیکمپلکسا وخانواده پلاسمودیده که قادر به ایجاد مالاریای سه –یک بدخیم در انسان میباشد 2-اسپوروزاییت: فرم فعال وعفونت زای انگل برای انسان که از پشه به انسان منتقل میگردد. 3-مروزوئیت: فرم حاصل از تکثیر غیر جنسی انگل در بدن میزبان واسط(انسان) که به دو فرم داخل گلوبولی و خارج گلبولی انجام میشود. 4-شیزوگونی: تکثیر غیر جنسی انگل در بدن میزبان واسط که به دو شکل شیزوگونی خونی وشیزوگونی نسجی (کبدی) است 5-واکنش زنجیره پلی مراز (PCR) : در زیست شناسی ملکولی واکنش زنجیره پلی مراز روشی است برای تکثیر یک یا چند نسخه از یک قطعه ملکول DNA که موجب تولید میلیونها نسخه از یک توالی خاص DNA می گردد. این روش متکی بر چرخه حرارتی ، شامل چرخه هایی از اعمال حرارت و سردکردن واکنش برای ذوب و نسخه برداری آنزیمی ملکول DNA است. 6-واکنش زنجیره پلی مراز آشیانه ای (Nested-PCR): واکنش زنجیره پلی مراز آشیانه ای روش تغییر یافته ای از واکنش زنجیره پلی مراز است که برای کاهش آلودگی محصولات حاصله از تکثیر جایگاه های اتصال پرایمرغیر منتظره ابداع گردیده است. در این روش دو دسته پرایمر در دو مرحله متوالی واکنش زنجیره پلی مراز مورد استفاده قرارمی گیرد که دومین سری پرایمر جهت تکثیر یک هدف ثانویه در داخل اولین محصول بکار می رود. 7-تکثیر هم دما به واسطه لوپ (LAMP) : تکثیر هم دما به واسطه لوپ (LAMP) یکی از تکنیکهای جدید تکثیر اسیدهای نوکلئیک است که با استفاده از 4 الی 6 پرایمرمخصوص که 6 تا 8 ناحیه مشخص از DNA الگو را شناسایی می کنند و یک DNA پلیمراز با خاصیت جانشینی رشته، DNA را با اختصاصیت، کارایی و سرعت بالا تکثیر می نماید. این روش می تواند تا109 کپی را در مدت زمانی کمتر از یک ساعت تحت شرایط هم دمایی (C°63 تا C°65) تکثیر کند. یک آنکوباتور ساده مثل بن ماری یا یک بلوک حرارتی برای تکثیر DNA کافی است. محصولات واکنش LAMP از طریق الکتروفورز بر روی ژل آگارز رنگ شده با اتیدیوم بروماید ومشاهده باندهای چندگانه با الگوی نردبانی شکل، دیدن فلورسانس سبزرنگ بدلیل وجود سایبر گرین I در لوله های واکنش زیر نور UV و مشاهده چشمی رسوب سفید رنگ منیزیم پیروفسفات در لوله های واکنش قابل تشخیص هستند. موارد فوق استفاده از LAMP را بعنوان یک تست سریع و دقیق و ساده در شرایط فیلد ممکن می سازد 8-روش میکروسکوپی در تشخیص مالاریا: Gold standard تشخیص مالاریا که لام تهیه شده ورنگ آمیزی شده به روش گیمسا از خون محیطی بیمار توسط میکروسکوپ بررسی میشود. 9-رینگ: فرم حاصل از رها شدن مروزوئیت کبدی در داخل خون که وارد گلبول قرمز شده به فرم گرد در میاید که دارای یک هسته ویک واکوئل غذایی است که توسط سیتوپلاسم احاطه شده است. 10-تروفوزوئیت: فرم حاصل از رشد انگل در گلبول قرمزکه به3 فرم :تروفوزوئیت جوان،در حال رشدوپیر دیده میشود 1-پلاسمودیوم ویواکس: تک یاخته انگلی داخل سلولی از شاخه آپیکمپلکساوخانواده پلاسمودیده که قادر به ایجاد مالاریای سه –یک خوش خیم درانسان میباشد 2-پلاسمودیوم فالسیپاروم:تک یاخته انگلی داخل سلولی از شاخه آپیکمپلکسا وخانواده پلاسمودیده که قادر به ایجاد مالاریای سه –یک بدخیم در انسان میباشد 2-اسپوروزاییت: فرم فعال وعفونت زای انگل برای انسان که از پشه به انسان منتقل میگردد. 3-مروزوئیت: فرم حاصل از تکثیر غیر جنسی انگل در بدن میزبان واسط(انسان) که به دو فرم داخل گلوبولی و خارج گلبولی انجام میشود. 4-شیزوگونی: تکثیر غیر جنسی انگل در بدن میزبان واسط که به دو شکل شیزوگونی خونی وشیزوگونی نسجی (کبدی) است 5-واکنش زنجیره پلی مراز (PCR) : در زیست شناسی ملکولی واکنش زنجیره پلی مراز روشی است برای تکثیر یک یا چند نسخه از یک قطعه ملکول DNA که موجب تولید میلیونها نسخه از یک توالی خاص DNA می گردد. این روش متکی بر چرخه حرارتی ، شامل چرخه هایی از اعمال حرارت و سردکردن واکنش برای ذوب و نسخه برداری آنزیمی ملکول DNA است. 6-واکنش زنجیره پلی مراز آشیانه ای (Nested-PCR): واکنش زنجیره پلی مراز آشیانه ای روش تغییر یافته ای از واکنش زنجیره پلی مراز است که برای کاهش آلودگی محصولات حاصله از تکثیر جایگاه های اتصال پرایمرغیر منتظره ابداع گردیده است. در این روش دو دسته پرایمر در دو مرحله متوالی واکنش زنجیره پلی مراز مورد استفاده قرارمی گیرد که دومین سری پرایمر جهت تکثیر یک هدف ثانویه در داخل اولین محصول بکار می رود. 7-تکثیر هم دما به واسطه لوپ (LAMP) : تکثیر هم دما به واسطه لوپ (LAMP) یکی از تکنیکهای جدید تکثیر اسیدهای نوکلئیک است که با استفاده از 4 الی 6 پرایمرمخصوص که 6 تا 8 ناحیه مشخص از DNA الگو را شناسایی می کنند و یک DNA پلیمراز با خاصیت جانشینی رشته، DNA را با اختصاصیت، کارایی و سرعت بالا تکثیر می نماید. این روش می تواند تا109 کپی را در مدت زمانی کمتر از یک ساعت تحت شرایط هم دمایی (C°63 تا C°65) تکثیر کند. یک آنکوباتور ساده مثل بن ماری یا یک بلوک حرارتی برای تکثیر DNA کافی است. محصولات واکنش LAMP از طریق الکتروفورز بر روی ژل آگارز رنگ شده با اتیدیوم بروماید ومشاهده باندهای چندگانه با الگوی نردبانی شکل، دیدن فلورسانس سبزرنگ بدلیل وجود سایبر گرین I در لوله های واکنش زیر نور UV و مشاهده چشمی رسوب سفید رنگ منیزیم پیروفسفات در لوله های واکنش قابل تشخیص هستند. موارد فوق استفاده از LAMP را بعنوان یک تست سریع و دقیق و ساده در شرایط فیلد ممکن می سازد 8-روش میکروسکوپی در تشخیص مالاریا: Gold standard تشخیص مالاریا که لام تهیه شده ورنگ آمیزی شده به روش گیمسا از خون محیطی بیمار توسط میکروسکوپ بررسی میشود. 9-رینگ: فرم حاصل از رها شدن مروزوئیت کبدی در داخل خون که وارد گلبول قرمز شده به فرم گرد در میاید که دارای یک هسته ویک واکوئل غذایی است که توسط سیتوپلاسم احاطه شده است. 10-تروفوزوئیت: فرم حاصل از رشد انگل در گلبول قرمزکه به3 فرم :تروفوزوئیت جوان،در حال رشدوپیر دیده میشود |
| پیشنهاد سوم نحوه کاربرد | |
| محل چهارم بکارگیری نتایج تحقیق | |
| نوع مطالعه | تجربی -آزمایشگاهی |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | لامهای تهیه شده از خون محیطی افراد مشکوک به مالاریا که به مراکز بهداشتی-درمانی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان (شهرستان زاهدان )در 6ماهه اول سال1395 مراجعه کرده اند. |
| پیشنهاد چهارم نحوه کاربرد | |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | کلیه لامهای جمع آوری شده(شهرستان زاهدان )در معاونت بهداشتی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان در طی 6 ماهه اول1395 واردمطالعه خواهد شد.لازم به ذکر است حداقل حجم نمونه با توجه به رفرنس شماره (21)،105برآورد میگردد. |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | سرشماری |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | برای ثبت نتایج از فرم اطلاعاتی جمع آوری داده های پایان نامه تحقیقاتی کاربرد ومقایسه تکنیک LAMP وNested-PCR در تشخیص مالاریا با استفاده از گسترش خونی افراد مراجعه کننده به مراکز بهداشتی-درمانی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان استفاده میشود(فرم تهیه شده ضمیمه میباشد) |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | پس ازهماهنگی با معاونت تحقیقات وفناوری دانشگاه علوم پزشکی زاهدان ومعاونت بهداشتی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان ،لامهای تهیه شده از افراد مراجعه کننده به مراکز بهداشتی-درمانی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان در طی 6 ماهه اول سال 1395که مشکوک به مالاریا بوده اند جمع آوری وپس از ثبت در فرم طراحی شده جمع آوری اطلاعات پایان نامه به آزمایشگاه انگل شناسی در جعبه مخصوص لام انتقال داده میشود. پس از انتقال مجددا کلیه لامها از لحاظ دید میکروسکوپی بررسی شده ونتیجه حاصله به صورت مثبت/منفی در فرم جمع آوری اطلاعات پایان نامه ثبت میشود. سپس با استفاده از پروتکل ذکر شده دربروشور کیت مورد استفاده از روی لامها DNAانگل استخراج وتخلیص میشودوتا زمان انجام آزمایش در20-درجه نگهداری میشود. بعد ازاین مراحل پرایمر مخصوص دو تکنیک IAMPوNestedPCRطراحی وشرایط اپتیمم جهت واکنش LAMPدرآزمایشگاه تعیین وراه اندازی میشود. دو تکنیک مولکولی LAMPوNested-PCRانجام ونتایج حاصل از تکنیک Nested-PCRبر روی ژل آگارز رنگ آمیزی شده با اتیدیوم بروماید مشاهده وبه صورت مثبت/منفی در فرم جمع آوری اطلاعات ثبت میشودمیشودهمچنین نتایج حاصل از تکنیک LAMPبراساس مشاهده رسوب سفید رنگ منیزیوم پیروفسفات و در مرحله پایانی مشاهده فلورسانس زیر نورUVبه دلیل افزودن سایبرگرینIدر لوله واکنش به صورت مثبت/منفی در فرم جمع آوری اطلاعات پایان نامه ثبت میشود.(به عنوان پایلوت جهت تایید Amplification چند نمونه از محصولات مثبت ارزیابی شده LAMP جهت تعیین توالی Sequence می گردد .) در پایان حساسیت وویژگی تکنیکها با استفاده از روشهای آماری انجام میشود. |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | با استفاده از روشهای آمار توصیفی:(تنظیم جدول توزیع فراوانی،رسم نمودار،تعیین شاخص های آماری)وروشهای آمارتحلیلی:(تعیین حساسیت وویژگی ونیز ضریب کاپا) داده هادرسطح اطمینان95%وبا نرم افزار SPSS تجزیه وتحلیل خواهد شد. |
| ملاحظات اخلاقی | در این پژوهش کدهای اخلاقی زیر از دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی رعایت شده است. با کد های 1، 2، 3، 4، 5، 7، 10، 11، 12، 13، 14، 15، 16، 17، 18، 19، 20، 21، 22، 23، 25، 26، 27، 28، 29، 30 و 31 همچنین در این پژوهش کدهای اخلاقی زیر از دفتر چه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران راهنمای عمومی با کد های 1، 2، 3، 4، 5، 6، 7، 8، 9، 10 ، 11، 12 |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | 1-تهیه موادومعرف آزمایش که LAMP از خارج ازکشور تهیه میشودبه دلیل عدم ساخت در داخل کشور راه حلی ندارد 2-یکی از خطاهای احتمالی، خطای فرد مشاهده گر در قرائت نتایج تستها می باشد . برای برآورد اثر آن ، محقق بر روی 30 نمونه از دو فرد مشاهده گر به طور مستقل استفاده می کند و هر کدام از این افراد نتایج را بدون اطلاع از یکدیگر ثبت می نمایند. در نهایت با محاصبه ضریب توافق کاپا ، میزان توافق دو مشاهده گر تعیین می گردد و در صورتی که ضریب توافق کاپا بالای 95٪ باشد ، خطای مشاهده گر قابل تحمل خواهد بود. 3-یکی دیگر از منابع خطا، خطای ابزار می باشد. فقط از دستگاههایی استفاده خواهد شد که قبلا توسط کارشناسان بخش کالیبره و استاندارد شده باشند(روایی آنها مورد تایید باشد). |
| کلمات کلیدی | LAMP, Nested-PCR, Malaria تکنیک تکثیر هم دما به واسطه لوپ، PCR آشیانه ای، مالاریا |
| فهرست منابع و مراجع | 1- Cavalier-Smith T, Kingdom Protozoa and its 18 Phyla. Microbia Rev 1993; 57:953-94. 2- Gilles Herbert M, Protozoal Disease. Co-Published in the United State of America by Oxford University Press Inc.New Yorc; 1999. 3- Menendez C. Malaria During Pregnancy: apriority Area of Malaria Research and Control. Reviews. Parasitol Today 1995; 5:178-183. 4- WHO 2013. WHO Global Malaria Programme. WORLD MALARIA REPORT 2013. ISBN: 987 924 156410 6. (NLM classification: WC 765) . 5- Kochen CH, Dubbeld MA, Vanderwel A, Pronk JT, Waters AP, Langermans JA, et al. High Level Expression of Plasmodium vivax Apical Membrane Antigen 1 (AMA-1) in Pichiapastoris: Strong Immunogenicity in Macacamulatta Immunized with P.vivax AMA-1 and Adjuvant SBAS2. Infect Immune 1999; 67(1): 43-49 6- Rodrigues MHC, Rodrigues KM, Oliveira TR, Comodo AN, Rodrigues MM, Kocken CHM, et al. Antibody response of Naturally Infected Individuals to Recombinant Plasmodium vivax Apical Membrane Antigen-1. In J Parasitol 2005; 35(2):185-192. 7-Disease control department provincial health center zahedan university of Medical sciences. 8- Santos-Ciminera PD, Alecrim MG, Roberts DR, Quinnan GVJr, Molecular Epidemiology of Plasmodium vivax in the State of Amazonas/Brazil. Acta 9- Rajesh V, Elmaran M, Vidya S, Gowrishankar M, Kochar D, Das A. Plasmodium vivax: Genetic Diversity of Apical Membrance Antigen-1 (AMA-1) in Isolate from India. Exp Parasitol 2007; 116 (3): 252-256. 10- Wilairatana P, Loareesuwan S, Gilles HM., editors. Pathogenesis, Pathology. Clinical Manifestation and Differential Diagnosis. In: Protozoal Diseases; 1999 11- Bruce-Chwatt LJ. Essential malariology. 2nd ed. London: William Heinemann; 1985. 12- World Health Organization (WHO). Severe and complicated malaria. World Health Organization, Division of Control of Tropical Diseases. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1990;84(suppl 2):1-65. 13- Zakeri S, Najafabadi ST, Zare A, Djadid ND. Detection of malaria parasites by nested PCR in south-eastern, Iran: evidence of highly mixed infections in Chahbahar district. Malar J. 2002; 1:2. 14- Zakeri S, Mamaghani S, Mehrizi AA, Shahsavari Z, Raeisi A, Arshi S, et al. Molecular evidence of mixed P. vivax and P. falciparum infections in northern Islamic Republic of Iran. East Mediterr Health J. 2004; 10:336-342. 15-Notomi T., Okayama H., Masubuchi H., et al. Loop-Mediated Isothermal Amplification of DNA. Nucleic Acids Research, 2000, Vol.28, N.12, 16- Qing-Ming Kong, Shao-Hong Lu, Qun-Bo Tong, et al., Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): Early detection of Toxoplasma gondii infection in mice. Parasites & Vectors 2012, 5:2 17- Zhang H,Thekisoe., Oriel M.M. Aboge Gabriel O. et al., Toxoplasma gondii: Sensitive and rapid detection of infection by loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method. Experimental Parasitology 122 (2009) 47–50 18- Notomi, T., Okayama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watanabe, K., Amino, N., Hase, T., Loop- mediated isothermal amplification of DNA. Nucleic Acids Res. 2000; 28: E63 19- Karanis P. and Ongerth J., LAMP – a powerful and flexible tool for monitoring microbial pathogens. Trends Parasitol. 2009; 25(11): 498-9. 20- Krasteva D., Toubiana M., Hartati Sri., et al., Development of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) as a diagnostic tool of toxoplasmosis. Veterinary Parasitology 2009; 162: 327–331. 21-Pöschl B, Waneesorn J, Thekisoe O,etal., Comparative diagnosis of malaria infections by microscopy, nested PCR, and LAMP in northern Thailand. Am J Trop Med Hyg. 2010 Jul;83(1):56-60 22- Hopkins H, Gonzalez IJ, Polley SD, Angutoko P, Ategeka J, Asiimwe C, et al. Highly sensitive detection of malaria parasitemia inamplification kit in a remote clinic in Uganda.J Infect Dis. 2013;208(4):645–52 23-Marti H, Stalder C, González IJ. Diagnostic accuracy of a LAMP kit for diagnosis of imported malaria in Switzerland. Travel Med Infect Dis. 2015 Mar-Apr;13(2):167-71 24-Oriero EC, Okebe J,etal., Diagnostic performance of a novel loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay targeting the apicoplast genome for malaria diagnosis in a field setting in sub-Saharan Africa. Malar J. 2015 Oct 9;14(1):396. 25- Vallejo AF, Martinez NL, Gonzalez IJ, Arevalo-Herrera M, Herrera S. Evaluation of the loop mediated isothermal DNA amplification (LAMP) kit for malaria diagnosis in P. vivax endemic settings of Colombia. PLoS N, egl Trop Dis. 2015;9:e3453. 26-Morris U, Khamis M, Aydin-Schmidt B,etal., Field deployment of loop-mediated isothermal amplification for centralized mass-screening of asymptomatic malaria in Zanzibar: a pre-elimination setting Malar J. 2015 May 17;14:205 27- Sotiriadou I. and Karanis P., Evaluation of loop-mediated isothermal amplification for detection of Toxoplasma gondii in water samples and comparative findings by polymerase chain reaction and immunofluorescence test (IFT). Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 62 (2008) 357–365 28-Ling Lau Y., Meganathan P., Sonaimuthu P., et al., Specific, Sensitive, and Rapid Diagnosis of Active Toxoplasmosis by a Loop-Mediated Isothermal Amplification Method Using Blood Samples from Patients. J. Clin. Mic., Oct. 2010, 3698–3702 |
| معرفی پژوهش/ اهداف پژوهش (عین عبارت هدف پروپوزال را کپی نکنید. بلکه با جملاتی که برای مردم قابل فهم باشد (برای سواد حدود پنجم ابتدایی )هدف را برای شرکت کنندگان توضیح دهید.) در تمام این متن در صورتیکه شرکت کننده کودک یا فرد فاقد ظرفیت تصمیم گیری است باید مواردیکه منظور از "من"، فرد شرکت کننده بوده است به "کودک" یا "فرد تحت سرپرستی من" اصلاح شود و مواردیکه منظور از "من"، رضایت دهنده است به من به عنوان "ولی" یا "قیم قانونی" اصلاح شود. | |
| خون گیری (آیا طرح شما نیاز به خونگیری دارد یا خیر) | |
| نحوه همکاری/ مزایا ی طرح (در این بخش برای شرکت کنندگان به زبان ساده توضیح دهید که: چه مداخله ای بر روی آنها صورت میگیرد. چه اقدامات پاراکلینیکی بر روی آنها انجام میشود. چه نمونه ای و با چه حجمی از آنها میگیرید در این مدت چند نوبت مراجعه باید داشته باشند و به چه فواصلی چه اقداماتی را در پیگیری آنها انجام میدهید. (حتی میتوانید سود بالقوه ای که شرکت کنندگان میتوانند از شرکت در این پژوهش ببرند بنویسید. این سود میتواند شرح احتمال درمان یا تشخیص بهتر بیماریشان، دریافت خدمات سلامت رایگان و یا پرداخت مشوق مالی در ازای جبران همکاریشان باشد) | |
| عوارض جانبی (منظور عوارض و میزان احتمال بروز آنها در این مطالعه است) | |
| جبران عوارض احتمالی (برای آنکه شرکت کننده بتواند ارزیابی مناسبی از سود و زیان شرکت در پژوهش شما داشته باشد لازم است بتواند سود و زیان مداخلات معمول و مداخلات این پژوهش را مقایسه کند. به عنوان مثال میزان موفقیت و میزان عوارض هریک را مقایسه کند.) - او باید بداند كه اگر در حين و بعد از انجام پژوهش هم هر مشكلي اعم از جسمي و روحي به علت شرکت در اين پژوهش برایش پيش آمد درمان عوارض، و هزينههاي آن و غرامت مربوطه بر عهده مجري خواهد بود. | |
| هزینه های مربوط به انجام طرح تحقیقاتی (تمام مداخلات پژوهشی باید برای بیمار رایگان باشد و بیمار بداند شامل چه مواردی هستند. ) | |
| روش های جایگزین در صورت عدم تمایل به شرکت در مطالعه چه روش های درمانی برای بیمار ارائه خواهد شد | |
| محرمانه بودن بیمار باید بداندکه دست اندر كاران اين پژوهش، كليه اطلاعات مربوط به او را نزد خود به صورت محرمانه نگهداشته و فقط اجازه دارند نتايج كلي و گروهي اين پژوهش را بدون ذکر نام و مشخصات بیمار منتشر كنند. و كميته اخلاق در پژوهش با هدف نظارت بر رعایت حقوق وی ميتواند به اطلاعات ایشان دسترسي داشته باشد. | |
| پاسخگویی به پرسش ها در این بخش نام و اطلاعات دسترسی فردی از عوامل پژوهش را که بتواند اطلاعات صحیح و کافی در اختیار شرکت کنندگان قرار دهند و در مورد عوارض و نگرانیها راهنمایی لازم را ارائه دهند ذکر شود | |
| حق نپذیرفتن یا انصراف بیمار باید بداند که شرکت اودر اين پژوهش کاملاً داوطلبانه است و مجبور به شرکت در اين پژوهش نيست و در صورت عدم شرکت از مراقبتهاي معمول تشخيصي و درماني محروم نخواهد شد او باید بداند كه حتي پس از موافقت با شركت در پژوهش ميتواند هر وقت كه بخواهد، پس از اطلاع به مجري، از پژوهش خارج شود و خروج اواز پژوهش باعث محرومیت از دریافت خدمات درمانی معمول برای اونخواهد شد. | |
| رضایت او باید بداند که اگر اشکال يا اعتراضي نسبت به دست اندركاران يا روند پژوهش دارد مي تواند با كميته اخلاق در پژوهش دانشگاه تماس گرفته و مشکل خود را به صورت شفاهي يا كتبي مطرح نمايد. در انتهای فرم قید گردد : اينجانب موارد فوقالذکر را خواندم و فهميدم و بر اساس آن رضايت آگاهانه خود را براي شركت در اين پژوهش اعلام ميکنم. اينجانب ……………… خود را ملزم به اجراي تعهدات مربوط به مجري در مفاد فوق دانسته و متعهد ميگردم در تأمين حقوق و ايمني شركت كننده در اين پژوهش تلاش نمايم | |
| پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی | فرم جمع آوری داده های پایان نامه تحقیقاتی کاربردومقایسه تکنیکLAMPوNested-PCRدر تشخیص مالاریابااستفاده از گسترش خونی افراد مراجعه کننده به مراکز بهداشتی-درمانی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان(شهرستان زاهدان ) |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| form.jpg | 1394/10/28 | 870521 | دانلود |
