چاپ صفحه |  صفحه نخست سامانه |  مجری و همکاران |  اطلاعات تفضیلی |  دانلود | علوم پزشکی زاهدان |
| کد طرح | 7712 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثرات محافظتی عصبی عصاره هیدروالکلی برگ زیتون بر نورونهای جسم سیاه مغز میانی در رتهای نر مدل بیماری پارکینسون |
| عنوان لاتین طرح | Study of neuroprotective effects of hydro-alcoholic extract of olive leaves on midbrain substantia nigra neurons in male rats model of Parkinson’s disease |
| نوع طرح | بنیادی-کاربردی |
| محل اجرای طرح | مدیریت توسعه فناوری سلامت |
| رسته مطالعاتی | تجربی- آزمایشگاهی |
| دانشکده/مرکز | دانشکده پزشکی زاهدان |
| زمان اجرا -روز | 365 |
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح | نوع همکاری | درجهتحصیلی | پست الکترونیک |
|---|---|---|---|---|
| مریم سربیشگی درمیان | مجری | اجراء طرح | دکترای تخصصی | msarbishegi@yahoo.co.in |
| سعیده سلیمی | همکار | نظارت بر آزمایش نمونه ها | دکترای تخصصی | sasalimi@yahoo.com |
| غلامرضا کمیلی | همکار | همکاری در اجرای طرح | متخصص | rkomeili@gmail.com |
| انعام الحق چرخت گرگیچ | همکار | جمع آوری نمونه ها | دکترای تخصصی | Enam.gorgich@yahoo.com |
| عذرا خواجوی | همکار | جمع آوری نمونه ها | کارشناسی ارشد | okhajavi@yahoo.com |
| عنوان | متن |
|---|---|
| خلاصه طرح به فارسی | بررسی اثرات محافظتی عصبی عصاره هیدروالکلی برگ زیتون بر نورونهای جسم سیاه مغز میانی در رتهای نر مدل بیماری پارکینسون |
| خلاصه طرح به لاتین | Study of neuroprotective effects of hydro-alcoholic extract of olive leaves on midbrain substantia nigra neurons in male rats model of Parkinson’s disease |
| بيان مسئله تحقيق/اهمیت پژوهش | بیماری پارکینسون یک اختلال نورودژنراتیو و پیشرونده در سیستم اعصاب مرکزی می باشد که لرزش ،سفتی حرکات و کندی حرکات از بارزترین نشانه های این بیماری به شمار می روند . این بیماری از دیدگاه آسیب شناسی با از بین رفتن نورونهای دوپامینرژیک بخش متراکم جسم سیاه و نهایتا فقدان دوپامین در پایانه های اصلی این نورونها در نئواستریاتوم ایجاد می شود(1) . علاوه بر دژنراسیون نورونی ،ویژگی برجسته این بیماری تشکیل انکلوزیونهای رشته ای داخل سلولی در نورونهای دوپامینرژیک است که اجسام لوئی(Lewy bodies) نامیده می شوند . در واقع این اجسام تجمعات پروتئینی غیر طبیعی از جمله پروتئین آلفا-سینکولین می باشد که در نورونهای دوپامینرژیک باقی مانده دیده می شوند(2). اگر چه پاتوژنزیس پارکینسون هنوز بطور کامل شناخته نشده است اما فاکتورهای محیطی و ژنتیکی نقش مهمی را در ایجاد بیماری دارند (3, 4) . از نظر سلولی نقش رادیکالهای آزاد ، استرس اکسیداتیو و اختلال در عملکرد میتوکندریایی به خوبی در پاتوژنزیس بیماری پارکینسون شناخته شده است (5). رادیکالهای آزاد در طی متابولیسم اکسیژن در بدن تولید می شوند . تحت شرایط معمولی سیستم آنتی اکسیدانی وROS ( (Reactive Oxidative Speciesدر بدن بالانس می باشند .هر عاملی که باعث بهم خوردن این تعادل بین فاکتورهای پرواکسیدانت و آنتی اکسیدانت شود اکسیداتیو استرس نامیده می شود (5).عدم تعادل بین تولید و از بین رفتن ROS میتواند باعث ایجاد اکسیداتیو استرس گردد که دراین صورت حمله ROS به تمام بیوملکولها در سلولها منجر به مرگ سلولی و ایجاد بیماریهای مزمن خطرناک شود (6) . مغز بدلیل داشتن محتوای بالای اسیدهای چرب غیر اشباع polyunsaturated fatty acid)) PUFA محتوای آهن بالا ، سطح پایین فعالیت آنتی اکسیدانی اندوژنوس نسبت به سایر بافتها مصرف حدود 20 درصد اکسیژن کل بدن و وابسته بودن به متابولیسم هوازی هدف بسیار مناسبی برای حمله رادیکالهای آزاد و بسیار حساس به صدمات اکسیداتیو می باشد . صدمات اکسیداتیو در مغز منجر به ایجاد اختلالات شناختی در افراد مسن می گرددپراکسیداسیون لیپید ها تخریب اکسیداتیو PUFA می باشد (7). این اسیدهای چرب دارای یک یا چند گروه متیلن هستند که تمایل زیادی به واکنش با عوامل اکسید کننده دارند ،در طی فرایند لیپید پراکسیداسیون کلیواژ باندهای کربن باعث تشکیل آلکالن هایی مانند مالون دی آلدئید MDA)malondialdehyde ) میگردد.بنابراین لیپید پراکسیداسیون باعث کاهش PUFA و در نتیجه باعث سختی غشائ نورونها و صدمه به سیستم عصبی گردد (8). در این میان بخش متراکم جسم سیاه مغز میانی Substantia nigra pars compacta) ) بدلیل متابولیسم دوپامین وافزایش محتوای آهن در مقایسه با سایر نواحی مغز نسبت به استرس اکسیداتیو بسیار حساس می باشد ،نشان داده شده است که یون آهن به عنوان یک کاتالیزور در تشکیل رادیکال هیدروکسیل از پراکسید هیدروژن عمل نماید و نقش مهمی در پراکسیداسیون لیپیدها دارد .رادیکالهای آزاد و ROS ایجاد شده باعث مرگ سلولی در سلولهای دوپامینرژیک می شود که این امر میتواند منجر به ایجاد بیماری پارکینسون گردد(9) . Jenner افزایش پراکسیداسیون لیپیدها و کاهش PUFA را در بیماران پارکینسونی گزارش نمود وی علائم اکسیداتیو استرس و پراکسیداسیون لیپیدی را در substantia nigra : افزایش مونوآمین اکسیداز B،کاهش گلوتاتیون پراکسیداز ،کاهش فعالیت کاتالاز ،تغییر در هومئوستاز یون کلسیم و کاهش فعالیت کمپلکس I و III سیستم انتقال الکترون میتوکندریایی بیان نمود (9). یکی از موادی که میتواند باعث مهار کمپلکسI میتوکندریایی و کاهش تولید ATP وبه دنبال آن افزایش تولید ROS و نهایتا ایجاد استرس اکسیداتیو و تغییرات نورودژنراتیو گردد نوروتوکسینی بنام Rotenone است که اخیرا برای ایجاد مدل پارکینسونی از آن استفاده می شود (10). Rotenone یک آفت کش قوی می باشد که به دلیل خاصیت لیپوفیلی به راحتی از سد خونی مغزی عبور کرده و پس از تجمع در داخل میتوکندری ها باعث مهار کمپلکسI میتوکندریایی و ایجاد صدمات اکسیداتیو میشود .این صدمات اکسیداتیو به صورت تشکیل پروتئین کربونیل در مغز میانی –پیاز بویایی – استریاتوم و کورتکس و ایجاد علائم پارکینسون می باشد همانند آنچه که در بیماران پارکینسونی دیده می شود(11). همچنین Rotenone باعث فعالیت وسیع میکروگلیالی هم در استریاتوم و هم در ناحیه متراکم ماده سیاه مغز میانی می گردد که این یافته ها با تظاهرات التهابی که در پارکینسون ایدیوپاتیک در انسان دیده می شود مشابهت دارد(12) . یکی ازمزیت های استفاده از Rotenone برای ایجاد مدل پارکینسون نسبت به MPTP و 6-OHDA تقلید کلیه علائم پارکینسون ایدیوپاتیک انسانی از جمله کاهش سلولها در ناحیه Ventral tier ماده سیاه مغز میانی –دژنراسیون نورونهای نورآدرنرژیک در لوکوس سرولئوس – و ایجاد انکلوزیونهای آلفا- سینوکلئین در اجسام Lewy و کاهش لوکوموتور می باشد (12, 13). در سالهای اخیر استفاده از غذاهای طبیعی و غنی از آنتی اکسیدانت مانند فیتوکمیکالهای فنولیک و ویتامین ها مورد توجه زیادی قرارگرفته اند چرا که عملکردشان به عنوان عوامل پیشگیری کننده در مقابل صدمات اکسیداتیو شناخته شده است (14) . اکسیدانتهای طبیعی تیپیکال مانند توکوفرول ها –کاروتنوئیدها –فلاونوئیدها و ترکیبات پلی فنولیک میتوانند در مقابل پیشرفت بیماریهای مزمن مرتبط با اکسیداسیون بدن رامحافظت نمایند (15). رژیم غذایی مدیترانه ای سرشار از آنتی اکسیدانت می باشد .این رژیم شامل مصرف مقدار زیادی از محصولات زیتون است که منبع غنی از فنولها مانند اولئوروپین و مشتقات آن مانند هیدروکسی تیروزول (HT ) می باشد فنولهای زیتون با قدرت آنتی اکسیدانی بالا می توانند باعث مهار اکسیداسیون و توقف پاسخ های التهابی گردند (23).نشان داده شده است که عصاره بدست آمده از زیتون میتواند باعث کاهش صدمات نورونی ایجاد شده توسط اکسیداتیو استرس های شیمیایی گردد (16). برگهای زیتون دارای اثرات هیپوگلیسمیک –هیپوتنسیو – وازودیلاتوری و آنتی آریتمیک در invivo و invitro می باشد ،این اثرات مربوط به اولئوروپین و هیدروکسی تیروزول است که مهمترین ترکیبات فنولیک در برگ زیتون و خود میوه زیتون می باشد ،اولئوروپین موجب از بین رفتن آنیونهای سوپراکسید و رادیکالهای هیدروکسیل می شود (17, 18) . همچنین اولئوروپین دارای اثرات آنتی اکسیدانی و هیپولیپیدمیک می باشد و بنابراین دارای اثرات محافظتی قلبی عروقی است ( 19و20). مطالعات نشان داده است که عصاره برگ زیتون با عبور از سد خونی مغزی دارای اثرات نوروپروتکتیو است و می تواند باعث کاهش حجم ایسکمی وادم مغزی در رت ها شود (21) . تحقیقات Dekanski و همکارانش در سال 2011 نشان داد که عصاره هیدروالکلی برگ زیتون با خاصیت آنتی اکسیدانی ، آنتی آپوپتوتیک و ضد التهابی خود باعث حفظ جمعیت نورونی در هیپوکمپ موشهای مدل ایسکمی مغزی میگردد(22). نتایج مطالعه زمانی و همکاران نیز در سال 2012 نشان داد که تجویز روغن زیتون می تواندباعث کاهش میزان آپوپتوز در هیپوکمپ موش های مدل ایسکمی مغزی گردد(23). در مطالعه ای دیگر Mehraein و همکارانش نشان داند که گاواژ عصاره هیدروالکلی برگ زیتون به مدت 6 ماه مانع کاهش تعداد سلولهای دوپامینرژیک و مالون دی آلدئید و افزایش فعالیت سیستم آنتی اکسیدانی در رت های پیر نسبت به گروه کنترل می شود(24) . همچنین پاسبان و همکارانش در سال 2013 نشان دادند که اولئوروپئین و عصاره برگ زیتون باعث کاهش صدمات ناشی از 6- هیدروکسی دوپامین بر سلولهای فئوکروموسایتومای غده آدرنال(PC12) در رت می شوندکه این اثرات را به خاصیت آنتی اکسیدانی و آنتی آپوپتوتیک آن نسبت دادند(25) . لذا هدف از این مطالعه بررسی اثرات محاظتی عصبی عصاره هیدروالکلی برگ زیتون برنورونهای بخش متراکم جسم سیاه (SNc ) موشهای نر مدل پارکینسون می باشد . |
| سوالات و / یا فرضیات پژوهش | - میانگین تعداد سلولهای دوپامینرژیک ماده سیاه مغز میانی گروه مدل پارکینسونی وگروههای تیمار شده باعصاره متفاوت است. - میزان سوپراکسید دیس موتاز( SOD) در مغز میانی گروه مدل پارکینسونی با گروههای تیمار شده با عصاره متفاوت است. - میزان گلوتاتیون پراکسیداز( GPX) در مغز میانی گروه مدل پارکینسونی با گروههای تیمار شده با عصاره متفاوت است. - میزان کاتالاز( CAT) در مغز میانی گروه مدل پارکینسونی با گروههای تیمار شده با عصاره متفاوت است. - میزان مالون دی آلدئید(MDA) در مغز میانی گروه مدل پارکینسونی با گروههای تیمار شده با عصاره متفاوت است. - حفظ تعادل حرکتی در رت های مدل پارکینسونی با گروههای تیمار شده با عصاره متفاوت است . - قدرت عضلانی در رت های مدل پارکینسونی با گروههای تیمار شده با عصاره متفاوت است . - تاثیر عصاره برگ زیتون برسطح آنتی اکسیدانی ، سلولهای دوپامینرژیک مغز میانی و حفظ تعادل حرکتی و عضلانی در رتهای پارکینسونی وابسته به دوز است |
| هدف کلی طرح | بررسی اثرات محافظتی عصبی عصاره هیدروالکلی برگ زیتون برنورونهای بخش متراکم جسم سیاه مغز میانی رت های نر مدل پارکینسون |
| اهداف اختصاصی | - مقایسه میانگین تعداد نورونهای دوپامینرژیک جسم سیاه(SNc) مغز میانی بین گروههای مورد مطالعه - مقایسه تعداد نورونهای TH مثبت جسم سیاه(SNc)مغز میانی بین گروههای مورد مطالعه - مقایسه میزان SOD مغز میانی بین گروههای مورد مطالعه - مقایسه میزان GPX مغز میانی بین گروههای مورد مطالعه - مقایسه میزان CAT مغز میانی بین گروههای مورد مطالعه - مقایسه میزان MDA مغز میانی بین گروههای مورد مطالعه - مقایسه میزان حفظ تعادل بین گروههای مورد مطالعه - مقایسه قدرت عضلانی بین گروههای مورد مطالعه |
| سازمانها، مراکز و موسسات و سایر بهره برداران بالقوه دستاوردهای طرح | مراکز تحقیقاتی علوم اعصاب |
| تعریف واژه های تخصصی | پارکینسون: یک اختلال نورودژنراتیو و پیشرونده در سیستم اعصاب مرکزی می باشد که لرزش ،سفتی حرکات و کندی حرکات از بارزترین نشانه های این بیماری به شمار می روند . روتنون:یک آفت کش که از آن برای ایجاد مدل پارکینسون استفاده می شود . ماده سیاه مغز میانی: قسمتی از مغز میانی حاوی سلولهای دوپامینرژیک |
| نوع مطالعه | دراین مطالعه پژوهش انجام شده از نوع تجربی می باشد . |
| جامعه مورد مطالعه(معرفی مشارکت کنندگان)/ محیط پژوهش(معیارهای ورود و خروج ذکر شوند) | جامعه مورد مطالعه رت های نر نژاد ویستار به وزن تقریبی350-300گرم می باشند . –معیار خروج: خونریزی از بینی پس از گاواژ یا کاهش شدید وزن که نشاندهنده پارگی احتمالی مری و عدم تغذیه کافی می باشد. با کمک گیری از کارشناس مرکز تحقیقات حیوانات جهت آموزش صحیح گاواژ احتمال پارگی مری به حداقل می رسد . |
| حجم نمونه و روش محاسبه آن | در این مطالعه از 96 سر (شش گروه 16 تایی )رت نژاد ویستار استفاده خواهد شد . |
| روش نمونه گیری(نحوه تخصیص تصادفی و همسانسازی در صورت لزوم ذکر شود) | تخصیص رتها به گروههای مورد مطالعه به صورت تصادفی خواهد بود. |
| روش و ابزار جمع آوري داده ها / صحت و استحکام داده ها (پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی ضمیمه شود) | فرم اطلاعاتی شامل نتایج مربوط به شمارش سلولهای دوپامینرژیک وTH مثبت، میزان مالون دی آلدئید،سوپراکسید دیس موتاز،کاتالاز ، گلوتاتیون پراکسیداز ونتیجه تست های حفظ تعادل و قدرت عضلانی در تمام گروههای مورد مطالعه می باشد. |
| روش اجرای طرح(با جزئیات بطور کامل شرح داده شود) | ): عصاره برگ زیتون از مرکز تحقیقاتی گیاهان دارویی رازی خرم آباد به مقدار مورد نیاز تهیه خواهد شد . گروه بندی حیوانات : در این تحقیق از تعداد96 سر رت نر نژاد ویستار در محدوده وزنی350-300 گرم استفاده خواهد شد . حیوانات در شرایط استاندارد و با دوره روشنایی و تاریکی 12ساعته و دمای 3±21 نگهداری و دسترسی آزاد به آب و غذا خواهند داشت و به روش تصادفی در گروههای زیر قرار داده خواهند شد : گروه Control: هیچ مداخله ای صورت نمی گیرد . گروه Sham : به مدت 5 هفته روزانه آب مقطر از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و همزمان روغن ذرت بصورت زیرجلدی تزریق می گردد . -گروهPD ) پارکینسون(: به مدت 5 هفته روزانه آب مقطر از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و همزمان mg/kg/48h 2 روتنون بصورت زیرجلدی هر 48 ساعت یکبار به مدت 4 هفته تزریق می گردد (26). -گروه OLE 75mg/kg+PD : به مدت 5 هفته روزانه 75 میلی گرم بر کیلوگرم عصاره برگ زیتون از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده (27)و همزمان/48h mg/kg 2 روتنون بصورت زیرجلدی به مدت 4 هفته تزریق می گردد(21) . -گروه OLE 150mg/kg+PD: به مدت 5 هفته روزانه 150 میلی گرم بر کیلوگرم عصاره برگ زیتون از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و همزمان mg/kg/48h 2 روتنون بصورت زیرجلدی به مدت 4 هفته تزریق می گردد -گروه OLE 300mg/kg+PD: به مدت 5 هفته روزانه 300میلی گرم بر کیلوگرم عصاره برگ زیتون از طریق گاواژ دهانی دریافت کرده و همزمان mg/kg/48h 2 روتنون بصورت زیرجلدی به مدت 4 هفته تزریق می گردد . تمامی گروهها عصاره یا آب مقطر را یک هفته قبل از شروع تزریقات و به مدت 4 هفته پس از آن دریافت خواهند کرد . یک روز پس از آخرین دوز گاواژ حیوانات تحت بیهوشی عمیق نیمی از رت ها کشته شده و مغز خارج و جهت انجام آنالیزهای بیوشیمیایی بلافاصله در دمای -80 درجه فریز خواهد شد . و مغز نیمی دیگر پس از انجام پرفیوژن ترانس کاردیال جهت انجام بررسی های هیستوپاتولوژیک در فرمالدئید 4% فیکس خواهد شد . رنگ آمیزی نیسل : پس از فیکس کردن نمونه ها پاساز بافتی انجام شده و بلوکهای پارافینی تهیه خواهد شد . سکشنهای سریالی 5 میکرو متری از منطقه ماده سیاه مغز میانی گرفته خواهد شد و با رنگ آمیزی نیسل مورد بررسی و شمارش سلولی قرار خواهند گرفت . ایمونوهیستوشیمی : سلولهای دوپامینرژیک حاوی تیروزین هیدروکسیلاز را با استفاده از آنتی بادی های اختصاصی Tyrosin Hydroxylase antibody و DAB مشخص و شمارش می شوند . بدین منظور مقاطع پارافینی توسط قرار دادن در الکلهای نزولی آبدهی شده و توسط H202/Methanol 10% پراکسیداز اندوژنوس بلاک خواهد شد . پس از آن جهت احیای آنتی ژنهای ماسکه شده مقاطع در سیترات بافر دراتوکلاو در دمای 120 درجه قرار خواهند گرفت . از محلول BSA(سرم آلبومین گاوی) جهت بلوکه کردن آنتی ژن های غیر اختصاصی استفاده خواهد شد . پس از آن نمونه ها به مدت1ساعت باآنتی بادی اولیه وآنتی بادی ثانویه به ترتیب انکوبه خواهند شد. از DAB جهت روئیت سازی کمپلکس آنتی ژن –آنتی بادی استفاده خواهد شد نهایتا Counterstaining با هماتوکسیلین انجام و دهیدراتاسیون توسط الکلهای صعودی انجام گرفته و لامها می شوندو با میکروسکوپ نوری بررسی خواهند شد . برای کنترل منفی تمامی مراحل فوق بدون آنتی بادی اولیه انجام شده و به جای آن از Tris wash buffer استفاده می شود . مقاطع پس از رنگ آمیزی با روش نیسل و ایمنوهیستوشیمی ، جهت شمارش تعداد سلولها در سمت راست بخش متراکم جسم سیاه مغز میانی مورد بررسی قرار می گیرند .از هر گروه 5 بلوک و تعداد 5 اسلاید از هر بلوک و تعداد 5 فیلد در هر اسلاید شمارش و میانگین گرفته خواهد شد(28) . تست های رفتاری: تست Rotarod روتارود یک تست معتبر جهت ارزیابی آسیب های عصبی،قدرت عضلانی و هماهنگی اندام های قدامی و خلفی و تعادل در جوندگان می باشد . حیوانات قبل از شروع مطالعه تحت برنامه آموزشی قرار می گیرند تا به یک عملکرد ثابت برسند و پس از آن پس از انجام تزریقات هر 48 ساعت یکبار در ساعت مشخصی از روز (8-9 صبح)انجام خواهد شد . مدت زمانی که حیوان قادر به حفظ تعادل خود بر روی دستگاه باشد به عنوان زمان روتارود بر حسب ثانیه ثبت خواهد شد (29). تست Hanging- wire این تست برای سنجش میزان قدرت عضلانی بکار می رود . در این تست حیوان بر روی در سیمی قفس قرار گرفته و با معکوس نمودن در قفس مدت زمانی را که حیوان قادر به نگهداری خود می باشد را بر حسب ثانیه محاسبه می گردد این تست سه بار در هر مرحله انجام می شود و میانگین آن به عنوان (latency time) بر حسب ثانیه ثبت خواهد شد (29). انجام آنالیزهای بیوشیمیایی: نمونه مغز میانی با محلول تریس 9/0 مولار سرد هموژنیزه و سپس در دمای 4 درجه سانتی گراد با دور 12000 به مدت 20 دقیقه سانتریفیوژ شده و محلول رویی جدا و میزان مالون دی آلدئید و ظرفیت آنتی اکسیدانی کل اندازه گیری خواهد شد . اندازه گیری مالون دی آلدئید(MDA): میزان MDA با کمک تست تیوباربیتوریک اسید (TBA) اندازه گیری خواهد شد ونهایتا لایه رنگی حاصل در طول موج 535 نانومتر اندازه گیری می شود . از تترامتوکسی پروپان به عنوان استاندارد MDA استفاده خواهد شد (30). اندازه گیری میزان فعالیت آنزیم کاتالاز) CAT) اندازه گیری آنزیم کاتالاز بر اساس قابلیت آنزیم جهت شکستن H2O2 با استفاده ازروش اسپکتروفتومتری و پروتکل Goth انجام می گردد . کاهش جذب در 240 نانومتر محاسبه می شود(31) . اندازه گیری میزان فعالیت سوپراکسید دیس موتاز ((SOD فعالیت سوپراکسید دیسموتاز (SOD) بر اساس اکسیداسیون NADPH با استفاده ازروش اسپکتروفتومتری طبق پروتکل Kakarانجام می گردد تغییرات جذب در560نانومتر قرائت می شود(32) . اندازه گیری میزان فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز(GPx) روش بکار رفته در اندازه گیری فعالیت آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز با استفاده ازروش اسپکتروفتومتری بر اساس پروتکل Paglia and Valentine انجام خواهد شد. فعالیت آنزیم در کاهش جذب در 340 نانومتر محاسبه و بصورت U/mg/protein بیان می شود(33). |
| روش تجزیه، تحليل و توصیف دادهها (نمونهاي از جدول توخالي ضميمه شود و روش هاي آماري مورد استفاده به طور كامل توضيح داده شود)(کیفی و کمی) | برای آنالیز داده ها از نرم افزار SPSS و در صورت نرمال بودن توزیع داده ها از آزمونهای آماری آنالیز واریانس یکطرفه (ANOVA) و تست Tukey و در صورت عدم توزیع نرمال داده ها از معادل نان پارامتریک ( کروسکال والیس) استفاده خواهدشد. سطح معنی داری برای تحلیل داده ها، P<0.05 در نظر گرفته می شود. |
| ملاحظات اخلاقی | فرم ' چک لیست کار با حیوانات آزمایشگاهی بر اساس کدهای راهنمای کار با حیوانات ابلاغی وزارت بهداشت' تکمیل و ضمیمه شده است. در تمام مراحل، کار با حیوانات آزمایشگاهی بر اساس پروتوکل استاندارد کار با حیوانات آرمایشگاهی عمل خواهدشد. |
| محدودیتهای اجرائی طرح و پیش بینی جهت حل آنها | 1- مرگ و میر احتمالی حیوانات بدلیل گاواژ و تزریق نوروتوکسین ( از دوز تثبیت شده نوروتوکسین که احتمال کمترین مرگ و میر را دارد استفاده خواهد شد و جهت گاواژ رت ها از کارشناس مرکز تحقیقات حیوانات آزمایشگاهی کمک گرفته می شود )-2- افزایش قیمت موادو تهیه مواد |
| کلمات کلیدی | عصاره برگ زیتون -پارکینسون - روتنون Olive leave extract -Parkinson disease-Rotenone |
| فهرست منابع و مراجع | 1. Bassani TB, Gradowski RW, Zaminelli T, Barbiero JK, Santiago RM, Boschen SL, et al. Neuroprotective and antidepressant-like effects of melatonin in a rotenone-induced Parkinson’s disease model in rats. Brain research. 2014;1593:95-105. 2. Olanow CW, Brundin P. Parkinson's Disease and Alpha Synuclein: Is Parkinson's Disease a Prion‐Like Disorder? Movement Disorders. 2013;28(1):31-40. 3. Olanow CW, Stern MB, Sethi K. The scientific and clinical basis for the treatment of Parkinson disease (2009). Neurology. 2009;72(21 Supplement 4):S1-S136. 4. Nunomura A, Moreira P, Lee H, Zhu X, Castellani R, Smith M, et al. Neuronal death and survival under oxidative stress in Alzheimer and Parkinson diseases. CNS & Neurological Disorders-Drug Targets (Formerly Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders). 2007;6(6):411-23. 5. Fukui H, Moraes CT. The mitochondrial impairment, oxidative stress and neurodegeneration connection: reality or just an attractive hypothesis? Trends in neurosciences. 2008;31(5):251-6. 6. Scandalios J. Oxidative stress: molecular perception and transduction of signals triggering antioxidant gene defenses. Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 2005;38(7):995-1014. 7. Shulman RG, Rothman DL, Behar KL, Hyder F. Energetic basis of brain activity: implications for neuroimaging. Trends in neurosciences. 2004;27(8):489-95. 8. Farooqui AA, Horrocks LA. Lipid peroxides in the free radical pathophysiology of brain diseases. Cellular and molecular neurobiology. 1998;18(6):599-608. 9. Jenner P. Oxidative stress in Parkinson's disease. Annals of neurology. 2003;53(S3):S26-S38. 10. Blesa J, Phani S, Jackson-Lewis V, Przedborski S. Classic and new animal models of Parkinson's disease. BioMed Research International. 2012;2012. 11. Sherer TB, Betarbet R, Testa CM, Seo BB, Richardson JR, Kim JH, et al. Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson's disease. The Journal of neuroscience. 2003;23(34):10756-64. 12. Mitra S, Chakrabarti N, Dutta S, Ray S, Bhattacharya P, Sinha P, et al. Gender-specific brain regional variation of neurons, endogenous estrogen, neuroinflammation and glial cells during rotenone-induced mouse model of Parkinson’s disease. Neuroscience. 2015;292:46-70. 13. Lapointe N, St-Hilaire M, Martinoli M-G, Blanchet J, Gould P, Rouillard C, et al. Rotenone induces non-specific central nervous system and systemic toxicity. The FASEB journal. 2004;18(6):717-9. 14. Carrasco-Pancorbo A, Cerretani L, Bendini A, Segura-Carretero A, Del Carlo M, Gallina-Toschi T, et al. Evaluation of the antioxidant capacity of individual phenolic compounds in virgin olive oil. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2005;53(23):8918-25. 15. Park Y-K, Lee W-Y, Park S-Y, Ahn J-K, Han M-S. Antioxidant activity and total phenolic content of Callistemon citrinus extracts. Food Science and Biotechnology. 2005. 16. Wang L, Geng C, Jiang L, Gong D, Liu D, Yoshimura H, et al. The anti-atherosclerotic effect of olive leaf extract is related to suppressed inflammatory response in rabbits with experimental atherosclerosis. European journal of nutrition. 2008;47(5):235-43. 17. Fki I, Sahnoun Z, Sayadi S. Hypocholesterolemic effects of phenolic extracts and purified hydroxytyrosol recovered from olive mill wastewater in rats fed a cholesterol-rich diet. Journal of agricultural and food chemistry. 2007;55(3):624-31. 18. Visioli F, Bellomo G, Galli C. Free radical-scavenging properties of olive oil polyphenols. Biochemical and biophysical research communications. 1998;247(1):60-4. 19. Andreadou I, Iliodromitis EK, Mikros E, Constantinou M, Agalias A, Magiatis P, et al. The olive constituent oleuropein exhibits anti-ischemic, antioxidative, and hypolipidemic effects in anesthetized rabbits. The Journal of nutrition. 2006;136(8):2213-9. 20. Jemai H, Bouaziz M, Fki I, El Feki A, Sayadi S. Hypolipidimic and antioxidant activities of oleuropein and its hydrolysis derivative-rich extracts from Chemlali olive leaves. Chemico-biological interactions. 2008;176(2):88-98. 21. Mohagheghi F, Bigdeli MR, Rasoulian B, Zeinanloo AA, Khoshbaten A. Dietary virgin olive oil reduces blood brain barrier permeability, brain edema, and brain injury in rats subjected to ischemia-reperfusion. The Scientific World Journal. 2010;10:1180-91. 22. Dekanski D, Selaković V, Piperski V, Radulović Ž, Korenić A, Radenović L. Protective effect of olive leaf extract on hippocampal injury induced by transient global cerebral ischemia and reperfusion in Mongolian gerbils. Phytomedicine. 2011;18(13):1137-43. 23. Zamani M, Hassanshahi J, Soleimani M, Zamani F. Neuroprotective effect of olive oil in the hippocampus CA1 neurons following ischemia: Reperfusion in mice. Journal of neurosciences in rural practice. 2013;4(2):164. 24. Mehraein F, Sarbishegi M, Golipoor Z. Different effects of olive leaf extract on antioxidant enzyme activities in midbrain and dopaminergic neurons of Substantia Nigra in young and old rats. Histology and histopathology. 2015:11687-. 25. Pasban-Aliabadi H, Esmaeili-Mahani S, Sheibani V, Abbasnejad M, Mehdizadeh A, Yaghoobi MM. Inhibition of 6-hydroxydopamine-induced PC12 cell apoptosis by olive (Olea europaea L.) leaf extract is performed by its main component oleuropein. Rejuvenation research. 2013;16(2):134-42. 26. Hassanzadeh K, Rahimmi A, Hassanzadeh K. Effect of N-acetylcysteine on TNF-α Level of Substantia Nigra and Striatum in Rat Model of Parkinson’s Disease. J Mazandaran Univ Med Sci. 2014;24(118):40-8. 27. Mohagheghi F, Bigdeli MR, Rasoulian B, Hashemi P, Pour MR. The neuroprotective effect of olive leaf extract is related to improved blood–brain barrier permeability and brain edema in rat with experimental focal cerebral ischemia. Phytomedicine. 2011;18(2):170-5. 28. Sarbishegi M, Mehraein F, Soleimani M. Antioxidant role of oleuropein on midbrain and dopaminergic neurons of substantia nigra in aged rats. Iranian biomedical journal. 2014;18(1):16. 29. von Wrangel C, Schwabe K, John N, Krauss JK, Alam M. The rotenone-induced rat model of Parkinson's disease: Behavioral and electrophysiological findings. Behavioural brain research. 2015;279:52-61. 30. Ohkawa H, Ohishi N, Yagi K. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction. Analytical biochemistry. 1979;95(2):351-8. 31. Goth L. A simple method for determination of serum catalase activity and revision of reference range. Clinica Chimica Acta. 1991;196(2):143-51. 32. Kakkar P, Das B, Viswanathan P. A modified spectrophotometric assay of superoxide dismutase. Indian J Biochem Biophys. 1984;21(2):130-2. 33. Paglia DE, Valentine WN. Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidase. The Journal of laboratory and clinical medicine. 1967;70(1):158-69. |
| معرفی پژوهش/ اهداف پژوهش (عین عبارت هدف پروپوزال را کپی نکنید. بلکه با جملاتی که برای مردم قابل فهم باشد (برای سواد حدود پنجم ابتدایی )هدف را برای شرکت کنندگان توضیح دهید.) در تمام این متن در صورتیکه شرکت کننده کودک یا فرد فاقد ظرفیت تصمیم گیری است باید مواردیکه منظور از "من"، فرد شرکت کننده بوده است به "کودک" یا "فرد تحت سرپرستی من" اصلاح شود و مواردیکه منظور از "من"، رضایت دهنده است به من به عنوان "ولی" یا "قیم قانونی" اصلاح شود. | |
| خون گیری (آیا طرح شما نیاز به خونگیری دارد یا خیر) | |
| نحوه همکاری/ مزایا ی طرح (در این بخش برای شرکت کنندگان به زبان ساده توضیح دهید که: چه مداخله ای بر روی آنها صورت میگیرد. چه اقدامات پاراکلینیکی بر روی آنها انجام میشود. چه نمونه ای و با چه حجمی از آنها میگیرید در این مدت چند نوبت مراجعه باید داشته باشند و به چه فواصلی چه اقداماتی را در پیگیری آنها انجام میدهید. (حتی میتوانید سود بالقوه ای که شرکت کنندگان میتوانند از شرکت در این پژوهش ببرند بنویسید. این سود میتواند شرح احتمال درمان یا تشخیص بهتر بیماریشان، دریافت خدمات سلامت رایگان و یا پرداخت مشوق مالی در ازای جبران همکاریشان باشد) | |
| عوارض جانبی (منظور عوارض و میزان احتمال بروز آنها در این مطالعه است) | |
| جبران عوارض احتمالی (برای آنکه شرکت کننده بتواند ارزیابی مناسبی از سود و زیان شرکت در پژوهش شما داشته باشد لازم است بتواند سود و زیان مداخلات معمول و مداخلات این پژوهش را مقایسه کند. به عنوان مثال میزان موفقیت و میزان عوارض هریک را مقایسه کند.) - او باید بداند كه اگر در حين و بعد از انجام پژوهش هم هر مشكلي اعم از جسمي و روحي به علت شرکت در اين پژوهش برایش پيش آمد درمان عوارض، و هزينههاي آن و غرامت مربوطه بر عهده مجري خواهد بود. | |
| هزینه های مربوط به انجام طرح تحقیقاتی (تمام مداخلات پژوهشی باید برای بیمار رایگان باشد و بیمار بداند شامل چه مواردی هستند. ) | |
| روش های جایگزین در صورت عدم تمایل به شرکت در مطالعه چه روش های درمانی برای بیمار ارائه خواهد شد | |
| محرمانه بودن بیمار باید بداندکه دست اندر كاران اين پژوهش، كليه اطلاعات مربوط به او را نزد خود به صورت محرمانه نگهداشته و فقط اجازه دارند نتايج كلي و گروهي اين پژوهش را بدون ذکر نام و مشخصات بیمار منتشر كنند. و كميته اخلاق در پژوهش با هدف نظارت بر رعایت حقوق وی ميتواند به اطلاعات ایشان دسترسي داشته باشد. | |
| پاسخگویی به پرسش ها در این بخش نام و اطلاعات دسترسی فردی از عوامل پژوهش را که بتواند اطلاعات صحیح و کافی در اختیار شرکت کنندگان قرار دهند و در مورد عوارض و نگرانیها راهنمایی لازم را ارائه دهند ذکر شود | |
| حق نپذیرفتن یا انصراف بیمار باید بداند که شرکت اودر اين پژوهش کاملاً داوطلبانه است و مجبور به شرکت در اين پژوهش نيست و در صورت عدم شرکت از مراقبتهاي معمول تشخيصي و درماني محروم نخواهد شد او باید بداند كه حتي پس از موافقت با شركت در پژوهش ميتواند هر وقت كه بخواهد، پس از اطلاع به مجري، از پژوهش خارج شود و خروج اواز پژوهش باعث محرومیت از دریافت خدمات درمانی معمول برای اونخواهد شد. | |
| رضایت او باید بداند که اگر اشکال يا اعتراضي نسبت به دست اندركاران يا روند پژوهش دارد مي تواند با كميته اخلاق در پژوهش دانشگاه تماس گرفته و مشکل خود را به صورت شفاهي يا كتبي مطرح نمايد. در انتهای فرم قید گردد : اينجانب موارد فوقالذکر را خواندم و فهميدم و بر اساس آن رضايت آگاهانه خود را براي شركت در اين پژوهش اعلام ميکنم. اينجانب ……………… خود را ملزم به اجراي تعهدات مربوط به مجري در مفاد فوق دانسته و متعهد ميگردم در تأمين حقوق و ايمني شركت كننده در اين پژوهش تلاش نمايم | |
| پرسشنامه یا فرم اطلاعاتی | چک لیست کار با حیوانات آزمایشگاهی ضمیمه گردید |
| نام فایل | تاریخ درج فایل | اندازه فایل | دانلود |
|---|---|---|---|
| nahaee.pdf | 1395/01/14 | 490048 | دانلود |
