بررسی اثرات جینسینگ در مدل القاء شده آلزایمر در موش صحرایی نر

    زوال مغزی[1] با علل‌های متفاوتی از جمله بیماری اختلالات مغزی- عروقی، پارکینسون و آلزایمر به وجود می‌آید. به دنبال زوال مغزی، اختلالات شناختی و به طور عمده از دست رفتن حافظه رخ می‌دهد. [1-4]. بیماری آلزایمر یکی از شایع‌ترین علل زوال عقلی است. این بیماری عصبی پیش‌رونده، غیرقابل برگشت و در نتیجه از دست دادن حافظه و رفتار غیرطبیعی، تغییرات تشخیصی و کاهش در توانایی تفکر بروز کرده و بیشتر در سنین پیری رخ می دهد[4-6].طبق مطالعات اخیر برآورد شده است که بروز سالیانه بیماری آلزایمر به طور چشمگیری با افزایش سن، از حدود 53 مورد جدید در هر 1000نفر در سن 65 تا 75 سالگی، به 170 مورد جدید در هر 1000 نفر در سن 75 تا 84 سالگی، به 231 مورد جدید در هر 1000 نفر در سن بالای 85 سالگی و بالاتر بروز پیدا کرده است[7]. هچنین طبق شواهد، تخمین زده شده است، موارد زوال عقل به 14 میلیون در سال 2050 خواهد رسید[8]. که 80 % این افراد ممکن است شامل بیماران مبتلا به آلزایمر باشند[9].

  مکانیسم پاتولوژیک بیماری آلزایمر، اساسا شامل اختلال عملکردکولینرژیک، استرس اکسیداتیو، تجمع بتاآمیلوئید (رسوب و تشکیل پلاک‌های بتاآمیلوئیدی) و بیان واکنش‌های التهابی می‌باشد که از بین این موارد تجمع پلاک‌های بتاآمیلوئید، نقش محوری در ایجاد بیماری آلزایمر ایفا می‌کند که این فرضیه توسط محققان زیادی در این زمینه تایید شده است [10-13].تجمع بتاآمیلوئید در خارج سلول باعث تولید گونه‌های فعال اکسیژن (Ros)[2] شده که این رادیکال‌های آزاد با لپیدها، پروتئین‌ها، DNA و RNA واکنش داده و باعث آسیب جدی به سلول می شوند[14-17]. از طرفی در اثر تشکیل پلاک‌ها و ایجاد التهاب در بافت مغز، باعث آزادشدن آنزیم استیل‌کولین‌استراز می‌شود[18, 19]. همچنین تجمع پلاک بتاآمیلوئید سبب تشکیل دولایه نوروفیبریولاتوری(NFTs) ناشی از فسفریله شدن پروتئین تاو مرتبط با میکروتوبول، می‌گردد[20-23] [24].

استرپتوزوتوسینstz))، با نام شیمایی 2-داکسی_3_متیل_3_نیتروزوراید، سبب اختلال در نورون های کولینرژیک می‌شود[25, 26]. همچنین باعث استرس اکسیداتیو می شود این ترکیب اگر به صورت محیطی تزریق شود موجب از بین رفتن سلول های بتا پانکراس، وبه دنبال آن دیابت می گردد. اما به روش تزریق داخل بطن های مغز، سبب اختلال در حافظه و یادگیری شده و بنابراین جهت القای آلزایمر بکار می رود[12, 25, 27-29].

         با وجود افزایش چشمگیر بیمارهای دژنراتیو، در سراسر جهان، تاکنون درمان موثری برای آنها در دسترس نیست. اگرچه چندین مهارکننده استیل‌کولین استراز مانند:تاکرین، دوپنزیل، ریوستیگمن و گالانتامین معمولا به کار برده می‎شوند اما این داروها تنها سرعت پیشرفت بیماری را کاهش می دهند و قادر به بازسازی کامل عملکرد مغز نیستند [13, 30].

          یکی از راهکارهای موثرتر برای درمان بیماری آلزایمر، می توان به استفاده از ترکیبات آنتی‌اکسیدان اشاره کرد.  بنظر می رسد که این ترکیبات، با پاکسازی رادیکال‌های آزاد می توانند از پیشرفت بیماری جلوگیری نمایند. با توجه به پیچیدگی این بیماری، برای درمان نیاز به ترکیباتی که از مسیرهای مختلف، باعث بهبود بیماری شوند وجود دارد [31].

گیاهان دارویی به دلیل داشتن ترکیباتی از جمله فلاونوئید، فنل و ترکیبات فنلی، به عنوان قویترین آنتی‌اکسیدان محسوب شده و می توانند از طریق مکانیسم‌های مختلف، بیماری های پیچیده را کنترل نمایند. به همین دلیل در سالهای اخیر، توجه زیادی به استفاده از گیاهان دارویی  برای درمان این بیماری‌ها شده است[32].

        جینسینگ (جینسهاجنسان مایر)گیاهی چندساله از خانواده عشقیان (Araliaceae)[3] در سراسر جهان، به عنوان یک داروی گیاهی استفاده و از مهمترین محصولات دارویی، به ویژه در شرق آسیا محسوب می‌شود[33-35]. جینسینگ شامل بسیاری از اجزای فعال، مانند: جین‌سینوزید، پلی‌ساکاریدها، پپتیدها، اسیدهای چرب و روغن‌های معدنی و همچنین ساپونین، آلکالوییدها، پلی‌استیلن، پلی‌ساکاریدها، اسیدهای آمینه، پلی فنل و ترکیبات فرار مانند لیمونن می‌باشد. بیش از ده ترکیب فنلی ازجمله کافئیک اسید، فرولیک اسید و سیرینجیک اسید نیزگزارش شده است[34, 36-38].

ریشه گیاه جنسینگ

          طبق گزارشات قبلی، مشاهده شده است که جین‌سیتوزید که از ترکیبات فعال جینسینگ می باشد، به طور گسترده‌ای در طب سنتی استفاده می‌شود و دارای اثرات دارویی مهمی از جمله ضد سرطان، آنتی‌اکسیدان، ضددیابت، افزایش‌ دهنده میل‌جنسی، محافظ نورونی، تقویت سیستم ایمنی، ضد تهوع و فعالیت ضد‌استرس، به تعویق انداختن پیری و جلوگیری از خستگی ناشی از ورزش می‌باشند[32, 34, 35, 39]. بر این اساس ریشه جینسینگ مورد توجه پژوهشگران سراسر جهان بوده که بر اساس مطالعات حیوانی، این گیاه نقش مهمی در تنظیم عملکرد حافظه ایفا می‌کند[39].

           طبق مطالعه ای کیاسالاری و همکاران در سال 2012،  به بررسی اثر عصاره آبی زعفران بر حافظه و یادگیری موش صحرایی نر دیابتی پرداخته و نشان دادندکه مصرف مزمن عصاره زعفران بر توانایی نگهداری اطلاعات در انبارهای حافظه و یادآوری آنها در حیوانات دیابتی موثر است. این احتمال می رودکه کروسین موجود در زعفران، به عنوان ماده آنتی اکسیدان و تقویت کننده سیستم کولیینرژیک، نقش بسزایی در تقویت حافظه فضایی بازی کند[40].

  همچنین در مطالعه  choon sikjeong در سال 2002 ، به بررسی اثرات بخش هوایی جینسینگ در ضایعه و زخم معده انجام داده به این نتیجه رسید که این گیاه می تواند اثرات  بهبودی در زخم ناشی از Hcl.ethanol داشته باشد. این نتایج نشان می دهد که اثر بهبودی بخش هوایی جینسینگ در زخم معده ممکن است نتیجه کاهش ترشح اسید از طریق غیرفعال کردن پمپATP_ase H⁺/K⁺ وهمچنین افزایش ترشح موکوس و اثر آنتی اکسیدانی گیاه جینسینگ باشد[41].

 در مطالعه ای دیگر   bombi leeو همکاران در سال 2010 ، به بررسی اثرات جینسینگ وحشی در کاهش استیل کولین ناشی از القا اسکوپولامین در هیپوکامپ موش پرداختند و به این نتیجه رسیدند، با توجه به اینکه تزریق اسکوپولامین تلفات شدیدی بر نورون های ناحیه کولینیرژیک هیپوکامپ (افزایش واکنش پذیری استیل کولین استراز)گذاشته است، مشاهده کردند، ژن عامل نوتروفیک مشتق از مغز[4] که با تزریق اسکوپولامین در مغز، کاهش یافته بود، با جینسینگ به حالت عادی برگشته است. لذا نهایتا به این نتیجه رسیدند که جینسینگ وحشی اثر حفاظتی قابل توجهی برای اختلال شناختی و عصبی ناشی از اسکوپولامین دارد [42].باتوجه به نقش BDNF درنوروژنز، بنظر می رسدکه مقدار این ماده، می تواند در ایجاد نورون های جدید و کاهش آسیب ناشی از آلزایمر نقش داشته باشد.

در مطالعه ای دیگر  xing وهمکاران در سال 2011، به بررسی اثرات ضد افسردگی و مکانیسم عمل ساپونین استخراج شده از برگ و ساقه گیاه جینسینگ در مدل حیوانی افسردگی پرداختند،  مشاهده کردند استخراج ساپونین از جینسینگ سطح دوپامین و نورآدرنالین در مغز را افزایش میدهد و به واسطه تغییرات سطح مونامین در مغز، اثرات ضد افسردگی به دنبال دارد[43].

         با توجه به مطالب مذکور، نیاز به پژوهش در زمینه درمان بیماری آلزایمر احساس می شود و با در نظر داشتن اینکه اخیرا مطرح شده که ریشه جینسینگ شاید بتواند اثراتی در بیماری آلزایمر داشته باشد و با توحه به محدود بودن و نتایج متفاوت مطالعات گزارش شده در این زمینه و همچنین مدنظر داشتن این نکته که تا به حال هیچ مطالعه ای در مورد اثرات ریشه جینسینگ بر مبنای شواهد رفتاری در مدل آلزایمری موش صحرایی گزارش نشده است، در این تحقیق برآن شدیم تا به بررسی این اثرات ریشه جینسینگ بپردازیم، تا شاید زمینه ساز مطالعات بیشتر برای درمان بیماری آلزایمر با دارویی کارآمدتر باشیم. لذا هدف از این مطالعه، بررسی اثرات  جینسینگ در مدل القاء شده آلزایمر در موش صحرایی می باشد.

مدت  زمان سپری شده توسط حیوان به منظور یافتن سکوی پنهان در گروههای مختلف، متفاوت است.

مسافت پیموده شده توسط حیوان به منظور یافتن سکوی پنهان در گروههای مختلف یکسان نیست.

مدت زمان تاخیر  ورود به اتاق تاریک در شاتل باکس در گروههای مختلف فرق می کند.

مقدار مالونیل دآلدئید (MDA) در گروههای مختلف مورد مطالعه متفاوت است.

مقدار گلوتاتیون پراکسیداز (GPX) در گروههای مختلف مورد مطالعه فرق می کند.

مقدار گلوتاتیون ردوکتاز (GR) در گروههای مختلف مورد مطالعه یکسان نیست.

ظرفیت آنتی اکسیدانی تام بافتی در گروههای مختلف، متفاوت است.

میزان BDNF بافت هیپوکمپ در گروههای مختلف مورد مطالعه متفاوت است.  

بررسی اثرات  جینسینگ در مدل القاء شده آلزایمر در موش صحرایی نر

تعیین و مقایسه مدت زمان سپری شده به منظور یافتن سکوی پنهان درگروه های مورد مطالعه

تعیین و مقایسه مسافت پیموده شده به منظور یافتن سکوی پنهان در گروه های مورد مطالعه

تعیین و مقایسه تاخیر زمانی برای ورود به اتاق تاریک پس از اعمال شوک در گروه های مورد مطالعه

تعیین و مقایسه میانگین مالونیل دآلدئید (MDA) در گروههای مختلف مورد مطالعه

تعیین و مقایسه میانگین گلوتاتیون پراکسیداز (GPX) در گروه  های مورد مطالعه

تعیین و مقایسه گلوتاتیون ردوکتاز (GR) در گروه های مورد مطالعه

تعیین و مقایسه ظرفیت آنتی اکسیدانی تام بافتی در گروه های مورد مطالعه

تعیین و مقایسه میزان سطح BDNF  بافت هیپوکمپ در گروه های مورد مطالعه

دانشگاه ها و مراکز تحقیقاتی

آلزایمر نتیجه از دست رفتن سلول های مغزی است که با علایمی مثل کاهش فعالیت حرکتی،کاهش حافظه،کاهش اکتساب یادگیری،کاهش سطح سرمی  BDNFوتخریب نورون های ناحیه هیپوکامپ در موش ظاهر می شود.

جینسینگ: گیاهی چند ساله از خانواده  عشقیان، در سراسر جهان بعنوان یک داروی گیاهی استفاده می شود.

مداخله ای و تجربی

موش صحرایی نر بالغ نژاد آلبینو ویستار با محدوده ورنی 200 تا 250 گرم که در مرکز تحقیقات حیوانات آزمایشگاهی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان نگهداری می شوند.

چهارگروه موش صحرایی 14تایی (تعداد هر گروه بر اساس مطالعات قبلی انتخاب شده است).

انتخاب 56 سر حیوان با توجه به ملاک های مورد مطالعه [44].و قرار گرفتن حیوان در 4  گروه به صورت تصادفی می باشد.

اطلاعات مربوط به حافظه فضائی با استفاده از دستگاه ماز آبی موریس، داده های حافظه اجتنابی با شاتل باکس، مقدار شاخصهای استرس اکسیداتیو و BDNF با کیت های مربوطه، اندازه گیری خواهد شد.

 پس از تصویب طرح، تعداد 56 سر موش صحرائی نژاد ویستار با محدوده وزنی (200 تا 250 گرم) انتخاب و پس از یک هفته سازگاری، بصورت تصادفی در چهار گروه (چهارده سر در هر گروه) در شرایط کنترل شده (دمای 2±23 درجه سانتیگراد، سیکل نوری دوازده ساعت روشنائی و تاریکی، میزان رطوبت 20 درصد و دسترسی آزاد به آب و غذا) به شرح ذیل قرار خواهند گرفت [44].

گروه شم کنترل: این گروه پس از استرئوتاکسی و کانول گذاری، حلال استرپتوزوسین را بصورت درون بطنی و با همان حجم دریافت خواهند کرد.

گروه آلزایمری درمان نشده: در این گروه با تزریق درون بطنی استرپتوزوسین (1/5 میلی گرم بازای کیلوگرم و با حجم 5 میکرولیتر در هر بطن) آلزایمر القاء شده و سپس در طول مطالعه حلال جنسینگ (بصورت درون صفاقی) به مدت سه هفته دریافت خواهند کرد.

گروه پیش درمان-پس درمان: در این گروه یک هفته قبل از القای آلزایمر تجویز جنسینگ آغاز شده و سه هفته پس از القای آلزایمر نیز ادامه خواهد یافت.

گروه درمان با جنسینگ: پس از استرئوتاکسی و کانول گذاری، همانند گروه دوم آلزایمر القاء شده و سپس به مدت سه هفته روزانه جنسینگ (200 میلی گرم بازای کیلوگرم) دریافت خواهند کرد.

روش القای آلزایمر:

برای کانول گذاری بطنهای جانبی، ابتدا حیوانات با (mg/kg300) کلرال هیدرات(سیگما آمریکا) به صورت تزریق داخل صفاقی بیهوش می شوند[12]. سپس داخل دستگاه استریوتاکس قرار می گیرند(میله نگه دارنده دندان نیش mm3/3 و میله نگه دارنده گوش به شکل متقارن قرار می گیرد. پوست سر شکاف داده شده و پس از پاک کردن سطح جمجمه، مطابق با اطلس پاکسینوس با مشخصات :  Ap=-1.5mm ,ML=±1.5mm,Dv=2.5 mmنسبت به برگما از سطح جمجمه سوراخ شده و کانول گذاری (با سرسوزن شماره 22) انجام می شود[12]. یک روز پس از کانول گذاری، استرپتوزوسین (1/5 میلی گرم بازای کیلوگرم) (حل شده در بافر سیترات نیم مولار) و با حجم 5 میکرولیتر (با سرنگ هامیلتون) به صورت  دو طرفه در هر بطن جانبی تزریق خواهد شد[12]. در تعدادی از حیوانات، پس از اتمام آزمایشات جهت اطمینان از صحت کانول گذاری 5 میکرولیتر تیونین تزریق خواهد شد و مغز این حیوانات جدا و در فرمالین 10درصد فیکس و برش از محل تزریق تهیه و زیر میکروسکوپ مشاهده خواهد شد.

روش تجویز جنسینگ:

 در این مطالعه از کپسول جنسینگ (هر کپسول حاوی 250 میلی گرم جنسینگ) تولیدی شرکت گل دارو استفاده خواهد شد. محتوی کپسولها در آب مقطر حل شده و پس از عبور از کاغذ صافی واتمن شماره یک با دوز 200 میلی گرم بازای کیلوگرم وزن بدن روزانه و بر اساس پروتکل، بصورت درون صفاقی تجویز خواهد شد[45].

برای اندازه گیری مقدار BDNF ، ابتدا بافت هیپوکمپ هموژنیزه شده و سپس مقدار این فاکتور در سوپرناتانت با استفاده از کیت الایزا (شرکت Zellbio) اندازه گیری خواهد شد. 

اندازه گیری های رفتاری:

 حافظه اجتنابی غیرفعال با کمک دستگاه شاتل باکس[46] ، حافظه فضائی با دستگاه ماز آبی موریس[26, 47].انجام خواهد شد.

داده ها توسط نرم افزار spss نسخه 17 مورد بررسی قرار خواهد گرفت. برای مقایسه متغیرهای کمی بین گروه ها از آزمون آنالیز واریانس یکطرفه و آزمون متعاقب توکی و یا آزمونهای ناپارامتری معادل(در صورت لزوم) استفاده خواهد شد. همچنین p<%5 بعنوان سطح معنی دار در نظر گرفته می شود ونتایج به دست آمده به صورت میانگین ± خطای معیار بیان می گردد.

در طول مطالعه بر اساس پروتوکل کار با حیوانات آزمایشگاهی (انستیتوبهداشت ملی آمریکا)رفتار شده وانجام کار به تایید کمیته اخلاق دانشگاه علوم پزشکی زاهدان خواهد رسید. همچنین چک لیست کار با حیوانات آزمایشگاهی مصوب وزارت متبوعه تکمیل و پیوست می شود.

تهیه کیت ها و مواد شیمیائی مورد نیاز 

آلزایمر: یک بیماری دژنراتیو مغزی است که با شروع زوال عقل ،اختلال در حافظه ،قضاوت،گستره توجه ازدست دادن توانایی های شناختی همراه است.بعد از 60 سالگی رخ می دهد ونشانه های پاتولوژی با آتروفی شدید کورتیکال و تشکیل پلاک پیری بروز می کند.

ریشه گیاه جینسینگ:گیاهی چند ساله از خانواده عشقه که شامل تعدادی از خواص دارویی فعال، به عنوان محرک،آرام بخش،ونیرو بخش به خصوص در طب سنتی استفاده می شود.

Panax ginseng- - Alzheimer disease

1.            Howes, M.J.R., N.S. Perry, and P.J. Houghton, Plants with traditional uses and activities, relevant to the management of Alzheimer's disease and other cognitive disorders. Phytotherapy Research, 2003. 17(1): p. 1-18.

2.            Tsoi, K.K., et al., Time to Treatment Initiation in People With Alzheimer Disease: A Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Journal of the American Medical Directors Association, 2016. 17(1): p. 24-30.

3.            Ulrich, D., Amyloid-β Impairs Synaptic Inhibition via GABAA Receptor Endocytosis. The Journal of Neuroscience, 2015. 35(24): p. 9205-9210.

4.            Liu, M., et al., Cognitive improvement of compound danshen in an Aβ25-35 peptide-induced rat model of Alzheimer’s disease. BMC complementary and alternative medicine, 2015. 15(1): p. 382.

5.            Wang, J., et al., Increased oxidative damage in nuclear and mitochondrial DNA in Alzheimer's disease. Journal of neurochemistry, 2005. 93(4): p. 953-962.

6.            Ho, L., et al., From proteomics to biomarker discovery in Alzheimer's disease. Brain research reviews, 2005. 48(2): p. 360-369.

7.            Zahedi, M., et al., Effect of Rheum Ribes Hydro-Alcoholic Extract on Memory Impairments in Rat Model of Alzheimer's Disease. Iranian journal of pharmaceutical research: IJPR, 2015. 14(4): p. 1197.

8.            Mura, T., J.F. Dartigues, and C. Berr, How many dementia cases in France and Europe? Alternative projections and scenarios 2010–2050. European Journal of Neurology, 2010. 17(2): p. 252-259.

9.            Jellinger, K.A. and J. Attems, Prevalence of dementia disorders in the oldest-old: an autopsy study. Acta neuropathologica, 2010. 119(4): p. 421-433.

10.          Bagheri, M., et al., Genistein ameliorates learning and memory deficits in amyloid β (1–40) rat model of Alzheimer’s disease. Neurobiology of learning and memory, 2011. 95(3): p. 270-276.

11.          Hassanzadeh, G., et al., Trimetazidine prevents oxidative changes induced in a rat model of sporadic type of Alzheimer's disease. Acta Medica Iranica, 2015. 53(1): p. 17-24.

12.          Song, J., et al., Agmatine improves cognitive dysfunction and prevents cell death in a streptozotocin-induced Alzheimer rat model. Yonsei medical journal, 2014. 55(3): p. 689-699.

13.          Zali, H., et al., Protein drug targets of lavandula angustifolia on treatment of rat alzheimer's disease. Iranian journal of pharmaceutical research: IJPR, 2015. 14(1): p. 291.

14.          Butterfield, D.A., et al., Roles of amyloid β-peptide-associated oxidative stress and brain protein modifications in the pathogenesis of Alzheimer's disease and mild cognitive impairment. Free Radical Biology and Medicine, 2007. 43(5): p. 658-677.

15.          Miranda, S., et al., The role of oxidative stress in the toxicity induced by amyloid β-peptide in Alzheimer’s disease. Progress in neurobiology, 2000. 62(6): p. 633-648.

16.          Gutteridge, J. and B. Halliwell, Antioxidants in nutrition, health, and disease. 1994: Oxford University Press.

17.          Polotow, T.G., et al., Redox Status and Neuro Inflammation Indexes in Cerebellum and Motor Cortex of Wistar Rats Supplemented with Natural Sources of Omega-3 Fatty Acids and Astaxanthin: Fish Oil, Krill Oil, and Algal Biomass. Marine drugs, 2015. 13(10): p. 6117-6137.

18.          Braak, H. and E. Braak, Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes. Acta neuropathologica, 1991. 82(4): p. 239-259.

19.          Tabrizian, K., et al., Auraptene consolidates memory, reverses scopolamine-disrupted memory in passive avoidance task, and ameliorates retention deficits in mice. Iranian journal of basic medical sciences, 2015. 18(10): p. 1014.

20.          Luo, H.-M., Combined administration of D-galactose and aluminium induces Alzheimerlike lesions in brain. Neuroscience bulletin, 2011. 27(3): p. 143-155.

21.          Chen, C.-L., et al., Ceramide induces p38 MAPK and JNK activation through a mechanism involving a thioredoxin-interacting protein-mediated pathway. Blood, 2008. 111(8): p. 4365-4374.

22.          Soheili Kashani, M., et al., Maze training improves learning in an Alzheimer model of rat. KAUMS Journal (FEYZ), 2010. 14(3): p. 209-216.

23.          Song, X.-Y., et al., Ginsenoside Rg1 attenuates okadaic acid induced spatial memory impairment by the GSK3β/tau signaling pathway and the Aβ formation prevention in rats. European journal of pharmacology, 2013. 710(1): p. 29-38.

24.          Maurice, T., Protection by sigma-1 receptor agonists is synergic with donepezil, but not with memantine, in a mouse model of amyloid-induced memory impairments. Behavioural brain research, 2016. 296: p. 270-278.

25.          Grieb, P., Intracerebroventricular Streptozotocin Injections as a Model of Alzheimer’s Disease: in Search of a Relevant Mechanism. Molecular neurobiology, 2015: p. 1-12.

26.          Ishrat, T., et al., Coenzyme Q10 modulates cognitive impairment against intracerebroventricular injection of streptozotocin in rats. Behavioural brain research, 2006. 171(1): p. 9-16.

27.          Shingo, A.S., et al., Intracerebroventricular administration of an insulin analogue recovers STZ-induced cognitive decline in rats. Behavioural brain research, 2013. 241: p. 105-111.

28.          Parihar, M., et al., Susceptibility of hippocampus and cerebral cortex to oxidative damage in streptozotocin treated mice: prevention by extracts of Withania somnifera and Aloe vera. Journal of Clinical Neuroscience, 2004. 11(4): p. 397-402.

29.          Biessels, G.J., et al., The effect of gamma-linolenic acid–alpha-lipoic acid on functional deficits in the peripheral and central nervous system of streptozotocin-diabetic rats. Journal of the neurological sciences, 2001. 182(2): p. 99-106.

30.          Ali, M.A., et al., Antidiabetic effect of galantamine: novel effect for a known centrally acting drug. PloS one, 2015. 10(8): p. e0134648.

31.          Ono, K., et al., Anti-amyloidogenic effects of antioxidants: implications for the prevention and therapeutics of Alzheimer's disease. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease, 2006. 1762(6): p. 575-586.

32.          Anekonda, T.S. and P.H. Reddy, Can herbs provide a new generation of drugs for treating Alzheimer's disease? Brain Research Reviews, 2005. 50(2): p. 361-376.

33.          Wan, Q., et al., Ginsenoside Reduces Cognitive Impairment During Chronic Cerebral Hypoperfusion Through Brain-Derived Neurotrophic Factor Regulated by Epigenetic Modulation. Molecular Neurobiology, 2016: p. 1-12.

34.          Ru, W., et al., Chemical constituents and bioactivities of Panax ginseng (CA Mey.). Drug discoveries & therapeutics, 2015. 9(1): p. 23-32.

35.          Jayakodi, M., et al., Comprehensive analysis of Panax ginseng root transcriptomes. BMC plant biology, 2015. 15(1): p. 138.

36.          Kim, I.-H., et al., Korean Red Ginseng Up-regulates C21-Steroid Hormone Metabolism via Cyp11a1 Gene in Senescent Rat Testes. Journal of ginseng research, 2011. 35(3): p. 272-282.

37.          Joo, K.-M., et al., Simultaneous determination of two Amadori compounds in Korean red ginseng (Panax ginseng) extracts and rat plasma by high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection. Journal of Chromatography B, 2008. 865(1): p. 159-166.

38.          Chung, I.-M., et al., Comparative phenolic compound profiles and antioxidative activity of the fruit, leaves, and roots of Korean ginseng (Panax ginseng Meyer) according to cultivation years. Journal of Ginseng Research, 2016. 40(1): p. 68-75.

39.          Poindexter, B.J., et al., Ginseng: Cardiotonic in adult rat cardiomyocytes, cardiotoxic in neonatal rat cardiomyocytes. Life sciences, 2006. 79(25): p. 2337-2344.

40.          Kiasalari, Z., M. Khalili, and L. Ghanbarian, The effect of aqueous Crocus sativus L.(saffron) extract on learning and memory in male streptozotocin-induced diabetic rats. Razi Journal of Medical Sciences, 2012. 19(95): p. 44-51.

41.          Jeong, C.S., Effect of butanol fraction ofPanax ginseng head on gastric lesion and ulcer. Archives of pharmacal research, 2002. 25(1): p. 61-66.

42.          Lee, B., et al., Effect of wild ginseng on scopolamine‐induced acetylcholine depletion in the rat hippocampus. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2010. 62(2): p. 263-271.

43.          Xiang, H., et al., The antidepressant effects and mechanism of action of total saponins from the caudexes and leaves of Panax notoginseng in animal models of depression. Phytomedicine, 2011. 18(8): p. 731-738.

44.          Xuan, A., et al., Hydrogen sulfide attenuates spatial memory impairment and hippocampal neuroinflammation in beta-amyloid rat model of Alzheimer’s disease. Journal of neuroinflammation, 2012. 9(1): p. 1.

45.          شهرزاد, خ.پ., خ. مریم, and م.پ. ساره, اثر ضد افسردگی عصاره آبی-الکلی ریشه جینسینگ قرمز در موش کوچک ماده سوری با استفاده از آزمون شنای اجباری و تست معلق ماندن.

46.          Zamani, Z., et al., Effect of Royal Jelly on Improving Passive Avoidance Learning and Spatial Learning and Memory in Rats. SSU_Journals, 2012. 20(2): p. 211-19.

47.          Mohamed, A.R., et al., Neuroprotective role of vitamin D3 in colchicine-induced Alzheimer’s disease in rats. Alexandria Journal of Medicine, 2015. 51(2): p. 127-136.