سندرم تخمدان پلیکیستیک(yndromPolyCystic Ovary S)شایعترینبیماریآندوکرین در زنان است کهباهایپرآندروژنیسمبا علت نا مشخص، عدم تخمکگذاری مزمن و تخمدانهایحاوی تعداد زیادیکیستتشخیص داده می شود. صفت مشخصه سندرم تخمدان پلیکیستیکهنگامی بروز میکندکه در دوره ای از زمان، عدم تخمکگذاری وجود داشته باشد. عدم تخمکگذاری مسأله ایبسیارشایع است که در مجموعه ای از تظاهرات بالینی، از جمله آمنوره، قاعدگیهاینامنظمو هیرسوتیسم بروز میکند. عدم تخمکگذاریمزمن و میزانبالایاستروژن،باناباروری،افزایشریسکابتلا به هایپرپلازیآندومتر ،سرطانآندومتر(3 تا 4 برابر نسبت به زنان سالم) و احتمالاً سرطانپستان در ارتباط است(1و2). این سندرم باچاقی عمومی یاشکمی، مقاومت به انسولین، خطر افزایش یافته تیپII دیابت ملیتوس، خطر ابتلا به بیماریهای قلبی و عروقی همراهمیباشد(1). مطالعات اپیدمیولوژیک، فراوانی این سندرم را در زنان در سنین باروری از 5% تا 15% و در زنان نابارور 15% تا 25% ،بسته به کرایتریاهای تشخیصی گزارش کرده اند(3).

مشاهدات نشان میدهند که PCOS اساس ژنتیکی داشته و استعداد ابتلا به آن بصورت ژنتیکی به ارث میرسد. وجود هایپرآندروژنیسم در وابستگان درجه اول زنان مبتلا به این بیماری و دوقلوهای تک تخمکی و دو تخمکی، همچنینشیوعخانوادگی عدم تخمکگذاری و تخمدانهایپلیکیستیک، بیان کننده نقش فاکتورهای ژنتیکی در ایجاد این بیماری می باشد(4و5).با وجود اینکهبرایایجاد سندرم تخمدان پلیکیستیک، زمینهژنتیکیمدنظر است، هیچ نقص ژنتیکی مسئول ایجادPCOSشناسایی نشده است و مکانیسمهایژنتیکیبرایایجاداین بیماری ناشناخته اند، اگرچه وجود الگویاتوزومال غالب برای این بیماری پیشنهاد شده است (2). برخی از مطالعات پیشنهادکرده اند کهPCOSیک بیماری الیگوژنیک است بنابراین لازم است مطالعات بیشتری جهت تعیین پایه ژنتیکی این بیماری انجام شود(4).

پلی مورفیسم های تک نوکلئوتیدی(SNP)، تغییرات تک در توالی DNAمیباشند که سبب ایجاد ژنوتیپهای مختلف میشوند. این تغییرات ژنتیکی ممکن است ریسک ابتلا به برخی بیماریها از جمله سرطان هارا در جمعیت هایی با ژنوتیپ خاص افزایش دهند(6و5).SNPهای متعددی در ارتباط با خطر ابتلا به سرطانهای آندومتر، تخمدان، سینه و پروستات گزارش شده اند. مطالعات  انجام شده در ارتباط با سرطان،  افزایش بیان دسته ای از RNA های غیر کد شونده را نشان میدهند(7و8).دسته بزرگی از RNA های غیر کدکننده، Long Non Coding RNAها میباشند.اینRNAها بیش از 200 نوکلئوتید طول دارند و طبق مطالعات انجام شده نقش مهمی در استعداد ابتلا به سرطان ایفا میکنند(9-12).یکی از انواع این RNAها، HOTAIR میباشد که توسط ژن HOTAIR(Hox transcript antisense RNA) کد میشود.این ژن بر روی بازوی بلند کروموزوم شماره 12 (12q13.13) قرار دارد و دارای 7 اگزون میباشد. این ژن به عنوان یک انکوژن در سرطانهای مختلف معرفی شده است و نقش مهمی در استعداد ابتلا به سرطان سینه ایفا میکند. در ارتباط با این ژن چندینSNP (rs1899663, rs4759314  rs920778,rs12826786) شناخته شده است(13-14).

ژن H19(Imprinted maternaly expressed transcript) یکی دیگر از ژنهای کد کننده LncRNA ها میباشد.این ژن بر روی کروموزوم شماره 11(11p15.5) قرار دارد و دارای 5 اگزون میباشد.  محصول این ژن به عنوان یک تومور ساپرسور عمل میکند. آلترنیتیواسپلایسینگ میتواند باعث ایجاد واریانت های رونویسی متعدد از این ژن گردد. در ارتباط با این ژن SNPهای متعددی شناخته شده است(rs3741219, rs217727, rs2251375, rs4929984rs2067051 و rs2107425). مطالعات نشان از همراهی پلی مورفیسمهای شایع این ژن با افزایش خطر ابتلا به سرطان تخمدان ، سرطان سینه ،  سرطان مثانه  و همچنین افزایش خطر ابتلا به بیماریهای قلبی عروقی دارند(17-15).

با توجه به اینکه  بیماران مبتلا به PCOS در معرض افزایش خطر ابتلا به سرطان های آندومتر، تخمدان و پستانهستند و همچنین این بیماری با ریسک افزایش یافته بیماریهای قلبی- عروقی همراه است و با توجه به نتایج مطالعات جدید در ارتباط با  نقش LncRNAها در افزایش استعداد ابتلا به انواع سرطانها و همچنین بیماریهای قلبی عروقی بر آن شدیم تا پلی مورفیسمهای شایع ژنهای HOTAIRو H19 را در بیماران مبتلا به PCOS بررسی کنیم.

پیشینه تحقیق:

تا کنون پلی مورفیسمهای شایع ژنهای HOTAIRو H19 در  بیماران مبتلا به  PCOS و تاثیر این پلی مورفیسمها در ابتلا به این بیماری مورد بررسی قرار نگرفته است. اما مطالعات متعددی نشان از همراهی این پلی مورفیسم ها با برخی سرطانها از جمله سرطان آندومتر و سرطان پستاندارند. همچنین ارتباط این پلی مورفیسم ها با بیماریهای قلبی عروقی در برخی مطالعات نشان داده شده است(16). از طرفی افزایش ابتلا به سرطان آندومتر، پستانو تخمدان در بیماران مبتلا به PCOS گزارش شده  است. در ادامه به تعدادی از این مطالعات اشاره میگردد.

نتایج حاصل از مطالعه متاآنالیز انجام شده  در سال 2014 نشان داد که ریسک ابتلا به سرطان آندومتر در زنان مبتلا به PCOS تقریبا 2.8 بیشتر از زنان سالم است همچنین در این مطالعه نشان داده شد که در زنان بیمار بالای 54 سال علاوه بر اینکه ریسک ابتلا به سرطان آندومتر 4 برابر بیشتر از زنان سالم است، ریسک ابتلا به سرطان تخمدان نیز  2.5 برابر بیشتر است(18).

نتایج حاصل از مطالعه CHENG-CHE و همکاران در سال 2015 نشان داد کهریسک ابتلا به سرطان رحم و سرطان سینه در بیماران مبتلا به PCOSافزایش می یابد لذا با توجه به نتایج حاصل پیشنهاد شد این بیماران به منظور افزایش شانس تشخیص زودتر این دو سرطان بطور منظم اسکرین گردند(19).

نتایج حاصل از مطالعه Yan و همکاران در سال 2015 در چین، ارتباط بین سه پلی مورفیسم شایع ژن HOTAIR و سرطان سینه را نشان داد(7).

نتایج حاصل از مطالعه انجام شده در ترکیه در سال 2016 نشان داد که پلی مورفیسمrs12826786 ژن HOTAIR میتواند نقش حیاتی در استعداد ژنتیکی ابتلا به سرطان سینه ایفا کند(9).

مطالعه انجام شده توسط Gao و همکاران در چین در سال 2015 نشان داد که پلی مورفیسم های شایع ژن H19 با خطر ابتلا و شدت بیماری های قلبی –عروقی در ارتباط هستند(16).

در سال 2016Odefrey و همکاران در مطالعه انجام شده در استرالیا نشان دادند که پلی مورفیسمrs2107425  ژن H19 با ناحیه با دانسیته بالا در ماموگرافی ارتباط معنی داری دارد و میتواند با استعداد ابتلا به سرطان سینه در ارتباط باشد(20).

با عنایت به اینکه LncRNAها در فرایندهای فیزیولوژیک متعددی دخالت دارند هدف از این پژوهش بررسی ارتباط پلی مورفیسم های HOTAIR و H19با تخمدان پلی کیستیک می باشد.

1. فراوانی پلی مورفیسم rs920778 ژن HOTAIR در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم متفاوت است.
2. فراوانی پلی مورفیسم rs189966,  ژن HOTAIR در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم متفاوت است.
3. فراوانی پلی مورفیسم  rs4759314 ژن HOTAIR در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم متفاوت است.
4. فراوانی پلی مورفیسم rs12826786 ژن HOTAIR در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم متفاوت است.
5. فراوانی پلی مورفیسم  rs2107425 ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم متفاوت است.
6. فراوانی پلی مورفیسم rs217727 ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم متفاوت است.
7. فراوانی پلی مورفیسم  rs4929984 ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم متفاوت است.
8. فراوانی پلی مورفیسم rs3741219  ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم متفاوت است.
9. فراوانی پلی مورفیسم rs2067051  ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم متفاوت است.
10. فراوانی پلی مورفیسم rs2251375 ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم متفاوت است.

تعیین و مقایسه پلی مورفیسمهای شایع ژنهای HOTAIRو H19 در زنان مبتلا به سندرم تخمدان پلی کیستیک با زنان سالم  

1.  مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs920778 ژن HOTAIR در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم
2.  مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs189966,  ژن HOTAIR در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم
3.  مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs4759314 ژن HOTAIR در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم
4. مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs12826786 ژن HOTAIR در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم
5.  مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs2107425 ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم
6.  مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs217727 ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم.
7.  مقایسه فراوانی پلی مورفیس  rs4929984 ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم.
8.  مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs3741219  ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم.
9.  مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs2067051  ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم.
10.  مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs2251375 ژن H19 در زنان مبتلا به PCOS با زنان سالم 

1. دانشگاه علوم پزشکی زاهدان، معاونت تحقیقات و فن آوری
2. افرادمبتلا به PCOS

موردی-شاهدی

1. تشخیص بیماری بر اساس معیار های بالینی، هایپرآندروژنیسم بالینی یا بیو شیمیایی و یا اولیگو ، آن اوولاسیون و توسط متخصصین مربوطه صورت میگیرد. زنان مبتلا به سندرم تخمدان پلی کیستیک مراجعه کننده به کلینیک زنان جهت شرکت در مطالعه انتخاب و مورد بررسی قرار می گیرند. تشخیص بیماری بر اساس تاریخچه پزشکی، معاینات فیزیکی و لگنی و آزمایش کامل خون انجام می گردد
2. گروه کنترل از زنان سالم که  برای معاینات دوره ای مراجعه کرده اند انتخاب میشوند. این افراد از نظر تاریخچه پزشکی، آزمایشات بیوشیمیایی و معاینات فیزیکی سالم میباشند.
3. هیچ گونه خویشاوندی بین افراد شرکت کننده در مطالعه  در  دو گروه مورد و شاهد  وجود ندارد

در این مطالعه حجم نمونه شامل 200زن مبتلا به PCOS می باشد. همچنین 200زن سالم به عنوان نمونه کنترل مورد بررسی قرار می گیرند.

نمونه گیری آسان و در دسترس برای نمونه های شاهد و کنترل

بر اساس پرسشنامه و یافته های آزمایشگاهی

حداقل200زن مبتلا به سندرم تخمدان پلیکیستیک و 200 زن سالم توسط متخصصین مربوطه معاینهشده و باتوجه  بهمعیارهای ورود و خروج از مطالعه ، جهت بررسیهایمولکولی انتخاب می گردند. پس از کسب رضایت نامه اخلاقی،  تکمیلپرسشنامه و جمع آوریاطلاعات، از هر فرد شرکتکننده در مطالعه حداقل5  میلیلیتر خونمحیطیگرفته شده و در لوله های حاوی EDTAدر دمای 20- درجه سانتیگراد تا زمان استخراج DNAنگهداریمیشود. استخراج  DNA  از لنفوسیتهای خون محیطی با استفاده از روش استانداردSalting out انجام می شود. پرایمرهایاختصاصی جهت تعیینپلیمورفیسمهایژنیبا روشPCR-RFLP طراحی میشوند. بعد از بهینه سازی شرایط PCR ، پلی مورفیسم های مورد مطالعه با تکنیک   RFLP-PCR بررسی میشوند و محصول PCR بر روی ژل آگارز 2% الکتروفورز میگردد. نمونه ها با توجه به الگوی الکتروفورز تعیین ژنوتیپ می کردند.

پس از گرداوریاطلاعات لازم، یافته ها توسط نرم افزارآماریspss با استفاده از آزمونهای آماری X²  وregression logestic مورد تجزیه و تحلیل قرار خواهند گرفت.

کدهای 1، 2، 3، 8، 10، 11، 13، 15، 18، 25، 28، مصوبکمیتهکشوریاخلاقدرپژوهشهایعلومپزشکیکه در دفترچه راهنمایعمومی اخلاق در پژوهش‌هایدارایآزمودنیانسانی در جمهوریاسلامیایران، دربردارنده‌ی اصول و مقررات اخلاقی‎مطرح و در سال 1392 در 31 بند تصویب شده است و همچنین کدهای 1، 2، 3، 4، 7 مربوط به دفترچه راهنمایاخلاقی پژوهشبرروی عضووبافتانسانی درجمهوریاسلامیایراناز قسمت راهنمای عمومی در این طرح رعایتمیشود. تمامی بیماران تحت مطالعه آگاهانه و برای مقاصد علمی  اقدام به دادن نمونه خواهند کرد. شرکت در این طرح هیچ گونه هزینه ای برای بیماران ندارد و نام و مشخصات بیماران گزارش نخواهد

عدم همکاریبیمار

مشکل تهیه مواد وامکان طولانی شدن زمان دریافت آنها

polymorphism, HOTAIR gene, H19 gene, polycystic ovary syndrome

پلی مورفیسم، سندرم تخمدان پلی کیستیک

1. Shannon M. Polycystic Ovary Syndrome: A Common but OftenUnrecognized Condition. Journal of Midwifery & Women’s Health. 2012; 57(3):221-230.
2. Azziz R, Nestler J.H, Dewailly D. Androgen Excess Disorder in Women: Polycystic Ovary Syndrom and Other Disorders, Second Edition.
3. Fauser BCJM, Tarlatzis BC, Rebar RW, Legro RS, Balen AH, Lobo R, Carmina H, Chang RJ, YildizBO,  Laven JSE, Boivin J, Petraglia F, Wijeyeratne CN, Norman RJ, Dunaif A, Franks S, Wild RA, Dumesic D, Barnhart K. Consensus on women's healthaspects of polycystic ovary syndrome(PCOS). Human Reproduction. 2012; 27(1):14-24.
4. Amato P, Simpson JL. The genetics of poly cystic ovary syndrome. Clinical Obstetrics and Gynaecology.2004; 18:707-718.
5. Bond GL, Hu W, Levine A. A single nucleotide polymorphism in the MDM2gene: from a molecular and cellular explanation to clinical effect.Cancer Res. 2005;65(13)5481-4.
6. Zhang K, Zhou B, Wang Y, Rao L, Zhang L. The TLR4gene polymorphisms and susceptibility to cancer: a systematic review and meta-analysis. European journal of cancer. 2014;49(4):946-54.
7. Yan R, Cao J, Song C, Chen Y, Wu Z, Wang K, Dai L^. Polymorphisms in lncRNA HOTAIR and susceptibility to breast cancer in a Chinese population. Cancer Epidemiol. 2015 Dec;39(6):978-85.
8. Du M, Wang W, Jin H, Wang Q, Ge Y, Lu J, Ma G, Chu H, Tong N, Zhu H, Wang M, Qiang F, Zhang Z. The association analysis of lncRNA HOTAIR genetic variants and gastric cancer risk in a Chinese population.Oncotarget. 2015 Oct 13;6(31):31255-62.
9. Bayram S, Sümbül AT, Dadaş E. A functional HOTAIR rs12826786 C>T polymorphism is associated with breast cancer susceptibility and poor clinicopathological characteristics in a Turkish population: a hospital-based case-control study. Tumour Biol. 2016 Apr;37(4):5577-84.
10. .Quaye L, Tyrer J, Ramus SJ, Song H, Wozniak E, DiCioccio RA, McGuire V, Høgdall E, Høgdall C, Blaakaer J, Goode EL,Schildkraut JM, Easton DF, Krüger-Kjaer S, Whittemore AS, Gayther SA, Pharoah PD. Association between common germline genetic variation in 94 candidate genes or regions and risks of invasive epithelial ovarian cancer.PLoS One. 2009 Jun 19;4(6):598.
11. Ponting CP, Oliver PL, Reik W. Evolution and functions of long noncoding RNAs. Cell. 2009;146(4):629-41.
12. Wang KC, Chang HY. Molecular mechanisms of long noncoding RNAs. Molecular cell. 2011;43(6):904-14.
13. Wilusz JE, Sunwoo H, Spector DL. Long noncoding RNAs: functional surprises from the RNA world. Genes & development. 2009;23(13):1494-504.
14. Mercer TR, Dinger ME, Mattick JS. Long non-coding RNAs: insights into functions. Nature Reviews Genetics. 2009;10 (4)155-9.
15. Verhaegh GW, Verkleij L, Vermeulen SH, den Heijer M, Witjes JA, Kiemeney LA. Polymorphisms in the H19 gene and the risk of bladder cancer. Eur Urol. 2008 Nov;54(5):1118-26.

16-   Gao W¹, Zhu M², Wang H², Zhao S², Zhao D², Yang Y², Wang ZM², Wang F², Yang ZJ², Lu X³, Wang LS⁴. Association of polymorphisms in long non-coding RNA H19 with coronary artery disease risk in a Chinese population. Mutat Res. 2015 Feb;772:15-22.

17. Xia Z, Yan R, Duan F, Song C, Wang P, Wang K. Genetic Polymorphisms in Long Noncoding RNA H۱۹ Are Associated With Susceptibility to Breast Cancer in Chinese Population. Medicine.2016;95(7):e2771

18. John A. Barry, Mallika M. Azizia, and Paul J. Hardiman. Risk of endometrial, ovarian and breast cancer in women with polycystic ovary syndrome: a systematic review and meta-analysis. Human Reproduction Update, Vol.20, No.5 pp. 748–758, 2014.

19. SHEN C,   YANG A.C, HUNG J H,  HU LY,  TSA S J. A Nationwide Population-Based Retrospective Cohort Study of the Risk of Uterine, Ovarian and Breast Cancer inWomenWith Polycystic Ovary Syndrome. The Oncologist 2015;20:45–49.

20. Odefrey F, Stone J, Gurrin LC, Byrnes GB, Apicella C, Dite GS, Cawson JN, Giles GG, Treloar SA, English DR, Hopper JL, Southey MC; Australian Twins and Sisters Mammographic Density Study. Common genetic variants associated with breast cancer and mammographic density measures that predict disease. Cancer Res. 2010 Feb 15;70(4):1449-58.

با توجه به اینکه  بیماران مبتلا به PCOS در معرض افزایش خطر ابتلا به سرطان های آندومتر، تخمدان و پستانهستند و همچنین این بیماری با ریسک افزایش یافته بیماریهای قلبی- عروقی همراه است و با توجه به نتایج مطالعات جدید در ارتباط با  نقش LncRNAها در افزایش استعداد ابتلا به انواع سرطانها و همچنین بیماریهای قلبی عروقی بر آن شدیم تا پلی مورفیسمهای شایع ژنهای HOTAIRو H19 را در بیماران مبتلا به PCOS بررسی کنیم. 

جهت بررسی ژنتیکی از افراد دارای معیارهای ورود به مطالعه 2 سی سی خون وریدی جمع آوری میگردد

ممکن است با استفاده از نتایج این مطالعه بتوان برنامه ریزیهای لازم را برای اقدامات تشخیصی و درمانی مناسب در افراد مستعد به ابتلا به سندرم تخمدان پلی کیستیک انجام داد.

عارضه جانبی  وجود ندارد

عارضه جانبی  وجود ندارد

هزینه انجام طرح بر عهده مجری میباشد و بیمار هزینه ای پرداخت نخواهد کرد.

روش جایگزینی وجود ندارد

در صورت تصویب در کمیته اخلاق پزشکی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان ، جهت حفظ اصول اخلاق پژوهشی ، کلیه اطلاعات شخصی بیماران مورد مطالعه محرمانه باقی خواهد ماند.

آدرس: دانشکده پزشکی، گروه ژنتیک. تلفن: 09151413198

شرکت من در مطالعه کاملا اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده و یا هر زمان که مایل بودم از پژوهش مذکور خارج شوم

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم.

ضمیمه شد