بررسی اثر ضد باکتریایی (Platelet Rich Plasma) PRP و PRF(Platelet Rich Fibrin)علیه Streptococcus oralis در محیط invitro

ژنژیویت مرتبط با پلاک شایع­ترین نوع بیماری لثه­ ای است. چنانچه این التهاب به جز لثه به سایر نسوج پریودنشیوم نظیر استخوان، PDL و سمنتوم گسترش یافته و سبب تخریب آن همراه با تشکیل پاکت یا تحلیل لثه و یا هر دو شود Peridontitis نامیده می شود. پاتوژنز بیماری پریودنتال مالتی فاکتوریال است که مهمترین آنها شامل پلاک میکروبی و واکنش ایمونولوژیک میزبان است و شدت و گسترش تخریب بافت مرتبط با تداخلات میزبان - میکروب است.بیماری پریودنتال نتیجه پیشرفت عفونت باکتریایی به درون پاکت پریودنتال است که باعث تحلیل استخوان می شود^3-1.

مطالعات نشان داده است که بیماری پریودنتال به میزان زیادی به حضوربرخی گونه های باکتریایی نظیر: porphyromonas، Aggregatibater، fusobacteruim nucleatnm، astinomycetemocomitans بستگی دارد⁴.استراتژی اصلی درمانی مربوط به درمان پریودنتال شامل دبریدمان میکروبی از طریق SRP و جراحی های پریودنتال برای برداشتن پلاک دندانی و باکتری های مرتبط در مکان های عفونی است.یکی از مشکلات عمده مرتبط با اعمال جراحی و پروسه التیام زخم احتمال تجمع باکتریایی و ریسک عفونت است. همچنین عفونت باکتریایی ممکن است باعث تأخیر و شکست درمان زخم و بازسازی بافتی شود.حتی زمانی که پروسه کنترل عفونت به شدت اجرا شود نیز باکتری ها قادر به عبور از بافت وکلونیزاسیون در لایه­ های زیرین زخم هستند⁵.

در صورتی که محل جراحی به طور کامل استریل شده باشد باکتری ها قادر به تهاجم به درون بافت پریودنتال­ اند که می­تواند منجر به از دست رفتن انسجام بافت و شکست کلی درمان باشد.کنترل عفونت یک پیش نیاز برای یک التیام زخم موفق و جلوگیری از شرایط حاد است⁶.

. پتانسیل بازسازی PRP و PRF طی دو دهه اخیر مورد تحقیق و پژوهش قرار گرفته است^11-7. هدف اولیه از کاربرد آن در درمانهای پریودنتال بازسازی بافت های پریودنتال تخریب شده در اثر پیشرفت بیماری پریودنتال است^13-12. پیشنهاد شده است که پلاکت های موجود در این فراورده ها شماری فاکتورهای رشدی را آزاد می کنند که بر روی فرایند بیولوژیک مرتبط با التیام زخم و بازسازی استخوان آلوئول مؤثر است و باعث پیشرفت آنها می شود ^15-14.

پتانسیل رژنراتیو PCs) Autologous platelet concentrates) دردو دهه اخیر مورد توجه قرار گرفته است. PCs دارای غلظت بالایی از پلاکت هاست که حاوی فاکتورهای رشدی متعددی مانند HGF، FGF، IGF-1، VEGF، EGF، TGF-β، PDGF و سایر مولکول هایی است که در ترمیم بافت سخت و نرم نقش دارند^21-19 .

تکنیک های مختلفی برای تهیه این مواد وجود دارد که هر روش باعث تولید محصولی متفاوت با ویژگی های بیولوژیک متفاوت و بالطبع کاربردهای ویژه خود خواهد شد. PCs براساس سطح لکوسیت ها و محتوای فیبرینی آنها به 4گروه تقسیم بندی میشوند: P-PRP(Pure Platelet-Rich Plasma) ، L-PRP(Leukocyte Platelet-Rich Plasma) ، P-PRF        (Pure Platelet-Rich fibrin) ، L-PRF           (Leukocyte Platelet-Rich Fibrin).¹⁶

از جمله خواص محتوای فیبرینی PRF میتوان به توانایی در سیل کردن لبه های زخم و تسهیل بازسازی پوست اشاره کرد که باعث شده تا در جراحی های عمومی و پلاستیک کاربرد داشته باشد.  ¹⁷

خواص بیولوژیک فیبرین موجود در PRF در بهبود محل زخم موثر بوده و سبب شده تا این ماده مورد توجه جراحان قرار گیرد همچنین در جراحی های دهان و سروگردن نیز کاربرد دارد.^20-18

این ماده علاوه بر تسریع فرایند بهبودی با کاهش هماتوم های بعد از جراحی موجب سیل ناحیه خواهد شد.²¹

PRP همچنین علیه کلونیزاسیون و تجمع باکتری­هایی نظیر Enterococcus faecalis، Candaida albicans، Streptococcus oralis ، Streptoccocccus agalactiae داخل حفره دهان مؤثر است که این اثر باعث شده به عنوان یک ماده قوی علیه عفونت های بعد ازعمل کاربرد داشته باشد⁵.

همچنین این فراورده به طور فزاینده ای به عنوان یک درمان کمکی برای درمان جراحی پریودنتال کاربرد دارد. اثر ضد میکروبی PRP علیه باکتری­هایی نظیر Staphylococcus aureus²²، Esherichia Coli^23.24،Klebsiella pnenmonia گزارش شده است.

اخیرا،اثر آنتی باکتریال PCs به صورت کلینیکی و invitro علیه باکتری هایی مانند Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae دیده شده در حالی که اثری علیه Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Bacillus cereus and Bacillus ندارد^32-25.

مکانیسم اثر آنتی باکتریال PCs به طور کامل شناخته نشده است،گرچه پلاکت ها نقش مهمی در دفاع ضد میکروبی میزبان دارند. پلاکت ها متابولیت های اکسیژن شامل سوپراکسید، هیدروژن پراکسید و رادیکال آزاد هیدروکسیل تولید می کنند و با اتصال و جمع آوری باکتری ها، پاکسازی پاتوژن های خون را افزایش می دهند. پلاکت ها در سیتوتوکسیسیته وابسته به آنتی بادی نقش دارند و به علاوه پپتید های ضد میکروبیال متعددی آزاد می کنند^34-33.

PRPشامل تعداد زیادی از پلاکت هاست و شامل غلظت بالایی از لکوسیت هاست که غلظت آن به میزان 2تا4 برابر بیشتر از کل خون است.لکوسیت ها و نوتروفیل ها در دفاع میزبان بر علیه باکتری ها و قارچ ها موثر شناخته شده اند،که این امر از طریق فعالیت میلوپراکسیدازهای حاضر در نوتروفیل ها،لنفوسیت های ساخته شده توسط سلول های ایمنی  در دفاع ایمونولوژیکی می باشد.بنابراین لکوسیت های تغلیظ یافته در این ماده باعث می شوند تا نقش مهمی در دفاع میزبان بر علیه عفونت های باکتریایی داشته باشد.پلاکت های فعال شده می توانند فاکتورهای رشدی مختلفی آزاد کنند که در پیشرفت ترمیم زخم و ترشح پروتیین های ضدمیکروبی پلاکتی(PMPs) موثر اند³⁵.PMP ها دارای  موادی با خاصیت انتی باکتریال هستند،شاملplatelet factor 4, regulated upon activation of normal T-cell expressed  secreted protein, connective tissue-activating peptide 3, platelet basic protein, thymosin beta-4, fibrinopeptide A,  fibrinopeptide B

PMPها همچنین میتوانند در مکانیسم های  تداخل با غشای باکتریایی، تغییرنفوذپذیری غشا و ورود به سلول و مهار ساخت مولکول های بزرگ موثر باشند. ³⁶

در تشکیل اولیه بیوفیلم دندانی استرپتوکوک ها دارای اهمیت زیادی می باشند.استرپتوکوک ها دارای گیرنده هایی برای طیف وسیعی از گونه های باکتری شامل کلونیزه شونده های اولیه و گونه های حد واسط می باشند.بسیاری از گونه های استرپتوکوک به خصوص S.mitis و S.oralis در چسبیدن به رسپتورهای مختلف موجود در پلاک دندانی و همچنین به یکدیگر می تواند در نقش مهم آنها به عنوان کلونیزه شونده های اولیه در سطح دندان اهمیت داشته باشد³⁷.S.oralis گونه پیشرو در تکامل بیوفیلم بالای لثه ای است و در پلاک4 و 6 ساعته گونه غالب می باشد.  در بررسی بیوفیلم زیرلثه ای افراد مبتلا به پریودنتیت مزمن همه گونه ها پس از تمیز کردن دندان کاهش یافت اما  S.oralisافزایش یافت و در روزهای 1تا2 بیشتر از آغاز مطالعه بود.با توجه به اهمیت S.oralis در تشکیل بیوفیلم دندانی و بلوغ آن این باکتری در آغاز و تکامل بیماری های پریودنتال دارای اهمیت می باشد.³⁸

در این مطالعه به بررسی اثر آنتی میکروبیال (Platelet Rich Plasma) PRP و PRF(Platelet-Rich Fibrin)در in vitro برروی Streptococcus oralis می پردازیم.

1-کمترین غلظت مهارکنندگی (MIC) وحد اقل غلطت کشنده (MBC )محلول کلرهگزیدین بر روی باکتری استرپتوکوکوس اورالیس به چه میزان است؟

2-کمترین غلظت مهارکنندگی(MIC) وحد اقل غلطت کشنده(MBC )محلول آنتی باکتریال(PRP)برروی باکتری استرپتوکوکوس اورالیس به چه میزان است؟

3--کمترین غلظت مهارکنندگی(MIC) وحد اقل غلطت کشنده(MBC )محلول آنتی باکتریال(PRF)برروی باکتری استرپتوکوکوس اورالیس به چه میزان است؟

4- ایا کمترین غلظت مهارکنندگی(MIC) و MBC محلول آنتی باکتریال(PRP) و PRF) و کلرهگزیدین برروی باکتری استرپتوکوکوس اورالیس با یکدیگر متفاوت است؟

بررسی اثر ضد باکتریایی Platelet Rich Plasma PRP) ) و Platelet-Rich Fibrin (PRF)علیه Streptococcus oralis در محیط invitro

1-تعیین کمترین غلظت مهارکنندگی (MIC) و MBC محلول کلرهگزیدین بر روی باکتری استرپتوکوکوس اورالیس

2-تعیین کمترین غلظت مهارکنندگی(MIC) و MBCمحلول آنتی باکتریال(PRP)برروی باکتری استرپتوکوکوس اورالیس

3-تعیین کمترین غلظت مهارکنندگی(MIC) و MBCمحلول آنتی باکتریال(PRF)برروی باکتری استرپتوکوکوس اورالیس

4- مقایسه کمترین غلظت مهارکنندگی(MIC) و MBC محلول آنتی باکتریال(PRP) و PRF) و کلرهگزیدین برروی باکتری استرپتوکوکوس اورالیس

مراکز دانشگاهی

پریودنتیت: ژنژیویت مرتبط با پلاک شایع­ترین نوع بیماری لثه­ ای است. چنانچه این التهاب به جز لثه به سایر نسوج پریودنشیوم نظیر استخوان، PDL و سمنتوم گسترش یافته و سبب تخریب آن همراه با تشکیل پاکت یا تحلیل لثه و یا هر دو شود Peridontitis نامیده می شود.^11-7

MIC: کمترین غلظت پلاسمای فراوری شده با قابلیت مهار رشد میکروارگانیسم ^42,43    

MBC: کمترین غلظت پلاسمای فراوری شده با قابلیت کشتن میکروارگانیسم⁴⁶

invitro

سویه مورد مطالعه در این تحقیق IBRC-M 10630 streptococcus oralis است و از مرکز ملی ذخائر ژنتیکی و زیستی ایران تهیه می شود و بر روی محیط های بلادآگار کشت داده می شود.

همچنین نمونه های خونی از40 نفر مرد سالم بدون مصرف دخانیات و مصرف انتی بیوتیک ظرف 6ماه اخیر به میزان 2 سی سی تهیه شده است.

براساس مقاله مشابه به میزان 1 سی سی PRP تهیه شده از 40 نمونه ی خونی و150 پلیت کشت فعال باکتری S.Oralis

اسان و در دسترس

تهیه پرسشنامه و جدول داده ها همچنین معاینه ی پریودونتال به وسیله پروب ویلیامز به قطر 1میلی متر و بررسی اثر آنتی میکروبیال پلاسمای فرآوری شده با روش های کشت میکروبی صورت خواهد گرفت.(ضمیمه شماره یک)

تهیه پلاسما و دیگر فرآورده های آن:

از میان افراد مراجعه کننده به مرکز انتقال خون زاهدان 40 مرد سالم با میانگین سنی45 سال جهت دریافت نمونه خون به صورت داوطلبانه وارد مطالعه می شوند. پیش از شروع مطالعه با آگاه کردن بیماران رضایت نامه کتبی از آنان اخذ خواهد شد. معیارهای ورود به مطالعه به این شرح است که این افراد سیگار مصرف نمی کنند و هیچ نشانه ای از عفونت ندارند، حداقل 6 ماه قبل از شروع مطالعه مصرف هیچگونه آنتی بیوتیکی را آغاز نکرده اند.

جهت بررسی وضعیت پریودنتال بیماران به وسیله پروب ویلیامز تحت معاینه قرار می گیرند هر دندان در 6 ناحیه پروب شده و عمق پروبینگ ثبت خواهد شد،بیماران در صورتی وارد مطالعه می شوند که در تمام موارد عمق پروبینگ کمتر از 2mm باشد. وضعیت پریودنتال افراد توسط پروب ویلیامز و بررسی ایندکس لثه (قوام،رنگ،کانتور و...)ارزیابی می شود و از افراد با سلامت کامل پریودنتال نمونه خون تهیه می شود.

میزان 2ccخون درون تیوب ها همراه با ماده ضد انعقاد (سدیم سیترات 2/3%) ریخته شده و برای 10 دقیقه به میزان 500 xg در اتاق حرارت سانتریوفیوژ می شود.

بخش پایین پلاسمای جدا شده بدون رسوبات سلول های قرمز PRP بوده و جداسازی می شود. برای فعال سازی PRP نمونه بدست آمده به تیوب های استریل فالکون منتقل شده و به انها میزان 23mM کلسیم کلراید افزوده می شود سپس به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق برای فعال شدن پلاکت ها و تبدیل فیبرینوژن به فیبرین قرار می گیرد.

  پلاکت ها و WBC ها به صورت چشمی شمارش شده اند. جمع آوری و فرآوری نمونه های خونی و اتمام اجرای آن در همزمان یک روز انجام خواهد شد.⁶

نحوه شمارش پلاکت ها و WBC:

برای شمارش دستی پلاکت نمی توان از خون تام استفاده کرد ونیاز به رقیق کننده است بدین صورت که پلاکت با استفاده از رقیق کننده اگزالات آمونیوم1% با ضریب رقت 1به 100 رقیق شده و پس از فرصت دادن به محلول در 2بازه زمانی 5 و 20 دقیقه جهت حذف سلول های اضافه و فیکس شدن پلاکت ها بر روی لام نئوبار load می شود. بعد از لود کردن از مربع میانی 5در5 استفاده می کنیم.این مربع در خود دارای تقسیم بندی هایی است که عملا 25 مربع16تایی یا400 مربع کوچک داریم.برای شمارش پلاکت ها5مربع شمرده می شود و در ضریب رقت5 ضرب خواهد شد(و فاکتور رقت که 100 است). عدد بدست آمده بیانگر تعداد پلاکت ها در امیلی لیتر مکعب خون خواهد بود. رنج نرمال ان150-450×10⁹ در1 لیتر خون است.

برای شمارش دستی گلبول های سفیدنیز از محلول رقیق کننده استفاده می شود.محلول مارکانو که حاوی اسید استیک است به عنوان رقیق کننده با هدف لیز گلبول های قرمز و سهولت در شمارش گلبول های سفید به نمونه خون اضافه می شود.ضریب رقت 1 به 20 است. پس از رقیق سازی برای 1تا2 دقیقه لوله shake می شود.پس از لود کردن بر روی لام نئوبار و گذشت زمان3 دقیقه در زیر میکروسکوپ نوری شمارش انجام می شود.تعداد گلبول ها در سطح 1میلی مترمربع از لام شمارش می شوند،سپس در ضریب رقت که 20 است ضرب شده و به دلیل استفاده از لامل و وجود فاصله0.1 میلی متری بین لام و لامل نتیجه بدست آمده را در عدد10 ضرب می کنیم که نهایتا تعداد گلبول های سفید در 1میلی متر مکعب خون بدست خواهد امد. رنج نرمال ان 10⁹×11-4 در1 لیترخون است.⁴⁴

 تهیه نمونه های باکتریایی:سویه مورد مطالعه در این تحقیق IBRC-M 10630 streptococcus oralis است و از مرکز ملی ذخائر ژنتیکی و زیستی ایران تهیه می شود و بر روی محیط های بلادآگار کشت داده خواهد شد.

مجموعه باکتری ها از برداشت یک کلونی از مجموعه بدست می آید. سویه در پلیت های آگار wilkins – chalgren (wc) تحت شرایط هوازی( co₂25% ,H₂10% , N₂85%   )رشد داده می شوند.برای تهیه مایع باکتریال چند کلونی باکتری در( 9 mL (broth محیط wilkinsرقیق شده ، سپس شمارش باکتری ها در غلظت 600 nm به صورت چشمی انجام خواهد شد. (بر مبنای 1/0 مربوط به واحد کلونی دCFU) ر )است)⁶

محیط نیم مک فارلند محیطی در تست آنتی بیوگرام است که میزان کدر بودن نمونه خود رابا آن مقایسه می کنیم.این محیط حاوی 10⁸×1.5باکتری است.نحوه تهیه این محیط درازمایشگاه به شرح زیر است:برای تهیه این کدورت0.5میلی لیتر باریم کلرید0.48 مولار را در 99.5میلی لیتر اسید سولفوریک0.36نرمال مخلوط کرده که این محیط به مدت6ماه در ظرف دربسته و تاریکی قابل نگهداری است.چنانچه در هر زمان رسوبی در لوله مشاهده شود محیط غیرقابل استفاده خواهد بود.

تهیه سوسپانسیون نیم مک فارلند: برای تهیه سوسپانسیون میکروبی، ابتدا 24 ساعت قبل از انجام آزمایش، باکتری از کشت ذخیره به محیط کشت شبیدار نوترینت آگار مغذی (مرک آلمان) تلقیح می شود. پس از رشد کلنی های باکتری، سطح محیط کشت را با محلول نرمال سالین شسته و سوسپانسیون غلیظ میکروبی حاصل می گردد. سپس مقداری از سوسپانسیون باکتری، داخل لوله استریل درب دار حاوی نرمال سالین ریخته شده و کدورت آن با اسپکتروفتومتر در طول موج 630 نانومتر اندازه‌گیری می شود و تا هنگام برابر شدن کدورت محلول با کدورت محلول نیم مک فارلند استاندارد، با نرمال سالین رقیق و سوسپانسیون باکتری با غلظت cfu/ml108×1 تهیه می گردد.⁴⁵

تعیین MIC (کمترین غلظت مهار کننده):

MIC  کمترین غلظت پلاسما فرآوری شده که به طور قابل ملاحظه ای قادر به مهار رشد میکروارگانیسم ها است می باشد. تکنیک (broth microdilution) برای تعیین MIC برای هر میکروارگانیسم به کار می رود.

.آزمون  ضدمیکروبی PRP: حساسیت سویه های باکتری دارای مقاومت چندگانه نسبت به PRP با استفاده از روش رقیق سازی در چاهک بررسی می شود. به شش چاهک از پلیت های میکروتیترباغلظت های0.3 ،  0.62 ،1.25 ،2.5، 5 و 10 mg/mlمیزان 100 میکرولیتر از محیط مایع مغذی مولر هینتون براث (MHB) اضافه می شود. سپس به چاهک اول 100 میلی لیتر از PRP اضافه شده و پس از مخلوط کردن 100 میکرولیتر از چاهک اول برداشته به چاهک دوم اضافه کرده، بدین ترتیب تا آخرین چاهک این کار انجام می شود. از چاهک آخر 100 میکرولیتر محیط کشت خارج کرده و مقدار 100 میکرولیتر از سوسپانسیون میکروبی حاوی 107 واحد در میلی لیتر معادل 5/0 مک فارلند اضافه شده و در انکوباتور در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت قرار می گیرد. اولین چاهکی که از رشد باکتری پس از قرار دادن در انکوباتور جلوگیری کرده است به‌عنوان (MIC) در نظر گرفته شد و برای اطمینان از چاهک های شفاف 10 میکرولیتر برداشته به محیط مولر هینتون آگار منتقل کرده و پس از 24 ساعت اولین رقتی که توانسته 9/99 درصد باکتری را از بین ببرد به‌عنوان حداقل غلظت کشنده در نظرگرفته خواهد شد ⁴⁵

پس از incubation در اتاقک خلأ در دمای  اتاقبرای 24 h رشد باکتریال برای تعیین میزان MIC مورد ارزیابی قرار می گیرد. برای سویه در 3 نسخه انجام و با حداقل 3 مرتبه با نتایج مشابه تکرار می شود. اطلاعات به عنوان نماینده آزمایش مورد تصویب قرار می گیرد.نتایج MIC با دستگاه الایزا خوانده می شود.

تعیین MBC (حداقل غلظت کشنده باکتری):

برای تعیین آن آخرین لوله ای که دارای (کمترین مقدار ماده PRP) باکتری های تلقیح شده به آن ،کشته شده باشند و نتیجه کشت آن بر روی محیط آگار منفی باشد، به عنوان حداقل غلظت کشنده در نظر گرفته خواهد شد.⁴⁶

کلرهگزیدین گلوکونات 2% به عنوان  کنترل مثبت  و سالین بدون پلاسما به عنوان کنترل منفی بررسی می شود. برای هر 20ml میزان (well) چاهک از سوسپانسیون رقیق شده باکتریال(  در wc broth) افزوده می شود.

آنالیز آماری

آنالیز با بکارگیری هر یک از آنالیز یک مرحله ای یا variance یا آنالیز اندازه گیری قابل تکرار انجام می شود. تست Tukey – HSD post hoe برای مقایسه هر گروه به کار می رود (05/0P<).

برای توصیف داده ها ، از شاخص های مرکزی و پراکندگی و برای تحلیل داده ها و مقایسه دوبه دوی گروه ها در صورت نرمال بودن توزیع داده ها، از آزمون T و در صورت عدم نرمال بودن از آزمون های ناپارامتری متناسب استفاده خواهد شد(ضمیمه شماره 2).

براساس دفرچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی مطابق با کد های 13،16،15،23و 25 عمل خواهد شد.

براساس دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی برروی عضو و بافت انسانی مطابق با کد های 2و 4 و 6 و 9 عمل خواهد شد.

کافی نبودن تعداد نمونه ها که با افزایش زمان مطالعه قابل حل است.

Antibacterial , PRP , Periodontitis

1- Dahlén G. Role of suspected periodontopathogens in microbiological monitoring of periodontitis. Adv Dent Res 1993; 7: 163-174.

2- Hajishengallis G. Immunomicrobial pathogenesis of periodontitis: keystones, pathobionts, and host response. Trends Immunol 2014; 35: 3-11.

3- Van Winkelhoff AJ, Loos BG, van der Reijden WA, van der Velden U. Porphyromonas gingivalis, Bacteroides forsythus and other putative periodontal pathogens in subjects with and without periodontal destruction. J Clin Periodontol 2002; 29: 1023-1028.

4- Loesche WJ, Grossman NS. Periodontal disease as a specific, albeit chronic, infection: diagnosis and treatment. Clin Microbiol Rev 2001; 14: 727-752.

5- Drago L, Bortolin M, Vassena C, Taschieri S, del Fabbro M. Antimicrobial activity of pure platelet-rich plasma against microorganisms isolated from oral cavity. BMC Microbiol 2013; 13: 47.

6-Yang L.C , Hu S.W , Yan M, Yang J.J , Tsou S.H , Lin Y.Y , Antimicribial Activity of Platelet-Rich Plasma and Other Plasma Preparations Against Periodontal Pathogens , journal of periodontology , 2014.140373

7- Marx RE, Carlson ER, Eichstaedt RM, Schimmele SR, Strauss JE, Georgeff KR. Platelet-rich plasma: Growth factor enhancement for bone grafts. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 1998; 85: 638-646.

8- Bezgin T, Yilmaz AD, Çelik BN, Sönmez H. Concentrated platelet-rich plasma used in root canal revascularization: 2 case reports. Int Endo J 2014; 47: 41-49.

9- Antonello GM, Torres do Couto R, Giongo CC, Corrêa MB, Chagas Júnior OL, Lemes CHJ. Evaluation of the effects of the use of platelet-rich plasma (PRP) on alveolar bone repair following extraction of impacted third molars: Prospective study. J Craniomaxillofac Surg 2013; 41: 70-75.

10- Streckbein P, Kleis W, Buch RSR, Hansen T, Weibrich G. Bone Healing with or without Platelet-Rich Plasma around Four Different Dental Implant Surfaces in Beagle Dogs. Clin Implant Dent Relat Res 2014; 16: 479-486.

11- Forni F, Marzagalli M, Tesei P, Grassi A. Platelet gel: applications in dental regenerative surgery. Blood Transfus 2013; 11: 102-107.

12- Markopoulou CE, Markopoulos P, Dereka XE, Pepelassi E, Vrotsos IA. Effect of homologous PRP on proliferation of human periodontally affected osteoblasts. In vitro preliminary study. Report of a case. J Musculoskelet Neuronal Interact 2009; 9: 167-172.

13- Malhotra A, Pelletier MH, Yu Y, Walsh WR. Can platelet-rich plasma (PRP) improve bone healing? A comparison between the theory and experimental outcomes. Arch Orthop Trauma Surg 2013; 133: 153-165.

14- Kotsovilis S, Markou N, Pepelassi E, Nikolidakis D. The adjunctive use of platelet-rich plasma in the therapy of periodontal intraosseous defects: a systematic review. J Periodont Res 2010; 45: 428-443.

15- Graziani F, Ivanovski S, Cei S, Ducci F, Tonetti M, Gabriele M. The in vitro effect of different PRP concentrations on osteoblasts and fibroblasts. Clinical Oral Implants Research 2006; 17: 212-219.

16-David M. DohanEhrenfest, Lars Rasmusson and Tomas Albrektsson.Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trend in Biotechnology2008;27:158-167.

17-.Saltz R, Sierra D, Feldman D, Saltz MB, Dimick A,Vascones LO. Experimental and clinical application of fibrin glue. PlastReconstrSurg 1991;88:1005-15 , discussion 1016-7.

18-HoltzG.Alveolar ridge augmentation with hydroxylapatite using fibrin sealant for fixation. Part1: An experimental study. Int J oral Maxillofacsurg 1991;20:204-7.

19-. Holtz G.Alveolar ridge augmentation with hydroxylapatite using fibrin sealant for fixation. Part2: clinical application. Int J oral Maxillofacsurg 1991;20:208-13.

20-.Bonucci E, Marini E, Valdinucci F, Fortunato G. osteogenic response to hydroxyapatite-fibrin implants in maxillofacial bone defects. Eur J oral Sci1997;105:557-61.

21-MatrasH.Fibrin sealant in maxillofacial surgery. Development and indications. A review of past 12 years. Facial plastsurg 1985;2:297-313.

22- Moojen DJF, Everts PAM, Schure R-M. Antimicrobial activity of platelet-leukocyte gel against Staphylococcus aureus. J Orthop Res 2008; 26: 404-410.

23- Bielecki TM, Gazdzik TS, Arendt J, Szczepanski T, Król W, Wielkoszynski T. Antibacterial effect of autologous platelet gel enriched with growth factors and other active substances: an in vitro study. J Bone Joint Surg Br 2007; 89: 417-420.

24- Anitua E, Alonso R, Girbau C, Aguirre JJ, Muruzabal F, Orive G. Antibacterial effect of plasma rich in growth factors (PRGF®-Endoret®) against Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis strains. Clin Exp Dermatol 2012; 37: 652-657.

25- Del Fabbro M, Ceresoli V, Lolato A, Taschieri S. Effect of platelet concentrate on quality of life after periradicular surgery: a randomized clinical study. J Endod 2012; 38: 733-739.

26- Cieslik-Bielecka A, Bielecki T, Gazdzik TS, Arendt J, Krol W, Szczepanski T. Autologous platelets and leukocytes can improve healing of infected high-energy soft tissue injury. Transfus Apher Sci 2009; 41: 9-12.

27- Everts PA, Devilee RJ, Brown Mahoney C, Eeftinck-Schattenkerk M, Box HA, Knape JT, et al. Platelet gel and fibrin sealant reduce allogeneic blood transfusions in total knee arthroplasty. Acta Anaesthesiol Scand 2006, 50:593-599.

28- Yuan T, Zhang CQ, Zeng BF. Treatment of chronic femoral osteomyelitis with platelet-rich plasma (PRP): A case report. Transfus Apher Sci 2008; 38: 167-170.

29- Anitua E, Alonso R, Girbau C, Aguirre JJ, Murozabal F, Orive G. Antibacterial effect of plasma rich in growth factors (PRGF-Endoret) against Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis strains. Clin Exp Dermatol in press.

30- Álvarez ME, López C, Giraldo CE, Samudio I, Carmona JU. In vitro bactericidal activity of equine platelet concentrates, platelet poor plasma, and plasma against methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Arch Med Vet 2011; 43: 155-161.

31- Bielecki TM, Gazdzik TS, Arendt J, Szczepanski T, Krol W, Wielkoszynski T. Antibacterial effect of autologous platelet gel enriched with growth factors and other active substances: an in vitro study. J Bone Joint Surg Br 2007, 89: 417-420.

32- Burnouf T, Chou ML, Wu YW, Su CY, Lee LW. Antimicrobial activity of platelet (PLT) poor plasma, PLT-rich plasma, PLT gel, and solvent/detergent-treated PLT lysate biomaterials against wound bacteria. Transfusion in press.

33- Moojen DJ, Everts PA, Schure RM, Overdevest EP, van Zundert A, Knape JT, et al. Antimicrobial activity of platelet-leukocyte gel against Staphylococcus aureus. J Orthop Res 2008; 26: 404-410.

34 Krijgsveld J, Zaat SA, Meeldijk J, van Veelen PA, Fang G, Poolman B, et al. Thrombocidines, microbicidal proteins from human blood platelets, are C-terminal deletion products of CXC chemokines. J Biol Chem 2000; 275: 20374-20381.

35- Wecksler BB, Nachman RL. Rabbit platelet bactericidal protein. J Exp Med 1971, 134: 1114-1130.

36- Klinger MH, Jelkmann W. Role of blood platelets in infection and inflammation. J Interferon Cytokine Res 2002; 22: 913-922.

37- Tang YQ, Yeaman MR, Selsted ME: Antimicrobial peptides from human platelets. Infect Immun 2002; 70: 6524-6533.

38-Yeaman MR. The role of platelets in antimicrobial host defense. Clin Infect Dis 1997;25:951-68

39-Tang YQ, Yeaman MR, Selsted ME. Antimicrobial peptides from human platelets. Infect Immun 2002;70:6524-33.

40-Lindhe j,P.lang N(2007)Clinical Periodontology and Implant Dentistry, microbiology (pp.232)

41-Lindhe j,P.lang N(2007)Clinical Periodontology and Implant Dentistry, microbiology (pp.241)

42- Vargas-Reus MA, Memarzadeh K, Huang J, Ren GG, Allaker RP. Antimicrobial activity of nanoparticulate metal oxides against peri-implantitis pathogens. Int J Antimicrob Agent 2012;40:135-139.

43- Zhou Y, Guan X, Zhu W, et al. Capsaicin inhibits Porphyromonas gingivalis growth, biofilm formation, gingivomucosal inflammatory cytokine secretion, and invitro osteoclastogenesis. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2014;33:211-219.

44-Harbert KR. Venipuncture. In:Dehn RW, Asprey DP, eds.Essential clinical Procedures. 3^rd. Philadelphia, PA: Elserior saunders;2013:chap5

45- سعیدی، س.، صباغ، س.ک.، صبوری رباط، الف. 1392.بررسی فعالیت ضدمیکروبی اسانس و عصاره گیاه مورد علیه سویه های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به آنتی بیوتیکهای انتخابی. مجله علوم پزشکی زابل . (3)4: 21-32.

46-خان ناظر ع.ح ، سعادتمند ر ، 1383. اندازه گیری حداقل غلظت ممانعت کننده از رشد و حداقل غلظت کشنده انتی بیوتیک های بتالاکتام بر روی اعضای خانواده انتروباکتریاسه جدا شده از مدفوع بیماران بیمارستان های شیراز. مجله علمی پزشکی جندی شاپور. 42: 19-

بررسی اثر ضد باکتریایی (Platelet Rich Plasma) PRP علیه Streptococcus oralis در محیط invitro

دارد

افزایش سرعت بازسازی بافت های  لثه ای تخریب شده در اثر پیشرفت بیماری لثه

ندارد

ندارد

برای بیمار هزینه ای ندارد

ندارد

تمامی اطلاعات بیمار محرمانه باقی می ماند

-

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.

ضمیمه شماره یک- اثرات شاخص های آنتی میکروبیال پلاسمای فراوری شده بر باکتری مورد مطالعه