مقایسه فراوانی پلی مورفیسم ژن های Drosha(rs6877842)، Dicer(rs3742330) ،XPO5(rs1107) و RAN(rs14035) ؛ miR-27a (rs895819) و miR-423 (rs6505162) در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل

ﺳﻨﺪرم ﺳﻘﻂ ﻣکﺮر ﺧﻮدﺑﺨﻮدی  (Recurrent spontaneous abortion)اﻏﻠﺐ ﺑﻪ ﺻﻮرت سه سقط پشت سر هم  ﺗﻌﺮیﻒ ﻣـی شود.

سازمان WHO^[1] سقط را از دست دادن جنین یا رویان تا وزن 500 گرم، پیش از هفته 20 بارداری تعریف می­کند(1). سقط یک اتفاق متداول در طی دوران بارداری است و این یکی از مشکلاتی است که همسران جوان با آن روبه رو هستند، که باعث نگرانی و ناکامی آنها می شود. در واقع حدود 15 درصد بارداری­هایی که از نظر کلینیکی تشخیص داده می­شوند، در نیمه اول بارداری سقط می­شوند(2).

سقط مکرر در منابع مختلف تعاریف متفاوتی دارد. در اغلب منابع سقط مکرر را به صورت سه یا بیش از سه سقط متوالی، پیش از هفته 20 بارداری تعریف می­کنند. گر چه گاه تعریف مدرنی از سقط مکرر به صورت دو یا بیش از دو سقط متوالی پیش از هفته 20 نیز ارائه می گردد. کالام در مطالعه ی خود نشان داد که 5 درصد زوج ها، دو سقط مکرر و 2 درصد آنها سه سقط مکرر یا بیشتر را تجربه خواهند کرد. این سقط از شایعترین عارضه ی حاملگی محسوب می شود و موجب استرس شدید در زوجهای مشتاق فرزند می شود (1).سقط مکرر به دو گروه سقط مکرر اولیه و ثانویه تفکیک می­گردد. در مورد سقط اولیه فرزند زنده ای متولد نمی شود، ولی در سقط مکرر ثانویه یک یا چند تولد زنده و پس از آن سقط های پشت سر هم رخ می دهد. در بیشتر مواقع سقط به صورت پدیده تصادفی در زوج اتفاق می افتد. به هر صورت دلایلی از جمله اختلالات کروموزومی مانند ترانسلوکاسیون، سندرم آنتی فسفولیپید،سندرم تخمدان پلی کیستیک، در ایجاد سقط مکرر شناسایی شده است. چنین حالات غیرطبیعی کروموزومی در 5 درصد زوج­هایی که دچار سقط مکرر می­شوند، حادث می شود. از سایر علل می توان به دلایل آناتومیک (6-12درصد)، آندوکرین (20-17درصد)، عفونت­ها (5-15درصد)، دلایل ایمنولوژیکی (ترومبوفیلی) و همچنین علل متفرقه دیگر اشاره کرد. البته بعد از ارزیابی واقعی در 60 درصد موارد، سقط مکرر غیرقابل توجیه باقی می­ماند (5-7).

بر اساس مطالعات مختلف اختلالات ژنتیک 6-5/3درصد دلایل سقط مکرر را شامل می شوند .این فاکتور تنها دلیل بدون بحث سقط مکرر می باشد که به دلیل وجود ساختمان غیر طبیعی در کروموزوم های یک یا هر دو زوج اتفاق می افتد. این اختلالات می توانند به علت تعداد غیر طبیعی کروموزوم ها که منجر به آنوپلوئیدی جنین خواهد شد، نیز باشد.و این اختلالات با بالا بودن سن مادر رابطه زیادی دارد.اختلالات ژنتیکی به دو روش مختلف تشخیص داده می شود:.

1. تشخیص سیتوژنیک:
2.  اختلالات کاریوتایپ ژنومی

تشخیص مولکولی. که دارای چند نقص ژنتیکی است که به کمک تجزیه DNA مشخص می شود

اختلالات کروموزومی ممکن است به علت وراثت اختلالات ساختمانی و جابجایی های قطعات کروموزومی در کروموزوم­های والدین و یا اختلال در تعداد کروموزوم جنین و یا اشکال ساختمانی در کروموزم های جنین اتفاق بیافتد. معمولاً این اشکالات به شکل جابجایی های کرموزومی، بر عکس شدن کروموزوم، حلقه ای شدن و غیره اتفاق می افتد. این جابه جایی ها مشکلی را برای خود والدین ایجاد نمی­کنند، اما در روند تقسیم و ایجاد سلول های جنسی نر و ماده ( که منجر به ایجاد سلول هایی با نصف کروموزم پدری و مادری می شود ) ایجاد مشکل می کنند. در واقع تعداد زیادی از جنین های با اشکالات کروموزومی سقط می شوند و تعداد کمی از آنها تولد زنده را تجربه خواهند کرد (8). اختلال کروموزمی حنین یکی از علل عمده سقط خودبخودی است که 50 درصد از سقط ها را شامل می شود(9). از طرفی دیگر، فراوانی کاریوتیپ طبیعی جنین در سقط ها افزایش یافته که نشانه اهمیت بیشتر فاکتورهای مادری در عدم بارداری موفق است(11،10).

میکروRNA ها (miRNA) زیر گروه بزرگی از RNA های غیر کدکننده 18-25 نوکلئوتیدی هستند که از نظر تکاملی حفاظت شده می باشند. در سال 1993 اولین miRNA به نام Lin-4(Lineage-4) توسط آقای E و همکاران در انگل کانورابدیتیس الگانس کشف شد، اما اهمیت این مولکول به عنوان تنظیم کننده زیستی تا سال 2001 که نمونه دیگری به نام Let-7 شناسایی شد، هنوز مشخص نشده بود.miRNA  مولکول های حفاظت شده ای از RNAهای تنظیمی درون سلولی هستند که بیان ژن را از طریق مسیر RNAi تعدیل می کنند.RNAi نوعی مکانیسم خاموش کننده پس از رونویسی در یوکاریوت ها است که با ایجاد RNA دو رشته ای تجزیه ی mRNA های مشابه را القا می کند. miRNA ها به صورت جزئی با mRNA هدف مکمل شده و اغلب به ناحیه ای از UTR´mRNA 3 هدف وصل می شوند که از این طریق منجر به مهار ترجمه یا تجزیه آن می شوند. پراکندگی ژن های  miRNA در ژنوم به صورت منفرد یا خوشه ای است و برخی در نواحی بین ژنی و حداقل نیمی از آنها در واحدهای رونویسی معینی مثل اینترون و اگزون های کدکننده پروتئین و رونوشت هایی که پروتئین کد نمی کنند یافت شده اند (12).

بیوژنز  miRNAدر هسته و سیتوپلاسم صورت میگیرد. رونوشت آغازین miRNA  چندین کیلوجفت باز طول دارد و توسط RNase II رونویسی شده و پلی آدنیله می شود. ساختار ساقه-حلقه این رونوشت ها توسط یک کمپلکس آنزیمی مستقر در هسته که 650 کیلودالتون وزن دارد تشخیص داده شده و پردازش می شود.کمپلکس مذکور حاوی یک   RNaseIII مخصوص برش RNA دورشته ای به نام Drosha و پروتئین متصل شونده به RNA دورشته ای DGCR8/Pasha است(13).پردازش اولیه منجر به ایجاد یک پیش ساز سنجاق سری 60-110 نوکلئوتیدی می شود،که این میکروRNA پیش ساز توسط فاکتور صادرکننده هسته ای (XPO5)Exportin-5 و فاکتور کمکیRan-GTP(RAN) به سیتوپلاسم منتقل می شود. در سیتوپلاسم، RNaseIII دیگری به نام Dicer منجر به پردازش نهاییmiRNA  می شود. Dicer به همراه عامل کمکی متصل شونده به RNA دورشته ای (dsRNA binding partner)که در انسان HIV1-TRBP و در مگس Loqs نامیده می شوند، لوپ انتهایی pri-miRNA را برش می دهد و miRNA (دورشته ای ) 19-22 نوکلئوتیدی را ایجاد می کند(12).TRBP دیگری، پروتئین آرگونات انسانی hAg2(EIF2C2) رابه کمپلکس دایسر متصل نموده و یک کمپلکس خاموش کننده القا شده ( RISC) توسط RNA را ایجاد می کند. از آنجایی که فقط یکی از رشته ها های دوتایی میکروRNA می تواند نقش راهنما و هدایت کننده RISC به 3՜ UTR mRNA های هدف را براساس جفت شدن با mRNA ایفا کند، رشته دوم(پسنجر) حذف می شود. رشته حاوی جفت باز ضعیف در پایانه 5 به عنوان رشته راهنما انتخاب می گردد. میکروRNAهای متصل شونده بهRISC به 3՜ UTR mRNA هم جنس جفت می شوند و پس از رونویسی ژن، بیان آن را از طریق برش یا مهار ترجمه mRNA هدف کنترل می کنند.mRNA هایی که ترجمه آنها مهار می شود، در جایگاه های سیتوپلاسمی مشخصی که اجسام پردازشی(p-bodies) نامیده می شوند، مستقر شده و در آنجا ذخیره یا تجزیه می شود(14).میکروRNAها وظایف پر اهمیتی در کنترل بسیاری از فرایندهای بیولوژیک از جمله رشد، تمایز و تکثیر سلولها  همچنین خونسازی، رگ زایی و آپوپتوز ایفا می کنند (15, 16).

مطالعات اخیر نشان داد ه اند که میکرو RNA ها در اندومتریوز؛ پره اکلامپسی و ناباروری دخالت دارند. به علاوه میکروRNA های زیادی چه در حالت بیماری چه در حالت نرمال در اندومتر شناخته شده اند و بیان گر این هستند که احتمالا برای عملکرد نرمال سیستم تولید مثل ضروری می باشند(17-19).

مطالعات متعددی در مورد ارتباط بیان و پلی مورفیسم میکروRNA ها و سقط مکرر انجام گرفته است EL-Shorafa و همکاران در سال 2013 به بررسی میزان بیان میکرو RNA های 517 ؛ 222 ،182 ،155 ،126 و21 در زنان مبتلا به سقط مکرر پرداختند و به این نتیجه رسیدند که بیان mir- 21 و mir -126 در حین بارداری و قبل از ان در زنان مبتلا به شدت کاهش می یابد پس احتمالا این میکروRNA ها در پاتوژنز بیماری دخیل می باشند(20).. در مطالعه ی دیگری که در سال 2012 توسط Wang و همکاران انجام شد، افزایش 30 برابری بیان miR-133a در خانم های مبتلا به RPL نسبت به خانم هایی که در هفته ی 7 بارداری سقط عمدی داشته اند، مشاهده شد(21).

در مطالعه ای که Jeon و همکاران در سال 2011 انجام دادند به این نتیجه رسیدند که درخانم های کره ای مبتلا به سقط مکرر ایدیوپاتیک؛ miR-499AG+GGو miR196a2CC و ترکیبی از miR-196a2CC/miR-499AG+GG دارای شیوع بالاتری نسبت به خانم های سالم این جمعیت می باشند.در نتیجه، چندشکلی های مذکور با افزایش خطر بروز سقط مکرر ایدیوپاتیک در خانم های کره ای ارتباط دارند(22) همچنین در سال 2017, Rah و همکاران با مطالعه ای که بر روی ارتباط پلی مورفیسمی ژن های mir-27a و mir-423 در خانم های کره ای مبتلا به سقط مکرر انجام دادند به این نتیجه رسیدند که بین ژنوتیپ ها miR-27a (AG and AG+GG) و ترکیبی از miR-27a/miR-423 (AG/GC) و کاهش ریسک ابتلا به RPL ارتباط وجود دارد(23).

مولکولهای کلیدی درگیر در بیوژنز miRNA، مانند DROSHA ، DICER و XPO5 در سلولهای تروفوبلاست شناسایی شده است که تایید کننده این فرضیه است که مسیر بیوژنز miRNA در جفت فعال می باشد. همچنین نشان داده شده است که جفت انسان تعداد زیادی miRNA که در نمو جفت نقش دارند را تولید می کند.(24)

تروفوبلاست villous انسانی miRNAs اختصاصی جفت را در گردش خون مادر ترشح می کند. همچنین مشخص شده است که تنظیم نامناسب microRNA با بیماری هایی مانند سرطان ، بیماری های قلبی عروقی و اختلالات بارداری مانند پره اکلامپسی ارتباط دارد. بنابراین، این احتمال مطرح می شود که miRNAs ها برای تنظیم ژن های درگیر در بارداری ضروری هستند(25).

ژن دایسر بر روی کروموزم 14 قرار دارد.طبق مطالعات انجام شده بین پلی مورفیسم آنزیم دایسر و بیماری هایی همچون pleuropulmonary blastoma (PPB), cystic nephroma (CN), و ovarian sex cord-stromal tumors و multinodular goiterو cervix embryonal rhabdomyosarcoma (CERMS و Wilms tumor و همچنین بین پلی مورفیسم rs3742330 و بیماری هایی از جمله سرطان کلرکتال، ارتباط وجود دارد(26, 27). ژن Drosha بر روی کروموزم 5 قرار دارد. (rs6877842)تک نوکلئوتیدG/C درناحیه پروموتورژن Drosha قراردارد(28)

در مطالعه ای که jung و همکاران در سال 2014 در کشو کره جنوبی انجام دادند. نشان دادند که combination، RAN rs14035 CC genotype and DICER rs3742330/DROSHA rs10719 GG/TC+CC, rs3742330/RAN rs14035 GG/CC, and DICER rs3742330/XPO5 rs11077 GG/AC+CC به طور قابل توجهی با افزایش ریسک ابتلا به سقط مکرر همراه بود.(24)

.

فراوانی پلی مورفیسم rs6877842 ژنDrosha در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم rs3742330 ژن Dicer در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم rs11077 ژن XPO5 در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم rs11077 ژن XPO5 در جفت زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم rs14035 ژن RAN در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم rs895819 ژن miR-27a در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم rs6505162 ژن mir-423a در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم ژن های Drosha(rs6877842)، Dicer(rs3742330) ،XPO5(rs1107) و RAN(rs14035) ؛ miR-27a (rs895819) و miR-423 (rs6505162) در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs6877842 ژنDrosha در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs3742330 ژن Dicer در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs11077 ژن XPO5 در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل.

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs14035 ژن RAN در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs895819 ژن miR-27a در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs6505162 ژن mir-423a در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل

دانشگاه علوم پزشکی زاهدان

مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی

 سقط مکرر: ﺳﻨﺪرم ﺳﻘﻂ ﻣکﺮر ﺧﻮدﺑﺨﻮدی  (Recurrent spontaneous abortion)اﻏﻠﺐ ﺑﻪ ﺻﻮرت به صورت  دو یﺎ ﺑیﺶ از دو ﺳﻘﻂ ﻣﺘﻮاﻟی ﭘیﺶ از ﻫﻔﺘﻪ  20 ﺑـﺎرداری ﺗﻌﺮیﻒ ﻣـی شود

پلی مورفیسم:تغییری در دنباله DNA که در یک نوکلئوتید(T،G،C،A) در ژنوم بین افراد یک گونه بیولوژیکی یا بین یک جفت کروموزم در یک فرد این نوکلئوتید فرق دارد

  موردی – شاهدی (case –control)

معیار ورود گروه بیمار:هر خانم باردار با سقط خودبخودی و دارای سابقه دو یا بیشتر سقط وارد مطالعه میشود.

معیار ورود گروه کنترل: خانم هایی که دارای چند فرزند بوده و هیچ مورد سقط نداشته اند.

معیار خروج هر دو گروه :بیماری زمینه ای مادر (لوپوس،بیماری اتوایمیون ،پره اکلامپسی،دیابت،کلیوی،فشارخون)

اختلالات آناتومیک رحمی در HSG

اختلالات کروموزومی والدین

هر گونه بیماری عفونی مادر

برای بررسی پلی مورفیسم ژنی کلیه بیماران مبتلا به سقط مکرردر طول یک سال پس از تصویب طرح و به همان تعداد افراد کنترل که حداقل آن 150 نمونه می باشد

اسان و در دسترس

دو گروه از نظر سن و BMI  همسان سازی میگردند

از طریق تشخیص بالینی و انجام آزمایشات واقدامات پاراکلینیک برای تشخیص بیماری و انجام PCR  بر روی DNA  خون  افراد و شناسایی الل های موردنظر.

کلیه بیمارانی که برای انجام سقط جنین به بیمارستان علی ابن ابیطالب (ع)مراجعه نموده اند چنانچه معیارهای ورود به مطالعه را داشته باشند وارد مطالعه میشوند اگر بیماران سابقه دو سقط خودبخودی قبلی داشته باشند بعنوان گروه مورد و بیمارانی که سابقه سقط قبلی ندارند بعنوان گروه شاهد در نظر گرفته میشوند.

ازکلیه افرادی که در مطالعه وارد شده اند 2 میلی لیتر خون در لوله های حاوی جمع آوری میگردد. نمونه های خون که در 20- درجه سانتیگراد نگهداری شده بودند، DNA با استفاده از کیت کیاژن تخلیص می‌شود. سپس با استفاده از پرایمرهای اختصاصی قطعات واجد ناحیه پلی مورفیک با روش PCR تکثیر گردیده و سپس توسط آنزیم های حدساز و با استفاده از تکنیک PCR-RFLP تعیین ژنوتیپ میگردند.

پس از گردآوری اطلاعات لازم، یافته ها در نرم افزار آماری SPSS  وارد گشته و داده ها با استفاده از آزمون­های آماری χ2  و تی تست مستقل و Regression Logistic مورد تجزیه و تحلیل قرار خواهند گرفت.

راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های علوم پزشکی

دارای آزمودنی انسانی

کد 1: هدف اصلی هر پژوهش‌باید ارتقای سلامت انسان‌ها توأم با رعایت کرامت و حقوق ایشان باشد.

کد 2:در پژوهش بر آزمودنی انسانی، سلامت و ایمنی فرد فرد آزمودنی‎ها در طول و بعد از اجرای پژوهش، بر تمامی مصالح دیگر اولویت دارد. هر پژوهشی که بر روی آزمودنی انسانی انجام می‌گیرد، باید توسط افرادی طراحی و اجرا شود که تخصص و مهارت بالینی لازم و مرتبط را داشته باشند. در کارآزمایی‌های بالینی  بر روی بیماران یا داوطلب‌های سالم نظارت پزشک دارای مهارت و دانش متناسب الزامی است.

کد 3:پژوهش بر انسان فقط در صورتی توجیه‌پذیر است که منافع بالقوه‌ی آن برای هر فرد آزمودنی بیش‌تر از خطرهای  آن باشد. در پژوهش‌های دارای ماهیت غیر درمانی، سطح آسیبی که آزمودنی در معرض آن قرار می‌گیرد نباید بیش‌تر از آن‌چه باشد که مردم عادی در زندگی روزمره‌ی خود با آن مواجه می‌شوند. حصول اطمینان از این امر برعهده‌ی طراحان، مجریان و همکاران پژوهش و تمامی شوراهای بررسی یا پایش‌کننده‌ی پژوهش از جمله کمیته‌ی اخلاق در پژوهش‌ است.

کد 4:مواردی از قبیل سرعت، سهولت کار، راحتی پژوهشگر، هزینه‌ی پایین‌تر و/ یا صرفاً عملی بودن آن به هیچ وجه نباید موجب قرار دادن آزمودنی در معرض خطر یا زیان افزوده یا تحمیل هر گونه محدودیت اختیار اضافی به وی شود.

کد 5: قبل از آغاز هر پژوهش پزشکی ، باید اقدامات  اولیه جهت به حداقل رساندن زیان احتمالی وارده به آزمودنی‌ها و تامین سلامت آن‌ها انجام گیرد.

کد 7: اگر در حین اجرای پژوهش مشخص شود که خطرات شرکت در این پژوهش برای آزمودنی‌ها بیش از فواید بالقوه‌ی آن است، باید آن پژوهش بلافاصله متوقف شود.

کد 13: کسب رضایت آگاهانه و آزادانه در هر پژوهشی که بر روی آزمودنی انسانی اجرا می‌شود، الزامی است. این رضایت باید به شکل کتبی باشد. در مواردی که اخذ رضایت آگاهانه‌ی کتبی غیر ممکن یا قابل صرف‌نظر باشد، باید موضوع با ذکر دلایل به کمیته‌ی اخلاق منتقل شود. در صورت تأیید کمیته‌ی اخلاق، اخذ رضایت کتبی قابل تعویق یا تبدیل به رضایت شفاهی یا ضمنی خواهد بود.

کد 14:اگر در طول اجرای پژوهش تغییری در نحوه اجرای پژوهش داده شود یا اطلاعات جدیدی به دست آید که احتمال داشته باشد که بر تصمیم آزمودنی مبنی بر ادامه‌ی شرکت در پژوهش تاثیر گذار باشد، باید موضوع به اطلاع کمیته‌ی اخلاق رسانده شود و در صورت موافقت کمیته با ادامه‌ی پژوهش، مراتب به اطلاع آزمودنی رسانده شود و رضایت آگاهانه مجددا اخذ گردد.

کد 15: پژوهشگر باید از آگاهانه بودن رضایت اخذشده اطمینان حاصل کند. برای این منظور، در تمامی پژوهش‌های پزشکی، اعم از درمانی و غیردرمانی، پژوهشگر موظف است فرد در نظر گرفته شده به‌عنوان آزمودنی را از تمامی اطلاعاتی که می‌توانند در تصمیم‌گیری او مؤثر باشند، به‌نحو مناسبی آگاه سازد. این اطلاعات مشتملند بر: عنوان و اهداف پژوهش، طول مدت پژوهش، روشی که قرار است به‌کار گرفته شود (شامل احتمال تخصیص تصادفی به گروه‌مورد یا شاهد)، منابع تأمین بودجه، هر گونه تعارض منافع احتمالی، وابستگی  سازمانی پژوهشگر، و فواید و زیان‌هایی که انتظار می‌رود مطالعه در بر داشته باشد. هم‌چنین، هر آزمودنی باید بداند که می‌تواند هر لحظه که بخواهد از مطالعه خارج شود و باید درباره‌ی خطرات و زیان‌های بالقوه‌ی ناشی از ترک زودرس پژوهش آگاه و پشتیبانی شود. پژوهشگر هم‌چنین باید به تمامی سؤالات و دغدغه‌های این افراد، با حوصله و دقت پاسخ بدهد. این موارد باید در رضایت‌نامه‌ی آگاهانه منعکس شود.

کد 25 : پژوهشگر مسؤول رعایت اصل رازداری و حفظ اسرار آزمودنی‌ها و اتخاذ تدابیر مناسب برای جلوگیری از انتشار آن است. هم‌چنین، پژوهشگر موظف است که از رعایت حریم خصوصی آزمودنی‌ها در طول پژوهش اطمینان حاصل کند. هرگونه انتشار داده‌ها یا اطلاعات به‌دست آمده از بیماران باید بر اساس رضایت آگاهانه انجام گیرد.

کد 28 :پژوهشگران موظفند که نتایج پژوهش‌های خود را صادقانه ، دقیق، و کامل منتشر کنند. نتایج، اعم از منفی یا مثبت، و نیز منابع تأمین بودجه، وابستگی  سازمانی، و تعارض منافع – در صورت وجود – باید کاملاً آشکارسازی شوند. پژوهشگران نباید در هنگام عقد قرارداد انجام پژوهش، هیچ  گونه شرطی را مبنی بر حذف یا عدم انتشار یافته‌هایی که از نظر حمایت کننده‌ی پژوهش  مطلوب نیست، بپذیرند.

کد 29:نحوه‌ی گزارش نتایج پژوهش باید ضامن حقوق مادی و معنوی تمامی اشخاص مرتبط با پژوهش، از جمله خود پژوهشگر یا پژوهشگران، آزمودنی‌ها و مؤسسه‌ی حمایت کننده‌ی  پژوهش باشد

راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی 

راهنمای عمومی

1- پژوهشگر باید به این امر مهم توجه داشته باشد که بافت‌ها و اعضای مورد استفاده، دارای منشأ انسانی‌اند و کرامت انسانی اقتضا می‌کند که جمع‌آوری، نگه‌داری، استفاده و نابودسازی آن‌ها توأم با رعایت ملاحظات و شؤون مرتبط باشد.

2- از اجزای بدنی دارای منشأ انسانی باید تنها در پژوهش‌هایی استفاده شود که اهداف ارزشمندی را در راستای مبارزه با بیماری‌ها و ارتقای سلامت انسان‌ها دنبال می‌کنند.

3- تمامی پژوهش‌ها بر روی عضو و بافت انسانی، پیش از اجرا، باید مورد تأیید کمیته‌ی اخلاق در پژوهش مرتبط قرار گیرد. کمیته‌ی اخلاق در پژوهش حق دارد که در تمامی مراحل پژوهش بر آن نظارت داشته باشد. پژوهشگران باید در این زمینه با کمیته‌ی اخلاق در پژوهش همکاری کنند.

4- رضایت آگاهانه‌ی فرد دهنده‌ی عضو یا بافت، یا جانشین قانونی او، شرط اساسی در تأیید اخلاقی هر پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی است. رضایت‌نامه باید با رعایت تمامی اصول مرتبط تهیه و هنگام ارسال طرح‌نامه برای تصویب، به آن پیوست شده باشد.

5- در مواردی که اخذ رضایت آگاهانه از دهنده‌ی نمونه‌ی ذخیره‌شده یا جانشین قانونی او امکان‌پذیر نباشد، به‌شرط وجود رضایت کلی اولیه بر استفاده‌ی پژوهشی، در صورت تأیید کمیته‌ی اخلاق در پژوهش می‌توان از آن نمونه برای پژوهش استفاده کرد. در چنین مواردی باید از نمونه‌هایی استفاده شود که به ‌نحو برگشت‌ناپذیر بی‌نام ‌شده باشد. ‌

6- تمامی اطلاعاتی که از صاحبان عضو یا بافت مورد پژوهش، جمع‌آوری و ثبت می‌شود، راز حرفه‌ای تلقی می‌‌شود؛ از این ‌رو، تمامی اصول و ملاحظات مربوط به رازداری و حفظ حریم شخصی، باید در مورد آن‌ها مراعات شود.

7- مرکز انجام دهنده‌ی پژوهش بر روی عضو و بافت باید مهارت و امکانات لازم برای حفظ رازداری را داشته باشد؛ در غیر این صورت، اطلاعات باید به شکل بی‌نام و غیرقابل ردیابی ثبت و ذخیره شود.

8- پژوهشگر باید از اعضاء و بافت‌هایی که به منظور پژوهش در اختیار او قرار می‌گیرد استفاده‌ی بهینه کرده، از هدر رفتن آن‌ها جلوگیری کند

9- پژوهشگر موظف است که تمهیدات لازم ایمنی، از جمله آزمون‌های غربالگری و وسایل محافظت‌کننده را برای جلوگیری از انتقال آلودگی از اجزای بدنی مورد استفاده به هر فرد دیگر، اعم از پژوهشگران، آزمودنی‌ها یا سایر افرادی که در فرایند پژوهش با این مواد سروکار خواهند داشت، پیش‌بینی و تأمین کند.

10- پژوهش بر روی عضو و بافت ممکن است به ایجاد روش‌ها و محصولاتی منجر شود که به استفاده‌ی تجاری از آن‌ها بینجامد. حقوق مالکیت معنوی نتایج حاصل از این‌گونه پژوهش‌ها باید مورد تأیید و حمایت قرار گیرد. احتمال استفاده‌ی تجاری از نتایج پژوهش و اشخاصی که احتمالاً از آن منتفع خواهند شد باید در رضایت‌نامه‌آورده شود.

11- زمان، نحوه و میزان اطلاع آزمودنی‌ها از نتایج پژوهش باید در رضایت‌نامه آورده شود. در هر حال، آزمودنی یا نماینده‌ی قانونی او باید به تمامی اطلاعاتی که در طول پژوهش درباره‌ی او به‌دست می‌آید، دسترسی داشته باشد.

12- در صورت کمبود بافت یا عضو، باید استفاده‌های درمانی بر استفاده‌های پژوهشی اولویت داده شود.

عدم همکاری بیمار

مشکل تهیه مواد وامکان طولانی شدن زمان دریافت آنها

1. Reddy AMaBM. Aruna Meka and B. Mohan Reddy. Int J Hum Genet. 2006;6(2):109-17.
2. Lee RM, Silver RM. Recurrent pregnancy loss: summary and clinical recommendations. Seminars in reproductive medicine. 2000;18(4):433-40.
3. Sierra S, Stephenson M. Genetics of recurrent pregnancy loss. Seminars in reproductive medicine. 2006;24(1):17-24.
4. Traina E, Daher S, Moron AF, Sun SY, Franchim CS, Mattar R. Polymorphisms in VEGF, progesterone receptor and IL-1 receptor genes in women with recurrent spontaneous abortion. Journal of reproductive immunology.88(1):53-7.
5. Lim KJ, Odukoya OA, Li TC, Cooke ID. Cytokines and immuno-endocrine factors in recurrent miscarriage. Human reproduction update. 1996;2(6):469-81.
6. Michels TC, Tiu AY. Second trimester pregnancy loss. American family physician. 2007;76(9):1341-6.
7. Ghosh K, Shetty S, Vora S, Salvi V. Successful pregnancy outcome in women with bad obstetric history and recurrent fetal loss due to thrombophilia: effect of unfractionated heparin and low-molecular weight heparin. Clin Appl Thromb Hemost. 2008;14(2):174-9.
8. Franssen MT, Korevaar JC, Leschot NJ, Bossuyt PM, Knegt AC, Gerssen-Schoorl KB, et al. Selective chromosome analysis in couples with two or more miscarriages: case-control study. BMJ (Clinical research ed. 2005;331(7509):137-41.
9. Stephenson MD, Awartani KA, Robinson WP. Cytogenetic analysis of miscarriages from couples with recurrent miscarriage: a case-control study. Human reproduction (Oxford, England). 2002;17(2):446-51.
10. Ogasawara M, Aoki K, Okada S, Suzumori K. Embryonic karyotype of abortuses in relation to the number of previous miscarriages. Fertility and sterility. 2000;73(2):300-4.
11. Sullivan AE, Silver RM, LaCoursiere DY, Porter TF, Branch DW. Recurrent fetal aneuploidy and recurrent miscarriage. Obstetrics and gynecology. 2004;104(4):784-8.
12. Wiemer EA. The role of microRNAs in cancer: no small matter. European Journal of Cancer. 2007;43(10):1529-44.
13. Babashah S, Soleimani M. The oncogenic and tumour suppressive roles of microRNAs in cancer and apoptosis. European journal of cancer. 2011;47(8):1127-37.
14. Schaefer A, Jung M, Kristiansen G, Lein M, Schrader M, Miller K, et al., editors. MicroRNAs and cancer: current state and future perspectives in urologic oncology. Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations; 2010: Elsevier.
15. Büssing I, Slack FJ, Großhans H. let-7 microRNAs in development, stem cells and cancer. Trends in molecular medicine. 2008;14(9):400-9.
16. Giovannetti E, Erozenci A, Smit J, Danesi R, Peters GJ. Molecular mechanisms underlying the role of microRNAs (miRNAs) in anticancer drug resistance and implications for clinical practice. Critical reviews in oncology/hematology. 2012;81(2):103-22.
17. McCallie B, Schoolcraft WB, Katz-Jaffe MG. Aberration of blastocyst microRNA expression is associated with human infertility. Fertility and sterility. 2010;93(7):2374-82.
18. Pickering MT, Stadler BM, Kowalik TF. miR-17 and miR-20a temper an E2F1-induced G1 checkpoint to regulate cell cycle progression. Oncogene. 2009;28(1):140.
19. Zhang Y, Diao Z, Su L, Sun H, Li R, Cui H, et al. MicroRNA-155 contributes to preeclampsia by down-regulating CYR61. American journal of obstetrics and gynecology. 2010;202(5):466. e1-. e7.
20. El-Shorafa HM, Sharif FA. Dysregulation of micro-RNA contributes to the risk of unexplained recurrent pregnancy loss. International Journal of Reproduction, Contraception, Obstetrics and Gynecology. 2016;2(3):330-5.
21. Wang X, Li B, Wang J, Lei J, Liu C, Ma Y, et al. Evidence that miR-133a causes recurrent spontaneous abortion by reducing HLA-G expression. Reproductive biomedicine online. 2012;25(4):415-24.
22. Jeon YJ, Choi YS, Rah H, Kim SY, Choi DH, Cha SH, et al. Association study of microRNA polymorphisms with risk of idiopathic recurrent spontaneous abortion in Korean women. Gene. 2012;494(2):168-73.
23. Rah HC, Chung KW, Ko KH, Kim ES, Kim JO, Sakong JH, et al. miR-27a and miR-449b polymorphisms associated with a risk of idiopathic recurrent pregnancy loss. PLoS ONE. 2017;12(5).
24. Jung YW, Jeon YJ, Rah H, Kim JH, Shin JE, Choi DH, et al. Genetic variants in microRNA machinery genes are associate with idiopathic recurrent pregnancy loss risk. PloS one. 2014;9(4):e95803.
25. Shakarami F, Mirfakhraie R, Karizi SZ, Zare H. MIR17HG Gene Polymorphism and the Risk of Recurrent Spontaneous Abortion. Gene, Cell and Tissue. 2016;3(1).
26. Foulkes WD, Bahubeshi A, Hamel N, Pasini B, Asioli S, Baynam G, et al. Extending the phenotypes associated with DICER1 mutations. Human mutation. 2011;32(12):1381-4.
27. Cho SH, Ko JJ, Kim JO, Jeon YJ, Yoo JK, Oh J, et al. 3’-UTR Polymorphisms in the MiRNA Machinery Genes DROSHA, DICER1, RAN, and XPO5 Are Associated with Colorectal Cancer Risk in a Korean Population. PloS one. 2015;10(7):e0131125.
28. Spreafico F, Ciceri S, Gamba B, Torri F, Terenziani M, Collini P, et al. Chromosomal anomalies at 1q, 3, 16q, and mutations of SIX1 and DROSHA genes underlie Wilms tumor recurrences. Oncotarget. 2016.

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم ژن های Drosha(rs6877842)، Dicer(rs3742330) ،XPO5(rs1107) و RAN(rs14035) ؛ miR-27a (rs895819) و miR-423 (rs6505162) در خون زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل

زکلیه افرادی که در مطالعه وارد شده اند 2 میلی لیتر خون در لوله های حاوی  جمع آوری میگردد ا

از نقش احتمالی تغییرات ژنتیکی بر بروز بیماری مطلع میشویم

در این قسمت عوارض جانبی ها و مضرات احتمالی روش انتخابی به زبان ساده و دقیق جهت تشخیص یا درمان بیماری فرد برای وی بیان می شود. مانند کبودی محل خونگیری که بعد از مدت زمان کوتاه بهبود پیدا می کند

در این قسمت باید مشخص گردد که جبران عوارض احتمالی روش تشخیصی یا درمانی جدید به عهده مجری یا مجریان طرح تحقیقاتی می باشد و نحوه جبران خسارت نیز ذکر می گردد.

کلیه  هزینه های طرح  به عهده مجری یا مجریان طرح خواهد بود و بیمار هزینه ای را پرداخت نخواهد کرد.

-فقط خونگیری ساده انجام می شود و روش جایگزینی وجود ندارد.

نتایج آزمایشها و روشهای به کار رفته به اطلاع بیمار خواهد رسید و این نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری وی در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند.

دکتر سعیده سلیمی 09123003175

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان  که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.