بررسی پلی مورفیسمهای rs1110839 G>T, rs4848320 C>T و rs6726151 A>C ژن PAX8-AS1 در کودکان مبتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حاد در مقایسه با کودکان سالم

   ( Acute Lymphoblastic Leukemia)  ALLلوسمی حاد لنفوبلاستیک   شایعترین لوسمی کودکان می باشد. 25تا30درصد تمامی بدخیمی های کودکان را شامل می شود.اگرچه شمای کلینیکی ، پاتولوژیکی و ایمونولوژیکی آن به خوبی مشخص شده است ، اما در مورد  منشاء ایجاد آن اطلاعات اندکی وجود د ارد. علل وعوامل اصلی ایجاد لوسمی ناشناخته است وبه نظر می رسد عوامل ژنتیکی و محیطی در آن دخیل باشند. لوسمی معمولا در نتیجه جابجایی DNA،اینورشن یا حذفها در ژنها و هموستاز و تکامل سلولهای خونی ایجاد می شود. [1]ALL هم در کودکان و هم در بزرگسالان بروز می­کند ولی پیک شیوع آن در 2 تا 5 سالگی می­باشد. علل متعدد بیرونی (محیطی) و استعداد ابتلاء ژنتیکی باعث بروز آن می­شود. بقاء در ALL کودکان تا حدود 90% بهبود یافته­است.  [2] میزان بقاء برای ALL کودکان در 4 دهه­ ی گذشته به­طور قابل ملاحظه­ای افزایش یافته­است. (بقاء 5 ساله بیش از 90%) .همه ساله در آمریکا 14382 مورد جدید سرطان در افراد زیر 20 سال تشخیص داده­می­شود. تقریبا21% )  2970(  از این موارد ALLمی­باشد. میزان بروز سالانه در آمریکا برای افراد زیر 20 سال ،35 نفردریک میلیون نفر جمعیت می­باشد که در مردان میزان بروز بیشتر از زنان است. تفاوت قابل ملاحظه ای در وقوع بین کودکان سفید و سیاه وجود دارد که در بین کودکان سفید تقریباً میزان بروز دو برابر بیشتر است. بیشترین بروز ALL کودکان در سنین بین 2 تا 5 سال رخ می­دهد. در بین ملل مختلف تفاوت قابل ملاحظه­ای در بروز ALL کودکان و بزرگسالان وجود دارد. ALL کودکان یکی از این سرطان­هاست. در بیمارستان تحقیقاتی St jude بقای بلند مدت از 10% در اواسط دهه­ی 1960 تا 90% تا به امروز افزایش یافته­است. [3]

 پلی مورفیسم های تک نوکلئوتیدی (SNP)که در آن یک جفت باز تغییر می کنند ممکن است در ساختمان یا بیان پروتئین ها موثرباشند.بنابراین تعیین و مشخص نمودن تغییرات توزیع SNPدر جمعیتهای مختلف ممکن است استعداد به ابتلا به بعضی بیماری هارا روشن نماید. پلی مورفیسم های تک نوکلئوتیدی (SNP) در تعدادی از ژنها در ALLبررسی شده اند. 

Long-noncoding RNA  کلاس بزرگ وجدیدی از RNAها هستند که رونویسی می شوند ولی ترجمه نمی شوند، معمولا بیش از 200 نوکلئوتید طول دارند و نقش مهمی در سرطانها ایفا می کنند.(12)

   PAX8  یک فاکتور رونویسی می باشد که برای ارگانوژنز غدد تیروئیدی ، کلیه و سیستم مولرین شامل لوله های فالوپ ، گردن رحم ، رحم و یک سوم بالایی واژن نقش حیاتی دارد [4].  مطالعات نشان داده است که بیان PAX8  در بسیاری از بافتهای نئوپلاستیک مثل سرطان تخمدان و مولرین افزایش داشته است اما در بافتهای نرمال چنین نبوده است[5] . در نتیجه بیان PAX8  بعنوان یک تومور مارکر جدید دراین سرطانها تشخیص داده شده است  [6, 7]. گرچه نقش PAX8  در سرطان همچنان واضح وروشن نیست اما تصور می شود که PAX8  ممکن است در حفظ سلولهای بنیادی بافتهای ویژه با مهار تمایز و آپوپتوز که منجر به پیشرفت تومور می گردد [8]. در ناحیه بالا دست PAX8  (در کروموزوم 2 2q13)  یک RNA  غیر کد کننده بلند (lncRNA)  بنام PAX8-AS1  وجود دارد. ثابت شده است که lncRNA به عنوان یک تنظیم کننده مهم بیان ژن در هسته از طریق تعدیل رونویسی ویا مکانیسمهای پس از رونویسی عمل نماید[9]. Veyrieras و همکاران نشان دادند که پلی مورفیسم های  rs4848320 و rs1110839 در PAX8-AS1 در بیان  ژن PAX8 نقش دارد  [10]. مطالعات در خصوص ارتباط پلی مورفیسم های PAX8-AS1و ریسک ابتلا به سرطان اندک است . تاکنون یک مطالعه در سال2016 توسطHan  و همکاران روی پلی مورفیسم های  rs4848320 و rs1110839 ژن PAX8-AS1 وریسک ابتلا به سرطان گردن رحم  انجام شده و نتایج آنها نشان داد که پلی مورفیسم های ذکر شده ریسک ابتلا به سرطان گردن رحم را کاهش می دهد[11].  لذا در این پژوهش بر آنیم تا برای اولین بار ارتباط بین پلی مورفیسم های rs4848320 و rs1110839 و rs6726151 ژن PAX8-AS1 وریسک ابتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حادکودکان  را بررسی نماییم.

فراوانی پلی‌مورفیسم   , rs4848320 C>T ژن    PAX8-AS1در کودکان مبتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حاد با کودکان سالم متفاوت است.

      -  فراوانی پلی‌مورفیسم   rs1110839 G>T، ژن    PAX8-AS1در کودکان مبتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حاد با کودکان سالم متفاوت است.

       -  فراوانی پلی‌مورفیسم   , rs6726151 A>C ژن    PAX8-AS1در کودکان مبتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حاد با کودکان سالم متفاوت است

تعیین و مقایسه ارتباط پلی مورفیسمهای   rs1110839 G>T, rs4848320 C>T و rs6726151 A>C  ژن  PAX8-AS1  در کودکان مبتلا به لوسمی  لنفوبلاستیک حاد و مقایسه با  کودکان سالم

  تعیین فراوانی پلی‌مورفیسم   , rs4848320 C>T ژن    PAX8-AS1در کودکان مبتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حاد و مقایسه‌ی آن با کودکان سالم

  تعیین فراوانی پلی‌مورفیسم   ,  rs1110839 G>T ژن   PAX8-AS1در کودکان مبتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حاد و مقایسه‌ی آن با کودکان سالم

تعیین فراوانی پلی‌مورفیسم  rs6726151 A>C ژن  PAX8-AS1در کودکان مبتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حاد و مقایسه‌ی آن با کودکان سالم

دانشگاه های علوم پزشکی و مراکز تحقیقاتی وابسته

مورد-شاهدی

این مطالعه برروی کودکان مبتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حاد کمتر از 18 سال مراجعه کننده به درمانگاه اطفال بیمارستان علی ابن ابیطالب(ع) شهر زاهدان انجام می گیرد

 برای بررسی پلی مورفیسم ژنی٬ ازکودکان مبتلا به ALLدر زاهدان به تعداد حداقل 100  نفر  مورد مطالعه قرار خواهند گرفت. گروه شاهد از نمونه های خون کودکان سالم که قبلاً در طرح بررسی شیوع سندروم نفروتیک وارد مطالعه شده اند انتخاب شده است (حداقل 100نمونه).

روش نمونه گیری آسان در دسترس میباشد.

مشاهده و بررسی های آزمایشگاهی

پس از تصویب پروپوزال از بیمارانی که براساس معیارهای تشخیصی  ابتلا آنان به   ALL توسط فوق تخصص هماتولوژی و انکولوژی کودکان   قطعی گردید ونیز افراد سالم خونگیری می‌شود. نمونه خون در 20- درجه سانتیگراد نگهداری خواهد شد. DNA نمونه خون این افراد به روش Salting  out تخلیص می‌شود، ، پرایمرهای اختصاصی RFLP طراحی شده وپس از بهینه سازی شرایط PCR ژنوتیپ گروه شاهد ومورد بااین روش موردارزیابی قرارمی گیرد. محصول  PCR روی ژل آگارز 2% برده با اتیدیوم بروماید رنگ آمیزی گردیده و محصولات PCR  مورد ارزیابی قرارگرفته وژنوتیپ افراد تعیین می گردد.

     پس از گردآوری اطلاعات لازم، یافته‌ها در نرم‌افزار آماری SPSS وارد گشته و با استفاده از آزمون آماری t-test مستقل برای متغیرهای کمی و آزمون X2برای مقایسه فراوانی پلی مورفیسمها در دو گروه مورد استفاده قرار میگیرد

کدهای 1، 2، 3، 8، 10، 11، 13، 15، 18، 25، 28، مصوب کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی که در دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های دارای آزمودنی انسانی در جمهوری اسلامی ایران، دربردارنده‌ی اصول و مقررات اخلاقی‎ مطرح  و در سال 1392 در 31 بند تصویب شده است و همچنین کدهای 1، 2، 3، 4، 7 مربوط به دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران از قسمت راهنمای عمومی در این طرح رعایت می شود. تمامی بیماران تحت مطالعه آگاهانه و برای مقاصد علمی  اقدام به دادن نمونه خواهند کرد. شرکت در این طرح هیچ گونه هزینه ای برای بیماران ندارد و نام و مشخصات بیماران گزارش نخواهد شد.

محدودیت طرح شامل عدم همکاری بیماران می‌باشد

پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی- لوسمی لنفوبلاستیک حاد -PAX8-AS1

1.       Kamel, A.M., et al., Synergistic effect of methyltetrahydrofolate reductase (MTHFR) C677T and A1298C polymorphism as risk modifiers of pediatric acute lymphoblastic leukemia. J Egypt Natl Canc Inst, 2007. 19(2): p. 96-105.

2.       Inaba, H., M. Greaves, and C.G. Mullighan, Acute lymphoblastic leukaemia. Lancet, 2013. 381(9881): p. 1943-55.

3.       Robison, L.L., Late effects of acute lymphoblastic leukemia therapy in patients diagnosed at 0-20 years of age. Hematology Am Soc Hematol Educ Program, 2011. 2011: p. 238-42.

4.       Poleev, A., et al., PAX8, a human paired box gene: isolation and expression in developing thyroid, kidney and Wilms' tumors. Development, 1992. 116(3): p. 611-23.

5.       Ordonez, N.G., Value of PAX 8 immunostaining in tumor diagnosis: a review and update. Advances in anatomic pathology, 2012. 19(3): p. 140-151.

6.       Tacha, D., D. Zhou, and L. Cheng, Expression of PAX8 in normal and neoplastic tissues: a comprehensive immunohistochemical study. Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2011. 19(4): p. 293-9.

7.       Waters, L., et al., PAX2 and PAX8: useful markers for metastatic effusions. Acta Cytol, 2014. 58(1): p. 60-6.

8.       Lang, D., et al., PAX genes: roles in development, pathophysiology, and cancer. Biochemical pharmacology, 2007. 73(1): p. 1-14.

9.       Angrand, P.O., et al., The role of long non-coding RNAs in genome formatting and expression. Front Genet, 2015. 6: p. 165.

10.     Veyrieras, J.B., et al., High-resolution mapping of expression-QTLs yields insight into human gene regulation. PLoS Genet, 2008. 4(10): p. e1000214.

11.     Han, J., et al., Expression quantitative trait loci in long non-coding RNA PAX8-AS1 are associated with decreased risk of cervical cancer. Molecular Genetics and Genomics, 2016. 291(4): p. 1743-1748.

12.     Ponting CP, Oliver PL, Reik W . Evolution and functions of  long noncoding RNAs. Cell. 2009 :136(4): 629-41.   

لوسمی لنفو بلاستی حاد: شایعترین سرطان خون در کودکان است که شامل تکثیر بدخیم سلولهای لنفوبلاست است . این تکثیر بدخیم بیشتر در مغز استخوان اتفاق می افتد. لوسمی لنفو بلاستی حاد  بیماری ای است که در آن تعداد بسیار زیادی از گویچه های  سفید خون که مسئول دفاع بدن در مقابل عوامل خارجی هستند و  لنفوسیت نامیده می شوند و هنوز  به طور کامل تکامل نیافته اند دچار اختلال شده و بطور فزاینده ای در خون محیطی و مغز استخوان یافت می شوند. علاوه بر این، تجمع این یاخته ها در بافتهای لنفاوی باعث بزرگ شدن این اندامها می شود.در این پژوهش بر آنیم تا برای اولین بار ارتباط بین پلی مورفیسم های rs4848320 و rs1110839 و rs6726151 ژن PAX8-AS1 وریسک ابتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حادکودکان  را بررسی نماییم.

در این طرح گرفتن 2 سی سی خون از فرد  بیمار و سالم جهت انجام آزمایش ضروری است

نتایج این پژوهش کمک بزرگی در شناسایی ژنوتیپ های  پلی مورفیسمهای ژن مورد مطالعه  و ریسک ابتلا به ALL خواهد نمود

ندارد

ندارد

هزینه به عهده مجری طرح خواهد بود و بیمار هیچ هزینه ای را پرداخت نخواهد کرد

ندارد

نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت فردی وی در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند.

آدرس مجری طرح 'غلامرضا بهاری' : زاهدان،  پردیس علوم پزشکی ، دانشکده پزشکی، گروه بیوشیمی بالینی

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان  که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.