هپاتیت به دسته گسترده ای از اختلالات بالینی- پاتولوژیکی و اختلالات بیوشیمیایی اطلاق می شود که از تخریب کبد به علت عوامل ویروسی، سمی، دارویی، بیماریها و یا تهاجم سیستم ایمنی به کبد بوجود می آیند(1).  بر اساس برآورد سازمان بهداشت جهانی  WHO حدود 2 میلیارد نفر از جمعیت جهان شواهد سرولوژیکی ابتلا به عفونت با ویروس هپاتیت  B [Hepatitis B Virus (HBV)] را دارند که حدود 400-360 میلیون نفر آنان به عفونت مزمن HBV مبتلا می باشند] ناقل مزمن: (Chronic Hepatitis B Virus Carrier)[. 15 تا 40 درصد ناقلین مزمن در معرض عوارض درازمدت بیماری شامل سیروز یا نارسایی کبدی، کارسینوم هپاتوسلولار (HCC) و مرگ قرار دارند. سالیانه حدود 500000-700000 مورد مرگ ناشی از HBV گزارش می شود (2). ایران جزو کشورهای با آلودگی خفیف تا متوسط ( International Endemicity) است که شیوع سرمی عفونت HBV 35 درصد و نسبت جمعیت ناقل مزمن 5-7/1 درصد است (3) و حدود 56-51 درصد بیماران سیروتیک ایرانی شواهد عفونت مزمن HBV را دارند (4).

امکان پیشرفت عفونت مزمن HBV به سیروز و نارسایی کبدی و یا کارسینوم هپاتوسلولارطی چند دهه وجود دارد بطوریکه حدود نیمی از موارد سیروز و بیش از نیمی از موارد هپاتوسلولار کارسینوم در سطح جهان ناشی از عارضه طولانی مدت عفونت مزمن HBV می باشد (5). هپاتوسلولار کارسینوم یا HCC پنجمین گونه شایع از تومورهای بدخیم و سومین علت عمده مرگ و میر مرتبط با سرطان است (6). بنابراین، تشخیص زود هنگام برای بهبود میزان بقای بیماران بسیار مهم است. نسبت ابتلا به هپاتوسل کارسینوما در بیماران مزمن عفونت HBV ، 25 تا 35 برابر افراد غیر آلوده به HBV است و در کسانی که آلوده به هر دو ویروس HBV و HCV می باشند احتمال سرطان کبد 130 برابر بیشتر از افراد غیر آلوده است. میزان مرگ و میر سالانه از بیماری های حاصله از HBV در دنیا 2/1 میلیون نفر می باشد (7).

دوره پیشرفت هپاتوسلولار کارسینوم (HCC) به لحاظ کلینیکی بسیار سریع است، میزان پاسخ به درمان های دارویی ضعیف بوده و پیش آگهی ضعیفی دارد. سیروز ناشی از هپاتیت B و C  عمده ترین عامل خطر بروز HCC در نظر گرفته شده زیرا بسیاری از بیماران مبتلا به عفونت مزمن هپاتیت برای یک دوره زمانی طولانی بدون علامت باقی می مانند و ناگهان با عارضه پیشرفته سیروز کبدی مواجه می شوند (8).  عدم وجود نشانگرهای پیش بینی کننده مناسب،  منجر به بروز غیر قابل پیش بینی و تهاجمی سیروز کبدی در بیماران مبتلا به عفونت مزمن هپاتیت B شده و این مسئله زمینه تشخیص دیر هنگام HCC، پیشرفت بیماری و همچنین پیش آگهی ضعیف را فراهم کرده است. در حال حاضر، به لحاظ بالینی آلفا فتوپروتئین (AFP)  شایع ترین نشانگر بدخیمی های اولیه کبد است که عمدتا در ترکیب با اکوگرافی کبدی برای تشخیص HCC  در بیماران مبتلا به سیروز به کار می رود. با این وجود در برخی حالات بالا رفتن میزان AFP موقتی است و در مواردی هم در صورت بروز نکروز بدون تبدیل به HCC  مقدار AFP افزایش میابد (9).

پروتئین مهار کننده پروتئاز سرین پستانی یا Maspin (Serpin B) برای اولین بار در سلو ل های اپیتلیال نرمال پستان  و به عنوان یک پروتئین مهار کننده تومور شناسایی شد. ژن کد کننده این پروتئین در انسان بر روی کروموزوم 18q21.3-q23 قرار دارد و CDNA حاصل از آن متشکل از 2584 نوکلئوتید می باشد که پپتیدی به اندازه 42 کیلو دالتون تولید می کند (10). پروتئین Maspin عضو خانواده پروتئین های مهار کننده سرین Serpin است و هومولوگ های بسیار مشابهی در این خانواده دارد از قبیل : مهار کننده های فعال سازی پلاسمینوژن (PAI1,2) و آلفا یک آنتی تریپسین که نقش به سزایی در تخریب ماتریکس خارج سلولی ایفا می کنند (11). مطالعات in vitro نشان داده است که پرتئین Maspin قابلیت مهار کردن جابه جایی و تهاجم سلول های تومور را در گونه های سلول های سرطانی پستان و پروستات دارا است و میزان تومورزایی و بروز متاستاز را در سلول های سرطانی مدل های حیوانی کاهش می دهد (12). در برخی مطالعات نشان داده شده است که پروتئین Maspin می تواند فرآیند آنژیوژنز را مهار کند، آپوپتوز سلولی را القا کند و اتصالات سلولی را با غشا پایه و ماتریکس خارج سلولی بهبود بخشد (13-16).به عبارتی Maspin موجب افزایش اتصال سلول به فیبرونکتین و افزایش بیان اینتگرین ها شده که در نهایت منجر به کاهش حرکت سلول ها می شود (17).

 با وجود اینکه پروتئین Maspin به عنوان یک سرکوبگر تومور شناخته شده است و عدم بیان این پروتئین منجر به افزایش تهاجم سلول های سرطانی در موارد پیشرفته سرطان سینه و پروستات به سایر بافت ها می شود (18, 19)، ولی برخی مطالعات in vivo پروتئین Maspin را یک انکوژن معرفی کرده اند زیرا افزایش بیان آن در موارد سرطان های پانکراس، تخمدان، تیروئید، ریه و مثانه دیده شده است و نیز در مواقعی که سرطان دستگاه گوارش به غدد لنفاوی متاستاز می دهد و همچنین در برخی موارد مشکوک به سرطان ریه سطح بیان پروتئین Maspin  افزایش می یابد (20-25).در این میان الگوی بیان هسته ای و سیتوپلاسمی این پروتئین به شکل معناداری با یکدیگر متفاوت است که می تواند نشان دهنده عملکرد های زیستی متفاوت پروتئین Maspin باشد (26, 27).

مطالعه Zheng و همکاران نشان داد که افزایش بیان پروتئین Maspin منجر به پیشرفت کولورکتال آدنوما به آدنوما کارسینوم می شود. از طرفی کاهش بیان Maspin رابطه مستقیمی با متاستاز کولورکتال آدنوکارسینوما به به کبد دارد. این پدیده احتمالا از طریق تخریب پایداری و ثبات ماتریکس خارج سلولی رخ می دهد که منجر به افزایش حرکت سلول های سرطانی می شود  (28)

در مطالعه دیگری که توسط Romani و همکاران به منظور بررسی ارتباط میان بیان پروتئین های Maspin و Bcl-2 به عنوان فاکتورهای تشخیصی قدرتمند برای کلانژیوکارسینوما انجام شد، نتایج نشان دادند که بیان همزمان این دو پروتئین منجر به تاخیر در پیشرفت تومور می شود. از لحاظ مکانیسم، پروتئین Maspin با افزایش آپوپتوز مانع پیشرفت تومور و نیز موجب کوچک شدن حجم تومور و قابلیت تهاجم آن می شود. بیان همزمان Bcl-2 نیز این پروسه را تسریع می کند (29)همچنین افزایش بیان Maspin موجب افزایش سطح بیان Bcl-2 و در نتیجه افزایش ترشح سیتوکروم C از میتوکندری و افزایش آپوپتوز در سلول های بیان کننده Maspin  شده که نهایتا منجر به کنترل و تنظیم آپوپتوز در سلول های سرطانی می شود (13،30،31)

در مطالعه in vitro ،  Jiang و همکاران نشان دادند که افزایش بیان Maspin ضمن کاهش فعالیت مسیر های پیام رسانی IKK-alpha و IKK-beta در افراد مبتلا به هپاتوسل کارسینوم با متاستاز هپاتوسل کارسینوم در ارتباط است (32).

Fujisawa و همکاران نشان دادند که بیان نابه جای پروتئین Maspin در کارسینومای مجاری صفراوی ارتباط نزدیکی با دمتیلاسیون ناحیه پروموتر این ژن دارد (33).

Wei و همکاران نشان دادند که افزایش بیان پروتئین (CLIC1) Chloride intracellular channel 1 منجر به کاهش بیان Maspin و در نتیجه افزایش میزان متاستاز HCC می شود (34). Bagheri و همکاران نشان دادند که میان بروز کارسینوم سلول های بازال اطراف چشم و سطح بیان Maspin  ارتباط معناداری وجود ندارد(35). Chen وهمکاران بیان کردند که افزایش بیان miRNA-7/21/107 منجر به مهار بیان Maspin شده که نتیجه آن پیشرفت HCC می باشد(36). Snoeren و همکاران توانستند ارتباط مستقیمی میان سرطان کولون و بیان افزایش یافته Maspin پیدا کنند (37). Strien و همکاران نشان دادند که میان بروز Luminal Breast Cancer و سطح بیان Maspin  ارتباط معناداری وجود ندارد(38).

با این وجود مشخص نیست که چگونه عفونت هپاتیت B و یا C از طریق کنترل بیان پروتئین Maspin می تواند باعث ایجاد هپاتوسل کارسینوما شود. مطالعات اپیدمیولوژی نشان می دهد که عفونت مزمن HBV از عوامل عمده بروز HCC می باشد. شیوع واقعی ابتلا به سرطان کبد در ایران هنوز ناشناخته است اما 80 درصد از موارد مبتلا به این سرطان دارای هپاتیت B می باشند (34). نظر به اهمیت این سرطان کشنده در دنیا و با در نظر گرفتن میزان مرگ و میر این سرطان و با توجه به عدم وجود برنامه های غربالگری، تشخیص زودهنگام بیماری، افزایش بروز این سرطان و پایین بودن بقای بیماران مبتلا به دلیل تشخیص بیماری در سطوح پیشرفته این سرطان، قصد داریم در این تحقیق  با کمک تکنیک های ایمونوهیستوشیمی و  PCR میزان مشارکت پروتئین Maspin را در تشخیص و پیش آگهی بیماران HBV مستعد ابتلا به HCC بررسی کنیم.

• تعیین میزان بیان ژن بیومارکر Maspin  در سطح mRNA در بافت کبد مبتلایان به عفونت مزمن HBV، HCC، HBV+HCC و سالم متفاوت است.
•  تعیین میزان بیان بیومارکر Maspin در سطح ایمونوهیستوشیمیایی  در بافت کبد مبتلایان به عفونت مزمن HBV، HCC، HBV+HCC و سالم متفاوت است.

• تعیین میزان بیان در سطح mRNA و ایمونوهیستوشیمی Menin  در کبد بیماران مبتلا به سرطان هپاتوسلولار ناشی از HBV  و مقایسه با کنترل سالم

• تعیین میزان بیان در سطح ژن بیومارکر Maspin در بافت کبد مبتلایان به عفونت مزمن HBV، HCC، HBV+HCC و مقایسه با کنترل سالم.
• تعیین میزان بیان در سطح ایمونوهیستوشیمیایی بیومارکر Maspin در بافت کبد مبتلایان به عفونت مزمن HBV، HCC، HBV+HCC و مقایسه سالم.

• نظام سلامت و دانشگاه علوم پزشکی زاهدان

•  ویروس هپاتیت  B: Hepatitis B Virus (HBV )
• سرطان اولیه سلول های کبدی (HCC)، Hepatocellular carcinoma
• واکنش زنجیره ای پلیمراز ترانس کریپتاز معکوس کمی (QRT-PCR)،(RT-PCR)quantification reverse transcription polymerase chain reaction :یکی از انواع روش های واکنش زنجیره ای پلیمراز است که برای شناسایی میزان بیان RNA استفاده می شود.
• ایمونوهیستوشیمی (IHC : immunohistochemistry) روند تشخیص آنتی ژن (برای مثال پروتئینها) در سلول های یک مقطع بافتی توسط اصل اتصال آنتی بادی خاص به آنتی ژن در بافت های بیولوژیکی است.

موردی- شاهدی

چهار گروه وارد مطالعه می شوند:

گروه مورد:  بیماران مبتلا به هپاتیت مزمن B (HBV) و هپاتوسل کارسینوم (HCC)، بیماران مبتلا به هپاتیت مزمن B و هپاتوسل کارسینوم (HBV+HCC)

معیارهای ورود: ابتلا به هپاتیت B، ابتلا به هپاتوسل کارسینوم، ابتلا به HBV + HCC

معیارهای خروج: افراد سیگاری، زنان باردار، بیماران دیابت نوع یک و دو، بیماران قلبی عروقی و کلیوی، HIV ، HCV ، افراد واجد ضایعات سرطانی خوش خیم و یا بدخیم در سایر ارگان ها.

نمونه هایی که سلامت آنها به لحاظ ابتلا به  HBV و HCC توسط پزشکان متخصص تائید گردیده و معیارهای خروج را نیز نداشتند در گروه کنترل قرار گرفتند. این افراد به منظور نمونه برداری کبد جهت اهدا بافت مراجعه می کنند و سلامت آنها از هر لحاظ مورد تائید می باشد.

با توجه به شیوع متوسط هپاتوسلولار کارسینوما در ایران و با استفاده از فرمول تعیین حجم نمونه برای داده های زوجی اسمی و همچنین با توجه به حجم نمونه سایر مقالات، حجم نمونه برای افراد مبتلا به HBV برابر 30 و گروه کنترل نیز به تعداد 30 در نظر گرفته شده است.

نمونه های مورد نظر  مربوط به طرح شماره 7262 و از بین نمونه های مبتلا به HBV و HCC که شاخص های ورود به مطالعه را داشته باشند و نیز افراد کنترل که در آرشیو بخش بافت شناسی موجود است انتخاب می شوند. تهیه مقاطع بافتی، مطالعات ایمونوهیستوشیمی و عکس برداری در بخش بافت شناسی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان و تست های مولکولی در آزمایشگاه مرکز تحقیقات بیماری های عفونی و گرمسیری زاهدان انجام خواهد شد.

فرم اطلاعاتی ضمیمه 1

پس از انجام آزمایش های مولکولی بر روی نمونه RNA استخراج شده از بافت، با روش RT-PCR میزان بیان بیومارکر Maspin  تعیین می گردد.

برای بررسی تغییرات بافت شناسی و میزان بیان بیومارکر در این بافت از تکنیک ایمونوهیستوشیمی استفاده خواهد شد.

استخراج RNA تام  ژنومی با استفاده از کیت استخراج RNA  بر روی نمونه های فریز شده در محیط نیتروژن مایع انجام می شود. با استفاده ازدستگاه اسپکتروفوتومتر نسبت جذب نوری 280/260  اندازه گرفته و نمونه هایی که بهترین خلوص را دارند(2>280/260 OD >1.8 )در 80- درجه سانتیگراد جهت استفاده در فرایند  QRT-PCR فریز می شوند. برای تعیین میزان بیان  RNA بیومارکر  از روش QRT-PCR (Quantification Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) یا واکنش زنجیره ای پلیمراز ترانس کریپتاز معکوس کمی استفاده خواهد شد. در این روش پس از طراحی و تهیه  پرایمرها و پروب های مناسب جهت تکثیر RNA و تولید CDNA مناسب و تکثیر آن برای بیومارکر، واکنش پلیمریزاسیون با استفاده از مواد اولیه خریداری شده از شرکت های معتبر و با استفاده از دستگاه Real Time انجام خواهد شد. پس از تصویب طرح، پرایمرها و پروب های مناسب جهت تکثیر RNA و تولید CDNA با استفاده از دیتا بانک NCBI به آدرس http:www.ncbi.nlm.nih.gov طراحی شده و جهت تولید به شرکت های معتبر سفارش داده خواهد شد. ژن مرجع متناسب با توالی پرایمر و پروب مورد نظر GAPDH می باشد. سپس کیت های حاوی مواد اولیه لازم جهت تولید  CDNA و تکثیر آن برای بیومارکر Maspin به صورت آماده از شرکت سیناکلون خریداری خواهد شد و مطابق دستور العمل کیت ارزیابی های ژنتیکی انجام خواهد گرفت.جهت بررسی ایمونوهیستوشیمیایی بیوپسی کبد اقدامات ذیل بر روی نمونه ها انجام خواهد شد: آماده سازی نمونه های بافتی،  قالب گیری نمونه ها، برش گیری، رنگ آمیزی تری کروم ماسون، رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین و بررسی میزان بیان بیومارکر Maspin  در بافت با استفاده از تکنیک ایمونوهیستوشیمی بر اساس دستورالعمل کیت های مربوطه.

ایمونوهیستوشیمی فرآیندی برای مکان‌یابی پروتئین‌ها در سلول های  یک بافت است. در این روش با استفاده ازآنتی‌بادی‌ها ، آنتی ژن های سلولی شناسایی می‌شود. اساس این روش، قرار دادن برش‎های بافتی تحت تأثیر آنتی بادی‎های خاص برای تشخیص یک سری پروتئین خاص می‎باشد. پروتئین‎های مورد نظر از طریق اتصال آنتی بادی‎ها به یک سوبسترای رنگی شناسایی و حتی تعیین مقدار می‎شوند. به این صورت که محل قرار گیری این مواد ایمونولوژیک دقیقا شناسایی شده و با استفاده از آنتی بادی مناسب به همراه عمل کنژوگاسیون توسط مارکر اختصاصی در کنار محلول های رنگ آمیزی بر روی نمونه های مقاطع تهیه شده انجام می گردد. پس از انجام رنگ آمیزی کانون های کمپلکس  (Ag-Ab) به صورت رنگی مشخص می گردد. این کانون های رنگی دلیل بر وجود پروتئین های مورد نظر بوده و ارزش تشخیصی بسیار بالایی دارد.

برای تعیین وجود یا عدم وجود تفاوت معنی دار در میانگین دو گروه مستقل از آزمون t مستقل استفاده خواهیم کرد(Independent student t test). یکی از نکات مهم در انجام این آزمون پیروی داده ها از توزیع نرمال می باشد و به همین منظور و برای اثبات تبعیت داده ها از توزیع نرمال ابتدا آزمون کولموگروف-اسمیرونوف (one sample Kolmogorov–Smirnov test) انجام خواهد پذیرفت.همچنین هنگام مقایسه دو گروه ممکن است واریانس دو جامعه ای که نمونه ها از آن انتخاب شده اند با یکدیگر برابر باشند و یا برابر نباشند. در هر یک از این دو حالت روش محاسبه t و درجه آزادی F اندکی با یکدیگر متفاوتند. برای تشخیص هریک از این دو حالت از یکدیگر آزمون Levene test به منظور بررسی همسانی واریانس ها مورد استفاده قرار خواهد گرفت. آنالیز واریانس یک طرفه ANOVA و تست Tokeys posthoc برای مقایسه میانگین ها و تفاوت گروه های آزمایشی مورد استفاده قرار می گیرد. جهت مقایسه متغیرهای کیفی از تست کای اسکوئر و متغیرهای کمی از آزمون ANOVA و تست های نان پارامتریک استفاده خواهد شد. به منظور مقایسه و آنالیز متغیرهای وابسته ای که بیش از دو حالت دارند نیز از مدل رگرسیون لجستیک Multinomial Logistic Regression استفاده خواهد شد. در نهایت نتایج به صورت     گزارش می شود. برای آنالیز تمام داده ها و انجام تست های آماری از نرم افزار SPSS ویرایش 20 بهره خواهیم برد. هنگامیکه 05/0P≤ شود تفاوت ها معنی دار فرض خواهند شد.  

در این مطالعه از نمونه های مربوط به طرح پایان نامه شماره 7262 استفاده خواهد شد که در آرشیو بخش بافت شناسی نگهداری می شوند. کدهای 1،2،3،4،5،10،11،25،28،29،30،31 از دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های دارای آزمودنی انسانی و همچنین کدهای 1،2،3،6،7،8،9دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی مربوط به بخش عمومی در این طرح رعایت شده است.

مشکلات مربوط به تهیه مواد اولیه و تجهیزات آزمایشگاهی مورد نیاز عمده ترین محدودیت های اجرای طرح به نظر می رسد زیرا برخی از مواد مورد نیاز باید از منابع خارج از کشور تهیه شوند و در این ارتباط بحث تحریم های اقتصادی خودنمایی می کند. برای مدیریت این محدودیت و همچنین منابع مالی، برخی از محلول ها بصورت دستی تهیه خواهد شد.

هپاتیت مزمن B (HBV)، هپاتوسلولار کارسینوما (HCC)، ایمونوهیستوشیمی، Maspin

Chronic Hepatitis B, Hepatocellular carcinoma, Immunohistochemistry, Maspin

1.         Lin CL, Kao JH. Hepatitis B viral factors and clinical outcomes of chronic hepatitis B. J Biomed Sci 2008;15(137-145).

2.         Shepard CW, Simard EP, Finelli L, Fiore AE, Bell BP. Hepatitis B virus infection: epidemiology and vaccination. Epidemiol Rev. 2006;28:112-25.

3.         Alavian SM, Fallahian F, Lankarani KB. The changing epidemiology of viral hepatitis B in Iran. J Gastrointestin Liver Dis. 2007;16(4):403-6.

4.         Shamszad M, Farzadegan H. Hepatitis B related cirrhosis and hepatocellular carcinoma in Iran. J Iran Med Council. 1982;8:228-33.

5.         World Health Organization. Hepatitis B vaccines. WKLY Epidemiol Rec. 2004;79:253-64.

6.         Ferlay J, Bray F, Pisani DM. Cancer Incidence Mortality and Prevalence Worldwide Globocon. 2001;1(5).

7.         Liaw YF, Joseph JYS, Wan CC. Lamivudine for Patients with Chronic Hepatitis B, and Advanced Liver Dis. NEJM. 2004;351(15):1521-31.

8.         Chuang SC, La Vecchia C, Boffetta P. Liver cancer: descriptive epidemiology and risk factors other than HBV and HCV infection. Cancer Lett. 2009;286(1):9-14.

9.         Liaw YF, Tai DI, Chen TJ, Chu CM, Huang MJ. Alpha-fetoprotein changes in the course of chronic hepatitis: relation to bridging hepatic necrosis and hepatocellular carcinoma. Liver. 1986;6(3):133-7.

10.       Wang MC, Yang YM, Li XH, Dong F, Li Y. Maspin expression and its clinicopathological significance in tumorigenesis and progression of gastric cancer. World J Gastroenterol. 2004;10(5):634-7.

11.       Yatabe Y, Mitsudomi T, Takahashi T. Maspin expression in normal lung and non-small-cell lung cancers: cellular property-associated expression under the control of promoter DNA methylation. Oncogene. 2004;23(23):4041-9.

12.       Maass N, Hojo T, Zhang M, Sager R, Jonat W, Nagasaki K. Maspin--a novel protease inhibitor with tumor-suppressing activity in breast cancer. Acta oncologica (Stockholm, Sweden). 2000;39(8):931-4.

13.       Zhang W, Shi HY, Zhang M. Maspin overexpression modulates tumor cell apoptosis through the regulation of Bcl-2 family proteins. BMC cancer. 2005;5:50.

14.       Liu J, Yin S, Reddy N, Spencer C, Sheng S. Bax mediates the apoptosis-sensitizing effect of maspin. Cancer research. 2004;64(5):1703-11.

15.       Odero-Marah VA, Khalkhali-Ellis Z, Chunthapong J, Amir S, Seftor RE, Seftor EA, et al. Maspin regulates different signaling pathways for motility and adhesion in aggressive breast cancer cells. Cancer Biol Ther. 2003;2(4):398-403.

16.       Ngamkitidechakul C, Warejcka DJ, Burke JM, O'Brien WJ, Twining SS. Sufficiency of the reactive site loop of maspin for induction of cell-matrix adhesion and inhibition of cell invasion. Conversion of ovalbumin to a maspin-like molecule. J Biol Chem. 2003;278(34):31796-806.

17.       Seftor RE, Seftor EA, Sheng S, Pemberton PA, Sager R, Hendrix MJ. maspin suppresses the invasive phenotype of human breast carcinoma. Cancer research. 1998;58(24):5681-5.

18.       Maass N, Hojo T, Rosel F, Ikeda T, Jonat W, Nagasaki K. Down regulation of the tumor suppressor gene maspin in breast carcinoma is associated with a higher risk of distant metastasis. Clin Biochem. 2001;34(4):303-7.

19.       Machtens S, Serth J, Bokemeyer C, Bathke W, Minssen A, Kollmannsberger C, et al. Expression of the p53 and Maspin protein in primary prostate cancer: correlation with clinical features. Int J Cancer. 2001;95(5):337-42.

20.       Maass N, Hojo T, Ueding M, Luttges J, Kloppel G, Jonat W, et al. Expression of the tumor suppressor gene Maspin in human pancreatic cancers. Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 2001;7(4):812-7.

21.       Sood AK, Fletcher MS, Gruman LM, Coffin JE, Jabbari S, Khalkhali-Ellis Z, et al. The paradoxical expression of maspin in ovarian carcinoma. Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 2002;8(9):2924-32.

22.       Hirai K, Koizumi K, Haraguchi S, Hirata T, Mikami I, Fukushima M, et al. Prognostic significance of the tumor suppressor gene maspin in non-small cell lung cancer. The Annals of thoracic surgery. 2005;79(1):248-53.

23.       Ito Y, Yoshida H, Tomoda C, Uruno T, Takamura Y, Miya A, et al. Maspin expression is directly associated with biological aggressiveness of thyroid carcinoma. Thyroid : official journal of the American Thyroid Association. 2004;14(1):13-8.

24.       Sugimoto S, Maass N, Takimoto Y, Sato K, Minei S, Zhang M, et al. Expression and regulation of tumor suppressor gene maspin in human bladder cancer. Cancer Lett. 2004;203(2):209-15.

25.       Terashima M, Maesawa C, Oyama K, Ohtani S, Akiyama Y, Ogasawara S, et al. Gene expression profiles in human gastric cancer: expression of maspin correlates with lymph node metastasis. British journal of cancer. 2005;92(6):1130-6.

26.       Marioni G, Blandamura S, Giacomelli L, Calgaro N, Segato P, Leo G, et al. Nuclear expression of maspin is associated with a lower recurrence rate and a longer disease-free interval after surgery for squamous cell carcinoma of the larynx. Histopathology. 2005;46(5):576-82.

27.       Mohsin SK, Zhang M, Clark GM, Craig Allred D. Maspin expression in invasive breast cancer: association with other prognostic factors. The Journal of pathology. 2003;199(4):432-5.

28.       Zheng H, Tsuneyama K, Cheng C, Takahashi H, Cui Z, Murai Y, et al. Maspin expression was involved in colorectal adenoma-adenocarcinoma sequence and liver metastasis of tumors. Anticancer Res. 2007;27(1a):259-65.

29.       Romani AA, Soliani P, Desenzani S, Borghetti AF, Crafa P. The associated expression of Maspin and Bax proteins as a potential prognostic factor in intrahepatic cholangiocarcinoma. BMC cancer. 2006;6:255.

30.       Latha K, Zhang W, Cella N, Shi HY, Zhang M. Maspin mediates increased tumor cell apoptosis upon induction of the mitochondrial permeability transition. Molecular and cellular biology. 2005;25(5):1737-48.

31.       Jiang N, Meng Y, Zhang S, Mensah-Osman E, Sheng S. Maspin sensitizes breast carcinoma cells to induced apoptosis. Oncogene. 2002;21(26):4089-98.

32.       Jiang R, Xia Y, Li J, Deng L, Zhao L, Shi J, et al. High expression levels of IKKalpha and IKKbeta are necessary for the malignant properties of liver cancer. Int J Cancer. 2010;126(5):1263-74.

33.       Fujisawa K, Maesawa C, Sato R, Wada K, Ogasawara S, Akiyama Y, et al. Epigenetic status and aberrant expression of the maspin gene in human hepato-biliary tract carcinomas. Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. 2005;85(2):214-24.

34.       Wei X, Li J, Xie H, Wang H, Wang J, Zhang X, et al. Chloride intracellular channel 1 participates in migration and invasion of hepatocellular carcinoma by targeting maspin. J Gastroenterol Hepatol. 2015;30(1):208-16.

35.       Bagheri M, Eghtedari M, Bagheri M, Geramizadeh B, Talebnejad M. Expression of maspin and ezrin proteins in periocular Basal cell carcinoma. Dermatology research and practice. 2014;2014:596564.

36.       Chen WS, Yen CJ, Chen YJ, Chen JY, Wang LY, Chiu SJ, et al. miRNA-7/21/107 contribute to HBx-induced hepatocellular carcinoma progression through suppression of maspin. Oncotarget. 2015;6(28):25962-74.

37.       Snoeren N, Emmink BL, Koerkamp MJ, van Hooff SR, Goos JA, van Houdt WJ, et al. Maspin is a marker for early recurrence in primary stage III and IV colorectal cancer. British journal of cancer. 2013;109(6):1636-47.

38.       Strien L, Joensuu K, Heikkila P, Leidenius MH. Different Expression Patterns of CXCR4, CCR7, Maspin and FOXP3 in Luminal Breast Cancers and Their Sentinel Node Metastases. Anticancer Res. 2017;37(1):175-82.

39.       Merat S, Malekzadeh R, Rezvan H, Khalilian M. Hepatitis B in Iran. Arch Iranian Med. 2000;3:192-201.

ویروس هپاتیت B طیف وسیعی از بیماری های حاد و مزمن را ایجاد می کند. مطالعات اپیدمیولوژی نشان می دهد که عفونت مزمن HBV از عوامل عمده بروز HCC می باشد.. نتایج تحقیقات نشان می دهد که میزان مرگ و میر حاصل از سرطان کبد در ایران در طول سالیان اخیر افزایش داشته است. همچنین برآورد می شود که در ایران حدود 1.5 میلیون نفر به هپاتیت B مبتلا هستند که از این تعداد بیش از 15 تا 40 درصد در معرض ابتلا به سیروز کبدی یا سرطان کبد می باشند. نظر به اهمیت این سرطان کشنده در دنیا و با در نظر گرفتن میزان مرگ و میر این سرطان و با توجه به عدم وجود برنامه های غربالگری، تشخیص زودهنگام بیماری، افزایش بروز این سرطان و پایین بودن بقای بیماران مبتلا به دلیل تشخیص بیماری در سطوح پیشرفته این سرطان، دیدگاه ما در این پژوهش این است که با کمک تکنیک ایمونوهیستوشیمی و PCR بیومارکر جدیدی در تشخیص و پیش آگهی بیماران HBV مستعد ابتلا به HCC ارائه دهیم. در مورد این موضوع Maspin  به عنوان یک عامل مستقل در شناسایی بیمار و عامل پیش آگهی بیماری و توصیف کننده میزان بقا، انتخاب شده و می تواند گامی موثر در شناسایی زودهنگام بیماران HCC در مراحل اولیه ابتلا بردارد.

ندارد

ندارد

ندارد

-

هزینه  آزمایشات  این طرح به عهده مجریان خواهد بود.

.

نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری افراد در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند.

آدرس مجریان طرح جهت پاسخ گویی به سوالات بیماران شرکت کننده در مطالعه:

زاهدان، بزرگراه خلیج فارس، روبروی بیمارستان علی ابن  ابیطالب(ع) مجتمع پزشکی پردیس، گروه بافت شناسی

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان  که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلام می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.

ضمیمه1

فرم اطلاعاتی طرح پژوهشی

مطالعه بیان mRNA و بروز ایمونوهیستوشیمی Maspin  در کبد بیماران مبتلا به سرطان هپاتوسلولار ناشی از HBV

اطلاعات زمینه ای:

نام ونام خانوادگی: 

گروه شاهد                     شماره .......                         گروه مورد              شماره ..........

سن(سال)  :            

جنس:       مرد                   زن

ضمیمه2

ویژگی های بالینی جمعیت مورد مطالعه

میزان بیان بیومارکر به روش QRT-PCR