بررسی پلی مورفیسم های rs221634 A>T ,rs221635 T>C,rs314276 C>A,rs9404590 T>Gوrs12194974 G>A rs6598964 A>G ژن Lin28B درزنان مبتلا به سرطان پستان و مقایسه آن با زنان سالم.

سرطان پستان یکی از شایع ترین انواع سرطان در میان زنان و دومین عامل مرگ در بین آنهاست.ریسک فاکتورهایی که در ارتباط با سرطان سینه هستند به دو دسته طبقه بندی میشوند که عبارت است از عوامل ژنتیکی وسابقه خانوادگی ودیگری عوامل محیطی که شامل: سن ،قاعدگی زودرس،مصرف الکل،عدم فعالیت های بدنی و.... میباشد (1).

پستان دارای 15 تا 20 بخش است که اصطلاحاً لوب نامیده می شود و هر کدام از این بخشها خود به قسمتهای کوچکتری تقسیم می شوند که لبول نامیده می گردند. لوبها و لوبولهای پستان توسط لوله های بسیار کوچکی که اصطلاحاً مجاری شیری نامیده می شوند با یکدیگر در ارتباط می باشند. شایعترین فرم سرطان پستان که اصطلاحاً سرطان مجاری سینه ای نام دارد در سلولهای موجود دراین مجاری منشاء میگیرد. سرطانهایی که منشاء آنها از لوبها یا لوبولها می باشدرا اصطلاحاً سرطان لوبی می نامند. معمولاً سرطانهای لوبی در مقایسه با سایر سرطانها بیشتر هر دو سینه را درگیر می کنند. نوع سومی از سرطانهای پستان نیز وجود دارند که اصطلاحاً سرطان التهابی سینه نامیده می شوند و در مقایسه با دو فرم دیگر از شیوع کمتری برخوردار می باشند (2).

سرطان پستان در انسان یک بیماری کلونال است؛ ممکن است  تا مدت‌های طولانی بصورت یک بیماری غیر تهاجمی و یا یک بیماری تهاجمی بدون متاستاز وجود داشته باشد. این واقعیات از نظر بالینی پی‌آمدها و اثرات بسیار مهمی دارند (3).

وفور سرطان پستان در میان ملت های مختلف متفاوت است که بیشترین ابتلا به آن در آمریکای شمالی واروپای شمالی وغربی میباشد ودرصد ابتلا به سرطان پستان در این کشورها 3تا 4 برابر کشورهای آسیایی و آفریقایی است (4).

در مطالعه ای که در پاکستان انجام شد به این نتیجه رسیدند که از هر 9 زن 1نفر از سرطان پستان رنج میبرند وشیوع آن در پاکستان 2.5برابر ایران وهند میباشد (5).

  (single nucleotide polymorphism)SNP تغییرات تک نوکئوتیدی در توالی DNA است که سبب ایجاد ژنوتیپ های مختلف می شود.طبق مطالعات انجام شده این تغییرات ژنتیکی ممکن است ریسک ابتلا به برخی بیماری ها از جمله سرطان ها( نظیر سرطان سینه) را در جمعیت هایی با ژنوتیپ خاص افزایش دهد(6, 7).

Lin28B پروتئینی است که توسط ژن Lin28B کد میشود و جزو دسته پروتئینهای باند شده به RNA (RNA-binding protein) می باشد. Lin28B باعث خاصیت تجدید پذیری (self renwalitty) استم سل می شو(8).

در مهره داران دو پارالوگ وجود دارد : Lin28a and Lin28b در حالی که در Caenorhabditis elegans فقط یک ژن Lin28B وجود دارد. پلی مرفیسم در ژن Lin28B سبب تغییراتی در زمان بلوغ و قد افراد میشود. Lin28B همراه با ژنهای OCT4, SOX2 and KLF4. در خاصیت چند قوه زایی سلولهای استم سل نقش دارد(9). 

Lin28B  در استم سل های جنینی موش به Let7 (pre micro RNA) باند شده و جلوی تولید آن را می گیرد. بیان Let7 در کانسر به شدت کاهش می یابد. Guo و همکارانش نشان دادند که میزان بیان این ژن در هپاتوسلولار کارسینوما افزایش می یابد (10). Lin28B به عنوان یک RNA binding  پروتئین سبب افزایش تومورزایی از طریق جلوگیری از تغییرات پس از رونویسی Let7 می شود (11). اخیرا مشخص شده که . Lin28Bو Lin28A به عنوان انکوژن عمل کرده و سبب پیشرفت سرطان می شوند.Lin28B  برای اولین بار در هپاتوسلولار کارسینوما دیده شد که به میزان زیادی بیان می شود (10). مطالعات زیادی نشان داده است که میزان بیان  Lin28Bو Lin28A در تعدادی از سرطانها افزایش می یابد. و افزایش بیان این ژنها با پیش آگهی بد بیماران همراه است. همچنین سبب افزایش تولید سلولهای سرطانی و متاستاز آنها می شوند (12و13). با وجود شباهتهایی بین Lin28Bو Lin28A در افزایش تولید سلولهای سرطانی و نیز افزایش قدرت متاستاز سلولهای سرطانی اما این دو در برخی ویژگیها نیز با یکدیگر تفاوتهایی دارند. به عنوان مثال Lin28A در سیتوپلاسم و Lin28B در هسته مستقر می باشند (14).   همچنین تعدادی از محققین نشان داده اند که هر دو اینها به عنوان انکوژن در بسیاری از سرطانها عمل می کنند، و این عمل را یا از طریق مهار تولید   microRNA let-7s   و یا از طریق پایدار کردن رونوشتهای انکوژنیک انجام می دهند ( 15). تا کنون مطالعات اندکی در ارتباط با استعداد ابتلا به سرطان و پلی مرفیسمهای ژن Lin28B صورت گرفته و نتایج این تحقیقات متفاوت می باشد به صورتی که برخی از این تغییرات سبب استعداد ابتلا و عده ای دیگر سبب محافظت می شوند(18-16 ).

همچنین برخی مطالعات حاکی از افزایش بیان این ژن در سرطانهای مختلف است به عنوان مثال Wang و همکاران نشان دادند که میزان بیان Lin28A و Lin28Bدر بیماران مبتلا به سرطان کولون افزایش می یابد .آنها همچنین نشان دادند که این دو دارای عملکرد یکسانی می باشند(15) . Jing در تحقیقی که بر روی کودکان مبتلا به نوروبلاستوما انجام داد دریافت که پلی مرفیسم های ژن Lin28B سبب استعداد ابتلا به این بیماری می شود و پلی مرفیسم rs221634 به عنوان یک ریسک فاکتور شناخته می شود.(19). Zhang و همکاران در مطالعه شان دریافتند که آلل T پلی مرفیسم rs221636 ofLin28B سبب کاهش ریسک سرطان oral cavity می شود(16).ژن LIN28B روی کروموزوم 6  واقع شده و دارای 7 اگزون بوده و بسیار پلی مرفیک می باشد(20). با توجه به موراد فوق ما در این مطالعه بر این هستیم تا پلی مرفیسمهای شایع این ژن را در بیماران مبتلا به سرطان پستان و گروه کنترل مقایسه کنیم.

توزیع فراوانی پلی مورفیسم(rs221634 A>T)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان با افراد سالم متفاوت است.

توزیع فراوانی پلی مورفیسم(rs221635 T>C)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان با افراد سالم متفاوت است.

توزیع فراوانی پلی مورفیسم(rs314276 C>A)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان با افراد سالم متفاوت است.

توزیع فراوانی پلی مورفیسم(rs9404590 T>G)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان با افراد سالم متفاوت است.

توزیع فراوانی پلی مورفیسم(rs12194974 G>A)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان با افراد سالم متفاوت است.

توزیع فراوانی پلی مورفیسم(rs6598964  A>G)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان با افراد سالم متفاوت است.

تعیین پلی مورفیسم های rs221634 A>T ,rs221635 T>C,rs314276 C>A,rs9404590 T>Gوrs12194974 G>A rs6598964 A>G ژن Lin28B درزنان مبتلا به سرطان پستان و مقایسه آن با زنان سالم.

مقایسه ی فراوانی پلی مورفیسم(rs221634 A>T)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان و افراد سالم

مقایسه ی فراوانی پلی مورفیسم(rs221635 T>C)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان و افراد سالم

مقایسه ی فراوانی پلی مورفیسم(rs314276 C>A)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان و افراد سالم

مقایسه ی فراوانی پلی مورفیسم(rs9404590 T>G)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان و افراد سالم

مقایسه ی فراوانی پلی مورفیسم(rs12194974 G>A)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان و افراد سالم

مقایسه ی فراوانی پلی مورفیسم(rs6598964  A>G)   Lin28B در بیماران مبتلا به سر طان پستان و افراد سالم

:SNP(single nucleotide polymorphism)

تغییرات تک نوکئوتیدی درتوالی DNA است که سبب ایجاد ژنوتیپ های مختلف می شود.طبق مطالعات انجام شده این تغییرات ژنتیکی ممکن است ریسک ابتلا به برخی بیماری ها از جمله سرطان ها را در جمعیت هایی با ژنوتیپ خاص افزایش دهد.

مورد شاهدی

افراد مبتلا به سرطان سینه مراجعه کننده به بیمارستان علی ابن ابیطالب (ع) زاهدان که بیماری ان ها توسط پاتولوژیست تایید شده و بیماری زمینه ای دیگری ندارند به عنوان گروه مورد وارد مطالعه میشوند. گروه شاهد هم از زنان سالم که وارد طرح بررسی شیوع سندرم متابولیک در زاهدان شده اند و بیماری شناخته شده خاصی ندارند و مبتلا به سرطان شناخته شده ای هم نیستند انتخاب می شوند.(نمونه ها بر اساس سن همسان سازی می شوند).

برای بررسی پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی ٬از خانم های مبتلا به سرطان سینه در زاهدان که هم اکنون تحت درمان می باشند به تعداد 200  نفر خون گرفته می شود و تعدادی هم در طول انجام کار از بیماران جدید اضافه خواهد شد. گروه شاهد از نمونه های خون خانم های سالم شهر زاهدان که در طرح بررسی شیوع سندرم متابولیک وارد مطالعه شده اند انتخاب می شوند,این افراد هیچ بیماری زمینه ای شناخته شده ای ندارند و مبتلا به سرطان شناخته شده ای هم نیستند (حداقل 200 نفر).

مشاهده و بررسی‌های آزمایشگاهی

برای بررسی پلی مورفیسم و حذف ژنی نمونه خون در 20- درجه سانتیگراد نگهداری می‌شود. DNA نمونه خون افراد گروه شاهد و مورد به روش salting out تخلیص می‌شود. پرایمرهای اختصاصی جهت تعیین پلی مورفیسم ژنی به روش RFLPطراحی می شود. در مرحله بعد شرایط PCR برای تعیین این پلی مورفیسم ها بهینه می شود و سپس پلی مورفیسم ها ی ژنی ذکر شده در نمونه ها با این تکنیک آنالیز می شوند. درنهایت محصول PCR رابرای تائید روش مورد بررسی الکتروفورز می کنیم.

   اطلاعات توسط نرم افزار آماری SPSS تجزیه و تحلیل خواهد شد. برای مقایسه آلل و ژنوتیپ در دو گروه از آزمون Fisher's exact و برای مقایسه پارامترهای دموگرافیک کیفی مثل جنس در دو گروه نیز از آزمون Fisher's exact و برای مقایسه پارامترهای دموگرافیک کمی مثل سن در دو گروه از آزمون t-test استفاده خواهد شد و p کمتر از 05/0 بعنوان سطح معنی داری در نظر گرفته خواهد شد. همچنین Odds Ratio با محدوده اطمینان 95 درصد (CI 95%) نیز برای افراد دارای اختلال ژنی برای ابتلا به سرطان پستان محاسبه خواهد شد.

تمامی بیماران تحت مطالعه آگاهانه و برای مقاصد علمی  اقدام به دادن نمونه خواهند کرد. شرکت در این طرح هیچ گونه هزینه ای برای بیماران ندارد و نام و مشخصات بیماران گزارش نخواهد شد.کدهای 1، 2، 3، 8، 10، 11، 13، 15، 18، 25، 28، مصوب کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی که در دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های دارای آزمودنی انسانی در جمهوری اسلامی ایران، دربردارنده‌ی اصول و مقررات اخلاقی‎ مطرح  و در سال 1392 در 31 بند تصویب شده است و همچنین کدهای 1، 2، 3، 4، 7 مربوط به دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران از قسمت راهنمای عمومی در این طرح رعایت می شود.

عدم همکاری بیمار

تهیه مواد وامکان طولانی شدن زمان دریافت آن ها

پلی مرفیسم

سرطان پستان

Lin28B

1.         Takahashi RU, Miyazaki H, Ochiya T. The Roles of MicroRNAs in Breast Cancer. Cancers. 2015;7(2):598-616.

2.         Tan VK, Goh BK, Fook-Chong S, Khin LW, Wong WK, Yong WS. The feasibility and accuracy of sentinel lymph node biopsy in clinically node-negative patients after neoadjuvant chemotherapy for breast cancer--a systematic review and meta-analysis. Journal of surgical oncology. 2011;104(1):97-103.

3.         AS F. Harrison's principles of internal medicine 2008.

4.         Pelton K, Coticchia CM, Curatolo AS, Schaffner CP, Zurakowski D, Solomon KR, et al. Hypercholesterolemia induces angiogenesis and accelerates growth of breast tumors in vivo. The American journal of pathology. 2014;184(7):2099-110.

5.         Asif HM, Sultana S, Akhtar N, Rehman JU, Rehman RU. Prevalence, risk factors and disease knowledge of breast cancer in Pakistan. Asian Pacific journal of cancer prevention : APJCP. 2014;15(11):4411-6.

6.             Bond GL, Hu W, Levine A. A single nucleotide polymorphism in the MDM2 gene: from a molecular and cellular explanation to clinical effect. Cancer Res. 2005;65(13):5481-4.

7.            Zhang K, Zhou B, Wang Y, Rao L, Zhang L. The TLR4 gene polymorphisms and susceptibility to cancer: a systematic review and meta-analysis. European journal of cancer. 2013;49(4):946-54.

8.          Li C, Sako Y, Imai A, Nishiyama T, Thompson K, Kubo M, et al. A Lin28 homologue reprograms differentiated cells to stem cells in the moss Physcomitrella patens. Nature communications. 2017;8:14242.

9.          Shyh-Chang N, Daley GQ. Lin28: primal regulator of growth and metabolism in stem cells. Cell stem cell. 2013;12(4):395-406.

10.       Guo Y, Chen Y, Ito H, Watanabe A, Ge X, et al. Identification andcharacterization of lin-28 homolog B (LIN28B) in human hepatocellularcarcinoma.2006.Gene 384: 51–61

11 .          Viswanathan SR, Daley GQ, Gregory RI Selective blockade ofmicroRNA processing by Lin28. Science.2008. 320: 97–100

12.       Viswanathan SR, Powers JT, Einhorn W, Hoshida Y, Ng TL, Toffanin S, O'Sullivan M, Lu J, Phillips LA, Lockhart VL, Shah SP, Tanwar PS, Mermel CH, Beroukhim R, Azam M, Teixeira J, et al. Lin28 promotes transformation and is associated with advanced human malignancies. Nature genetics. 2009; 41:843-848.

13 .          Cao D, Allan RW, Cheng L, Peng Y, Guo CC, Dahiya N, Akhi S, Li J. RNA-binding protein LIN28 is a marker for testicular germ cell tumors. Human pathology. 2011; 42:710-718.

14.      Piskounova E, Polytarchou C, Thornton JE, LaPierre RJ, Pothoulakis C, Hagan JP, Iliopoulos D, Gregory RI. Lin28A and Lin28B inhibit let-7 microRNA biogenesis by distinct mechanisms. Cell. 2011; 147:1066-1079.

15.       Wang T, Han P, He Y, Zhao C, Wang G, Yang W, Shan M, Zhu Y, Yang C, Weng M, Wu D, Gao L, Jin X, Wei Y, Cui B, Shen G, et al. Lin28A enhances chemosensitivity of colon cancer cells to 5-FU by promoting apoptosis in a let-7 independent manner. 2016;37:7657-7665.

16.    Ye Y, Madison B, Wu X, Rustgi AK. A LIN28B polymorphism predicts for colon cancer survival. Cancer biology & therapy. 2012;13(14):1390-5.

17.     Zhang Y, Zhu L, Wang R, Miao L, Jiang H, Yuan H, et al. Genetic variants in let-7/Lin28 modulate the risk of oral cavity cancer in a Chinese Han population. Scientific reports. 2014;4:7434.

18.     Permuth-Wey J, Kim D, Tsai YY, Lin HY, Chen YA, Barnholtz-Sloan J, et al. LIN28B polymorphisms influence susceptibility to epithelial ovarian cancer. Cancer research. 2011;71(11):3896-903

19. He J, Yang T, Zhang R, Zhu J, Wang F, Zou Y, et al. Potentially functional polymorphisms in the LIN28B gene contribute to neuroblastoma susceptibility in Chinese children. J Cell Mol Med. 2016;20(8):1534-41.

20. Faria AM, Sbiera S, Ribeiro TC, Soares IC, Mariani BM, Freire DS, et al. Expression of LIN28 and its regulatory microRNAs in adult adrenocortical cancer. Clin Endocrinol. 2015;82(4):481-8.

بررسی تغییرات ژنتیکی در ابتلا یا مقاومت به سرطان سینه

2cc به منظور استخراج DNA وانجام استفاده از آن در RLFP -PCR و ARMS-PCR

کمک به فهمیدن علت های ژنتیکی دخیل در ایجاد بیماری

Side effect برای بیمار ندارد

انجام این طرح هیچ هزینه ای برای بیمار نخواهد داشت.

نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری وی در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند.

دکتر محسن طاهری- 09151431350- زاهدان دانشکده پزشکی -کروه ژنتیک

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.