تعیین فراوانی پلی مورفیسم rs16999593 ژن DNMT1 و rs4841587 ژن GATA4 در نقص دیواره بین بطنی وتترالوژی فالوت و ارتباط آن با شدت علائم بالینی و مقایسه با گروه کنترل

بیماری های مادرزادی قلب شامل دسته خاصی از بیماریهایی است که از ابتدای تولد وجود داشته و  می‌تواند موجب مرگ و میر و یا اختلالات شدیدی در رشد و نمو کودکان شود. در بین آنومالی های مادرزادی در شیرخواران، ضایعات سیستم قلبی عروقی بیشترین موارد مرگ و میر را به دنبال دارد. 45 نوع بیماری مادرزادی قلبی تا کنون شناخته شده است. ¹

میزان شیوع بیماری های مادرزادی قلب تقریبا 1 در هر 100 تولد زنده است اما این آمار در نقاط مختلف دنیا متفاوت است. در صورتی که یکی از بستگان درجه اول به CHD مبتلا باشند، این میزان به 2 تا 6 درصد می رسد. این بیماری علت اصلی مرگ و میر و ناتوانی کودکان در سراسر دنیاست.² و آن را مسئول یک سوم آنومالی‌های نوزادی و شایعترین عامل مرگ نوزادان دانسته اند.³

کودکان مبتلا به بیماری‌های مادرزادی قلب به علت دریافت ناکافی انرژی، افزایش متابولیسم و یا هر دو، مستعد
سوء تغذیه هستند^6-4. کودک مبتلا به بیماری مادرزادی قلب به علت افزایش کار قلبی-تنفسی و متعاقب آن خستگی و بی‌اشتهایی، تنگی نفس، تاکی‌پنه و هایپوکسی مزمن، به سمت کاهش دریافت انرژی و افزایش نیازهای متابولیک و
سوء تغذیه و تاخیر رشد می‌روند.⁷

25 تا 30 درصد اشغال تخت‌های بخش مراقبت ویژه کودکان توسط کودکانی است که به بیماری مادرزادی قلبی دچارند بنابراین بخش عظیمی از هزینه‌های مزبور به مراقبت‌های بهداشتی و درمانی آنان تعلق می گیرد. آمارهای آمریکا نشان می‌دهد VSD با 30 تا 35 درصد شایعترین نوع CHD ایزوله می باشد.⁸

VSD   شایعترین فرم CHD می باشدکه در1/56 تا 2/53 در هر هزار تولد زنده رخ می دهد.⁹ تا کنون چندین مطالعه ژنتیکی جهت مقایسه در گروه مبتلا به بیماری مادرزادی قلبی و گروه شاهد انجام شده است.¹⁰

ژن DNMT1 دستورالعمل لازم برای ساختن آنزیم متیل ترانسفراز DNA را فراهم میکند. این آنزیم متیلاسیون DNA را انجام میدهد که علاوه بر این از گروههای متیل متشکل از یک اتم کربن و سه اتم هیدروژن تشکیل میشود. این آنزیم به اضافه شدن گروه متیل به بلوکهای DNA (نوکلئوتیدها) که Cytosines نامیده میشود کمک میکند.

متیلاسیون DNA نقش مهمی در عملکرد سلولها دارد مانند اکتیو کردن یا خاموش کردن قسمتی از DNA، تنظیم واکنشهای مربوط به پروتئینها و چربی ها، کنترل و پردازش انتقال دهنده های عصبی.

متیلاسیون DNA یک مکانیزم مهم سلولی که بیان ژن مرتبط با افزایش سن، التهاب و فرآیندهای آترواسکلروتیک است. هایپومتیلاسیون هم در Vivo و هم در Vitro پیدا شده است که نتیجه آن پیری عضلات صاف و همچنین ضایعات آترواسکلروتیک پیشرفته در انسان است. از طرف دیگر هایپرمتیلاسیون ژن خاص از جمله گیرنده استروژن، فاکتور مهار کننده بافتی 2 در بافت عروقی و سلولهای خون محیطی در بیمار CAD اتفاق می افتد.¹¹

ژن DNMT1 نقش محوری در حفظ وضعیت متیلاسیون DNA ایفا میکند. پلی مورفسیم در ژن DNMT1 در پیش آگهی سرطان معده نیز نقش دارد.¹²

ژن GATA4 یک فاکتور رونویسی است که در توسعه میوسیتهای قلب نقش دارد. جهش در ژن GATA4 در بیماران CHD شناسایی شده است. GATA4 یک فاکتور تنظیم کننده حساس میباشد. همچنین مشخص شده است که ژن GATA4 نقش مهمی در رشد قلب در زمان جنینی دارد.¹³

چون یان پنگ و همکاران (2014)  در تحقیق خود به این نتیجه رسیدند که یک جز اپیژنیک قابل توجه در پاتوژنز بیماری عروق کرونر وجود دارد. در این مطالعه ارتباط احتمالی پلی مورفیسم ژن DNMT1 با بیمار عروق کرونر قلب در بیماران چینی مورد بررسی قرار دادند. پنج پلی مورفیسم در 476 بیمار CAD و 478 بیمار سالم بررسی شد. نتایج این تحقیق نشان داد تفاوت معناداری در ژنوتایپ و توزیع آلل rs2228611 و rs2336691 بین بیماران و گروه کنترل وجود دارد. آلل rs22286111 با کاهش خطر ابتلا به CAD همراه بود، در حالیکه آلل rs2336691 در ریسک خطر بالاتر ابتلا قرار داشت.¹¹

گوی و همکاران (2014) یافتند که متیلاسیون DNA خون محیطی در جایگاه ژن DNMT1 مربوط به متابولیسم لیپو پروتئین به طور قابل توجهی با سطح لیپیدهای سرم در هایپرکلسترولینمیا فامیلیال در ارتباط است. انها بر اساس این مشاهدات پیش بینی نمودند که متیلاسیون DNA ریسک CAD را افزایش میدهد. همچنین به این نتیجه رسیدند که افزایش بیان DNMT1 با افزایش تکثیر سلولی در آترواسکلروز همراه است.^{14 و 15}

جیسیلی و همکاران (2014)  در تحقیق خود گزارش نمودند که بیان ژنهای آندوتلیال در شرایط Invitro توسط الگوهای متیلاسیون DNA از طریق یک مکانیزم وابسته به DNMT1 در عروق کاروتید است. بنابراین عنوان نمودند که منطقی است ژن DNMT1 در پاتوژنز CAD نقش داشته باشد.¹⁶

ژیفانگ و همکاران (2016) پلی مورفیسم DNMT1 را در پیش آگهی سرطان معده بررسی نمودند. در این مطالعه 447 نفر که مبتلا به سرطان معده بودند و تحت رادیکال تومور کتومی قرار گرفته بودند مورد بررسی قرار گرفتند، 5 نوع پلی مورفیسم در ژن DNMT1 بررسی شد. بیمارانی که پلی مورفیسم rs2228611 داشتند زندگی طولانی تری دارا بودند که به عنوان یک پیش آگهی مستقل برای سرطان معده شناخته شد.¹²

فنگیو وانگ و همکاران (2015) ارتباط بین پلی مورفیسم DNMT1 و بیماری مادرزادی قلبی را بررسی نمودند. 224 بیمار مبتلا به CHD و 199 فرد سالم وارد مطالعه شدند. DNA را از نمونه خون استخراج نمودند و پلی مورفیسم rs10420321 و rs16999593 و rs2228612 و rs2288349 بررسی نمودند که مشخص گردید پلی مورفیسم rs16999593 با CHD همراهی دارد.¹⁷

ماتاپالی و همکاران (2015)  در مطالعه ارتباط میان موتاسیون در ژن GATA4 با بیماری CHD را در جنوب هند بررسی نمودند. که در مطالعه آنها ژن GATA4 در 100 بیمار CHD و 200 فرد سالم بررسی شد. در مجموع 19 جهش مشاهده شد که یک پلی مورفیسم با بیماری ASD و دو پلی مورفیسم با TF و سه پلی مورفیسم (rs804280 و rs4841587 و rs4841588) با VSD ارتباط داشتند.¹⁸

گوانگوا وو و همکاران (2011)  پرو موتور ژن GATA2 با توالی دو طرفه را در 172 بیمار VSD و 171 فرد سالم آنالیز نمودند. نتایج نشان داد که 5 پلی مورفیسم در ژن GATA2 در پنج بیمار VSD دیده شدند که در گروه کنترل وجود نداشتتند.¹³

در پژوهش هیرایاما و همکاران (2005) GATA4 و NKX_2.5 به عنوان ژنهای بیماری زا در ASD گزارش شد، امّا رابطه بین جایگاه موتاسیون و فنوتایپ آنها مشخص نگردیده است. آنها موتاسیون GATA را در 16 مورد ASD بررسی نموده که 4 مورد از آنها همراه با بلوک AV و 2 مورد همراه با تنگی PS بودند و به وسیله PCR و تعیین توالی و معاینه بالینی، 5 جهش شامل دو موتاسیون GATA و سه موتاسیون NKX_2.5 در % 3/31 از مبتلایان به ASD مشاهده نمودند، که از میان آنها دو موتاسیون GATA در فرد مبتلا به ASD بدون بلوک AV به صورت S52F و C0107sdelG و سه جهش NKX_2.5 در فرد مبتلا به ASD با بلوک AV که شامل R190C و A88XF3 و T178M گزارش شد. ¹⁹

از آنجاکه درجه بندی دقیق از حضور و شدت علائم و نشانه های نارسایی قلب در شیرخواران و کودکان دشوار است، طبقه بندی Ross برای نخستین بار جهت این موضوع بکار گرفته شد. این طبقه بندی بیماران را در 4 گروه زیر قرار میدهد:

• بدون علائم
• تاکی پنه خفیف یا تعریق همراه با تغذیه در نوزادان، تنگی نفس در هنگام ورزش در کودکان بزرگتر بدون اختلال رشد واضح
• تاکی پنه واضح و تعریق همراه با تغذیه یا ورزش، طولانی شدن دفعات شیر خوردن و اختلال رشد
• تاکی پنه در هنگام استراحت، رتراکشن، ناله و تعریق

فراوانی پلی مورفیسم   rs16999593 ژن DNMT1 درکودکان مبتلا به VSD با  کودکان سالم متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم   rs16999593 ژن DNMT1 درکودکان مبتلا به TF با  کودکان سالم متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم rs4841587  ژن  GATA4 در کودکان مبتلا به VSD با  کودکان سالم متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم RS4841587  ژن  GATA4 در کودکان مبتلا به TF با  کودکان سالم متفاوت است

ارتباط معناداری میان فراوانی پلی مورفیسم   rs16999593 ژن DNMT1 و شدت علائم بالینی در کودکان مبتلا به VSD  وجود دارد

ارتباط معناداری میان  فراوانی پلی مورفیسم   rs16999593 ژن DNMT1 و شدت علائم بالینی در کودکان مبتلا به TF  وجود دارد

ارتباط معناداری میان  فراوانی پلی مورفیسم rs4841587  ژن  GATA4 و شدت علائم بالینی در کودکان مبتلا به VSD  وجود دارد

ارتباط معناداری میان  فراوانی پلی مورفیسم rs4841587  ژن  GATA4 و شدت علائم بالینی در کودکان مبتلا به TF  وجود دارد

تعیین توزیع فراوانی  پلی مورفیسم  rs16999593 ژن DNMT1 و  rs4841587 ژن GATA4 در نقص دیواره بین بطنی وتترالوژی فالوت و نیز ارتباط آن با شدت علائم بالینی و مقایسه با گروه کنترل.

مقایسه توزیع فراوانی  پلی مورفیسم rs4841587  ژن GATA4 درکودکان مبتلا به VSD و کودکان سالم

مقایسه توزیع فراوانی  پلی مورفیسم rs4841587  ژن GATA4 درکودکان مبتلا به TF و کودکان سالم

مقایسه توزیع فراوانی  پلی مورفیسم  rs16999593  ژن DNMT1 درکودکان مبتلا به VSD  و کودکان سالم

مقایسه توزیع فراوانی  پلی مورفیسم  rs16999593  ژن DNMT1 درکودکان مبتلا به TF و کودکان سالم

بررسی ارتباط میان توزیع فراوانی  پلی مورفیسم rs4841587  ژن GATA4با شدت علائم بالینی کودکان مبتلا به VSD

بررسی ارتباط میان توزیع فراوانی  پلی مورفیسم rs4841587  ژن GATA4با شدت علائم بالینی کودکان مبتلا به TF

بررسی ارتباط میان توزیع فراوانی  پلی مورفیسم rs16999593  ژن DNMT1 با شدت علائم بالینی کودکان مبتلا به VSD

بررسی ارتباط میان توزیع فراوانی  پلی مورفیسم rs16999593  ژن DNMT1 با شدت علائم بالینی کودکان مبتلا به TF

بیماری مادرزادی قلب: بیماری های مادرزادی قلب شامل دسته خاصی از بیماری ها ست که از ابتدای تولد وجود داشته و می تواند موجب مرگ و میر و یا اختلالات شدیدی در رشد و نمو کودکان شود.

 : VSD نقص دیواره بین بطنی: شایعترین نوع CHD ایزوله می باشد.

TF : با تنگی اینفندی بولوم(PS) ، نقص دیواره بین بطنی ، سوار شدن آئورت بر روی نقص دیواره بین بطنی و هایپرتروفی بطن راست مشخص میگردد.

پلی مورفیسم ژنی: وقتی رخ می دهد که در یک گونه زیستی بیش از یک آلل در یک locus)جایگاه ژنتیکی) وجود داشته باشد.

مورد - شاهدی

ورودو: کلیه کودکان با تشخیص قطعی نقص دیواره بین بطنی و تترالوژی فالوت که فاقد سایر آنومالی های قلبی. سندروم داون. سایر تریزومی ها . سابقه تماس با مواد تراتوژن میباشند

خروج: ابتلای همزمان به سایر آنومالی های قلبی. سندروم داون. سایر تریزومی ها . سابقه تماس با مواد تراتوژن.

با توجه به  تعداد بیماران در دسترس در استان و حجم نمونه مطالعات مشابه ، حجم نمونه برای این مطالعه حد اقل 200 کودک مبتلا به CHD  به همین تعداد نیز کودک سالم به عنوان گروه شاهد (200 نفر) در نظر گرفته خواهد شد.

نمونه گیری آسان کلیه کودکان مراجعه کننده به کلینیک قلب کودکان بیمارستان های علی اصغر(ع) و
علی ابن‌ابیطالب (ع) و یا بستری در این دو بیمارستان که تشخیص VSD و TF برای انها مسجل شده است وارد مطالعه می شوند.گروه های مورد به صورت انتخاب آسان گزینش می‌شوند.گروه شاهد افرادی هستند که فاقد بیماری فوق بوده و از نظر سن و جنس با گروه مورد همسان سازی شده اند.

فرم اطلاعاتی – پرونده بستری بیماران و نتایج حاصل از روش های مولکولی

این مطالعه از نوع مورد شاهدی می باشد و زمان اجرای آن یک سال و نیم می باشد که طی آن ارتباط پلی مورفیسم rs4841587 ژن GATA4 و پلی مورفیسم rs16999593 ژن DNMT1 در بیماران مبتلا به VSDو TF بررسی می شود  و نیز ارتباط میان  پلی مورفیسم rs4841587 ژن GATA4 و پلی مورفیسم rs16999593 ژن DNMT1 با شدت علائم بالینی در کودکان مبتلا به VSD و TF بررسی میشود. کودکان مراجعه کننده به کلنیک های قلب بیمارستان های امام علی (ع) و علی اصغر (ع ) شهرستان زاهدان که برای آن ها تشخیص TFو VSD گذاشته شده است وارد مطالعه می شوند. تشخیص قطعی این بیماری با اکوکاردیوگرافی انجام می شود.در صورتی که کودک مبتلا به سایر آنومالی های قلبی، سندروم داون،  سایر تریزومی ها باشد ویا سابقه تماس با مواد تراتوژن اثبات شده داشته باشد از مطالعه خارج می شوند. گروه شاهد نیز از کودکانی انتخاب می شود که هیچ بیماری ثابت شده قلبی نداشته باشند. با توجه به اینکه این بیماران به بیمارستان مراجعه می کنند و برای آزمایشات مختلف از آنها خون گیری می شود خون گیری اضافی به بیماران تحمیل نمی شود لذا از نمونه خون گرفته شده بر روی ضدانعقادEDTA جهت تخلیص DNA استفاده می شود. نمونه های خون در20- درجه سانتیگراد نگهداری می شود. DNA نمونه خون این افراد به روش salting out تخلیص می‌شود، پرایمرهای اختصاصی طراحی شده و پس از بهینه سازی شرایط PCRژنوتیپ گروه شاهد و مورد با روش ARMS-PCR مورد ارزیابی قرارمی گیرد. محصول PCR را روی ژل آگارز 2% برده، با اتیدیوم بروماید رنگ آمیزی کرده و محصولات PCR مورد ارزیابی قرارگرفته وژنوتیپ فرد تعیین می گردد.در نهایت کلیه اطلاعات و داده ها وارد نرم افزار آماری SPSS می شوند و برای تحلیل از تست های آماری مناسب استفاده خواهد شد. همچنین شدت علائم بالینی بر اساس طبقه بندی Ross تعریف می گردد.

نتایج با استفاده از آزمون های توصیفی شامل فراوانی درصد و جداول و نمودارهار توصیف شده و  با استفاده از نرم افزار spss  و تست های آماری کای اسکوئر ، Odds ratio و آزمون دقیق فیشر تحلیل می شوند. برای تعیین ارتباط میان پلی مورفیسم RS4841587 ژن GATA4 و پلی مورفیسم rs16999593 ژن DNMT1 با شدت علائم بالینی در کودکان مبتلا به VSD و TF از ROSS Clasification استفاده میشود.

کد های(1الی23) دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر گروه های آسیب پذیر در جمهوری اسلامی(فصل اول کلیات و فصل دوم نوزادان و کودکان) در پژوهش ما به طور کامل رعایت میگردد.

1-در پژوهش‌های علوم پزشکی نباید از افراد آسیب‌پذیر به‌عنوان آزمودنی ترجیحی استفاده شود و تنها در صورتی باید از این افراد در پژوهش استفاده شود که  دلیل موجهی برای آن وجود داشته باشد.

2-افراد آسیب‌پذیر باید در تمامی مراحل طراحی و اجرا و گزارش پژوهش مورد حفاظت ویژه قرار بگیرند.

3-طراحی و اجرای پژوهش باید به‌گونه‌ای باشد که کرامت انسانی، احترام و تمامیت جسمانی و روانی این شرکت کنندگان رعایت و حفاظت شود.

4-در صورت ضرورتِ استفاده از افراد آسیب‌پذیر در پژوهش، باید تا حد ممکن افرادی به‌عنوان آزمودنی انتخاب شوند که درجات کم‌تری از آسیب‌پذیری را دارا باشند.

5-در پژوهش‌های غیر درمانی تنها در صورتی باید از افراد آسیب‌پذیر استفاده شود که نتایج پژوهش برای خود شرکت‌کننده یا سایر افرادی که به همان گروه آسیب‌پذیر تعلق دارند مفید باشد و خطر پژوهش برای هر شرکت‌کننده بیش از حد متعارف در زندگی روزمره نباشد.

6-در پژوهش‌های درمانی تنها در صورتی باید از افراد آسیب‌پذیر استفاده شود که نسبت فایده به زیان مورد انتظار برای خود آزمودنی به‌گونه‌ای باشد که انجام پژوهش را مبتنی بر منافع شخص آزمودنی توجیه کند.

7-داشتن تصمیم‌گیرنده‌ی جایگزین، ضرورت اخذ رضایت‌آگاهانه از خود آزمودنی را مرتفع نمی‌کند. در مورد افرادی که تصمیم‌گیرنده‌ی جایگزین (اعم از سرپرست قانونی) دارند، باید تا حد ممکن از خود فرد هم رضایت آگاهانه و آزادانه اخذ شود.

8-امتناع فرد از قبول یا ادامه‌ی شرکت در مطالعه را باید جدی گرفت و به آن احترام گذاشت.

9-دوره‌ی کودکی نیز به سنینی اطلاق می شود که پس از نوزادی آغاز و تا پایان 18 سالگی ادامه می‌یابد. هم‌چنین، سرپرست قانونی به ولی، قیم، یا فرد بزرگسال دیگری اطلاق می‌شود که بر طبق قانون، سرپرستی کودک را بر عهده دارد.

10-هدف از پژوهش باید پیشبرد دانش در رابطه با سلامت کودکان یا ارتقای سلامت و مراقبت از این گروه باشد.

11-کودکان از نظر دارا بودن ظرفیت برای دادن رضایت به سه گروه سنی تقسیم می‌شوند:

• زیر 7 سال، 7 تا 15 سال، و بالای 15سال: در کودکان زیر 7 سال: باید رضایت کتبی هم از پدر وهم از مادر نوزاد گرفته شود. در صورت عدم دسترسی به یکی از آن‌ها یا فقدان ظرفیت تصمیم‌گیری درهریک از والدین، رضایت از یکی از آن‌ها کفایت می‌کند. در صورت عدم دسترسی یا فقدان ظرفیت در هر دو والد، رضایت سرپرست قانونی واجد صلاحیت برای انجام پژوهش‌های درمانی لازم است، اما در پژوهش‌های غیردرمانی انجام پژوهش‌ها در چنین شرایطی ممنوع است.
• در کودکان 7 تا 15 سال تمام، باید رضایت آگاهانه‌ی کتبی از سرپرست قانونی گرفته شود. هم‌چنین، باید متناسب با سطح درک و شناخت کودک، موافقت  آگاهانه‌ی وی نیز اخذ شود. کودک حق دارد که اطلاعات لازم را در حد توانایی فهم خود دریافت کند، نظر خود را بیان کند و تصمیم بگیرد. روش‌های مورد استفاده برای ارائه‌ی اطلاعات و اخذ رضایت، باید متناسب با سن و قدرت فهم کودک باشد
• در کودکان بالای 15 سال، رضایت آگاهانه‌ی کتبی باید هم از سرپرست قانونی و هم از کودک اخذ شود.
• در مورد کودکانی که بر طبق نظر مراجع قضایی حکم رشد گرفته‌اند، اخذ رضایت از خود فرد ضروری و کافی است.

12-اگر سن سرپرست قانونی کم‌تر از 18 سال باشد، تنها در صورتی می تواند به نیابت از کودک رضایت دهد که ظرفیت تصمیم‌گیری در ایشان محرز شود.

13- پژوهش بر کودکان تنها در صورتی باید انجام گیرد که انجام آن پژوهش بر روی سنین بالاتر امکان‌پذیر نباشد یا توجیه اخلاقی برای انجام آن پژوهش بر روی کودکان وجود داشته باشد.

14-پژوهش‌هایی که مستقیماً سودی به کودکان شرکت‌کننده نرساند، در صورتی که باعث ایجاد منافع برای گروه کودکان و نوزادان شود اخلاقی محسوب می‌شود. البته با این شرط که ضرری را متوجه آزمودنی‌ها نکند.

15- در پژوهش‌های درمانی، نسبت فایده به خطرات مورد انتظار برای خود آزمودنی‌ها باید به‌گونه‌ای باشد که انجام پژوهش را بر اساس منافع آزمودنی‌ها توجیه کند.

16- ارزیابی خطر باید توسط تمامی افراد درگیر در پژوهش صورت گیرد که شامل سرپرستان قانونی، محققان، متخصصین درگیر، کمیته‌ی اخلاق در پژوهش و خود کودک (در صورت امکان) می‌شود.

17- در ارزیابی خطرات ناشی از پژوهش، باید توجه داشت که برخی از مداخله‌هایی که در بزرگسالان کم‌خطر به‌حساب می‌آیند (مانند خون‌گیری وریدی)، در مورد کودکان با در نظر گرفتن درد و اضطرابی که تجربه می‌کنند و اثرات احتمالی آن بر تکامل سیستم عصبی آن‌ها از گروه کم‌خطر خارج خواهد شد.

18- زمانی که لازم نباشد پژوهش حتماً بر روی گروه سنی خاصی از کودکان انجام شود، کودکان بزرگ‌تر برکودکان کم و سن و سال‌تر برای شرکت در پژوهش ارجح‌اند.

19- نباید هیچ‌گونه هزینه‌ی مالی برای شرکت در پژوهش به کودکان یا سرپرست قانونی آنان پرداخت شود ولی هزینه‌هایی که در نتیجه‌ی شرکت در پژوهش متحمل شده‌اند باید پرداخت شود. دادن هدیه‌های کوچک و فاقد ارزش مالی بالا (مانند بسته کوچک مدادرنگی یا کاغذ رنگی یا میان وعده‌های ساده) به کودکان شرکت کننده در پژوهش از نظر اخلاقی ایرادی ندارد و تشویق می‌شود.

20- سرپرستان کودک این حق را دارند که در طی انجام پژوهش کودک خود را همراهی کنند.

21- سرپرستان کودک، در صورت تمایل، باید از فرصت کافی برای مشورت با بستگان، مراقبان بهداشتی و مشاورین مستقل در رابطه با شرکت در پژوهش، برخوردار شوند.

22- باید به تمامی سؤالات و دغدغه‌های سرپرستان کودک در طی پژوهش پاسخ مناسب داده شود.

23- اخذ رضایت آگاهانه از کودک و سرپرستان او ترجیحاً باید توسط شخص یا اشخاصی انجام گیرد که در تیم درمانی او مشارکت ندارند.

کد های اخلاقی(1الی12)دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران به طور کامل در پژوهش ما رعایت میگردد.

1-پژوهشگر باید به این امر مهم توجه داشته باشد که بافت‌ها و اعضای مورد استفاده، دارای منشأ انسانی‌اند و کرامت انسانی اقتضا می‌کند که جمع‌آوری، نگه‌داری، استفاده و نابودسازی آن‌ها توأم با رعایت ملاحظات و شؤون مرتبط باشد.

2-از اجزای بدنی دارای منشأ انسانی باید تنها در پژوهش‌هایی استفاده شود که اهداف ارزشمندی را در راستای مبارزه با بیماری‌ها و ارتقای سلامت انسان‌ها دنبال می‌کنند.

3-تمامی پژوهش‌ها بر روی عضو و بافت انسانی، پیش از اجرا، باید مورد تأیید کمیته‌ی اخلاق در پژوهش مرتبط قرار گیرد. کمیته‌ی اخلاق در پژوهش حق دارد که در تمامی مراحل پژوهش بر آن نظارت داشته باشد. پژوهشگران باید در این زمینه با کمیته‌ی اخلاق در پژوهش همکاری کنند.

4-رضایت آگاهانه‌ی فرد دهنده‌ی عضو یا بافت، یا جانشین قانونی او، شرط اساسی در تأیید اخلاقی هر پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی است. رضایت‌نامه باید با رعایت تمامی اصول مرتبط تهیه و هنگام ارسال طرح‌نامه برای تصویب، به آن پیوست شده باشد.

5-در مواردی که اخذ رضایت آگاهانه از دهنده‌ی نمونه‌ی ذخیره‌شده یا جانشین قانونی او امکان‌پذیر نباشد، به‌شرط وجود رضایت کلی اولیه بر استفاده‌ی پژوهشی، در صورت تأیید کمیته‌ی اخلاق در پژوهش می‌توان از آن نمونه برای پژوهش استفاده کرد. در چنین مواردی باید از نمونه‌هایی استفاده شود که به ‌نحو برگشت‌ناپذیر بی‌نام ‌شده باشد.

6-تمامی اطلاعاتی که از صاحبان عضو یا بافت مورد پژوهش، جمع‌آوری و ثبت می‌شود، راز حرفه‌ای تلقی می‌‌شود؛ از این ‌رو، تمامی اصول و ملاحظات مربوط به رازداری و حفظ حریم شخصی، باید در مورد آن‌ها مراعات شود.

7-مرکز انجام دهنده‌ی پژوهش بر روی عضو و بافت باید مهارت و امکانات لازم برای حفظ رازداری را داشته باشد؛ در غیر این صورت، اطلاعات باید به شکل بی‌نام و غیرقابل ردیابی ثبت و ذخیره شود.

8-پژوهشگر باید از اعضاء و بافت‌هایی که به منظور پژوهش در اختیار او قرار می‌گیرد استفاده‌ی بهینه کرده، از هدر رفتن آن‌ها جلوگیری کند

9-پژوهشگر موظف است که تمهیدات لازم ایمنی، از جمله آزمون‌های غربالگری و وسایل محافظت‌کننده را برای جلوگیری از انتقال آلودگی از اجزای بدنی مورد استفاده به هر فرد دیگر، اعم از پژوهشگران، آزمودنی‌ها یا سایر افرادی که در فرایند پژوهش با این مواد سروکار خواهند داشت، پیش‌بینی و تأمین کند.

10-پژوهش بر روی عضو و بافت ممکن است به ایجاد روش‌ها و محصولاتی منجر شود که به استفاده‌ی تجاری از آن‌ها بینجامد. حقوق مالکیت معنوی نتایج حاصل از این‌گونه پژوهش‌ها باید مورد تأیید و حمایت قرار گیرد. احتمال استفاده‌ی تجاری از نتایج پژوهش و اشخاصی که احتمالاً از آن منتفع خواهند شد باید در رضایت‌نامه‌آورده شود.

11-زمان، نحوه و میزان اطلاع آزمودنی‌ها از نتایج پژوهش باید در رضایت‌نامه آورده شود. در هر حال، آزمودنی یا نماینده‌ی قانونی او باید به تمامی اطلاعاتی که در طول پژوهش درباره‌ی او به‌دست می‌آید، دسترسی داشته باشد.

12-در صورت کمبود بافت یا عضو، باید استفاده‌های درمانی بر استفاده‌های پژوهشی اولویت داده شود. 

مشکلات مربوط به تهیه مواد اولیه و تجهیزات آزمایشگاهی مورد نیاز- عدم همکاری بیماران

GATA4- TF- DNMT1-VSD

1 - Perloff JK. Congenital heart disease in adults. A new cardiovascular subspecialty. Circulation. 1991 Nov;84(5):1881-90.

2. Liu, C.X.; Shen, A.D.; Li, X.F.; Jiao, W.W.; Bai, S.; Yung, F.; Guan, X.; Zhang, X.G.;Zhang, G.R.; Li, Z.Z. Association of TBX5 gene polymorphism with ventricular septal defect in the Chinese Han population. Chin. Med. J. 2009, 122, 30–34.

3. Van Beynum, I.M.; Blom, H.J.; Kapusta, L.; den Heijer, M. The MTHFR 677C'T polymorphism and the risk of congenital heart defects: A literature review and meta-analysis. QJM 2007, 100, 743–753.

4. Kao Yl, Wang R, Pai L, Hwang B. Life adjustment of school age children with congenital heart disease after corrective surgery. Journal of Nursing 2000; 47: 43-45.

5. Salzer HR, Haschke F, Wimmer M, Schilling R. Growth and nutritional intake of infants with congenital heart disease. Pediatric Cardio 1989; 10: 170 - 230.

6. Vieria TC, Trigo M, Alonso RR, Ribeiro RH, Cardoso MR, Cardoso AC. Assessment of food intake in infants between 0 and 24 months with congenital heart disease. Arq Bras Cardiol 2007; 89(4): 219-224.

7. Birgul U, Kursad T, Gonca Y. Malnutrition and growth failure in cyanotic and acyanotic congenital heart disease with and without pulmonary hypertension. Arch Dis Child 1999; 81: 490-520

8. David, EF. Epidemiology of congenital heart disease in oskis pediatrics(eds: mc millan JA, De angelis CD, Feigin RD, Warshow JB. 3^rd ed. Philadelphia: Lippincott William and Wilkins, 1999,P:277-280.

9. Minette, M.S.; Sahn, D.J. Congenital heart disease for the adult cardiologist, ventricular septal

defects. Am. Heart Assoc. 2006, 114, 2190–2197.

10. Little, J.; Higgins, J.P.; Ioannidis, J.P.; Moher, D.; Gagnon, F.; von Elm, E.; Khoury, M.J.; Cohen, B.; Scheet, P.; Hutc, K. Association of strengthening the reporting of genetic associationstudies (STREGA): An extension of the STROBE statement the C677T methylenetetrahydrofolate reductase mutation with congenital heart diseases. Eur. J. Epidemiol. 2009, 24, 37–55.

11. Peng, C; Deng, Q; Li, Z; Xiong, C. Risk-Association of DNMT1 Gene Polymorphisms with Coronary Artery Disease in Chinese Han Population. International Journal of Molecular Sciences. 2014, 15, 22694-22705.

12. Zhiafang, J; Xing, W; Donghui, C; Chuan, W; Lili, Y; Meishan, J; Simin, W; Xueyuan, C; Jing, J. Polymorphisms of the DNA Methyltransferase 1 Gene Predict

Survival of Gastric Cancer Patients Receiving Tumorectomy. Disease Market. 2016, 1-9.

13. Wu, G; Shan, J; Pang, S; Wei, X; Zhang, H; Yan, B. Genetic analysis of the promoter region of the GATA4 gene in patients with ventricular septal defects. Translational Research. 2016. 376-382.

14. Guay, S.P.; Brisson, D.; Lamarche, B.; Gaudet, D.; Bouchard, L. Epipolymorphisms within lipoprotein genes contribute independently to plasma lipid levels in familial hypercholesterolemia. Epigenetics. 2014, 9, 718–729.

15. Guay, S.P.; Legare, C.; Houde, A.A.; Mathieu, P.; Bosse, Y.; Bouchard, L. Acetylsalicylic acid, aging and coronary artery disease are associated with ABCA1 DNA methylation in men. Clin. Epigenet. 2014, 6, 14, doi:10.1186/1868-7083-6-14.

16. Dunn, J.; Qiu, H.; Kim, S.; Jjingo, D.; Hoffman, R.; Kim, C.W.; Jang, I.; Son, D.J.; Kim, D.; Pan, C.; et al. Flow-dependent epigenetic DNA methylation regulates endothelial gene expression and atherosclerosis. J. Clin. Investig. 2014, 124, 3187–3199.

17. Wang, F; Zhou, S; Wang, Y; Wang, L; Zhou, J; Wang, H; Li, C; Chang,M. Association of DNMT1 Gene Polymorphisms with Congenital Heart Disease in Child Patients. Pediatr Cardiol. 2015, 36, 906-911.

18.Mattapally, S; Nizauddin, S; Murthy, K; Thangaraj, K; Banerjee, S. c.620C>T mutation in GATA4 is associated with congenital heart disease in South India. BMC Medical Genetics. 2015, 16:7, DOI 10.1186/s12881-015-0152-7.

19. Hirayama-Yamada, K; Kamisago, M; Akimoto, K; et al. Phenotypes with GATA4 or NKX2.5 mutation in familial atrial septal defect. AM J Med Genet A, 2005, 135, 47-52.

تعیین فراوانی  پلی مورفیسم  rs16999593 ژن DNMT1 و  rs4841587 ژن GATA4 در نقص دیواره بین بطنی وتترالوژی فالوت و ارتباط آن با شدت علائم بالینی و مقایسه با گروه کنترل

خونگیری انجام صورت گرفته حدود 2 سی سی بوده و جهت جهت تخلیص DNA استفاده می شود.

با توجه به اهمیت بیماری های مادر زادی و ارتباط آن ها با ژنوتیپ می توان با یافتن این ارتباط ام مهمی در پیشگیری و برنامه ریزی درمانی برداشت.

فاقد عوارض جانبی می باشد.

در این تحقیق عارضه ای در کودک ایجاد نمیگردد.

چنانچه در طرح تحقیقاتی اقدام تشخیصی یا درمانی انجام شود، هزینه به عهده مجری یا مجریان طرح و واحد های مربوطه خواهد بود و بیمار هزینه ای را پرداخت نخواهد کرد.

روش جایگزینی برای آن در دسترس نمی باشد

کلیه نتایج آزمایشها و روشهای به کار رفته به اطلاع بیمار خواهد رسید و این نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری وی در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند.

مشکل احتمالی در این طرح مطرح نمی باشد.

شرکت در مطالعه کاملاً اختیاری است و بیمار آزاد خواهد بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان  که مایل بود بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیمار ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شود

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.

-

دانشگاه علوم پزشکی زاهدان

معاونت پژوهشی

فرم رضایت آگاهانه شرکت در طرح تحقیقاتی

جهت رسیدگی به شکایات با شماره:  33295789-054 دبیرخانه کمیته اخلاق دانشگاه تماس حاصل نمایید.

ایمیل کمیته اخلاق دانشگاه جهت پاسخگویی به سوالات یا رسیدگی به شکایات مردمی