بررسی ایمنوهیستو شیمی میزان ظهور CD117 درماست سل های موجوددرپریودنتیت مهاجم

در زمینه تشخیص ضایعه

پریودنتیت یکی از شایع ترین بیماری های التهابی دهان است که توسط باکتری های موجود در پلاک دندانی ایجاد می شود.(1)در این بیماری ارتباط بین بافت و استخوان آلوئولر در حول دندان از بین می رود و این بیماری ممکن است به صورت aggressive بروز کند و موجب از دست رفتن دندان قبل از 20 سالگی شود.(2)اطلاعات بیولوژیکی که از مکانیسم این بیماری داریم اولین گام در جلوگیری و درمان این بیماری پریودنتال است.در پروسه این بیماری پاسخ ایمنولژیک و التهابی به عنوان مکانیسم تخریبی عمل می کند ویکی از پاسخ های التهابی ازاد شدن ماست سل ها است.به طور کلی ماست سل ها در بافت لثه نسبت به دیگر بافت های سالم بدن بیشتر است.(1)

پریودنتیت aggressive ویژگی های کلینیکی شامل bone loss و attachment loss clinical در پاسخ به کلونیزه شدن باکتری ها (پلاک دندانی)ازخود بروز می کند.(3)

پریودنتیت مهاجم یک شکل دوره ایی و تیپیک از پریودنتیت مزمن را بروز می کند.همچنین ضایعات مهاجم ممکن است توالی مشابه پریودتیت مزمن از تشکیل ضایعه اولیه و پیشرفت ضایعه را بروز ندهد.(4)

ماست سل ها یک جمعیت هتروژن هستند که به دو فنوتایپ بر اساس serine protease طبیعی تقسیم می شود.وظیفه اولیه ماست سل هابه طورطبیعی دفاع در مقابل باکتری های عفونی است که این وظیفه را از طریق تولید سایتوکاین ایمنولوژیک ایفا می کنند.ماست سل ها همچنین با قرارگیری در کنار T-Cell ها به انها گزارش می دهند،در واقع ان ها از طریق فاگوسیت و انالیز باکتری ،انتی ژن هارابهT-Cellعرضه می کنند.(5)

از سلول هایی که در فعالیت ایمنی و التهابی در بیماری پریودنتال نقش دارند،ماست سل هاظریفیت بالایی در تولید فعالیت بیولوژِیک دارند.ماست سل ها در بیماری پریودنتال به طور چشمگیری افزایش می یابند.(6)

یکی از مکانیسم های بیماری پریودنتال در نتیجه ازاد شدن ماست سل ها ایجاد می شود که ماست سل ها نقش اصلی در پاسخ های hypersensivity و فرایند التهاب دارند و می توانند یک سری عوامل مانند IgE را ترشح کنند که در گسترش التهاب نقش دارند.(7)

در یک مطالعه که توسط وهبی و همکارانش انجام شد رابطه معناداری میان تعداد ماست سل و پریودنیت مهاجم مشاهده نشد.(8)اما در یک مطالعه دیگر رابطه معناداری بین افزایش تعداد ماست سل و پریودنتیت مهاجم جنرالیزه در مقایسه با بافت لثه سالم مشاهده شد.(9) به نظر می رسد در ضایعات همراه با تخریب استخوان ماست سل ها نقش ویژه ای دارند.(10)

CD117یک محصول پروتوانکوژنیک C-kit است که به صورت زیرمجموعه ای از stemcellهای Hematopoietic است و در سطح ماست سل ها و ملانوسیت ها بیان می شوند.(11)

CD117 که به عنوان پروتو انکوژن شناخته می شود ،جهش ژن یا بیان بیش اندازه ژن را مشخص می کندو مطالعات اخیر نشان می دهد که CD117 یک مارکر بلقوه در تشخیص سرطانی شدن stemcellهااست.(12)

از انجایی که نقش ماست سل هادر بیماری های پریودنتال مشهود است و نقش اصلی در پاسخ های Hypersensivity دارند و با توجه به نقش تهاجمی تر بیماری پریودنتیت مهاجم و احتمال ظهور بیشتر مارکر های التهابی در این بیماری بر آن شدیم تا به بررسی ظهور مارکرCD117 در این بیماری بپردازیم و همچنین این که مطالعه مشابه در این زمینه در جمعیت مورد نظر نداریم.

زمینه ی پریودنتولوژی

زمینه ی پریودنتولوژی

ایجاد روند سریعتر تشخیصی

در زمینه ی یشگیری

1.میانگین میزان ظهور CD117 درماست سل های موجود در پریودنتیت مهاجم چند درصد است؟

2.میانگین میزان ظهور CD117 درماست سل های موجود در افرادسالم چند درصد است؟

3.میانگین میزان ظهور CD117 درماست سل های موجود در پریودنتیت مهاجم و افراد سالم متفاوت است.

تعیین میزان ظهورCD117 ماست سل های در بیماری پریودنتیت

مهاجم به روش ایمنوهیستوشیمی

زمینه ی پریودنتولوژی

زمینه ی پریودنتولوژی

1.تعیین میانگین ظهور CD117در ماست سل های موجود در پریودنتیت مهاجم

2.تعیین میانگین ظهور CD117 در ماست سل های موجود در اقراد سالم

3.مقایسه میانگین ظهور CD117 در ماست سل های در پریودنتیت مهاجم و افراد سالم

اهداف درمانی

دانشکده دندانپزشکی زاهدان

زمینه ی پریودنتولوژی

زمینه ی پریودنتولوژی

CD117:

CD117یک محصول پروتوانکوژنیک C-kit است که به صورت زیرمجموعه ای از stemcellهای Hematopoietic است و در سطح ماست سل ها و ملانوسیت ها بیان می شوند.(11)

CD117 که به عنوان پروتو انکوژن شناخته می شود ،جهش ژن یا بیان بیش اندازه ژن را مشخص می کندو مطالعات اخیر نشان می دهد که CD117 یک مارکر بلقوه در تشخیص سرطانی شدن stemcellها است.(12)

پریودنتیت مهاجم: پریودنتیت یکی از شایع ترین بیماری های التهابی دهان است که توسط باکتری های موجود در پلاک دندانی ایجاد می شود.(1)در این بیماری ارتباط بین بافت و استخوان آلوئولر در حول دندان از بین می رود و این بیماری ممکن است به صورت aggressive بروز کند و موجب از دست رفتن دندان قبل از 20 سالگی شود.(2)

زمینه ی پریودنتولوژی

توصیفی-تحلیلی

افراد دارای پریودنتیت مهاجم و گروه کنترل شامل افراد سالمی که جهت افزایش طول تاج کلینیکی به بخش پریودانتیکس دانشکده دندانپزشکی زاهدان در سال96-1394مراجعه کرده اند.

معیار ورود:

1.عدم وجود بیماری سیستمیک زمینه ایی

2.عدم وجود بیماری پریودنتال به غیر از بیماری مد نظر

3.عدم استعمال دخانیات

4.عدم استفاده از داروهای که منجر به ایجاد بیماری پریودنتال می شود.

5.عدم بارداری

6.بلوکهای پارافینی که میزان کاملی از ضایعه به منظور رنگ امیزی داشته باشند.

معیار خروج :

انصراف بیمار از شرکت در مطالعه

بر طبق مطالعات مشابه(وهبی و همکارانش(12))وSavita) وهمکارانش(13)) وتعداد افراد مراجعه کننده به بخش پریودانتیکس دانشکده دندان پزشکی 15 مورد پریودنتیت مهاجم و 15 مورد فرد سالم مورد مطالعه قرار خواهند گرفت.

نمونه گیری به صورت غیر احتمالی در دسترس از بین افراد مراجعه کننده به بخش پریودانتیکس دانشکده دندانپزشکی زاهدان انجام خواهد گرفت تا زمانی که تعداد نمونه ها تکمیل گردد.

فرم ثبت اطلاعات (ضمیمه شماره یک)

نمونه های بیوپسی افراد دارای بیماری پریودنتیت مهاجم که جهت جراحی ارجاع شده اند و افراد سالمی که جهت جراحی افزایش طول تاج کلینیکی به بخش پریودانتیکس دانشکده داندانپزشکی زاهدان در 96-1394مراجعه کرده اند پس از کسب کسب رضایت نامه اگاهانه (ضمیمه شماره2)به بخش پاتولوژی ارجاع داده شده و سپس بلوک های پارافینی انها تهیه می شود.اطلاعات بالینی موارد تایید شده نیز از پرونده بیماران استخراج خواهد شد(لازم به ذکر است که چون بیماری پریودنتیت مهاجم اغلب افراد زیر بیست سال را در گیر میکند پس باید گروه افراد سالم نیز تقریبا همسان سازی شوند).سپس یک برش با ضخامت 5-4میکرومتر از هر بلوک پارافینی تهیه می شود و جهت تعیین تعداد ماست سل ها با رنگ امیزی ایمونوهیستوشیمی برای مارکر CD117 رنگ امیزی خواهند شد.

جهت شمارش ماست سل ها :تعداد ماست سل ها درHpF(high power feld) درجاییکه بیشترین تراکم سلول ها وجود دارد(,(hot spotزیر میکروسکوپ نوری (Nikon-type 4) با بزرگنمایی 400 بررسی خواهد شد و در نهایت متوسط تعداد انها در هر گروه در فرم ضمیمه شماره یک ثبت خواهد شد.قابل ذکر است که شمارش ماست سل ها توسط دانشجوی اموزش دیده و تحت نظارت یک پاتولوژیست صورت خواهد گرفت.

داده های بدست امده از مطالعه وارد نرم افزار spss شده و سپس به صورت جداول توزیع فراوانی (مطلق و نسبی)و تعیین شاخص های مرکزی و پراکندگی توصیف و با توجه به حجم کم نمونه ها که کمتر از 30 عدد می باشد لذا از ازمون نان پارامتریک من ویتنی استفاده خواهیم کرد و لازم به ذکر است که سطح اطمینان و توان ازمون به ترتیب %95و%80 در نظر گرفته خواهد شد.

جدول 1-1:شمارش ماست سل ها در پریودنتیت مهاجم و افراد سالم

راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی دارای ازمودنی انسانی

کدهای 1-2-5-11-13-15-16-19-21-22-24-25-29-30-31

راهنمای اخلاق پژوهش بروی بافت و عضو انسانی

فصل 4 زیست بانکها ،کدهای 1-2-3-4-5

تعداد کم مراجعه کنندگان به بخش پریودانتیکس و اختصاص دادن مدت زمان بیشتر برای تکمیل نمونه هاو عدم همکاری بیمار که نیاز به تشویق به همکاری دارد.

پریودنتیت مهاجم،ماست سل،CD117

1.Vahabi S,Rezazadeh F,Movaghar S, Nazemisalman B.Relationship between Mast Cell and Different Types of periodontitis.J Periodontal Implant Dent.2010.2(2):56-60

2.Haubak D,Ennibi O,Poulsen K,Vaeth M,Poulson S,Kilian M.Risk of aggressive periodontitis in adolescent carriers of the JP2 clone of Aggregatibacter(Actinobacillius)actinomycetemcomitans in Morocco:a prospective longitudinal cohort study.Lancet.2008.371:237-42

3.Smith M,Seymour G,Cullinan M. Histopathological features of chronic and aggressive periodontitis. Periodontology 2000.2010(53):45-54

4.Ford P,Gamonal J,Seymour G. Immunological differences and similarities between chronic periodontitis and aggressive periodontitis. Periodontology 2000.2010(53):111-123

5.Gemmell E,Carter C,Seymour G. Mast Cells in Human Periodontal Disease.J Dent Res.2004.83(5):384-387

6. Batista A, Rodini C ,Lara V. Quantification of mast cells in different stages of human periodontal disease. Oral Diseases.2005(11):249-254

7.Shojae S,Jamshidi S,Faradmal J,Biglari K,Ahmadi S.Comparison of Mast Cell Presence in Inflammatory Periapical Lesions Incuding Periapical Cyst and Granuloma Using Cd117 (C-KIT).J Dent.2014.7(1):e24679

8.وهبی س،ابراهیمی م، ناظمی ب.بررسی حضور ماست سل ها در پریودنتیت مهاجم. مجله پژوهشی دانشکده علوم پزشکی زنجان.1391(20):76-83.

9. Hassan A, Riham O. Role of mast cells in angiogenesis of aggressive periodontitis (Abstract). 14Th International Egyptian Congress.2006.

10. Arzi B, Murphy B, Cox DP, Vapniarsky N,Kass PH, Verstraete FJ. Presence and quantification of mast cells in the gingival of cats with tooth resorption periodontitis and chronic stomatitis. Arch Oral Biol. 2011; 55: 148-54.

11.Rikala M,Kovatich AJ,Barusevicios A,Miettinen M.CD117: a sensitive marker for gastrointestinal stromal tumors that is more specific than CD34.Modern pathology.1998.11(8):728-34

12.Too L, Gracie G,Hasic E,Iwakura J,Cherepanoff S. Adult human retinal Müller glia display distinct peripheral andmacular expression of CD117 and CD44 stem cell-associated proteinsLay. Acta Histochemica.2017:142-9

13. Savita S, Ambica,Rithesh K ,Veena G ,Poorna P, Varsha V . Quantification of Mast Cells in Periodontal Diseases: A Comparative Study. J Pharm Biomed Sci. 2015(12):919–923.

CD117یک محصول پروتوانکوژنیک C-kit است که به صورت زیرمجموعه ای از stemcellهای Hematopoietic است و در سطح ماست سل ها و ملانوسیت ها بیان می شوند.

ندارد.

از انجایی که نقش ماست سل ها در هر دو دسته بیماری فوق مشهود است و نقش اصلی در پاسخ های Hypersensivity دارند و با توجه به نقش تهاجمی تر بیماری پریودنتیت مهاجم و احتمال ظهور بیشتر مارکر های التهابی در این بیماری بر آن شدیم تا به بررسی ظهور مارکرCD117 درهر دو دسته بیماری بپردازیم و همچنین این که مطالعه مشابه در این زمینه در جمعیت مورد نظر نداریم.

به علت انجام رنگ امیزی ایمنوهیستوشیمی روی بلوک های پارافینی،عوارض جانبی ندارد.

ندارد.

هزینه ها به عهده مجری طرح بوده و بیمار هزینه ایی پرداخت نخواهد کرد.

ندارد.

نتایج آزمایشها و روشهای به کار رفته به اطلاع بیمار خواهد رسید و این نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری وی در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند.

-

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.

فرم اطلاعات مریض

1.شماره پرونده:

2.سن:.........سال

3.جنسیت:(الف)مذکر (ب)مونث

4.بیماری سیتمیک:

• نوع بیماری :........ (ب)ندارد

5.گروه مورد مطالعه :

(الف)سالم (ب)پریودنتیت مهاجم

6.مکان برداشت ضایعه:

(الف)نیمه راست فک بالا (ب)نیمه چپ فک بالا

(ج)نیمه راست فک پایین (د)نیمه چپ فک پائین

7.میزان ظهور ماست سل ها(درصد):......