بررسی فراوانی ژنهای پمپ افلاکس( Mex AB-OprM) و OprDو الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی در ایزوله های بالینی سودوموناس آئروژینوزای جدا شده از بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان در سال 96

سودوموناس آئروژینوزا باکتری گرم منفی غیر تخمیری و پاتوژن فرصت طلبی است که توانایی زیستن در تمام محیط ها را داشته و عامل بسیاری از بیماریها در انسان مانند اندوکاردیت، مننژیت ،سپتی سمی , عفونتهای ادراری , عفونت زخم در بیماران سوختگی بوده(1-3) و باعث عفونت های مزمن ریه و عامل مرگ و میر در بیماران مبتلا به سیستیک فیبروزیس می گردد. (4)این پاتوژن یکی از باکتریهای بیمارستانی[1] و عامل 10 درصد از عفونت های بیمارستانی در تمام دنیا می باشد(5) این باکتری به علت دارا بودن تنوع ژنتیکی قادر به سازگاری با انواع میزبانها و محیط های مختلف بوده و لذا ویژگی های فنوتیپی متفاوتی را نشان می دهد.(6)

سودوموناس آئروژینوزا دارای مکانیسم های مختلفی برای مقاومت به عوامل آنتی میکروبیال است، از این رو به یک معضل مهم در مراکز بالینی تبدیل شده است.(7) امروزه با مصرف بی رویه آنتی بیوتیک ها ، سویه های سودوموناس آئروژینوزای دخیل در عفونت های بیمارستانی دارای مقاومت چند دارویی(MDR )[2] به آنتی بیوتیک های مختلف در تمام دنیا روز به روز در حال افزایش است. مقاومت سویه های سودوموناس آئروژینوزا به آنتی بیوتیک ها ناشی از علل مختلف مانند تغییر در نفوذپذیری غشا، تولید آنزیمهای غیرفعال کننده آنتی بیوتیک، تغییر ساختمان مولکول هدف آنتی بیوتیک ها مانند تغییر ساختمان پروتئینهای اتصالی به پنی سیلین([3](PBPs که باعث کاهش یا ممانعت از ورود دارو به داخل سلول می گردد و همچنین دفع دارو به خارج سلول از طریق پمپ های افلاکس (Efflux Pump ) می باشد.(8) نیازهای تغذیه ای ساده، فاکتورهای ویرولانس متعدد و از همه مهم تر مقاومت به طیف وسیعی از مواد ضد میکروبی باعث شده که این ارگانیسم به یک پاتوژن خطرناک تبدیل شود.

مکانیسم های مقاومت در این باکتری در مقابله با آنتی بیوتیکها می تواند ذاتی (با منشا کروموزومی) و اکتسابی(با منشا پلاسمیدی) باشد.(9)مقاومت ذاتی در نتیجه جهش خود به خودی در ژنهای کنترل کننده باکتری به داروهای ضد میکروبی رخ می دهد مانندکاهش نفوذپذیری و پمپ های افلاکس و مقاومت اکتسابی مقاومت کسب شده با مبادله ژنها بین سویه های باکتریایی از طریق جابجایی قطعات DNA به عنوان پلاسمید ها حاصل می شود مانند تولید بتالاکتامازها وآنزیم های تغییردهنده آمینوگلیکوزیدها.(10, 11)

پمپ های افلاکس نقش مهمی در مقاومت ذاتی این باکتری به انواع آنتی بیوتیکها از جمله فلوروکینولونها دارند. امروزه فلوروکینولونها )مانند سیپروفلوکساسین( و بتالاکتامازهای وسیع الطیف و آمینوگلیکوزیدهای ضد سودوموناس) مانند آمیکاسین (برای درمان این باکتری استفاده می شوند ولی از طریق موتاسیون کروموزومی می تواند منجر به ایجاد مقاومت به این آنتی بیوتیکها گردد.(12) مقاومت چند دارویی((MDR ناشی از پمپ های افلاکس علاوه بر سودوموناس در سایر گونه های باکتریها نیز وجود دارد. این پمپ ها کمپلکس های پروتئینی هستند که توانایی انتقال مولکولهای سوبسترا ) از جمله آنتی بیوتیکها)در اندازه های مختلف از داخل سلول باکتری به فضای خارج سلول را دارند و از ایجاد غلظت مناسب مواد سمی که برای باکتری کشنده است ، جلوگیری می کند.(13) لازم به ذکر است که تجمع مولکولهای آنتی بیوتیک داخل سیتوپلاسم، به غلظت کافی برای اثربخشی آنتی بیوتیک ها لازم می باشد و بدین ترتیب دفع این داروها توسط باکتری موجب بروز مقاومت نسبت به آنها خواهد شد.از اهمیت پمپ های افلاکس می توان به موارد زیرا شاره نمود:

دفع داروها و مواد شیمیایی، دفع متابولیتها و توکسینهای باکتریایی، حفاظت میکروارگانیسم از آنتی بیوتیک، توکسین و استرس و بقائ میکروارگانیسم در محیطهای مختلف(14)

طبق مطالعات مختلف از جمله بررسی های Putman وهمکارانش در سال2000 ،پنج خانواده از این پمپ های افلاکس در باکتریهای گرم منفی شناخته شده اند. این پمپ ها دارای بیشترین طیف سوبسترا بوده و قادرند طیف وسیعی از آنتی بیوتیک ها، رنگ ها، بیوسایدها، دترجنت ها، حلال های آلی را از سلول باکتری به بیرون پمپ کنند.(15) پمپ های مذکور با توجه به نحوه عملکرد، موجب بروز مقاومت چند دارویی(MDR) در باکتریهای گرم منفی از جمله سودوموناس آئروژینوزا می گردند .این پمپ ها براساس توالی اسیدهای آمینه وکسب انرژی برای انتقال سوبسترا تقسیم بندی میشوند(8) که عبارتند از: (2, 7, 16)

1.The major facilitator super Family(MFS)

2.The small multi drug resistance (SMR)

3.The multidrug and toxic compound extrusion (MATE)

4.The ATP-binding cassette (ABC)

5.The resistance nodulation cell division (RND)

این در حالیست که در مطالعه جدیدی که توسط Sara M که در مرکز سلامت بین المللی بارسلونا در سال 2013 انجام شد خانواده ششمی هم به این طبقه بندی اضافه شد که عبارتست از :

6) the drug metabolite transporter (DMT) superfamily.(17)

در این بین خانواده RNDنقش مهمی در مقاومت های آنتی بیوتیکی سودوموناس آئروژینوز ایفا می کند. بطور کلی خانواده RND دارای 12 نوع پمپ افلاکس تحت عنوان Mex (Multi drug efflux system ) میباشد که از این میان 6 پمپ به نام های :

Mex EF-OprN, Mex CD-OprJ, Mex AB-OprM, Mex JK-OprM, Mex XY-OprM ,Mex Mex GH-OprDنقش مهمی در ایجاد مقاومت به آنتی بیوتیک ها در سودوموناس آئروژینوزا دارند.(17-20)

بر اساس بررسی های متعدد ، پمپ های Mex AB-OprM از مهم ترین پمپ های افلاکس محسوب می شوند.(21) این پمپ از سه بخش تشکیل شده است:

1. : Mex A پروتئین پری پلاسمیک در غشای سیتوپلاسمی باکتری است.

2) : Mex Bپروتئین غشای داخلی سیتوپلاسمی که باعث انتقال فعال آنتی بیوتیک ها از عرض غشا می شود.

3) OprM(Outer membrane) که یک کانال پروتئینی در غشای خارجی که موجب خروج دارو از سیتوپلاسم به محیط خارج می شود.(22, 23)

پمپ افلاکس MexAB-OprM می تواند آنتی بیوتیکهای زیادی از کلاسهای مختلف بتالاکتام (مانندکربوکسی پنی سیلین و آزترونام) ، سفالوسپورینهای وسیع الطیف(مانند سفتازیدیم)، کارباپنم ها (مانند مروپنم و پنی پنم)، فلوئوروکوئینولونها(مانندسیپروفلوکساسین) ، تتراسایکلین، کلرامفنیکل، ماکرولیدها(ماننداریترومایسین)، نووبیوسین، تری متوپریم و سولفانامیدها را از باکتری به بیرون پمپ کند. لازم به ذکر است که بیان ژنهای این پمپ تحت کنترل ژنی بنام Mex R می باشد، نحوه اعمال این کنترل به این صورت است که این ژن رپرسوری را کد می کند که باعث مهار رونویسی ژن های پمپ Mex AB-oprM شده و به عنوان تنظیم کننده منفی آنها محسوب می شودو از طرفی موتاسیون در این ژن باعث افزایش بیان MexAB-OprMمی شود.(24) ارتباط تنگاتنگی بین پروتئین Mex AB-OprM و پروتئین OprD وجود دارد..Opr D نوعی پورین اختصاصی در باکتری سودوموناس آئروژینوزا و کانال ورودی قندها، پپتیدهای کوچک و آمینواسیدهای بازی و بعضی داروهاخصوصا کارباپنم ها به داخل باکتری می باشد. فقدان ژن این پورین یا کاهش بیان آن یا جهش در آن منجر به کاهش ورود کارباپنم ها می گردد.(6) در نتیجه بروز مقاومت به آنتی بیوتیک های خانواده کارباپنم می شود (25, 26)

مکانیسمهای مقاومت وابسته به Opr D عبارتند از: مکانیسمهایی که موجب کاهش بیان ژن Opr D می شوند مانند فلزاتی از قبیل روی و مس، تخریب پروموتر ناحیه بالا دست این ژن ،جهش هایی که منجر به ایجاد محصولات ناکارآمد و در نهایت منجر به تغییر عملکرد پورین خارج سلولی می گردد.(6)

با توجه به میزان بالای مقاومت های آنتی بیوتیکی و اینکه عفونت های بیمارستانی به سختی درمان شده و گاهی منجر به مرگ بیماران می شود، تقریبا تمام افراد بستری شده درمعرض تهدید عفونت های سودوموناسی مقاوم به آنتی بیوتیک قرار دارند. (27) با توجه به اهمیت پمپ های افلاکس در مقاومت آنتی بیوتیکی سودوموناس آئروژینوزا و مطالعات محدودی که در این زمینه انجام شده، بر آن شدیم تا در این مطالعه وجود پمپ های افلاکس MexAB-OprM و Opr D را با روش PCR بررسی کنیم. برای این منظور وجود ژن های OprM, Mex B,MexAبه عنوان ژن های کدکننده پمپ افلاکس MexAB-OprMو ژن OprD مورد بررسی قرار خواهد گرفت. بدیهی است نتایج این مطالعه می تواند در آینده در زمینه بکارگیری روش های درمانی مناسب تر، تولید آنتی بیوتیک های مناسب تر و نیز ابداع روش های جلوگیری از بروز موتاسیون در ژن OprD و در نتیجه حساس ماندن سویه های سودوموناس آئروژینوزا به آنتی بیوتیک های خانواده کارباپنم مورد استفاده قرار گیرد.

بررسی متون:

در مطالعه Sacha و همکارانش در لهستان در سالهای 2002 تا 2009 ژنهای Mex A MexR,Mex B مقدار 94%، 98%، 99% بود و بیان افلاکس پمپ Mex AB-Opr M در نمونه های مقاوم به مروپنم و سیپروفلوکساسین وجود داشت.(28)

در مطالعه دشتی زاده و همکاران که بر روی 250 نمونه از زخم سوختگی بیماران در بیمارستان شیراز انجام شد، و 66.66% از سویه های دارای پمپ افلاکس به ترتیب Mex A92.42% Mex B 87.87% بود.(2) عربستانی و همکارانش از بین 100 نمونه 31 ایزوله را بررسی و نشان دادند که بیشترین مقاومت به لووفلوکساسین و کمترین مقاومت به ایمی پنم بود و تمام سویه ها(100%) دارای پمپ افلاکس Mex AB-Opr M بودند.(21) در مطالعه پوراکبری و همکاران در 45 نمونه ایزوله سودوموناس آئروژینوزا در بیمارستان کودکان تهران فراوانی ژن Mex A 55.5% (n=25) ، Mex B 53.3%( n=24) ، Opr M 35.5% (n=16) گزارش شد.(29)

الغراوی(Al-Grawi) و همکاران در سال 2012 در عراق نشان دادند که تمامی 53 سویه سودوموناس آئروژینوزا جداسازی شده(100%) دارای ژنهای Mex A و Mex B و MexR بودند.(30) رحمانی بدیع و همکاران در سال 85 تنها 17% از سویه های مورد مطالعه پمپ MexAB-OprM را مشاهده نمودند.(31) در مطالعه صالحی و همکاران 27% ازسویه های MDR ژن های پمپ افلاکس MexAB-OprM را روی کروموزوم خود داشتند.(21)در حالیکه نجارپیرایه و همکاران در سال 1389 در هیچ یک از 33 سویه MDR سودوموناس آئروژینوزا پمپ MexAB-OprM را مشاهده نکردند.(21) در مطالعه امامی بیش از 80% نمونه های مقاوم به ایمی پنم تغییر در ساختار ژن مرتبط با پروتئین OprD را داشتند.(25)

امروزه مقاومت به آنتی بیوتیک ها به عنوان یکی از مشکلات در حال گسترش مراکز بهداشتی و درمانی محسوب می شود که از این میان سودوموناس آئروژینوزا با توان بالقوه برای ایجاد مقاومت، باعث محدودیت در انتخاب دارو و افزایش مرگ و میر و افزایش هزینه های درمانی عفونت های ناشی از این باکتری شده است.(32)

;

1. توزیع الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی در نمونه های ایزوله سودوموناس آئروژینوزا بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان چگونه است؟
2. توزیع فراوانی ژنهای پمپ افلاکس Mex A، Mex B، Opr M، Opr D در نمونه های ایزوله سودوموناس آئروژینوزای بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان چگونه است؟
3. توزیع فراوانی ژنهای Mex AB, Opr Mو Opr Dبرحسب الگوی مقاومت به آنتی بیوتیک در نمونه های ایزوله سودوموناس آئروژینوزای بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان چگونه است؟

4. حداقل غلظت مهاری ایمی پنم ، سفتازیدیم ، پیراسیلین تازوباکتام در نمونه های ایزوله سودوموناس آئروژینوزای بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان چگونه است؟

تعیین فراوانی ژنهای پمپ های افلاکس Mex AB,Opr M, Opr Dدر ایزوله های سودوموناس آئروژینوزای دارای مقاومت چند دارویی در بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان

1. تعیین الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی در نمونه های ایزوله سودوموناس آئروژینوزا بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان

2. تعیین فراوانی ژن های پمپ افلاکس Mex AB و Opr M در نمونه های ایزوله سودوموناس آئروژینوزا بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان

3. تعیین فراوانی ژنهای Mex AB, ، Opr Mو Opr D برحسب الگوی مقاومت به آنتی بیوتیک در نمونه های ایزوله سودوموناس آئروژینوزای بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان

4. تعیین غلظت مهاری ایمیپنم و سفتازیدیم و پیراسیلین-تازوباکتام در نمونه های ایزوله سودوموناس آئروژینوزا بیمارستان های آموزشی شهر زاهدان

مرکز تحقیقات بیماری های عفونی-گرمسیری دانشگاه علوم پزشکی زاهدان

پمپ افلاکس: فرآیندی است که طی آن باکتریها ترکیبات خارج سلولی را که سمی هستند(داروها،مواد شیمیایی و آنتی بیوتیکها) به خارج سلول دفع و از ایجاد غلظت مناسب آنتی بیوتیکها برای مهار باکتری ممانعت می کنند.

MexAB-OprM : یکی از کلاسهای پمپ افلاکس که در مقاومت ذاتی باکتری سودوموناس آئروژینوزا نقش  مهمی دارد.

OprD: یک کانال پورینی که در مقاومت سودوموناس آئروژینوزا به کاربنم ها تقش دارد.

1

توصیفی(مقطعی)

این مطالعه توصیفی بر روی نمونه های مختلف بالینی (ادرار، خون، زخم، ترشحات چشم، کاتترو ...) جمع آوری شده از آزمایشگاههای بیمارستانهای آموزشی شهر زاهدان( بیمارستان علی ابن ابیطالب، خاتم الانبیا، چشم پزشکی، بوعلی) در سال 69 است.

در مطالعات مشابه حجم نمونه از 104 تا 250 متغیر است. لذا با در نظرگرفتن سقف هزینه پایان نامه ارشد نمونه ها برابر با 200 ایزوله های بالینی سودوموناس آئروژینوزای دارای مقاومت آنتی بیوتیکی جدا شده از بیمارستانهای آموزشی زاهدان می باشد.

از زمان تصویب طرح در کمیته اخلاق بصورت آسان یا در دسترس نمونه های واجد شرایط تا رسیدن به حجم نمونه مورد نظر وارد مطالعه خواهند شد.

شناسایی اولیه سودوموناس آئروژینوزا براساس تست های مرسوم میکروب شناسایی انجام می گردد برای جداسازی باکتری از سایر باکتریهای گرم منفی و حصول اطمینان از جنس و گونه باکتری، تست های بیوشیمیایی استاندارد انجام می گیرد.استخراج پلاسمید سودوموناس آئروژینوزا براساس کیت انجام می شود ، جهت تعیین ژنوتیپی حضور ژن Mex A, Mex B, Opr M, Opr D توسط PCRمورد بررسی قرار می گیرند.

الف- جداسازی و تشخیص ایزوله ها: در یک مطالعه ی توصیفی,مقطعی تعداد 200 نمونه سودوموناس آئروژینوزا از بیمارستانهای شهر زاهدان جمع آوری می شود و نمونه ها به فاصله ی چند ساعت پس از جمع آوری مورد بررسی قرار می گیرند .در تمامی نمونه ها، اطلاعات کلینیکی مربوط به هر بیمار نیز در پرسش نامه تنظیم می گردد. نمونه های جمع آوری شده، به منظور جداسازی سویه های سودوموناس آئروژینوزا به کمک تست های تشخیصی شامل روش فنوتیپی، رنگ آمیزی گرم، کشت بر روی محیط های Macconkey Agar و Muller Hinton Agar و رشد در دمای 42 درجه سانتی گراد، تست هایی از قبیل اکسیداز، کاتالاز ، OF ، TSI، SIM MR/VP و سیمون سیترات، هویت سویه ها تایید می شوند و توسط تست آنتی بیوگرام از نظر مقاومت آنتی بیوتیکی مورد ارزیابی قرار می گردند. پس از تعیین هویت به صورت کشت ذخیره در محیط کشت Skim milk Broth وارد می شوند و تا زمان استخراج DNA در دمای 70- فریز می گردند.

ب- ارزیابی مقاومت آنتی بیوتیکی سویه های جداسازی شده:

جهت بررسی حساسیت آنتی بیوتیکی از تست دیسک دیفیوژن آگار به روش کربی- بایر مطابق با استانداردClinical and laboratory standard Institute (CLSI) استفاده می گردد. به طور خلاصه سوسپانسیونی از کلنی های باکتری با کدورت معادل نیمه مک فارلند تهیه و پس از آغشته کردن سواپ استریل با سوسپانسیون، آن را به خوبی روی محیط مولر هینتون آگار پخش نموده، پس از قرار دادن دیسک های آنتی بیوتیک روی پلیت قطر هاله عدم رشد پس از 16-20 ساعت انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتی گراد با خط کش اندازه گیری و نتایج مطابق با دستورالعمل مربوطه ثبت خواهد شد در این آزمون از سویه کنترلATCC27853 Pseudomonas aeroginosaبه عنوان کنترل کیفی استفاده خواهد شد.

آنتی بیوتیک های مورد استفاده:

این آنتی بیوتیک ها شامل سیپروفلوکساسین ،ایمی پنم،آمیکاسین، جنتامایسین، سفتازیدیم، سفپیم ، آزترونام، مروپنم کلرامفنیکل ، پیراسیلین-تازوباکتام، کلسیتین،سفوپرازون  تعیین می شودکه از شرکتMAST .خریداری می گردند.

MIC: به روش ETest برای ایمی پنم و سفتازیدیم طبق توصیه CLSI انجام و تفسیر می‌گردد

ج-آنالیز مولکولی:

روش استخراج ; DNA استخراج DNA با استفاده از کیت های استخراج DNA کروموزومی شرکت کیا ژن انجام می گردد.

واکنش ;PCR شناسایی ژن های پمپ افلاکس Mex A، Mex B، ,Opr D,OprMبااستفاده از روش PCR صورت می گیرد و محصولات روی ژل الکترفورز شده و سپس تعدای از ژنهای OprD جهت تعیین توالی به شرکت کیا ژن ارسال خواهد شد. از پرایمرهای زیر نیز جهت تکثیر ژن های موردنظر استفاده خواهد شد.

پس از جمع آوری داده ها با روش آمار توصیفی یعنی تنظیم جدول فراوانی، رسم نمودار، تعیین شاخص درصد و با استفاده از نرم افزار SPSS تجزیه و تحلیل صورت می گیرد.

راهنمای عمومی اخلاق در پژوهشهای علوم پزشکی  

دارای آزمودنی انسانی  در جمهوری اسلامی ایران

3-پژوهش بر انسان فقط در صورتی توجیه‌پذیر است که منافع بالقوه‌ی آن برای هر فرد آزمودنی بیش‌تر از خطرهای آن باشد. در پژوهش‌های دارای ماهیت غیر درمانی، سطح آسیبی که آزمودنی در معرض آن قرار می‌گیرد نباید بیش‌تر از آن‌چه باشد که مردم عادی در زندگی روزمره‌ی خود با آن مواجه می‌شوند. حصول اطمینان از این امر برعهده‌ی طراحان، مجریان و همکاران پژوهش و تمامی شوراهای بررسی یا پایش‌کننده‌ی پژوهش از جمله کمیته‌ی اخلاق در پژوهش‌ است.

5-قبل از آغاز هر پژوهش پزشکی ، باید اقدامات اولیه جهت به حداقل رساندن زیان احتمالی وارده به آزمودنی‌ها و تامین سلامت آن‌ها انجام گیرد.

7-اگر در حین اجرای پژوهش مشخص شود که خطرات شرکت در این پژوهش برای آزمودنی‌ها بیش از فواید بالقوه‌ی آن است، باید آن پژوهش بلافاصله متوقف شود.

11- کمیته‌ی اخلاق در پژوهش علاوه بر بررسی و تصویب طرح‌نامه و دستورالعمل، این حق را دارد که طرح‌‌ها را در حین و بعد از اجرا را از نظر رعایت ملاحظات اخلاقی مورد پایش قرار دهد. اطلاعات و مدارکی که برای پایش از سوی کمیته‌ی اخلاق درخواست می‌شود، باید از سوی پژوهشگران در اختیار این کمیته گذاشته شود.

15- اگر در طول اجرای پژوهش تغییری در نحوه اجرای پژوهش داده شود یا اطلاعات جدیدی به دست آید که احتمال داشته باشد که بر تصمیم آزمودنی مبنی بر ادامه‌ی شرکت در پژوهش تاثیر گذار باشد، باید موضوع به اطلاع کمیته‌ی اخلاق رسانده شود و در صورت موافقت کمیته با ادامه‌ی پژوهش، مراتب به اطلاع آزمودنی رسانده شود و رضایت آگاهانه مجددا اخذ گردد.

20- در مواردی که آگاه کردن آزمودنی درباره‌ی جنبه‌ای از پژوهش باعث کاهش اعتبار پژوهش می شود، ضرورت اطلاع‌رسانی ناکامل از طرف پژوهشگر باید توسط کمیته‌ی اخلاق تأیید شود. بعد از رفع عامل این محدودیت، باید اطلاع‌رسانی کامل به آزمودنی انجام گیرد.

29- نحوه‌ی گزارش نتایج پژوهش باید ضامن حقوق مادی و معنوی تمامی اشخاص مرتبط با پژوهش، از جمله خود پژوهشگر یا پژوهشگران، آزمودنی‌ها و مؤسسه‌ی حمایت کننده‌ی پژوهش باشد

30- گزارش‌ها و مقالات حاصل از پژوهش‌هایی که مفاد این راهنما را نقض کرده‌اند، نباید برای انتشار پذیرفته شوند.

31- روش پژوهش نباید با ارزش‌های احتماعی، فرهنگی و دینی جامعه در تناقض باشد.

محدودیت ها: تهیه مواد و ابزار مورد نیاز برای آزمایش

راه حل: افزایش زمان انجام طرح

پمپ افلاکس ،سودوموناس آئروژینوزا، مقاومت آنتی بیوتیک

1. Safaei H FJ, Fazeli H, Vaez H, Isfahani B, Moghim S, et al. Efflux pump regulatory genes mutations in multidrug resistance Pseudomonas aeruginosa isolated from wound infections in Isfahan hospitals. Advanced Biomedical Research. 2014;3(1):1-5.
2. Yahya Dashtizadeh AM, Aliakbar Garzin. The prevalence of genetic and phenotypic assessment of efflux pumps and antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa clinical samples in a hospital burn patients Qutb al-Din Shirazi. Microbs world. 2014;2(19):118-27.
3. Radan M MR, Khorshidi A, Gilasi H, Norouzi Z, Beigi F, et al. Emerging Carbapenem-Resistant Pseudomonas aeruginosa Isolates Carrying blaIMP Among Burn Patients in Isfahan, Iran. Archives of Trauma Research. 2016;5(3):1-5.
4. Herman C FS, Luján AM, Moyano AJ, Sola C, Bocco JL, et al. Mucoidy, Quorum Sensing, Mismatch Repair and Antibiotic Resistance in Pseudomonas aeruginosa from Cystic Fibrosis Chronic Airways Infections. PLoS ONE. 2010;5(9):1-12.
5. Chatterjee M AC, Biswas L, Anil Kumar V, Gopi Mohan C, Biswas R,. Antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa and alternative therapeutic options,. Int J Med Microbiol. 2016;306(1):48-58.
6. Motaghi M NS. Outer membrane protein D gene in clinical isolatedes of pseudomonas aeroginosa and its role in antibiotics resistance. fasa university of medical science. 2015;5(4):501-5.
7. Rezaei F SH, BoromandiSh,Faghihzade S. Relation between resistance to antipseudomonal B-lactamas and ampC and mexC genes of pseudomonas aeroginosa. Iran journal pathology. 2016;11(1):47-53.
8. Valizadeh A SN, Zolfaghary M.R, MalekiA,Ghafourian S, Shakib P. Study of mutation frequency in PA3721 gene among producing and non producingESBls pseudomonas aeroginosa strains by PCR method. Scientific Journal of ilam university of medical science. 2012;20(2):28-43.
9. Doosti M HoFM, Ramazai A, Saini MR. Comparison of Conventional Reaction (PCR) for Specific Detection of Pseudomonas Aeruginosa. Journal of Isfahan Medical School. 2012;30(192):770-86.
10. teymouri. Efflux pump mechanisms in anti microbial resistance of pseudomonas aeroginosa2016.
11. Mohammadi M. Evaluation of clinical isolates of Pseudomonas aeroginosa producing Metallobeta lactamase IMP,VIM and SPM by PCR. Qazvin: Qazvin university of medical sience; 2014.
12. Morita Y TJ, Kawamura Y. MexXY. MexXY multidrug efflux system of Pseudomonas aeruginosa. Frontiers in Microbiology. 2012;3(408):1-13.
13. Blair JMA PL. How to Measure Export via Bacterial Multidrug Resistance Efflux Pumps. American society for microbiology. 2016;7(4):1-6.
14. SH.N.Peerayeh DE. Antibiotic efflux pumps. JAUMA. 2004;2(5):301-6.
15. Starr.L.M F, PooleK. Pentachlorophenol Induction of the Pseudomonas aeruginosa mexAB-oprM Efflux Operon: Involvement ofRepressorsNalC and MexR and the AntirepressorArmR. Pluseone. 2012;7(2):1-9.
16. Rachael Lynne Klinoski. PA3719-mediated regulation of the Mex AB,Opr M efflux system of pseudomonas aeroginosa. Canada: Queens university; 2007.
17. M sara, M sS. Role of efflux pumps in the antibiotic resistance of bacteria embedded in biofilm. lands bioscience. 2013;4(3):223-9.
18. Poonsuk K CR. Detection of the Mex Efflux Pumps in Pseudomonas Combined Resistance-Phenotypic Markers and Multiplex RT-PCR. scientific research. 2014;4:153-60.
19. Maryam Adabi MTT, Leila Arbabi,Mastane Afshar,Sara Fathizadeh,Sar Minaeian. Spread of Efflux Pump Overexpressing-Mediated Fluoroquinolone Resistance and Multidrug Resistance in Pseudomonas aeruginosa by using an Efflux Pump Inhibitor. Gross Mark. 2015;47(2):47-104.
20. Razie pourahmad PMT, Francoise Van Bambeke. study the expression of Mex AB-OprM pump genes in clinical isolates of pseudomonas aeroginosa using RT-PCR method. The Journal of Urmia university of medical science. 2014;25(2):87-96.
21. SalehiM H, Hoseini F. Quinolone resistance associated with efllux pumps mexAB-oprM in clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa. microbial world. 2014;6(4):290-198.
22. Hakimi F RN, Ghasemi MF. Mutations in nalC gene in ciprofloxacin resistant strains of Pseudomonas aeruginosa isolated from hospitals and laboratories of Guilan province in 2014-2015 years. Arak Medical University Journal. 2016;19(112):12-21.
23. Alice Verchère MD, Isabelle Broutin, Martin Picard. In vitro Investigation of the MexAB Efflux Pump From Pseudomonas aeruginosa. Journal of Visualized Experiments. 2014(84):1-6

24. Choudhury D GA, ChandaD.D,TalukdarA.D,Choudhury M.D, Paul D eta. Premature Termination of MexR Leads toOverexpression of MexAB-OprM Efflux Pump in Pseudomonas aeruginosa in a TertiaryReferral Hospital in India. PLOS ONE. 2016;10(1371):1-12.
25. Emami A ZM, Pirboneyh N,Rostampour S,Najafipour S. Genetic variations of OprD porin protein in imipenem resistant clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa in burn patients. JQUMS. 2016;19(6):30-6.
26. Arbestani MR RM, Yousefi Mashuf R,Yusefi Alikhani M, Mousavi M. Efflux pump ex AB-OprM & OprD of pseudomonas aeroginosa strains isolated from clinical samples using QRT-PCR. Archives of Iranian Medicin. 2015;18(2):102-8.
27. Amir Mozafari N FMJ, Habibi A,Kazemi R. Frequency and antibiotic resistance patterns in clinical strains of pseudomonas aeroginosa isolated from Tehran hospitals. Razi journal of medical sience. 2016;146(23):149-54.
28. Sacha P WP, Ojdana D, Hauschild T, Milewski R, Czaban S, et al. Expression of MexAB-OprMeffluxpump system and susceptibility to antibiotics of different Pseudomonas aeruginosa clones isolated from patients hospitalized in two intensive care units at University Hospital in Bialystok (northeastern Poland) between January 2002 and December 2009. APMIS. 2014;122(10):40-5.
29. Pourakbari B YS, Mahmoudi Sh,Keshavarz S,Mamishi S. Evaluation of efflux pumps gene expression in resistant Pseudomonas aeruginosa isolates in an Iranian referral hospital. Iranian Jiurnal of Microbiology. 2016;8(4):249-56.
30. Ibtesam Ghadban Auda Al-Grawi AkA-A, Noor Hashim Kareem, Sabah Abdul-Latif Belal. Occurrence of MexAB-OprM Efflux Pump Operon on Septicemic Pseudomonas Aeruginosa Chromosome. The Iraqi postgradute medical journal. 2012;11(1).
31. Azadeh RAHMANI-BADI AA-A, Tahereh FALSAFI. Association of MexAB-OprM with intrinsic resistance of Pseudomonas aeruginosa to aminoglycosides. Annals of Microbiology,. 2007;57(3):425-9.
32. Ranji N RTS. Role of Mex Z gene in ciprofloxacin resistance in pseudomonas aeroginosa isolates in Guilan province. The Journal of Urmia university of medical science. 2017;27(10):902-1

فرم اطلاعاتی جمع آوری نمونه

1. سن بیمار:
2. جنس بیمار: مرد0 زن0
3. بیمارستان: علی ابن ابیطالب0 خاتم الانبیا0 بوعلی0 چشم پزشکی0
4. بخش بستری: سرپایی0 داخلی0 جراحی0 زنان0 اطفال0 سوختگی0 ICU 0 CCU 0 NICU 0
5. نوع نمونه: خون0 ادرار0 مایع مفصلی0 ترشحات زخم0

لوله ونتیلاتور0 ترشحات چشم0 سایر موارد:

6. شماره نمونه: