تعیین فراوانی انگل کریپتوسپوریدیوم پارووم و کریپتوسپوریدیوم هومینیس درکودکان زیر ده سال با مدفوع اسهالی مراجعه کننده به بیمارستان کودکان علی اصغر و آزمایشگاه رفرانس شهر زاهدان با استفاده از ژن 18SrRNA با روش PCR-RFLP

 مرکز کنترل بهداشت استان

کریپتوسپوریدیوم تک یاخته انگل روده ای داخل سلولی-خارج سیتوپلاسمی اجباری متعلق به شاخه آپی کمپلکسا و خانواده کریپتوسپوریده (Apicomplexa: Cryptosporiidae) می باشد (1). کریپتوسپوریدیوم در مبتلایان به نقص سیستم ایمنی در بدن انتشار یافته و سایر ارگانهای خارج روده ای مانند ریه ها، مجاری صفراوی و پانکراس را مورد تهاجم قرار می دهد.

اولین بار تایزر در سال 1907 (Tyzzer, 1907) این موجودات متحرک میکروسکوپی را در موش مورد بررسی قرار داده و این تک یاخته را کریپتوسپوریدیوم موریس (C. muris) نامید. در گذشته کریپتوسپوریدیوم تنها به عنوان یک عامل مهم گاسترو آنتریت در دام های جوان (گوساله، بره و توله خوک) مورد توجه بوده است، اما امروزه با شناسائی نقش بیماری زائی این انگل در انسان آن را یکی از عوامل مهم بیماری های گوارشی (اسهال) مشترک بین انسان و دام می دانند.

این تک یاخته در سیر تکاملی خود دارای فرم مروزوئیت و اووسیست است. فرم فعال یا مروزوئیت، در سلول های اپی تلیال روده، در داخل حفره واکوئل مانندی موسوم به پارازیتوفوروس (Parasitophorous vacuole) زندگی کرده و تکثیر می یابند. اووسیست (فرم مقاوم و عفونی زا بوده که همراه مدفوع دفع می شود. اووسیست های کروی شکل، حاوی 4 اسپوروزوئیت هلالی شکل می باشند. اووسیست ها 6-4 میکرون قطر داشته و با رنگ ذیل-نلسون یا اسید-فاست به رنگ قرمز در می آیند. این انگل از آنجا که در بیماران نقص سیستم ایمنی،تمایل به ماندگاری دارد،موجب اسهال مزمن در این بیماران می شود و از این نظر مورد توجه محققان قرار دارد .

کریپتوسپویدیوم ،زئنوتیک است و افرادی که با دام ها تماس دارند در خطر ابتلا به آن هستند.کودکان با سو تغذیه نیز در معرض ابتلا به اسهال مزمن با این انگل هستند.عفونت ماهها و حتی سالها در افراد با نقص اکتسابی سیستم ایمنی و یا نقص مادرزادی آن باقی می ماند و حتی می تواند به سمت کبد و صفرا و یا لوله های پانکراس گسترده شود.

با ظهور پاندمی AIDS در دهه 1960 این تک یاخته به عنوان یکی از عوامل اسهال کودکان اهمیت جهانی یافت این بیماری در افراد دارای سیستم ایمنی ناکارآمد، موجب اسهال های شدید و مزمن شده که در صورت عدم درمان، می تواند موجب مرگ بیمار شود (3)

امروزه حضور این تک یاخته در تمامی کشورهای جهان در افراد سالم و در افراد با نقص سیستم ایمنی به اثبات رسیده است و کودکان جنبه های مختلفی از عفونت کریپتوسپوریودیوزیس را میتوانند داشته باشند که نشان میدهد ایمنی ناشی از این انگل پایدار نیست (5،4)

کریپتوسپوریدیوم 25%موارد اسهال در دنیا را به خود اختصاص داده است و انگلی جهان شمول است. کودکان نیزبه علت پایین بودن ایمنی شان در صورت آلودگی، به اسهال های شدیدی مبتلا میشوند که اغلب خود محدود شونده است، چندین گزارش نشان میدهد که اسهال کریپتوسپوریدیایی در کودکان با سو تغذیه تمایل به ماندگاری دارد.مشکل ایجاد اسهال پایدار ،دهیدراتاسیون و سو جذب در این کودکان است.همچنین مطالعات عده ای از محققین نشان داده است که ارتباطی قوی ،بین سن و ایجاد شدن اسهال وجود دارد.(2) ولی با توجه به وضعیت تغذیه، بهداشت و دیگر عوامل محیطی تاثیرگذار بر ایمنی کودک، نیاز به درمان در گروهی از آنها دیده میشود، علاوه بر این، اپیدمیهای متعدد این بیماری موجب اهمیت بیشتر این تک یاخته و بیماری مرتبط با آن شده است(6،7)

با توجه به اینکه در کنترل و پیشگیری بیماری های عفونی تشخیص نقش مهمی دارد ،لذا شناسایی دقیق کریپتوسپوریدیوم در نمونه مدفوع کودکان ،جهت درمان و کنترل بیماری حائز اهمیت می باشد .

روش های معمول تشخیص این انگل، تهیه اسمیر توسط روش مستقیم، یا روش تغلیظی و سپس رنگ آمیزی و مشاهده اسمیر با روش ذیل نلسون اصلاح شده(MZN) و مشاهده اووسیست آن می باشد(8،9)باتوجه به این مسئله که میکروارگانیسم های دیگر اسیدفست نیز در مدفوع وجود دارند که از نظر اندازه مشابه کریپتوسپوریدیوم هستند، لذا تشخیص این تک یاخته به راحتی امکان پذیر نمی باشد. از جمله این عوامل اسید فست می توان به مخمرها، گرده های گیاهان و سایر تک یاخته ها مانند سیکلوسپورا اشاره نمود(8)همچنین ضرورت وجود حداقل تعداد 50/000-500/000 اووسیت در هر گرم مدفوع جهت تشخیص توسط روش میکروسکوپی، سبب شده تا محققان به دنبال روش های تشخیصی بهتری، باشند که بتواند تعداد کمتر انگل را در نمونه تشخیص دهند (10)تشخیص گونه و ژنوتیپ عامل بیماری درشناخت و قطع چرخه انتقال ضرورت دارد که روش میکروسکوپی قادر به انجام آن نیست(11،12)امروزه روشهای مولکولی جهت تشخیص دقیق بسیاری از بیماری ها استفاده می شوند . (13-14)

در دو دهه اخیر برای تشخیص گونه و سویه های کریپتوسپوریدیوم استفاده از روشهای مولکولی رایج شد.و با توجه به توانایی PCR در تفریق و تمایز ژنوتایپ های عامل بیماری ،آن را روش مفیدی در بررسی های علمی معرفی کردند(15)

اهمیت این بیماری در این است که هنوز روش درمانی موثری برای مقابله با آن شناخته نشده است و درمان علامتی می باشد و از طرفی به دلیل کوچکی ومقاومت زیاد اووسیست های انگل در برابر مواد فیزیکوشیمیایی راه اساسی برای از بین بردن آنها توصیه نگردیده است بعلاوه در مرگ ومیر حاصل از اسهال کریپتوسپوریدیایی در مبتلایان به نقص های ایمنی به ویژه در مبتلایان به ایدز و اطفالی که دچار انواع لوسمی بودند در سالهای اخیر رو به افزایش بوده است.حال با توجه به موارد ذکر شده از آنجا که از چگونگی شیوع این بیماری و میزان مبتلایان انسانی در سالهای اخیر در شهرستان زاهدان اطلاعاتی در دست نبود بر آن شدیم تا این تحقیق صورت گیرد.هدف از انجام این مطالعه تعیین گونه های شایع کریپتوسپوریدیوم در کودکان با مدفوع اسهالی زیر 10 سال شهر زاهدان با استفاده از روش PCR-RFLP و از طریق تکثیر و مطالعه ژن 18srRNA است.

دانشگاه علوم پزشکی زاهدان

فراوانی انگل کریپتوسپوریدیوم در کودکان اسهالی زیر ده سال چگونه است؟

توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم پارووم در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب سن (2 > ، 6 > 2،10 > 6) چگونه است؟

توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم هومی نیس در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب سن (2 > ، 6 > 2،10 > 6) چگونه است؟

توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم پارووم در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب جنس چگونه است؟

توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم هومی نیس در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب جنس چگونه است؟

توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم پارووم در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب منبع آب آشامیدنی چگونه است؟

توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم هومی نیس در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب منبع آب آشامیدنی چگونه است؟

تعیین فراوانی انگل کریپتوسپوریدیوم پارووم و کریپتوسپوریدیوم هومی نیس درکودکان زیر ده سال با مدفوع اسهالی مراجعه کننده به بیمارستان کودکان علی اصغر و آزمایشگاه رفرانس شهر زاهدان با استفاده از ژن 18SrRNA  با روش  PCR-RFLP

تعیین فراوانی انگل کریپتوسپوریدیوم در کودکان اسهالی زیر ده سال

تعیین توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم پارووم در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب سن (2 > ، 6 > 2،10 > 6)

تعیین توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم هومی نیس در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب سن (2 > ، 6 > 2،10 > 6)

تعیین توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم پارووم در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب جنس

تعیین توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم هومی نیس در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب جنس

تعیین توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم پارووم در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب منبع آب آشامیدنی

تعیین توزیع فراوانی گونه کریپتوسپوریدیوم هومی نیس در کودکان اسهالی زیر ده سال بر حسب منبع آب آشامیدنی

دانشگاه علوم پزشکی زاهدان

مرکز کنترل بهداشت استان

کریپتوسپوریدیوم: تک یاخته انگل روده ای داخل سلولی-خارج سیتوپلاسمی اجباری متعلق به شاخه آپی کمپلکسا و خانواده کریپتوسپوریده میباشد.

این مطالعه مقطعی( توصیفی-تحلیلی) می باشد.

کودکان با مدفوع اسهالی کمتر از 10 سال که به ازمایشگاه رفرانس استان و بیمارستان کودکان علی اصغر مراجعه میکنند.

 حجم نمونه n=764

                                                                                                                                                                                  z₁₋ = 1.92

p = 4.7%

α = 0.05

1₋p = 95.333

d = 0.015

آسان و در دسترس از مراجعه کنندگان به ازمایشگاه و بیمارستان

جمع آوری داده ها با مشاهده و معاینه انگل با روش مربوطه و استفاده از فرم اطلاعات

الف) هماهنگی با معاونت محترم پژوهشی و کسب مجوز رسمی از ایشان جهت انجام نمونه گیری در آزمایشگاه رفرانس استان و بیمارستان علی اصغر زاهدان

ب) تهیه فرم ثبت مشخصات مربوط به هر نمونه

پ) جمع آوری نمونه بصورت روزانه

ت) تغلیظ نمونه ها به رسوبی آب-اتیل استات (مشابه فرمالین-اتر ولی به جهت اینکه فرمالین مهار کننده PCR است از آب مقطر به جای فرمالین استفاده می شود) و بررسی میکروسکوپی از نظر وجود اووسیست های کریپتوسپوریدیوم (پس از رنگ آمیزی ذیل نسلون اسید فاست اصلاح شده) و کیست های ژیاردیا (بعنوان تک یاخته همراه به عنوان یک متغیر) (پس از رنگ آمیزی به روش تک رنگی ید لوگل)

ث) نگهداری تمام نمونه ها در دی کرومات پتاسیم 5/2 درصد در دمای 4 درجه سانتی گراد تا زمان انجام مطالعات ملکولی. دی کرومات پتاسیم به منظور اسپرولاسیون اووسیست تک یاخته های روده مورد استفاده قرار می گیرد ولی آسیبی هم به کیست های ژیاردیا وارد نمی کند و می تواند به عنوان نگهدارنده تا زمان انجام کار ملکولی مورد استفاده قرار گیرد.

ج) استخراج DNA با استفاده از کیت استخراج (AccuPrep® stool DNA extraction kit Bioneer, Daejeon, South Korea) طبق دستورالعمل شرکت سازنده کیت (قبل از کاربرد کیت، ابتدا پروسه منجمد کردن و فریز کردن متناوب جهت شکستن دیواره سخت اووسیست بر روی نمونه ها انجام خواهد گرفت (Freezing and Thawing) DNA استخراج شده تا زمان انجام واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR) در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری خواهد شد(Hatam-Nahavandi et al., 2011, 2016) .

• در مورد کریپتوسپوریدیوم، طی واکنش زنجیره ای پلی مراز طی دو مرحله (Nested-PCR) ژن 18S rRNA ایزوله های کریپتوسپوریدیوم تکثیر خواهند شد. ابتدا با استفاده از پرایمرهای External Forward (EF) و External Reverse 1 (ER) ، قطعه bp 1325 تکثیر خواهد شد (جدول 1). سپس با استفاده از جفت پرایمرهای Internal Forward 2 (IF) و Internal Reverse (IR) ، قطعه bp 830 تکثیر خواهد شد (جدول 1) (Feng et al., 2007; Xiao et al., 1999). شرایط انجام واکنشهای زنجیره ای پلیمراز قبلا شرح داد ه شده اند (Helmy et al., 2013; Feng et al., 2007; Xiao et al., 1999).

یک نمونه بعنوان کنترل مثبت و آب مقطر به عنوان کنترل منفی استفاده خواهد گردید.

ح) جهت برش قطعه 830 جفت بازی از آنزیم های محدودالاثر (RFLP) SspI و VspI استفاده خواهد شد (جدول 2). شرایط انجام واکنش قبلا شرح داده شده است (Helmy et al., 2013; Feng et al., 2007). محصولات برش آنزیمی بر روی ژل آگارز 5/1 درصد ران، و در نهایت با نور UV مشاهده و بررسی خواهند شد. سایز قطعات حاصل از برش آنزیمی و گونه های مربوط به هر الگوی برش آنزیمی در جدول 2 آورده شده اند (جدول 2) (Xiao et al., 1999).

همچنین به منظور تایید نتایج RFLP برخی محصولات PCR ثانویه تعین توالی خواهد شد.

جدول 1 – پرایمرهای مربوط به واکنش دو مرحله ای پلیمراز استفاده شده در این مطالعه

جدول 2 – سایز قطعات حاصل از برش و گونه مورد شناسایی

برای توصیف داده ها از امار توصیفی شامل جداول و نمودارهای اماری و توزیعهای فراوانی استفاده خواهد شد. برای تحلیل داده ها از ازمونهای مجذور کای و یا ازمون دقیق فیشر استفاده می شود. برای ارائه میزان ارتباط مقدار نسبت شانس نیز گزارش خواهد شد. سطح معنی داری 05/0 در نظر گرفته می شود.

راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های علوم پزشکی 

دارای آزمودنی انسانی  در جمهوری اسلامی ایران

مقدمه

در طبابت باید از پزشکی مبتنی بر شواهد استفاده شود. این شواهد از راه پژوهش به‌دست می‌آیند. بنابراین پیشرفت دانش پزشکی بر پژوهش مبتنی است.  بخش بزرگی از پژوهش‌ها برای رسیدن به نتایج معتبر، در نهایت باید بر روی انسان به انجام برسند.

راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های دارای آزمودنی انسانی در جمهوری اسلامی ایران، دربردارنده‌ی اصول و مقررات اخلاقی‎ است که تمامی پژوهشگرانی که اقدام به پژوهش بر روی آزمودنی‌های انسانی (که شامل داده‌ها یا مواد بدنی به‌دست آمده از انسان‌ها نیز می‌شود) می‌کنند، و تمامی مدیران پژوهشی و کمیته‌های اخلاق در پژوهش کشور، باید آن را مبنا و راهنمای عملکرد خود قرار دهند و تمامی تلاش خود را برای تضمین رعایت حداکثری آن در عملکرد پژوهشی خود - و تا جای ممکن دیگر پژوهشگران - به عمل آورند. این راهنما بر اساس اصول اخلاقی، به‌ویژه کرامت انسانی، مبانییی و ارزش‌های اسلامی و ملی تدوین یافته است. تقدم و تأخر بندهای این راهنما، بر اساس اهمیت نیست. این راهنما باید به‌صورت یک کل واحد دیده شود و هیچ‌کدام از بندهای آن نباید بدون توجه کافی به مقدمه و سایر بندهای مرتبط تفسیر شود. هر پژوهشگر باید علاوه بر این راهنما، از دیگر قوانین و راهنماهای مرتبط که از سوی مراجع رسمی ابلاغ شده‌اند مانند راهنماهای اختصاصی اخلاق در پژوهش کشور  آگاهی داشته باشد و آن‌ها را رعایت کند.

1. هدف اصلی هر پژوهش‌باید ارتقای سلامت انسان‌ها توأم با رعایت کرامت و حقوق ایشان باشد.
2. در پژوهش بر آزمودنی انسانی، سلامت و ایمنی فرد فرد آزمودنی‎ها در طول و بعد از اجرای پژوهش، بر تمامی مصالح دیگر اولویت دارد. هر پژوهشی که بر روی آزمودنی انسانی انجام می‌گیرد، باید توسط افرادی طراحی و اجرا شود که تخصص و مهارت بالینی لازم و مرتبط را داشته باشند. در کارآزمایی‌های بالینی  بر روی بیماران یا داوطلب‌های سالم نظارت پزشک دارای مهارت و دانش متناسب الزامی است.
3. پژوهش بر انسان فقط در صورتی توجیه‌پذیر است که منافع بالقوه‌ی آن برای هر فرد آزمودنی بیش‌تر از خطرهای  آن باشد. در پژوهش‌های دارای ماهیت غیر درمانی، سطح آسیبی که آزمودنی در معرض آن قرار می‌گیرد نباید بیش‌تر از آن‌چه باشد که مردم عادی در زندگی روزمره‌ی خود با آن مواجه می‌شوند. حصول اطمینان از این امر برعهده‌ی طراحان، مجریان و همکاران پژوهش و تمامی شوراهای بررسی یا پایش‌کننده‌ی پژوهش از جمله کمیته‌ی اخلاق در پژوهش‌ است.
4. مواردی از قبیل سرعت، سهولت کار، راحتی پژوهشگر، هزینه‌ی پایین‌تر و/ یا صرفاً عملی بودن آن به هیچ وجه نباید موجب قرار دادن آزمودنی در معرض خطر یا زیان افزوده یا تحمیل هر گونه محدودیت اختیار اضافی به وی شود.
5. قبل از آغاز هر پژوهش پزشکی ، باید اقدامات  اولیه جهت به حداقل رساندن زیان احتمالی وارده به آزمودنی‌ها و تامین سلامت آن‌ها انجام گیرد.
6. در کارآزمایی های بالینی دوسوکور  که آزمودنی از ماهیت دارویی یا مداخله‌ای که برای وی تجویز شده بی‌اطلاع است، پژوهشگر باید تدابیر لازم جهت کمک‌رسانی به آزمودنی در صورت لزوم و در شرایط اضطراری را تدارک ببیند.
7. اگر در حین اجرای پژوهش مشخص شود که خطرات شرکت در این پژوهش برای آزمودنی‌ها بیش از فواید بالقوه‌ی آن است، باید آن پژوهش بلافاصله متوقف شود.
8. طراحی و اجرای پژوهش‌هایی که بر روی آزمودنی انسانی انجام می‌گیرند، باید منطبق با اصول علمی پذیرفته شده بر اساس دانش روز و مبتنی بر مرور کامل منابع علمی موجود و پژوهش‌های قبلی آزمایشگاهی، و  در صورت لزوم،  حیوانی مناسب باشد. مطالعات حیوانی باید با رعایت کامل اصول اخلاقی کار با حیوانات آزمایشگاهی انجام شوند.
9. در پژوهش‌های پزشکی که ممکن است به محیط زیست آسیب برسانند، باید احتیاط‌های لازم در جهت حفظ و نگهداری و عدم آسیب رسانی به محیط ریست انجام گیرد.
10. هر پژوهشی باید بر اساس و منطبق بر یک طرح‌نامه (پروپوزال) به انجام برسد. در کارآزمایی‌های بالینی باید علاوه بر طرح نامه، دستورالعمل (پروتکل) نیز تهیه و ارائه شود. طرح‌نامه و دستورالعمل باید شامل تمامی اجزای ضروری باشد. از جمله بخش ملاحظات اخلاقی، اطلاعات مربوط به بودجه، حمایت کننده‌ها، وابستگی‌های سازمانی، موارد تعارض منافع بالقوه‌ی دیگر، مشوق‌های شرکت کنندگان، پیش بینی درمان و یا جبران خسارت افراد آسیب دیده در پژوهش .در مواردی که لازم است رضایت‌نامه‌ی آگاهانه به‌صورت کتبی اخذ شود، فرم رضایت‌نامه باید تدوین و به طرح‌نامه پیوست شده باشد. پیش از تصویب یا تأیید طرح‌نامه از سوی کمیته‌ی مستقل اخلاق در پژوهش، نباید اجرای پژوهش شروع شود.
11. کمیته‌ی اخلاق در پژوهش علاوه بر بررسی و تصویب طرح‌نامه و دستورالعمل، این حق را دارد که طرح‌‌ها را در حین و بعد از اجرا را از نظر رعایت ملاحظات اخلاقی مورد پایش قرار دهد. اطلاعات و مدارکی که برای پایش از سوی کمیته‌ی اخلاق درخواست می‌شود، باید از سوی پژوهشگران در اختیار این کمیته گذاشته شود.    
12. انتخاب آزمودنی‌های بالقوه از میان جمعیت بیماران یا هر گروه جمعیتی دیگر، باید منصفانه باشد، به‌نحوی که توزیع بارها (خطرات یا هزینه‌ها) و منافع شرکت در پژوهش، در آن جمعیت و کل جامعه، تبعیض‌آمیز نباشد.
13. کسب رضایت آگاهانه و آزادانه در هر پژوهشی که بر روی آزمودنی انسانی اجرا می‌شود، الزامی است. این رضایت باید به شکل کتبی باشد. در مواردی که اخذ رضایت آگاهانه‌ی کتبی غیر ممکن یا قابل صرف‌نظر باشد، باید موضوع با ذکر دلایل به کمیته‌ی اخلاق منتقل شود. در صورت تأیید کمیته‌ی اخلاق، اخذ رضایت کتبی قابل تعویق یا تبدیل به رضایت شفاهی یا ضمنی خواهد بود.
14. اگر در طول اجرای پژوهش تغییری در نحوه اجرای پژوهش داده شود یا اطلاعات جدیدی به دست آید که احتمال داشته باشد که بر تصمیم آزمودنی مبنی بر ادامه‌ی شرکت در پژوهش تاثیر گذار باشد، باید موضوع به اطلاع کمیته‌ی اخلاق رسانده شود و در صورت موافقت کمیته با ادامه‌ی پژوهش، مراتب به اطلاع آزمودنی رسانده شود و رضایت آگاهانه مجددا اخذ گردد.
15. پژوهشگر باید از آگاهانه بودن رضایت اخذشده اطمینان حاصل کند. برای این منظور، در تمامی پژوهش‌های پزشکی، اعم از درمانی و غیردرمانی، پژوهشگر موظف است فرد در نظر گرفته شده به‌عنوان آزمودنی را از تمامی اطلاعاتی که می‌توانند در تصمیم‌گیری او مؤثر باشند، به‌نحو مناسبی آگاه سازد. این اطلاعات مشتملند بر: عنوان و اهداف پژوهش، طول مدت پژوهش، روشی که قرار است به‌کار گرفته شود (شامل احتمال تخصیص تصادفی به گروه‌مورد یا شاهد)، منابع تأمین بودجه، هر گونه تعارض منافع احتمالی، وابستگی  سازمانی پژوهشگر، و فواید و زیان‌هایی که انتظار می‌رود مطالعه در بر داشته باشد. هم‌چنین، هر آزمودنی باید بداند که می‌تواند هر لحظه که بخواهد از مطالعه خارج شود و باید درباره‌ی خطرات و زیان‌های بالقوه‌ی ناشی از ترک زودرس پژوهش آگاه و پشتیبانی شود. پژوهشگر هم‌چنین باید به تمامی سؤالات و دغدغه‌های این افراد، با حوصله و دقت پاسخ بدهد. این موارد باید در رضایت‌نامه‌ی آگاهانه منعکس شود.
16. پژوهشگر باید از آزادانه بودن رضایت اخذ شده اطمینان حاصل کند. رفتارهایی که به هر نحوی متضمن تهدید، اغوا، فریب و یا اجبار باشد موجب ابطال رضایت آزمودنی می‌شود. به فرد باید فرصت کافی برای مشاوره با افرادی که مایل باشد – نظیر اعضای فامیل یا پزشک خانواده - داده شود. هم‌چنین، در پژوهش‌هایی که پژوهشگر مقام سازمانی بالاتری نسبت به آزمودنی  داشته باشد، دلایل این شیوه‌ی جذب آزمودنی، باید توسط کمیته‌ی اخلاق  تأیید شود، در این موارد شخص ثالث و معتمدی باید رضایت را دریافت کند.
17. پژوهشگر ارشد مسؤول مستقیم ارائه‌ی اطلاعات کافی و به زبان قابل فهم برای آزمودنی ، اطمینان از درک اطلاعات ارائه شده، و اخذ رضایت آگاهانه است. در مواردی که بنا به‌دلیلی، نظیر زیاد بودن تعداد آزمودنی‌ها، این اطلاع‌رسانی از طریق شخص دیگری انجام می‌گیرد، این پژوهشگر ارشد است که مسؤول انتخاب فردی آگاه و مناسب برای این کار و حصول اطمینان از تأمین شرایط مذکور در این بند است.
18. در پژوهش‌هایی که از مواد بدنی (شامل بافت‌ها و مایعات بدن انسان)  یا داده‌هایی استفاده می‌شود که هویت صاحبان آن‌ها معلوم یا قابل کشف و ردیابی است، باید برای جمع‌آوری، تحلیل، ذخیره‎سازی و /یا استفاده‌ی مجدد از آن‌ها رضایت آگاهانه گرفته شود. در مواردی که اخذ رضایت غیرممکن باشد یا اعتبار پژوهش را خدشه‌دار کند، می‌توان در صورت بررسی مورد و تصویب کمیته‌ی اخلاق ، از داده‌ها یا مواد بدنی ذخیره شده، بدون اخذ رضایت آگاهانه استفاده کرد.
19. عدم قبول شرکت در پژوهش، یا ادامه ندادن به همکاری، نباید هیچ‌گونه تأثیری بر خدمات درمانی که در همان مؤسسه – نظیر بیمارستان – به فرد ارائه می‌شود، داشته باشد. این موضوع باید در فرایند اخذ رضایت آگاهانه، به آزمودنی اطلاع داده شود.
20. در مواردی که آگاه کردن آزمودنی درباره‌ی جنبه‌ای از پژوهش باعث کاهش اعتبار پژوهش می شود، ضرورت اطلاع‌رسانی ناکامل از طرف پژوهشگر باید توسط کمیته‌ی اخلاق تأیید شود. بعد از رفع عامل این محدودیت، باید اطلاع‌رسانی کامل به آزمودنی انجام گیرد.
21. برخی از افراد یا گروه‌هایی از مردم، نظیر ناتوانان ذهنی، کودکان، جنین و نوزاد، بیماران اورژانسی، یا زندانیان‌که ممکن است به‌عنوان آزمودنی در پژوهش شرکت کنند، نمی‌توانند برای دادن رضایت، آگاهی یا آزادی لازم را داشته باشند. این افراد یا گروه‌ها آسیب‌پذیر دانسته می‌شوند و باید مورد حفاظت ویژه قرار گیرند.
22. از گروه‌های آسیب‌پذیر هیچ‌گاه نباید (به دلایلی چون سهولت دسترسی ) به عناون آزمودنی ترجیحی استفاده شود. پژوهش پزشکی با استفاده از گروه‌ها یا جوامع آسیب‌پذیر تنها در صورتی موجه است که با هدف پاسخگویی به نیازهای سلامت و اولویت‌های همان گروه یا جامعه طراحی و اجرا شود و احتمال معقولی وجود داشته باشد که همان گروه یا جامعه از نتایج آن پژوهش سود خواهد برد.
23. در پژوهش بر روی گروه‌های آسیب‌پذیر، وظیفه‌ی اخذ رضایت آگاهانه مرتفع نمی‌شود. در مورد افرادی که سرپرست قانونی دارند، پژوهشگر موظف است که علاوه بر اخذ رضایت آگاهانه از سرپرست قانونی، متناسب با ظرفیت خود فرد، از وی رضایت آگاهانه اخذ کند. در هر حال، باید به امتناع این افراد از شرکت در پژوهش احترام گذاشته شود.
24. اگر در حین اجرای پژوهش، آزمودنی دارای ظرفیت، ظرفیت خود را از دست بدهد یا آزمودنی فاقد ظرفیت، واجد ظرفیت شود، باید با توجه به تغییر حاصله، رضایت آگاهانه برای ادامه‌ی پژوهش از سرپرست قانونی یا خود فرد اخذ شود. 
25. پژوهشگر مسؤول رعایت اصل رازداری و حفظ اسرار آزمودنی‌ها و اتخاذ تدابیر مناسب برای جلوگیری از انتشار آن است. هم‌چنین، پژوهشگر موظف است که از رعایت حریم خصوصی آزمودنی‌ها در طول پژوهش اطمینان حاصل کند. هرگونه انتشار داده‌ها یا اطلاعات به‌دست آمده از بیماران باید بر اساس رضایت آگاهانه انجام گیرد.
26. هر نوع آسیب یا خسارت ناشی از شرکت در پژوهش باید بر طبق قوانین مصوب جبران خسارت شود. این امر باید در هنگام طراحی پژوهش لحاظ شده باشد. نحوه‌ی تحقق این امر ترجیحاً به‌صورت پوشش بیمه‌ای نامشروط باشد.
27. در پایان پژوهش، هر فردی که به‌عنوان آزمودنی به آن مطالعه وارد شده است، این حق را دارد که درباره‌ی نتایج مطالعه آگاه شود و از مداخلات یا روش‌هایی که سودمندی‌شان در آن مطالعه نشان داده شده است، بهره‌مند شود.
28. پژوهشگران موظفند که نتایج پژوهش‌های خود را صادقانه ، دقیق، و کامل منتشر کنند. نتایج، اعم از منفی یا مثبت، و نیز منابع تأمین بودجه، وابستگی  سازمانی، و تعارض منافع – در صورت وجود – باید کاملاً آشکارسازی شوند. پژوهشگران نباید در هنگام عقد قرارداد انجام پژوهش، هیچ  گونه شرطی را مبنی بر حذف یا عدم انتشار یافته‌هایی که از نظر حمایت کننده‌ی پژوهش  مطلوب نیست، بپذیرند.
29. نحوه‌ی گزارش نتایج پژوهش باید ضامن حقوق مادی و معنوی تمامی اشخاص مرتبط با پژوهش، از جمله خود پژوهشگر یا پژوهشگران، آزمودنی‌ها و مؤسسه‌ی حمایت کننده‌ی  پژوهش باشد.
30. گزارش‌ها و مقالات حاصل از پژوهش‌هایی که مفاد این راهنما را نقض کرده‌اند، نباید برای انتشار پذیرفته شوند.
31. روش پژوهش نباید با ارزش‌های احتماعی، فرهنگی و دینی  جامعه در تناقض باشد.

عنوان دفترچه:راهنمای اخلاقی پژوهش بر گروه‌های آسیب‌پذیردر جمهوری اسلامی ایران

فصل دوم: نوزادان و کودکان

1. در این راهنما دوره‌ی نوزادی از بدو تولد تا پایان 28 روزگی در نظر گرفته می‌شود. دوره‌ی کودکی نیز به سنینی اطلاق می شود که پس از نوزادی آغاز و تا پایان 18 سالگی ادامه می‌یابد. هم‌چنین، سرپرست قانونی به ولی، قیم، یا فرد بزرگسال دیگری اطلاق می‌شود که بر طبق قانون، سرپرستی کودک را بر عهده دارد.

2- هدف از پژوهش باید پیشبرد دانش در رابطه با سلامت نوزادان و کودکان یا ارتقای سلامت و مراقبت از این گروه باشد.

3- در نوزادان باید رضایت کتبی هم از پدر و هم از مادر نوزاد گرفته شود. در صورت عدم دسترسی به آن‌ها یا فقدان ظرفیت تصمیم‌گیری درهریک از والدین، رضایت از یکی از آن‌ها کفایت می‌کند. در صورت عدم دسترسی یا فقدان ظرفیت در هر دو والد، رضایت سرپرست قانونی واجد صلاحیت برای انجام پژوهش‌های درمانی لازم است، اما در پژوهش‌های غیردرمانی انجام پژوهش‌ها در چنین شرایطی ممنوع است.

4- کودکان از نظر دارا بودن ظرفیت برای دادن رضایت به سه گروه سنی تقسیم می‌شوند:

زیر 7 سال، 7 تا 15 سال، و بالای 15سال.

1-4- در کودکان زیر 7 سال: باید رضایت کتبی هم از پدر وهم از مادر نوزاد گرفته شود. در صورت عدم دسترسی به یکی از آن‌ها یا فقدان ظرفیت تصمیم‌گیری درهریک از والدین، رضایت از یکی از آن‌ها کفایت می‌کند. در صورت عدم دسترسی یا فقدان ظرفیت در هر دو والد، رضایت سرپرست قانونی واجد صلاحیت برای انجام پژوهش‌های درمانی لازم است، اما در پژوهش‌های غیردرمانی انجام پژوهش‌ها در چنین شرایطی ممنوع است.

2-4- در کودکان 7 تا 15 سال تمام، باید رضایت آگاهانه‌ی کتبی از سرپرست قانونی گرفته شود. هم‌چنین، باید متناسب با سطح درک و شناخت کودک، موافقت آگاهانه‌ی وی نیز اخذ شود. کودک حق دارد که اطلاعات لازم را در حد توانایی فهم خود دریافت کند، نظر خود را بیان کند و تصمیم بگیرد. روش‌های مورد استفاده برای ارائه‌ی اطلاعات و اخذ رضایت، باید متناسب با سن و قدرت فهم کودک باشد

3-4- در کودکان بالای 15 سال، رضایت آگاهانه‌ی کتبی باید هم از سرپرست قانونی و هم از کودک اخذ شود.

5- در مورد کودکانی که بر طبق نظر مراجع قضایی حکم رشد گرفته‌اند، اخذ رضایت از خود فرد ضروری و کافی است.

6- اگر سن سرپرست قانونی کم‌تر از 18 سال باشد، تنها در صورتی می تواند به نیابت از کودک رضایت دهد که ظرفیت تصمیم‌گیری در ایشان محرز شود.

7- پژوهش بر نوزادان یا کودکان تنها در صورتی باید انجام گیرد که انجام آن پژوهش بر روی سنین بالاتر امکان‌پذیر نباشد یا توجیه اخلاقی برای انجام آن پژوهش بر روی کودکان وجود داشته باشد.

8- از حیث برخی از ملاحظات اخلاق در پژوهش، نوزادان به سه گروه تقسیم می‌شوند:

1-8- نوزادانی که از قابلیت زنده ماندن برخوردارند.

2-8- نوزادانی که زنده ماندن آن‌ها مورد تردید است.

3-8- نوزادانی که از قابلیت زنده ماندن برخوردار نیستند.

9- در نوزادانی که از قابلیت زنده ماندن برخوردار نیستند یا زنده‌ماندن آن‌ها مورد تردید است، هر گونه تصمیم‌گیری در مورد احیا یا عدم احیای قلبی - عروقی نوزاد، استفاده از ونتیلاتور، تداوم یا قطع استفاده از ونتیلاتور باید تنها بر اساس منافع سلامت خود نوزاد انجام گیرد و این تصمیمات تحت تأثیر شرکت احتمالی نوزاد در پژوهش قرار نگیرد.

10- نوزادانی که زنده ماندن یا زنده‌نماندن آن‌ها مشخص نیست (مشکوک از نظر قابلیت احیا شدن) در پژوهش شرکت داده نمی‌شوند، مگر این‌که اطمینان حاصل شود که :

1-10- شرکت نوزاد در پژوهش منجر به افزایش احتمال زنده ماندن او می‌شود و تمامی خطرات احتمالی در حداقل ممکن هستند.

2-10- هدف از پژوهش دستیابی به اطلاعات پزشکی مهم است که از روش‌های دیگر قابل دسترسی نیست و هیچ‌گونه خطر بیش‌تری در نتیجه‌ی شرکت نوزاد در پژوهش برای وی به‌وجود نمی‌آید.

11- پژوهش‌هایی که مستقیماً سودی به کودکان و نوزادان شرکت‌کننده نرساند، در صورتی که باعث ایجاد منافع برای گروه کودکان و نوزادان شود اخلاقی محسوب می‌شود. البته با این شرط که ضرری را متوجه آزمودنی‌ها نکند.

12- در پژوهش‌های درمانی، نسبت فایده به خطرات مورد انتظار برای خود آزمودنی‌ها باید به‌گونه‌ای باشد که انجام پژوهش را بر اساس منافع آزمودنی‌ها توجیه کند.

13- ارزیابی خطر باید توسط تمامی افراد درگیر در پژوهش صورت گیرد که شامل سرپرستان قانونی، محققان، متخصصین درگیر، کمیته‌ی اخلاق در پژوهش و خود کودک (در صورت امکان) می‌شود.

14- در ارزیابی خطرات ناشی از پژوهش، باید توجه داشت که برخی از مداخله‌هایی که در بزرگسالان کم‌خطر به‌حساب می‌آیند (مانند خون‌گیری وریدی)، در مورد کودکان و نوزادان با در نظر گرفتن درد و اضطرابی که تجربه می‌کنند و اثرات احتمالی آن بر تکامل سیستم عصبی آن‌ها از گروه کم‌خطر خارج خواهد شد.

15- زمانی که لازم نباشد پژوهش حتماً بر روی گروه سنی خاصی از کودکان انجام شود، کودکان بزرگ‌تر برکودکان کم و سن و سال‌تر برای شرکت در پژوهش ارجح‌اند.

16- در پژوهش‌هایی که شامل پرسشگری - اعم از مصاحبه یا تکمیل پرسشنامه - اند، باید توجه داشت که احساس گناه، بدبینی یا نگرانی نامناسب در والدینی که مورد پرسشگری قرار می‌گیرند ایجاد نشود. برای این منظور، باید توضیحات لازم در ضمن اخذ رضایت آگاهانه ارائه شود.

17- نباید هیچ‌گونه هزینه‌ی مالی برای شرکت در پژوهش به کودکان یا سرپرست قانونی آنان پرداخت شود ولی هزینه‌هایی که در نتیجه‌ی شرکت در پژوهش متحمل شده‌اند باید پرداخت شود. دادن هدیه‌های کوچک و فاقد ارزش مالی بالا (مانند بسته کوچک مدادرنگی یا کاغذ رنگی یا میان وعده‌های ساده) به کودکان شرکت کننده در پژوهش از نظر اخلاقی ایرادی ندارد و تشویق می‌شود.

18- سرپرستان کودک این حق را دارند که در طی انجام پژوهش کودک خود را همراهی کنند.

19- سرپرستان کودک، در صورت تمایل، باید از فرصت کافی برای مشورت با بستگان، مراقبان بهداشتی و مشاورین مستقل در رابطه با شرکت در پژوهش، برخوردار شوند.

20- باید به تمامی سؤالات و دغدغه‌های سرپرستان کودک در طی پژوهش پاسخ مناسب داده شود.

21- اخذ رضایت آگاهانه از کودک و سرپرستان او ترجیحاً باید توسط شخص یا اشخاصی انجام گیرد که در تیم درمانی او مشارکت ندارند.

هزینه بالای کیت PCR

عدم وجود روش های دقیق در شهر زاهدان

عدم همکاری بیماران و پرسنل جهت انجام دوباره نمونه گیری

کریپتوسپوریدیوم پاروم، کریپتسپوریدیوم هومینیس، ژن 18S rRNA

1. Fayer R, Xiao L, Editors. Cryptosporidium and cryptosporidiosis. New York. Clearance Center; 2007.

2. Tyzzer EE. A sporozoan found in the peptic glands of the common mouse. Proceeding of the Society for

Experimental biology and Medicine, 1907; 5: 12-13.

3. Sunnotel O, Lowery CJ, Moore JE, Dooley JSG, Xiao L, Millar BC, et al. Cryptosporidium. Lett Appl Microbiol 2006; 43: 7-16.

4. Haghighi A, Keshavarz A, Taghipour N, Editors. Cryptosporidium and cryptosporidiosis. 1st ed. Tehran: Shahid Beheshti Medical University, Parasitology Division; 2009. [In Persian]

5.Chen XM, Keithly, Paya CV. Cryptosporidiosis. N Engl J Med 2002; 346: 1723-31

6.Unger BLP. Cryptosporidiosis in hunman (homo sapines). In: Dubey JP, Speer CA, Fayer R. Editors.

Cryptosporidiosis of man and animals. Boca Rotan, FL: CRC Press; 1990.

7.Cox FEG. Cryptosporidiosis. Mc Donald V, Editor. Welcome Trust illustrated history of tropical disease. London, England: The Welcome Trust; 1996. P.256-63.

8.Neva F, Brown HW, Editors. Basic clinical parasitology. 6th ed. Norwalk, CT: Appleton and Lange; 1994.

9.Garcia LS, Brewer TC, Bruckner DA. Fluorescence detection of Cryptosporidium oocysts in human fecal specimens by using monoclonal antibodies. Clin Microbiol J 1987; 25: 119-21

10.Anonymous L. Cryptosporidium outbreak in British Colombia. Cryptosporidium Capsule 1996;1: 1-3.

11.Fayer R, Morgan U, Upton SJ. Epidemiology of Cryptosporidium: transmission, detection and identification. Int JParasitol 2000; 30: 1305-22.

12.Morgan UM, Constantine CC, Forbes DA, Thompson RC. Differentiation between human and animal isolates of Cryptosporidium parvum using rDNA sequencing and direct PCR analysis. J Parasitol 1997; 83: 82530.

13.Morgan U, Thompson RCA. PCR Detection of Cryptosporidium. Parasitol Today 1998; 14: 241-45.

19.Morgan UM, Pallant L, Dwyer BW, Forbes DA, Rich G, T hompson CA. Comparision of PCR and Microscopy for Detection of Cryptosporidium parvum in human fecal Specimens: Clinical Trial Microbiol 1998; 36: 995-98.

14.Wu Z, Nagana I, Matsuo A. specific PCR primers for Cryptosporidium parvum with extra high sensitivity: Mol Cell Probes 2000; 14: 33-39.

15.Morgan UM, Pallant L, Dwyer BW, Forbes DA, Rich G, T hompson CA. Comparision of PCR and Microscopy for

Detection of Cryptosporidium parvum in human fecal Specimens: Clinical Trial Microbiol 1998; 36: 995-98.

16. Leviene ND. Veterinary protozoology, low state Univ. Press Am 1985; p. 213-215

17-Nime FA, Burek JD, Page DL, Holscher MA, Yardles SH. Acute entrolitis in a human-being infected with protozoan cryptosporidium. Gastroentrology 1976; 70: 592-598.

18.Current WL, Garcia LS. Cryptosporidiosis. Clin Microbiol Rev 1991;4(3):325-58.

19.Huang DB, Chappell C, Okhuysen PC. Cryptosporidiosis in children. Semin Pediatr Infect Dis

2004;15(4):253-9.

20. Casemore DP. Human cryptosporidiosis. In:Reeves D, Geddes A, eds. Recent advances in infections. First edition. Edinburgh. Churchil Livingston. 1988; 209-236.

21. Crawford FG, Vermund SH. Human cryptosporidiosis. Crit Rew Microbiol. 1988; 16 (2): 113-159.

22. Casemore DP. Epidemiological aspect of human cryptosporidiosis. Epidemiology of infections. 1990; 104: 1-28.

23.بشیری بد ، ح . شهابی ، س. بررسی عفونت کریپتوسپوریدیایی کودکان صفر تا پانزده سال در شهرستان تنکابن . مجله علمی نظام پزشکی ایران. ١٣٧٣ . دوره دوازدهم. صفحه ٢٩٤ تا ٣٠٠

24. نوری ، م . مقدم، ا . حقیقت نیا ، ح . مواردی از کریپتوسپوریدیوزیس. انسانی در ارومیه . مجله دانشکده پزشکی شهید بهشتی . ١٣٧٠ . شماره ١ و ٢. صفحات ٣٥ تا ٣

25.) شهابی ، س . بشیری بد ، ح . بررسی کریپتوسپوریدیوزیس در کودکانزیر ده سال مبتلا به اسهال . مجله دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی وخدمات بهداشتی درمانی شهید بهشتی. ١٣٧٣ ، شماره ٤ ، صفحه ٥١ تا ٥٦

26. Keshvarz A, Athari A, Haghighi A, Kazemi B, Abai A, Nazemolhoseini E, et al. Genetic characterization of

Cryptosporidium spp. Among children with diarrhea in Tehran and Qazvin provinces, Iran. Iranian J Parasitol 2008; 3: 33-36.

27. Saneian H, Yaghini O, Modarresi MR. Infection rate of Cryptosporidium parvum among diarrheic children in

Isfahan. Iran J Pediatr. 2010; 20: 343-47.

28.دبیرزاده،م و همکاران شیوع کریپتوسپوریدیوم در کودکان زیر پنج سال مبتلا به اسهال شهر زاهدان مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی گرگان / سال پنجم / شماره ١١ / بهار و تابستان ١٣٨٢

29. Millar C, Moore J, Lowery C, McCorry K, Dooley J. Successful PCR amplification of genomic DNA from Cryptosporidium parvum oocysts extracted from a human faecal sample: a rapid and simple method suited for outbreak analysis. Int J Hyg Environ Health 2001; 204(2-3): 191-4.

29. Hazrati Tappeh KH, Rahbar M, Hejazi S, Mostaghim M. Cryptosporidium in children referred to oncology center of Urmia, Imam Khomeini hospital, 2001. J Ardabil Uni Med Sci (JAUMS) 2005; 5(4): 327-32. (Persian)

30. Patel S, Pedraza-Díaz S, McLauchlin J. Theidentification of Cryptosporidium species and Cryptosporidium parvum directly from whole faeces by analysis of a multiplex PCR of the 18S Rrna gene and by PCR/RFLP of the Cryptosporidium outer wall protein (COWP) gene. Int J Parasitol 1999; 29(8): 1241-7.

31.Morgan UM, Constantine CC, Forbes DA, Thompson RC. Differentiation between human and animal isolates of Cryptosporidiumparvum using rDNA sequencing and direct PCR analysis. J Parasitol 1997; 83(5): 825-30.

32. Gatei W, Greensill J, Ashford RW, Cuevas LE, Parry CM, Cunliffe NA, Beeching NJ, Hart CA. Molecular analysis of the 18S rRNA gene of Cryptosporidium parasites from patients with or without human immunodeficiency virus infections living in Kenya, Malawi, Brazil, the United Kingdom, and Vietnam. J Clin Microbiol 2003; 41(4): 1458-62.

33.Leoni F, Amar C, Nichols G, Pedraza-Díaz S, McLauchlin J. Genetic analysis of Cryptosporidium from 2414 humans with diarrhoea in England between 1985 and 2000. J Med Microbiol 2006; 55(Pt 6): 703-7.

34. Waldron LS, Dimeski B, Beggs PJ, Ferrari BC, Power ML. Molecular epidemiology, spatiotemporal analysis, and ecology of sporadic human cryptosporidiosis in Australia. Appl Environ Microbiol 2011; 77(21): 7757-65.

35. Doroskar Moghadam D, Azami M, Salehi R, Salehi M. The identification of Cryptosporidium species by analysis of PCR-RFLP of the 18s rRNA gene. Iranian J Basic Med Sci 2005;8(4):232-8

36. Ebrahimzadeh E, Shayan P, Nabian S, Rahbari S, Mokhber Dezfouli MR. Identification of Cryptosporidium parvum by PCR and its determination of protein pattern and immunogenic antigens. J Vet Res 2009; 64(1): 15-21.

37. Keshavarz Riazi A, Nazemalhosseini MojaradE, Haghighi A,Taghipour N, Sahebekhtiari N, Nouchi Z, Kazemi B. Cryptosporidium genetic diversity based on analysis of COWP, SSUrRNA and TRAP-C2 polymorphic genes in children with diarrhea in Tehran and Qazvin Provinces: A survey from Iran. Pejouhandeh 2010; 14(6): 299-306. (Persian)

38. Keshavarz A, Athari A, Haghighi A, Kazemi B, Abadi A, Nazemalhosseini Mojarad E, Kashi L. Genetic characterization of Cryptosporidium spp. among children with diarrhea in Tehran and Qazvin Provinces, Iran. Iranian J Parasitol 2008; 3(3): 30-6.

39. Ghorbanzadeh B, Sadraei J, Emadi H. Diagnosis of Cryptosporidium and intestinal Microsporidia in HIV/AIDS patients with staining and PCR methods on 16srRNA gen. Aark Medical University Journal (AMUJ) 2012; 15(66): 37-47. (Persian)

40. Meamar AR, Guyot K, Certad G, Dei-Cas E, Mohraz M, Mohebali M, Mohammad K, Mehbod AA, Rezaie S, Rezaian M. Molecular characterization of Cryptosporidium isolates from humans and animals in Iran. Appl Environ Microbiol 2007; 73(3): 1033-5.

41. Meamar AR, Rezaian M, Rezaie S, Mohraz M, Mohebali M, Mohammad K, Golestan B, Guyot K, Dei-Cas E. SSU-rRNA gene analysis of Cryptosporidium spp. in HIV positive and negative patients. Iranian J Publ Health 2006; 35(4): 1-7.

42. Nazemalhosseini Mojarad E, Keshavarz A, Taghipour N, Haghighi A, Kazemi B, Athari A. Genotyping of Cryptosporidium spp. In clinical samples: PCR-RFLP analysis of the TRAP-C2 gene. Gastroenterol Hepatol Bed Bench 2011; 4(1): 29-33.

43. The identification of Human Cryptosporidium Species in Tehran by PCR/RFLP Modares Journal of Medical Sciences: Pathobiology, Vol 17, No 2, Summer 2014, Pages: 39-48

44. Arrowood M. J., Sterling C. R, 1987, Isolation of Cryptosporidium oocysts and sporozoites using discontinuous sucrose and isopycnic percoll gradients, J. Parasit., 73, 314-319.

45.درستکار مقدم داود، اعظمی مهدی، جداسازی و تخلیص اووسیست ها و اسپروزوئیت های کریپتوسپوریدیوم با استفاده از روشهای گرادیانت منقطع ساکارز و گرادیانت پرکول. مجله علوم پایه پزشکی ایران، جلد 8، شماره 1 18-24 ،1384

46.. Boom R., Sol C. J. A., Salimans M. M. M., Jansen C. L., Wertheim-Van Dillen P. M. E., Van der Noordaa J., 1990, Rapid and simple method for purification of nucleic acids, J. Clin. Microbiol., 28, 495-503.

این پژوهش نیاز به خونگیری ندارد

تعیین فراوانی انگل کریپتوسپوریدیوم پارووم و کریپتوسپوریدیوم هومینیس

به دلیل عدم ارتباط مستقیم با بیمار عوارض جانبی ندارد

بر عهده دانشجو می باشد

بر عهده پژوهش دانشگاه می باشد76,230,000

از بیمار هزینه ای دریافت نمی شود

پرسش از همراه کودک و با رضایت از همراه کودک

تمامی اطلاعات دریافت شده و نتایج آنها محرمانه بتقی خواهد ماند

بر عهده ی همراه کودک می باشد و از طریق پرسشنامه انجام می گیرد

فرد مورد مطالعه قرار گرفته میتواند در هر مرحله با رضایت کامل از ادامه مطالعه انصراف دهد

از همراه بیمار رضایت کسب می شود

پیوست می باشد