بررسی بیان اینترلوکین22 طی پنجره لانه گزینی در آندومتر زنان مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه و سقط مکرر در مقایسه با زنان سالم بارور: یک مطالعه ایمونوهیستوشیمی و واکنش QRT-PCR

امروزه ناباروری به عنوان یک نگرانی عمومی در حال افزایش محسوب شده که به عدم تعادل روانی زوجین و شکست در زندگی آنها منجر می شود (1و2). در حال حاضر علی رغم پیشرفت­های زیادی که در زمینه درمان ناباروری حاصل شده همچنان این مسأله مشکل مهم جوامع توسعه یافته و در حال توسعه به حساب می­آید (3و4). شیوع ناباروری در جهان حدود10 تا 15 درصد بوده (5) که این میزان نسبت به دهه گذشته50 درصد افزایش نشان داده است (6). ﻧﺎﺑﺎروری، در واﻗﻊ یک ﺑﺤﺮان ﭘیﭽیﺪة زﻧﺪﮔی اﺳﺖ کﻪ از ﻟﺤﺎظ روان ﺷﻨﺎﺧﺘی ﺗﻬﺪیﺪکﻨﻨﺪه و از ﻟﺤﺎظ ﻫیﺠﺎﻧی ﻓﺸﺎرآور اﺳﺖ. ﺑﻪ ﺟﻬﺖ  ﺗﺎﺛیﺮﮔﺬاری ﻧﺎﺑﺎروری در زﻧﺪﮔی ﺑﺸﺮی،  ﺑﺨﺶ ﻣﻬﻤی از ﻃﺒﺎﺑﺖ و ﺗﺤﻘیﻖ در ﺟﺎﻣﻌﻪ ﭘﺰﺷکی را ﺑﻪ ﺧﻮد اﺧﺘﺼﺎص داده اﺳت (7). همین امر باعث می­شود که پیگیری، تشخیص و درمان ناباروری همه ساله هزینه­های سنگینی را بر دوش جامعه تحمیل کند (8). ناباروری طبق تعریف به تلاش ناموفق یک زوج جهت بچه­دار شدن طی یک سال بدون استفاده از روش­های پیشگیری از بارداری اطلاق می­گردد (9). دلایل ناباروری در یک زوج می­تواند مربوط به زن (30 درصد موارد)، مرد (30 درصد موارد) و یا ترکیبی از هر دو باشد (20 درصد موارد). ناباروری در زنان دارای علل متفاوتی می­باشد که از آن جمله می­توان به اختلالات آناتومیک، آندوکرینی، ایمونولوژیک، ژنتیکی اشاره نمود. اما در30 درصد موارد دلایل ناباروری در یک زوج با روش های استاندارد و معمول ارزیابی باروری در زوجین مشخص نمی­گردد که این نوع ناباروری تحت عنوان ناباروری غیر قابل توجیه[1] نامیده می­شود(10). زنان دارای ناباروری غیر قابل توجیه اوولاسیون طبیعی داشته، هیچگونه آشفتگی آندوکرینولوژیک از خود نشان نداده و همسر آنها از کیفیت سیمن طبیعی برخوردار می­باشد(11).

از دست دادن بارداری(سقط) یکی از شایع ترین مشکلات پزشکی در دوران بارداری زنان است. تخمین زده می شود که حدود یک چهارم زنان، در دوره بارداری، دست کم یک نوبت سقط خودبه خودی دارند و حداقل نیمی از بارداری ها پیش از رسیدن به زمان تولد از بین می روند(12).

بنابر تعریف، سقط مکرر به دست کم سه سقط اطلاق می شود، اما برخی از محققان دو مورد سقط را نیز، سقط مکرر می نامند(13). سقط یا از دست دادن مکرر بارداری[2]در 5/0 تا 1% زنان عارض می شود. در زنان دارای سابقه سقط مکرر، خطر از دست دادن بارداری بالاتر از کسانی است که تنها یک نوبت سقط داشته اند (14). سقط مکرر هم برای بیمار هم برای پزشک تنش زاست. طبق مطالعات مختلف در 60% موارد یک عامل ژنتیکی، اختلال غدد درون ریز، آناتومیک یا خود ایمنی با سقط مکرر مرتبط است و در 40% موارد هیچ عامل مرتبطی پیدا نمی شود (15). در میان عوامل شناخته شده، مشکلات ژنتیکی شایع ترین علت هستند و برآورد می شود حدود نیمی از موارد را شامل می شوند(16). با این حال، از آنجا که مطالعات مختلف نشان داده است که عملکرد آندومتر در زنان مبتلا به اختلالات باروری دستخوش تغییر می­شود اختلال در روند لانه­گزینی رویان از جمله دلایلی است که می­تواند به عنوان عامل وقوع ناباروری در این زنان مطرح باشد(17).

 Sharkey و همکاران یکی از علل اصلی ناباروری را عدم لانه گزینی جنین گزارش کردند (18). لانه­گزینی روندی  است که در طی آن بلاستوسیست به آندومتر رحم متصل و سپس به داخل استرومای آن وارد شده و جفت را تشکیل می­دهد (22،21،20،19). جهت وقوع یک لانه­گزینی موفق لازم است که یک دیالوگ پیچیده با واسطه فاکتورهای رشد، هورمون­ها، مولکول­های اتصالی، ماتریکس خارج سلولی و پروستاگلاندین­ها بین آندومتر و رویان صورت پذیرد(23،20،19). این فاکتورها بطور منظم اتصال رویان به اپی­تلیوم، تخریب غشا پایه، ورود رویان به داخل استرومای رحم، شکل­گیری دسیدوآ و در نهایت یک بارداری موفق را باعث می­شوند(19و20).

 اما اگرچه لانه­گزینی به خودی خود یک پروسه دینامیک بین بلاستوسیست و آندومتر است، آغاز ورود آندومتر به فاز پذیرش صرفاً منشاء مادری دارد(24). کاهش پذیرش آندومتر می­تواند به عنوان فاکتور اصلی و تعیین کننده باروری محسوب شود(25). مطالعات مختلف نشان داده که طی فرآیند لانه­گزینی آندومتر برای یک دوره معین دستخوش یکسری تغییرات منظم و دقیق شده تا بتواند پذیرای رویان گردد بطوریکه از این دوره تحت عنوان پنجره لانه­گزینیImplantation window یاد می­شود(26،25،24). طی فاز لوتئال سیکل قاعدگی یکسری تغییرات در آندومتر رخ می­دهد. این تغییرات دست به دست هم داده تا آندومتر را آماده پذیرش رویان کند(27). اگر چه برخی از این تغییرات تا مراحل ابتدایی بارداری ثابت می­ماند اما برخی عمر محدودی دارند(28). در جوندگان آندومتر صرفاً برای یک دوره زمانی کوتاه، حدود 24 ساعت، آماده پذیرش رویان می­باشد. در موش­های صحرایی این فاز پذیرش بین روزهای 4 و 5 بعد از جفتگیری رخ می­دهد(29). رویان­هایی که قبل و بعد از این دوره زمانی(فاز پذیرش) وارد حفره رحم می­شوند نمی­توانند به دیواره آندومتر متصل شوند(20). در انسان و پریمات­ها نیز مطالعات مختلف وجود این فاز پذیرش را از روز 5 تا 10 بعد از غلیان هورمون LH تعیین نموده است(30). این دوره در اواسط فاز لوتئال یعنی از روز 19 تا 24 سیکل قاعدگی صورت می­پذیرد(31و32). امروزه مشخص گردیده که در اکثر زنان عدم موفقیت در لانه­گزینی به سبب عدم وارد شدن آندومتر رحم به فاز پذیرش می­باشد(20).

وجود این فاز پذیرش(پنجره لانه­گزینی) موجب شده تا تحقیقات زیادی در خصوص یافتن پاسخ مناسب برای این سوال مطرح شود که چگونه رحم وارد فاز پذیرش شده و چه مارکرهای مورفولوژیکی و مولکولی این حالت پذیرش را در آندومتر بوجود می­آورند. گرچه تعدادی از پروتئین­ها و مولکول­هایی که ممکن است در پروسه لانه­گزینی دخالت داشته باشند هنوز به درستی شناخته نشده­اند اما تاکنون مارکرهای متعددی جهت بروز فاز پذیرش در آندومتر پیشنهاد شده­اند، که از آن جمله می­توان به اعضا خانواده اینتگرین[3](24و33)، موسین یک[4](34)،گلیکودلین[5] (35)، فاکتور رشد اپیدرمی[6] (36)، فاکتور رشد شبه انسولین[7](37و38)، فاکتور مهارگر لوسمی[8] (39) و اینترلوکین یک[9](40و41) اشاره نمود. با این حال تا به امروز یک مارکر واحدی که جهت پیشگویی وقوع آبستنی اختصاصی و حساس باشد تشخیص داده نشده است(25و42). امروزه مشخص گردیده که این تغییرات تحت کنترل هورمون­های استروئیدی استروژن و پروژسترون به وقوع می­پیوندند(25).

ﺳﺎﯾﺘﻮﮐﯿﻦ ها ﺧﺎﻧﻮاده ﺑﺰرﮔـﯽ  از ﻣﻮﻟﮑــﻮل ﻫــﺎیی ﻫــﺴﺘﻨﺪ ﮐــﻪ ﺷــﺎﻣﻞ ﮐﻤﻮﮐــﺎﯾﻦ، اﯾﻨﺘﺮﻟــﻮﮐﯿﻦ،  اﯾﻨﺘﺮﻓﺮون و اﻋﻀﺎی ﺧﺎﻧﻮاده TNF (ﻋﺎﻣـﻞ ﻧﮑـﺮوز ﺗﻮﻣـﻮری[10])ﻣــﯽ ﺑﺎﺷــﻨﺪ و ﻧﻘــﺶ ﻣﻬﻤــﯽ را در ﺷــﺮوع و ﺗﻨﻈــﯿﻢ ﭘﺎﺳــﺦ ﻫــﺎی اﯾﻤﻨﯽ، ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﻫﺎی ﺑﯿﻮﻟﻮژﯾﮑﯽ ﺑـﺪن  و ﺧـﻮن  ﺳـﺎزی  ﺑـﺮ  ﻋﻬـﺪه دارﻧﺪ(43) ﺗﻌﯿﯿﻦ ﻣﻘﺪار و ﻣـﺪت  زﻣـﺎن  ﺗﻮﻟﯿـﺪ  ﺳـﺎﯾﺘﻮﮐﯿﻦ ﻫـﺎ  در ﭘﺎﺳﺦ ﺑﻪ ﯾﮏ ﻣﺤﺮک اﻟﺘﻬﺎﺑﯽ، ﻋﻤﺪﺗﺎ در ﺳـﻄﺢ  روﻧﻮﯾـﺴﯽ  ژن ﺗﻨﻈﯿﻢ ﻣﯽ شود(44).

 اینترلوکین ها سایتوکاینهای ساخته شده توسط انواع گویچه های سفید خون هستند که اغلب بر لنفوسیت های دیگرمؤثر می باشند. تعداد آنها بسیار زیاد است و با شماره مشخص می شوند مانند اینترلوکین1و2... . این ترکیبات در سیستم ایمنی نقش مهمی دارند. این پروتئین ها با تنوع زیادی که دارند عملکردهایی خارج از سیستم ایمنی هم دارند(45). ﺳﺎیﺮ اﻋﻀﺎی ایﻦ ﺧﺎﻧﻮاده ﺳیﺘﻮکیﻨی ﺷﺎﻣﻞ IL-10، IL-19، IL-20، MDA7 (IL-24)، IL(TIF)،  IL-22و IL-26   می باشند(46). ﮔﺮﭼﻪ اﻋﻀﺎی ایﻦ ﺧﺎﻧﻮاده ﻣﺸﺘﺮکﺎت ﺳﺎﺧﺘﻤﺎﻧی ﺑﺴیﺎر زیﺎدی دارﻧﺪ، اﻣﺎ  از ﻟﺤﺎظ ﻋﻤﻠکﺮد ﺑیﻮﻟﻮژیک و ایﻤونوﻟﻮژیک ﺗﻔﺎوت ﻓﺎﺣﺸی ﺑیﻦ آن ها وﺟﻮد دارد. ﺳیﺘﻮکیﻦ های ﻣﺆﺛﺮ در ﻻﻧﻪ  ﮔﺰیﻨی ﻣﻤکﻦ اﺳﺖ ﺑﻄﺮق ﻣﺨﺘﻠﻒ ﻋﻤﻞ ﻧﻤﺎیﻨﺪ، از ﺟﻤﻠﻪ ایﻦ روﺷﻬﺎ ﻣی ﺗﻮان به ﺷیﻮه ﻫﺎی اﺗﻮ کﺮیﻦ و ﭘﺎراکﺮیﻦ اﺷﺎره ﻧﻤﻮد. در ﺗﺤﻘیﻘی کﻪ ﺑﻬﻤﻦ  ﭘﻮر در روی ﺑﻼﺳﺘﻮﺳیﺴﺖ اﻧﺠﺎم داد(47) ﺑﻪ وﺟﻮد ﺗﻌﺪاد زیﺎدی ﻟﻮکﻮﺳیﺖ در ﻧﺎﺣیﻪ ﻻﻧﻪ ﮔﺰیﻨی در ﺑﺎﻓﺖ اﻧﺪوﻣﺘﺮ اﺷﺎره نمود. ایﻦ ﻟﻮکﻮﺳیﺘﻬﺎ در ﻫﻨﮕﺎم ﻻﻧﻪ ﮔﺰیﻨی و اﻧﺪکی ﻗﺒﻞ از آن در ﺑﺎﻓﺖ اﻧﺪوﻣﺘﺮ ﻣﺸﺎﻫﺪه ﮔﺮدیﺪ، کﻪ ﺧﻮد ﻣی  ﺗﻮاﻧﺪ دال ﺑﺮ ﻓﻌﺎﻟیﺘﻬﺎی ایﻤﻨی در ﻧﺎﺣیﻪ ﻻﻧﻪ ﮔﺰیﻨیﺑﺎشد(47و48). ﺧﻮد ایﻨﺘﺮﻟﻮکیﻦ ﺗﻮﺳﻂ ﺟﻨیﻦ ﺗﺮﺷﺢ  ﻣی ﮔﺮدد، وﻟی ﻓﻌﺎﻟیﺖ  ﻫﺎی واکﻨﺸی و ﮔیﺮﻧﺪﮔی ایﻨﺘﺮﻟﻮکیﻦ در ﺑﺎﻓﺖ ﭘﻮﺷﺸی آﻧﺪوﻣﺘﺮ رﺣﻤی ﻣﻮﺟﻮد  می ﺑﺎﺷﺪ، بنابراین، ﺗﺄﺛیﺮ ایﻨﺘﺮﻟﻮکیﻦ در ﻻﻧﻪ ﮔﺰیﻨی از اﻫﻤیﺖ ﺧﺎﺻی ﺑﺮﺧﻮردار می باشد(49).

 ایﻨﺘﺮﻟﻮکیﻦ 22 یکی از ﺳﺎیﺘﻮکیﻦ های التهابی است که از لحاظ ساختاری در خانواده اینترلوکین 10 قرار می گیرد(50) که توسط سلول های ایمنی بدن از ﺟﻤﻠـﻪ ،[11]Th17، ﺳـﻠﻮل  ﻫـﺎی [12]NK و  سلولﻫﺎی دﻧﺪریﺘیک ساخته و ترشح می شود(51و52) و نقش مهمی در التهاب، نظارت بر ایمنی و هوموستاز بافت در محل مخاطی دارد(55،54،53). ﻣﺴیﺮ ﺳیﮕﻨﺎل دﻫی اینترلوکین22 از ﻃﺮیﻖ اﺗﺼــﺎل آن ﺑــﻪ رﺳــﭙﺘﻮری کــﻪ ﺷــﺎﻣﻞ دو زنجیره IL-22Rα و IL-10R2 است آغاز می گردد(56). زﻧﺠیﺮه IL-10R2 ﮔیﺮﻧﺪه ایﻦ ﺳﺎیﺘﻮکﺎیﻦ در ﺑﺴیﺎری از سلول ﻫﺎ ﺷﻨﺎﺳﺎیی ﺷﺪه اﺳـﺖ، در ﺣﺎﻟی  کﻪ زﻧﺠیـﺮهIL-22Rα آن ﺗﻨﻬـﺎ در ﺳـﻠﻮل ﻫـﺎی روده، کﻠیﻪ، ﭘﻮﺳﺖ، ﭘﺎﻧکﺮاس، کﺒﺪ، ﺳـیﻨﻪ و ﺷـﺶ دیـﺪه ﻣـی ﺷـﻮد (57و58). ﺷﻮاﻫﺪ ﻋﻠﻤی ﺑیﺎﻧﮕﺮ آن اﺳﺖ کـﻪ ایﻨﺘﺮﻟـﻮکیﻦ 22 درﻓﺮآیﻨﺪ اﻟﺘﻬﺎب ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻣیﺎﻧﺠی ﺑیﻦ  سلول ﻫﺎی ﺳیﺴـﺘﻢ ایﻤﻨی ﺗﻮﻟیﺪ کﻨﻨﺪه آن و ﺳﻠﻮل ﻫﺎی ﻫﺪف ﻋﻤﻞ می کند(59). ایﻨﺘﺮﻟﻮکیﻦ 22 باعث اﻓﺰایﺶ ﺗﻮﻟیﺪ ﭘﺮوﺗﺌیﻦ ﻫﺎی ﻓﺎز ﺣﺎد در ﺳﻠﻮل ﻫﺎی کﺒﺪی ﺷـﺪه و در ﭘﺎﺳﺦ ﺳﻠﻮل ﻫﺎی اﻟﺘﻬﺎﺑی و ایﻤﻨی سلول های اپی تلیال ایفای نقش می کند(60و61). ﻋـــﻼوه ﺑـــﺮ آن، ﺑﺎ دﺧﺎﻟﺖ در ﺗﻨﻈیﻢ ﺑیـﺎن واﺳـﻄﻪ ﻫـﺎی ﺗﺤﺮیـک کﻨﻨــﺪه ﭼﺮﺧــﻪ ﺳــﻠﻮﻟی، ﻃــی ﭘیــﺪایﺶ ﺗﻮﻣــﻮر در روﻧــﺪ رﺷــﺪ ﺳﻠﻮل ﻫﺎی ﺳﺮﻃﺎﻧی ﻣﻮﺛﺮ میﺑﺎﺷﺪ(62و63).

 Kobold و همکاران در سال 2013 گزارش دادند که IL-22 باعث رشد سلولهای سرطانی ریه مقاوم به شیمی درمانی می شود (64).

Zenewic و ﻫﻤکﺎراﻧﺶ گزارشکﺮدﻧـﺪ کـﻪ ایﻨﺘﺮﻟـﻮکیﻦ22 ﺑـﻪ دﺳﺖ آﻣﺪه از ﺳﻠﻮل های T و NK ﻣﻨﺠﺮ ﺑﻪ ﻣﺤﺎﻓﻈـﺖ ﻣـﻮش از ﺑیﻤﺎری ﻫﺎی اﻟﺘﻬﺎﺑی روده ﻣـی شود (65). ﻫﻤﭽﻨـیﻦ ﻣﻄﺎﻟﻌـﺎت ﺑﺴیﺎری ﺗﺎییﺪ کﺮدﻧﺪ کﻪ ایﻨﺘﺮﻟﻮکیﻦ22 یک ﻣیﺎﻧﺠی در ﺳیﺴﺘﻢ دﻓﺎﻋی ﻣیﺰﺑﺎن در ﻣﻘﺎﺑﻞ ﻋﻔﻮﻧـﺖ ﻫـﺎی ﺑﺎکﺘﺮیـﺎیی اﺳـﺖ کـﻪ از ﻃﺮیﻖ اﻟﻘﺎی ﺗکﺜیﺮ ﺳـﻠﻮﻟی و ﺧﺎﺻـیﺖ آﻧﺘـی آﭘﻮﭘﺘـﻮزی ﺑﺎﻋـﺚ ﺑﻬﺒﻮد ﺳﺮیﻊ زﺧﻢ ﻣی گردد(66و67).

Sabat  و همکارانش در سال 2014 طی مطالعه ای به این نتیجه دست یافتند که در بیماری های سیستمیک، به نظر می رسد که IL-22 در درجه اول توسط سلول های T، اغلب سلول های Th1 و TH17، و با بیان کمتر از سلول های NK تولید شده است(68). در همین راستا Cella و همکارانش در سال 2009 اظهار داشتند که IL-22 به عنوان یک تنظیم کننده کلیدی از هوموستاز مخاطی ظاهر شده است و سلول های NK منبع مهمی از این سیتوکین هستند(69). سلول های قاتل طبیعی رحم[13] (uNK) جمعیت لکوسیتی غالب در اندومتر طبیعی انسان است. محتوای آنها در طول چرخه طبیعی قاعدگی به احتمال زیاد به علت جذب سلول های محیطی [14]NKو یا در تکثیر رحم و یا تمایز سلول های بنیادی uNK متفاوت است(70). uNK، 40 درصد از کل جمعیت لکوسیت را در فاز پرولیفراتیو نشان می دهد که در اواسط مرحله ترشح تا 60 درصد و در اوایل بارداری تا 75 درصد افزایش می یابد و تنظیم کننده فعالیت سلول های کشنده طبیعی در آندومتر است(71). سلول های uNK فراوان  ترین لکوسیت ها در بافت اندومتر در طول پنجره لانه گزینی انسان است. این سلول ها نقش کلیدی در حفظ بارداری دارند(72).

Emma   و همکارانش در سال 2014 نشان دادند که سلول های قاتل طبیعی رحم ، نقش کلیدی در اندومتریوز و ناباروری را بازی کرده است، نتایج مطالعات آنها ارتباط بین وضعیت فعال سازی سلول های NK رحم و افزایش خطر نارسایی تولید مثل در بیماران مبتلا به آندومتریوز و بدون آن را پشتیبانی می کند. افزایش CD16 و NKp46 در بیماران مبتلا به از دست دادن بارداری مجدد و بیماران مبتلا به ناباروری نامعلوم نشان می دهد که تغییرات در عملکرد سلول های NK رحم ممکن است قبل از لانه گزینی و یا در طول decidualization رخ دهد(73). در همین راستا مطالعات Seshadri و همکاران و پولانسکی و همکاران،  در سال  2014بیان داشتند که ماهیت پیچیده سلول های NK رحم نیاز به مطالعات بیشتری برای تعیین این که کدام اندازه گیری جمعیت سلول NK رحم و / یا توابع با دقت می تواند به پیش بینی خطر اختلالات باروری در بیماران آینده و نیز در تعیین درمان مناسب برای این بیماران کمک کند(74و75).

 Candice O’و همکارانش در سال 2015 طی بررسی هایی که روی زنان انجام دادند به این نتیجه دست یافتند که سلول های   uNK دسیدوا به عنوان منبع اصلی بیان IL-22 در رحم هستند، آنها فرض کرده اند که عدم تعادل سلول های ایمنی در دسیدوای رحم و اختلال عملکرد در سیتوکین های تولید شده آنها ممکن است به از دست دادن بارداری مجدد (RPL) کمک کند. هدف آنها از این مطالعه تعیین این است که آیا IL-23، IL-22 و IL-17 غیرطبیعی در decidua بیماران مبتلا به RPL نسبت به زنان دارای حاملگی نرمال بیان می شود. آنها دریافتند که زنان مبتلا به RPL غیر قابل توجیه به طور قابل توجهی بیان کمتر ژن و پروتئین IL-22 را در decidua نشان دادند. علاوه بر این، آنها دریافتند که IL-22 عمدتا توسط سلول های uNK در decidua بیان می شود. نتایج آنها نشان می دهد که سطوح پایین تر IL-22 در دهانه رحم در بیماران مبتلا به RPL غیر قابل توجیه ممکن است منجر به اختلال هوموستازی جداگانه شود و در نهایت منجر به از دست دادن حاملگی زودرس شود. همچنین یافته های آن ها  نشان می دهد که کاهش بیان  IL-22 به طور قابل توجهی در بیماران RPL غیر قابل توجیه ممکن است در تکرار تخریب جنین یوپلویید نقش داشته باشد و یا ممکن است یک نشانگر اختلال عملکرد سیستم ایمنی در این گروه باشد(76).

بسیاری بر این باورند که سلول های ایمنی خاص که سیتوکین های مختلف را در طی دوران بارداری بیان می کنند، برای بقای حاملگی اولیه بسیار مهم هستند. انتشارات اولیه گزارش دادند که بیماران مبتلا به RPL دارای عدم تعادل سلولهای طبیعی رحم (uNK)، سلولهای CD4 + T و ماکروفاژها بودند. داده های منتشر شده در سطوح سلولی NK در RPL متناقض است(77و78). اطلاعات کمی در مورد IL-22 و عملکرد تولید مثل شناخته شده است . در سال 2013، وانگ و همکاران گزارش کردند که تروفوبلاستهای جنینی بیانگر گیرنده IL-22  (IL-22R1) هستند و در هنگام قرار گرفتن در معرض IL-22 پرولیفراسیون(افزایش تکثیر) بیشتری دارند. آنها همچنین دریافتند که در نمونه های خودبخودی سقط جنین به طور قابل ملاحظه ای بیان پروتئین IL-22R1 کمتری در مقایسه با حاملگی های طبیعی بارداری وجود دارد(79). اگرچه آنها ارتباط بین IL-22 و IL-22R1 را در تروفوبلاست نشان دادند، هدف اولیه آنها ارزیابی بافتهای تروفوبلاست برای IL-22R1 بود. تا به امروز هیچ تحقیق منتشر شده درباره ژن و بیان پروتئین IL-22 در حاملگی های طبیعی یا نمونه های RPL ناشناخته در decidua وجود ندارد(76).  تحقیقات نشان داده است که IL-22 می تواند به محدود کردن التهاب و محافظت از محل های مخاطی کمک کند و سطوح پایین تر IL-22 همراه با چندین بیماری التهابی مانند بیماری التهابی روده و بیماری حاد جراحی در برابر میزبان است(80و81). علاوه بر این نشان داده شده است که بیماران با نشانه های بدتر و دوره بیماری طولانی مدت سطوح بالایی از بیان IL-22 را پایین می آورند(80و81). در این زمینه، IL-22 به احتمال زیاد نقش مهمی در حفظ هوموستازی جداگانه ایفا می کند و به محدود کردن التهاب رایج در اوایل بارداری کمک می کند. یافته های ما در مورد سطوح پایین تر IL-22 در RPL غیر قابل توجیه ممکن است به توضیح اختلال هوموستازی منجر شود که منجر به از دست رفتن اولیه می شود(76). در مطالعه ای که در سال 2013 توسط Yan و همکارانش انجام شد بیان داشتند که IL-22 در محیط اندومتریوم باعث افزایش تکثیر سلول های استرومای اندومتری توسط تحریک ترشح CCL2 و IL-8 می شود(82).

تحقیقات Santulli در سال2013 نشان داده است که سطح IL-22 در سرم زنان مبتلا به اندومتریوم تخمدان کاهش می یابد(83). ﻧﻘﺶ IL-22  ﺑﻪ ﻋﻨﻮان  یـک ﺳـیﺘﻮکیﻦ در ﭘﺎﺳـﺦ  ﻫـﺎی اﻟﺘﻬـﺎﺑی وایجاد ﺣﻔﺎﻇــﺖ  در ایﻤﻨــیذاﺗــی  و کﻨﺘــﺮل ﻋﻔﻮﻧــﺖ  ﻫــﺎی ﻣﺨﺘﻠــﻒ  و ﻫﻤﻮﺳﺘﺎزی و ﺑﻬﺒﻮد ﺳﻠﻮل ﻫﺎی اﭘی  ﺗﻠیﺎل ﺻﺪﻣﻪ دیﺪه ﺛﺎﺑـﺖ ﺷـﺪه اﺳﺖ؛ ﺑﻨﺎﺑﺮایﻦ  ﻫـﺪف از  ﺗﺤﻘیـﻖ  ﺣﺎﺿـﺮ، بررسی بیان اینترلوکین22 طی دوره لانه گزینی در آندومتر زنان مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه و سقط مکرر و مقایسه با افراد بارور است.

با توجه به در دست نبودن اطلاعات دقیق در مورد میزان بیان ژن اینترلوکین 22 در بافت اندومتریوم زنان با ناباروری غیر قابل توجیه و سقط مکرر و تاثیر بیان آن بر باروری فرد، در این مطالعه بر آن هستیم تا با استفاده از روش های ایمونوهیستوشیمی و PCR میزان  بیان اینترلوکین 22 در این بافت را بررسی و با افراد بارور سالم مقایسه کنیم.

. میزان بیان ایمنوهیستوشیمیایی اینترلوکین22 طی دوره پنجره لانه گزینی در بافت آندومتر زنان مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه، سقط مکرر و افراد سالم بارور متفاوت است.

2. میزان بیان در سطح mRNA اینترلوکین22 طی دوره پنجره لانه گزینی در بافت آندومتر زنان مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه، سقط مکرر و افراد سالم بارور متفاوت است.

بررسی بیان اینترلوکین22 طی دوره پنجره لانه گزینی در آندومتر زنان مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه و سقط مکرر در مقایسه با زنان سالم بارور: یک مطالعه ایمونوهیستوشیمی، واکنش QRT-PCR

. تعیین و مقایسه میزان بیان ایمنوهیستوشیمیایی اینترلوکین22 طی دوره پنجره لانه گزینی در بافت آندومتر زنان مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه، سقط مکرر و افراد سالم بارور

2. تعیین و مقایسه میزان بیان mRNA اینترلوکین22 طی دوره پنجره لانه گزینی در بافت آندومتر زنان مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه، سقط مکرر و افراد سالم بارور.

مراکز آموزشی، پژوهشی و درمانی دخیل در مسئله ناباروری

باروری:[1]

فرآیند رشد[2] ، نمو[3] و تکامل[4] با عمل باروری(لقاح) آغاز می­شود. باروری فرآیندی است که در طی آن اسپرماتوزوئید و اووسیت با هم ادغام می­شوند در نتیجه تخم (زیگوت[5]) به وجود می­آید.

ناباروری:[6]

 به تلاش ناموفق یک زوج جهت بچه­دار شدن طی یک سال بدون استفاده از روش­های پیشگیری از بارداری اطلاق می­گردد.

ناباروری غیر قابل توجیه:[7]

در30 درصد موارد دلایل ناباروری در یک زوج با روش­های استاندارد و معمول ارزیابی باروری در زوجین مشخص نمی­گردد که این نوع ناباروری تحت عنوان ناباروری غیر قابل توجیه یا ناشناخته نامیده می­شود.

لانه گزینی:[8]

لانه­گزینی عبارت است از اتصال بلاستوسیت به سلول­های اپی­تلیال سطحی آندومتر در پایان مرحله­ ترشحی و نفوذ پروتئولیتیک آن از طریق این اپی­تلیوم به درون استرومای زیرین که این فرآیند 3 روز طول می­کشد.

سقط مکرر:[9]

سقط مکرر به دو بار یا بیشتر از دست رفتن حاملگی در سه ماهه اول یا ابتدای سه ماهه دوم گفته می شود.

ایمونوهیستوشیمی:

فرآیندی برای مکان‌یابی پروتئین‌ها در سلول های  یک بافت است. در این روش با استفاده ازآنتی‌بادی‌ها ، آنتی ژن های سلولی شناسایی می‌شود.

واکنش زنجیره ای پلیمراز ترانس کریپتاز معکوس:

واکنش زنجیره ای پلیمراز ترانس کریپتاز معکوس کمی (QRT-PCR)،(RT-PCR)quantification reverse transcription polymerase chain reaction :یکی از انواع روش های واکنش زنجیره ای پلیمراز است که برای شناسایی میزان بیان RNA استفاده می شود.

مورد – شاهدی ( Case-Control)

زنان مورد مطالعه (مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه ، سقط مکرر و افراد سالم) همگی باید بین 25 تا 40 سال سن داشته، از سیکل قاعدگی نرمال (26 تا 32 روز) برخوردار بوده و از هیچگونه روش جلوگیری از بارداری اعم از کنتراسپتیو داخل رحمی و خوراکی ظرف 6 ماه قبل از جراحی (نمونه گیری) و همچنین هیچگونه دارویی هورمونی استفاده نکرده باشند. گروه بارور(کنترل) از میان داوطلبانی انتخاب خواهند شد که دارای سیکل قاعدگی نرمال بوده، در یکسال گذشته آبستنی طبیعی را تجربه نموده و صاحب فرزند هستند. این گروه از بین افرادی که بعنوان دهنده تخمک به کلینیک ناباروری مراجعه می کنند انتخاب خواهند شد. گروه نابارورغیر قابل توجیه (بیمار) افرادی هستند که بیش از یک سال از دوره ناباروری آنها می­گذرد، سیکل قاعدگی و اوولاسیون طبیعی داشته، ارزیابی لوله ها و رحم با هیستروسکپی یا لاپاروسکپی یا هیستروسالپنگوگرافی نرمال بوده است  و همسرشان از کیفیت سیمن طبیعی برخوردار می­باشد. زنان مبتلا به سقط مکرر نیز از بین افرادی انتخاب می شوند که در سه ماهه اول یا ابتدای سه ماهه دوم، دو بار یا بیشتر حاملگی از دست رفته داشته اند.

معیارهای خروج: عدم رضایت بیمار به نمونه گیری، هرگونه بیماری زمینه ای، سابقه عمل جراحی گذشته رحم و اسکار جراحی روی رحم، استفاده از وسایل جلوگیری از بارداری داخل رحمی IUD ، هر گونه عفونت سیستمیک یا موضعی،سابقه هر گونه عفونت قبلی مکرر رحمی یا PID، افراد مبتلا به بیماری زمینه ای شناخته شده مثل دیابت، هایپرتانسیون و...

با توجه به حجم نمونه در سایر مقالات، حجم نمونه برای افراد مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه برابر 20 و  سقط مکرر 20 و  گروه کنترل نیز به تعداد 20 در نظر گرفته شده است.

نمونه های مورد نظر  از بین افراد مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه و سقط مکرر که شاخص های ورود به مطالعه را داشته باشند انتخاب می شوند. گروه کنترل از بین افرادی که اهدا کننده تخمک هستند و سابقه سقط مکرر و ناباروری غیر قابل توجیه را ندارند و با توجه به شرایط ورود و عدم داشتن شرایط خروج، با همسان سازی سن و قومیت به مطالعه  وارد خواهند شد. نمونه گیری ها درکلینیک ناباروری بیمارستان امام علی زاهدان انجام خواهد شد. تهیه مقاطع بافتی و عکس برداری در بخش بافت شناسی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان و تست های مولکولی در مرکز تحقیقات بیماری های عفونی و گرمسیری انجام خواهد شد. ابتدا معیارهای ورود ارزیابی شده و در بیماران واجد شرایط، شرایط مطالعه توضیح داده می شود و رضایت نامه آگاهانه کتبی اخذ می شود سپس در افراد واجد شرایط سیکل روزی دو بار با گذاشتن کیت LH بروز LH surge رصد می شود و 7 تا 8 روز پس از پیک ادراری هورمون LH (LH+7 or LH+8) دو نمونه بیوپسی (یکی از بخش قدامی و دیگری از بخش خلفی فاندوس رحم) از آندومتر 20 زن بارور و   20زن مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه و 20 زن مبتلا به سقط مکرر تهیه می­شود. علاوه­ بر این، وقوع اوولاسیون در زنان از طریق اندازه­گیری دمای پایه بدن و نیز انجام سونوگرافی واژینال مشخص می­گردد. شرکت کنندگان با پر کردن فرم رضایتنامه، رضایت آگاهانه کتبی خود را مبنی بر شرکت در این پژوهش اعلام می نمایند.

فرم اطلاعاتی ضمیمه 1

تشخیص بیماری (ناباروری غیر قابل توجیه و سقط مکرر) و بارور بودن افراد توسط پزشک متخصص زنان انجام خواهد شد. نمونه بافت اندومتریوم توسط جراح زنان برداشته خواهد شد. جهت تهیه بیوپسی از آندومتر به کمک اسپکلوم مجرای واژن فرد باز نگه داشته شده و سپس با استفاده از پایپل نمونه­گیری انجام خواهد گردید. پس از انجام آزمایش های مولکولی بر روی نمونه RNA استخراج شده از بافت، با روش RT-PCR میزان بیان بیومارکر مورد نظر تعیین می گردد و برای بررسی میزان بیان بیومارکر در این بافت از تکنیک ایمونوهیستوشیمی استفاده خواهد شد.

پس از تاییدیه کمیته اخلاق دانشگاه، ابتدا معیارهای ورود ارزیابی شده و در بیماران واجد شرایط، شرایط مطالعه توضیح داده میشود و رضایت کتبی آگاهانه اخذ می شود. گروه بارور(کنترل) از میان داوطلبانی از افراد دهنده تخمک انتخاب خواهند شد که دارای سیکل قاعدگی نرمال بوده، در یک سال گذشته آبستنی طبیعی را تجربه نموده و صاحب فرزند باشند. گروه نابارور (بیمار) از میان زنان مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه و زنان مبتلا به سقط مکرر مراجعه کننده به بخش درمان ناباروری بیمارستان امام علی وابسته به دانشگاه علوم پزشکی وخدمات بهداشتی درمانی زاهدان، انتخاب خواهند شد. زنان مورد مطالعه همگی باید بین 25 تا 40 سال سن داشته، از سیکل قاعدگی نرمال (26 تا 32 روز) برخوردار بوده و از هیچگونه روش جلوگیری از بارداری اعم از کنتراسپتیو داخل رحمی و خوراکی ظرف 6 ماه قبل از نمونه­گیری استفاده نکنند. در این مطالعه پس از اندازه­گیری قد و وزن افراد، 7 روز پس از پیک ادراری هورمون LH (LH+7)، دو نمونه بیوپسی (یکی از بخش قدامی و دیگری از بخش خلفی فاندوس رحم) از آندومتر  20 زن بارور و 20 زن مبتلا به ناباروری ناشناخته و 20 زن مبتلا به سقط مکرر اخذ خواهد گردید. جهت تعیین زمان اوولاسیون و تعیین پیک ادراری هورمون LH دو بار در روز میزان هورمون LH اندازه­گیری خواهد شد.

نمونه­های بیوپسی پس از برداشت به دو قسمت تقسیم خواهد شد.

بخشی از هر نمونه آندومتر در محلول فرمالین 10 درصد (V / V)  تثبیت شده و سپس بلاک های پارافین هر نمونه تهیه و جهت ارزیابی های ایمونوهیستوشیمی استفاده خواهد شد.

بخشی از هر نمونه آندومتر بلافاصله به محیط نیتروژن مایع منتقل و پس از آن تا زمان انجام آزمایش های مولکولی و RT-PCR در دمای-80  درجه سانتی گراد نگهداری می شود.

استخراج RNA تام  ژنومی با استفاده از کیت استخراج RNA  انجام می شود. با استفاده ازدستگاه اسپکتروفوتومتر نسبت جذب نوری 280/260  اندازه گرفته و نمونه هایی که بهترین خلوص را دارند(2>280/260 OD >1.8 )در 80- درجه سانتیگراد جهت استفاده در فرایند  QRT-PCR فریز می شوند. برای تعیین میزان بیان  RNA هر بیومارکر  از روش QRT-PCR (Quantification Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) یا واکنش زنجیره ای پلیمراز ترانس کریپتاز معکوس کمی استفاده خواهد شد. در این روش پس از طراحی و تهیه  پرایمرها و پروب های مناسب جهت تکثیر RNA و تولید CDNA مناسب و تکثیر آن برای بیومارکر، واکنش پلیمریزاسیون با استفاده از مواد اولیه خریداری شده از شرکت های معتبر و با استفاده از دستگاه Real Time انجام خواهد شد.

جهت بررسی ایمونوهیستوشیمیایی بیوپسی آندومتر اقدامات ذیل بر روی نمونه ها انجام خواهد شد: آماده سازی نمونه های بافتی،  قالب گیری نمونه ها، برش گیری، رنگ آمیزی تری کروم ماسون، رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین و بررسی میزان بیان بیومارکردر بافت با استفاده از تکنیک ایمونوهیستوشیمی بر اساس دستورالعمل کیت های مربوطه.

بررسی اطلاعات بدست آمده از روش ایمنوهیستوشیمی با استفاده از روش های آماری غیر پارامتریک کروسکال والیس و من ویتنی انجام خواهد شد. سطح معنی دار بودن تفاوت بین گروه ها p<0.05 در نظر گرفته می شود. برای تعیین وجود یا عدم وجود تفاوت معنی دار در میانگین دو گروه مستقل از آزمون t مستقل استفاده خواهیم کرد(Independent student t test).  آنالیز واریانس یک طرفه ANOVA و تست Tokeys posthoc برای مقایسه میانگین ها و تفاوت گروه های آزمایشی مورد استفاده قرار می گیرد. جهت مقایسه متغیرهای کیفی از تست کای اسکوئر و متغیرهای کمی از آزمون ANOVA و تست های نان پارامتریک استفاده خواهد شد. به منظور مقایسه و آنالیز متغیرهای وابسته ای که بیش از دو حالت دارند نیز از مدل رگرسیون لجستیک Multinomial Logistic Regression استفاده خواهد شد.

در نهایت نتایج به صورت  گزارش می شود. برای آنالیز تمام داده ها و انجام تست های آماری از نرم افزار SPSS ویرایش 20 بهره خواهیم برد. هنگامیکه 05/0P≤ شود تفاوت ها معنی دار فرض خواهند شد.  

نمونه گیری از تمامی بیماران تحت مطالعه آگاهانه و برای مقاصد علمی انجام خواهد شد. شرکت در این طرح هیچ گونه هزینه اضافی برای افراد در بر نخواهد داشت و نام و مشخصات بیماران گزارش نخواهد شد.

کدهای1، 2، 3، 4، 5، 10، 11، 12، 13، 15، 16، 17، 18، 19، 25، 28، 29، 30، 31  مصوب کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی که در دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های دارای آزمودنی انسانی در جمهوری اسلامی ایران، دربردارنده‌ی اصول و مقررات اخلاقی‎ مطرح  و در سال 1392 در 31 بند تصویب شده است در این طرح رعایت می شود.

همچنین کدهای 1، 2، 3، 4، 5، 6، 7، 8، 9، 10، 11، 12  مصوب کمیته کشوری اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی که در دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی مربوط به بخش عمومی تصویب شده است در این طرح رعایت می گردد.

-وجود تطابق از نظر سن بین گروه شاهد و بیمار در جمع آوری نمونه ها ممکن است محدودیت ایجاد کند.

-رعایت شرایط زنجیره سرد برای موادی که در بررسی های مولکولی مورد استفاده قرار می گیرند که باید مورد دقت قرار بگیرد.

-امکان عدم همکاری بیماران در روند نمونه گیری.

-به علت وجود طیف وسیع معیارهای خروج از مطالعه، نمونه گیری ممکن است با محدودیت مواجه شود. که با طولانی تر شدن زمان نمونه گیری مشکل مرتفع خواهد شد.

Interleukin-22 , Endometrium, Infertility, Implantation window

اینترلوکین22،اندومتریوم،ناباروری

1. Farahani MN. Psycological aspect of coping and adjustment of infertility and role of psaychology. J Report Infertile.2008;2(4): 52-59.

2. Tarlatzist I, Taratzi BC, Diakogianis I, Bontis J, Lagos S, Gavrilidou D, et al. Psaycological impacts of infertility on Greek couples . Human reported.2007;8(3): 396-401.

3. Dunson DB, Baird DD, Colombo B. Increased infertility with age in men and women. Obstet Gynecol.2006;103 (1):51-6.

4- Wilcox AJ, Baird DD., Weinberg C.R. Time of implantation of the conceptus and loss of pregnancy. N Engl J Med.2004 ;10; 340 (23):1796-1799.

5. Healy D, Trounson A, Andersen A. Female infertility: causes and treatment. Lancet. 2005; 343:1539-1544.

6. Danforth D,Scott J .Danforth’s obstetrics and Gynecology. 9^th ed. London :Lippincott villiams&Wilkins,2007;1155p.

7. Eniola O, Adetola A, Abayomi B. A review of female infertility: important Etiological factors and management. J Microbiol Biotech Res. 2012;2(3):379-385.

8. Boivin J, Bunting L, Collins JA, Nygren KG. International estimates of infertility prevalence and treatment-seeking: potential need and demand for infertility medical care. Hum Reprod. 2007; 22(6):1506-12.

9. Collins J, Bustilo M, Visscher RD. An estimate of cost of in vitro fertilization in the united states in. Fertili Steril. 2014; 64: 538-545.

10. Speroff L, Fritz MA. Clinical Gynecologic Endocrinology and Infertility. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins. 2005.

11. Farahani MN. Psycological aspect of coping and adjustment of infertility and role of psaychology. J Report Infertile.2008; 2(4): 52-59.

12. warren JE, silver RM. Genetics of pregnancy loss.clin obstet Gynecol.2008;51(1):84-95.

13. Ii Te, makris M, Tomsu M. Recurrent miscarriage:aetiolog, management and prognosis.hum Reprod update.2004;8(5):463-810.

14. frias AE, luikenaar EA, Branch DW. poor obstetrics outcome in subsequent pregnancies in women with prior fetal death obstet Gynecol.2009;104:521-6.

15. Hill JA, Polqar K. Evidence of embryo and trophoblast toxic cellular immune eesponses women with recurrent spontaneous abortion.Amj obstet cynecol.2007;166:1044-52.

16. puscheck EE. The impact of male factor on recurrent pregnancy loss.curr opin obste Gynecol 2010;19(3):222-8.

17. Feng HL. Molecular biology of male infertility. Arch. Androl.2006;49, pp: 19-27.

18. Sharkey AM, Smith SK.. The endometrium as a cause of implantation failure. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol1.2014; 7:289-307.

19.Tabibzadeh S, Babaknia A. The signals and molecular pathways involved in implantation, a symbiotic interaction between blastocyst and endometrium involving adhesion and tissue invasion. Human Reproduction.2008; 10: 1579–1602.

20.Sharkey AM, Smith SK. The endometrium as a cause of implantation Failure. Best Practice & Research Clinical Obstetrics & Gynaecology Vol. 17, No. 2, pp. 2003;289–307.

21. Hakan Cakmak and Hugh S. Taylor. Implantation failure: molecular mechanisms and clinical treatment. Human Reproduction Update.2010;13.

22. Guzeloglu-Kayisli O, Kayisli UA, Taylor HS. The role of growth factors and cytokines during implantation: endocrine and paracrine interactions. Semin Reprod Med 2009;27:62–79.

23. Simon C, Martin JC, Pellicer A. Paracrine regulators of implantation. Baillieres Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol.2005;14:815–826.

24. Lessey BA, Castelbaum AJ, Sawin SW.Integrins as markers of uterine receptivity in women with primary unexplained infertility. Fertil Steril.2009;63,535–542.

25. Strowitzki T, Germeyer A, Popovici R, von Wolff M. The human endometrium as a fertility-determining factor. Human Reproduction Update.2006;617–630.

26. P Vigano ,S Mangioni. Maternal-conceptus Cross Talk. A Review.2008;S56–S61.

27.Klentzeris LD. The role of endometrium in implantation. Hum Reprod.1997;170-75.

28.Duc-Goiran P, Mignot TM, Bourgeois C, Ferre F. Embryo–maternal interactions at the implantation site: a delicate Equilibrium. European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology.2005;85–100.

29.Psychoyos A. Uterine receptivity for nidation. Annals of the New York Academy of Sciences.2008;476:36–42.

30.Navot D, Bergh PA, et al. An insight into early reproductive processes through the in vivo model of ovum donation. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism.2007;72: 408–414.

31.Dominguez F, Remohi J, Pellicer A and Simon C. Human endometrial receptivity: a genomic approach. Reprod Biomed Online.2009;332–338.

32.Navot D, Scott RT, Droesch K, Veeck LL, Liu HC and Rosenwaks Z. The window of embryo transfer and the efficiency of human conception in vitro. Fertil Steril.2009;114–118.

33.Thomas K, Thomson A, Wood S, et al. Endometrial integrin expression in women undergoing in vitro fertilization and the association with subsequent treatment outcome. Fertility and Sterility.2008;502-7.

34.Lindhard A, Bentin-Ley U, Ravn V, Islin H, Hviid T. Biochemical evaluation of endometrial function at the time of implantation. Fertil Steril.2008;78, 221–233.

35.Chryssikopoulos A, Mantzavinos T, Kanakas N, et al. Correlation of serum and follicular fluid concentrations of placental protein 14 and CA-125 in in vitro fertilization-embryo transfer patients. Fertility and Sterility.2008;599-603.

36.Yoo H J, Barlow DH, and Mardon HJ. Temporal and spatial regulation of expression of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor in the human endometrium: a possible role in blastocyst implantation. Developmental Genetics.2005;102-8.

37.Giudice LC & Irwin JC. Roles of the insulin-like growth factor family in nonpregnant human endometrium and at the decidual: trophoblast interface. Semin Reprod Endocrinol.2009;13–21.

38.Seier JV, Chwalisz K, Louw J, van der Horst G. Endometrial function in vervet monkeys (Cercopithecus aethiops): morphology, beta3 integrin and insuline-like growth factor binding protein-1 expression during the menstrual cycle and pregnancy in the normal and disrupted endometrium. J Med Primatol.2007;330–339.

39.Lédée-Bataille N, Laprée-Delage G, Taupin JL et al. Concentration of leukaemia inhibitory factor (LIF) in uterine flushing fluid is highly predictive of embryo implantation. Human Reproduction.2009;213-8.

40.Simo´n C, Mercader A. The interleukin-1 system and human implantation. Am J Reprod Immunol.2005;64–72.

41.Gonzalez RR, Leary K, Petrozza JC. Leptin regulation of the interleukin-1 system in human endometrial cells. Mol Hum Reprod.2009;151–158.

42.Hoozemans DA, Schats R, Lambalk CB et al. Human embryo implantation: current knowledge and clinical implications in assisted reproductive technology. Reproductive Biomedicine Online.2007;692-712.

43. Grünhage F, Nattermann J. Viral hepatitis: human genes that limit infection. Best Practice & Research Clinical Gastroenterology. 2010;24(5):709-23.

44. Kimura T, Saito T, Yoshimura M, Yixuan S, Baba M, Ji G, et al. Association of Transforming Growth Factor–β1 Functional Polymorphisms with Natural Clearance of Hepatitis C Virus. Journal of Infectious Diseases. 2006;193(10):1371-4.

45. Zhang F, Shang D, Zhang Y, Tian Y. Interleukin-22 suppresses the growth of A498 renal cell carcinoma cells via regulation of STAT1 pathway. PLoS One 2011;6:e20382.

46.Aujla SJ, Kolls JK. IL-22: a critical mediator in mucosal host defense. J Mol Med (Berl).2009; 87(5): 451-4.

47. Bahmanpour S. A study of blastocyst implantation and related histological changes of endometrium in mice. Journal of Medical Research. 2003;3:10-17.

48. Bahmanpour S, Nasr MH. A study on preimplantation period of development in mouse embryo, Journal of Isfahan Medical School. 2000;57:17-20.

49. Simon C, Frances A, Piquette GN, el Danasouri I, et al. Embryonic implantation in mice is blocked by IL-1 receptor antagonist. Endocrinology.2009;134:521-528.

50. Weber GF, Gaertner FC, Erl W, Janssen KP, et al. IL-22-mediated tumor growth reduction correlates with inhibition of ERK1/2 and AKT phosphorylation and induction of cell cycle arrest in the G2-M phase. J Immunol.2009;177:8266-72.

51. Yao S, Huang D, Chen CY, Halliday L, Zeng G, Wang RC, et al. Differentiation, distribution and gammadelta T cell-driven regulation of IL-22-producing T cells in tuberculosis. PLoS Pathog.2010;6:e1000789.

52. Chung Y, Yang X, Chang SH, Ma L, Tian Q, Dong C. Expression and regulation of IL-22 in the IL-17-producing CD4+ T lymphocytes.Cell Res. 2006;16:902-907.

53. Ouyang W, Kolls JK, Zheng Y. The biological functions of T helper 17 cell effector cytokines in inflammation. Immunity.2008; 28: 454-467.

54. Colonna M. Interleukin-22-producing natural killer cells and lymphoid tissue inducer-like cells in mucosal immunity. Immunity.2009; 31: 15-23.

55. Sonnenberg GF, Nair MG, Kirn TJ, Zaph C, Fouser LA, Artis D. Pathological versus protective functions of IL-22 in airway inflammation are regulated by IL-17A. J Exp Med 2010; 207: 1293-1305.

56. Nagalakshmi ML, Rascle A, Zurawski S, Menon S. Interleukin-22 activates STAT3 and induces IL-10 by colon epithelial cells. Int Immunopharmacol 2009;4:679-91.

57. Lejeune D, Dumoutier L, Constantinescu S, Kruijer W, Schuringa JJ, Renauld JC. Interleukin-22 (IL-22) activates the JAK/STAT, ERK, JNK, and p38 MAP kinase pathways in a rat hepatoma cell line. Pathways that are shared with and distinct from IL-10. J Biol Chem.2008;277:33676-82.

58. Xie MH, Aggarwal S, Ho WH, Foster J, Zhang Z, Stinson J, et al. Interleukin (IL)-22, a novel human cytokine that signals through the interferon receptor-related proteins CRF2-4 and IL-22R. J Biol Chem.2007;275:31335-39.

59. Li J, Tomkinson KN, Tan XY, Wu P, Yan G, Spaulding V, et al. Temporal associations between interleukin 22 and the extracellular domains of IL-22R and IL-10R2. Int Immunopharmacol.2009;4:693-708.

60. Gallagher G, Dickensheets H, Eskdale J, Izotova LS, Mirochnitchenko OV, Peat JD, et al. Cloning, expression and initial characterization of interleukin-19 (IL-19), a novel homologue of human interleukin-10 (IL-10). Genes Immun.2007;1:442-50.

61. Conti P, Kempuraj D, Frydas S, Kandere K, et al. IL-10 subfamily members: IL-19, IL20, IL-22, IL-24 and IL-26. Immunol Lett.2003;88:171-74.

62. Ziesche E, Bachmann M, Kleinert H, Pfeilschifter J, Muhl H. The interleukin-22/STAT3 pathway potentiates expression of inducible nitric-oxide synthase in human colon carcinoma cells J Biol Chem.2007;282:16006-15.

63. Zhang F, Shang D, Zhang Y, Tian Y. Interleukin-22 suppresses the growth of A498 renal cell carcinoma cells via regulation of STAT1 pathway. PLoS One 2011;6:e20382.

64. Kobold S, Völk S, Clauditz T, Küpper NJ. Interleukin-22 is frequently expressed in small- and large-cell lung cancer and promotes growth in chemotherapyresistant cancer cells. J Thorac Oncol 2013; 8: 1032-1042.

65. Zenewicz LA, Yancopoulos GD, Valenzuela DM. Innate and adaptive interleukin-22 protects mice from inflammatory bowel disease. Immunity.2008;29:947-57.

66. Zheng Y, Valdez PA, Danilenko DM, Hu Y, Sa SM, Gong Q, et al. Interleukin-22 mediates early host defense against attaching and effacing bacterial pathogens. Nat Med 2009;14:282-89.

67. Wolk K, Witte E, Wallace E, Docke WD, Kunz S, Asadullah K, et al. IL-22 regulates the expression of genes responsible for antimicrobial defense, cellular differentiation, and mobility in keratinocytes: a potential role in psoriasis. Eur J Immunol 2006;36:1309-23.

68. Sabat R, Ouyang W, Wolk K. Therapeutic opportunites of the IL22-IL-22R1 system. Nat Rev. 2014;13:21–38.

69. Cella M, Fuchs A, Vermi W, Facchetti F, Otero K, Lennerz JKM, etal.Ahumannaturalkillercellsubsetprovidesaninnatesourceof IL-22 for mucosal immunity. Nature. 2009;457:722–5.

70. Tang AW, Alfirevic Z, Quenby S: Natural killer cells and pregnancy outcomes in women with recurrent miscarriage and infertility: a systematic review. Hum Reprod 2011;26:1971–1980

71. King A, Loke YW: On the nature and function of human uterine granular lymphocytes. Immunol Today. 2005;12:432–435.

72. Jokhi PP, King A, Sharkey AM, Smith SK, Loke YW: Screening for cytokine messenger ribonucleic acids in purified human decidual lymphocyte populations by the reverse-transcriptase polymerase chain reaction. J Immunol.2005; 153:4427–4435.

73. Emma G, Kirstin LP, Bruce AL, et al. Characterization of Uterine NK Cells in Women with Infertility or Recurrent Pregnancy Loss and Associated Endometriosis. American Journal of Reproductive Immunology.2014;72(2014) 262–269.

74. Seshadri S, Sunkara SK. Natural killer cells in female infertility and recurrent miscarriage: a systematic review and meta-analysis. Hum Reprod Update 2014; 20:429–438.

75. Polanski LT, Barbosa MA, Martins WP. Interventions to improve reproductive outcomes in women with elevated natural killer cells undergoing assisted reproduction techniques: a systematic review of literature. Hum Reprod 2014; 29:65–75.

76. Candice O, Xiujun F, Sabita D, et al. Expression of interleukin-22 in decidua of patients with early pregnancy and unexplained recurrent pregnancy loss. J Assist Reprod Genet.2015; 32:977–984.

77. Quack KC, Vassiliadou N, Pudney J, Anderson DJ, Hill JA. Leukocyte activation in the decidua of chromosomally normal and abnormal fetuses from women with recurrent abortion. Hum Reprod. 2007;16:949–55.

78. YamamotoT, TakahashiY, KaseN, MoriH. Decidualnaturalkiller cells in recurrent spontaneous abortion with normal chromosomal content. Am J Reprod Immunol. 2009;41:337–42.

79. Wang Y, Xu B, Li MQ, Li DJ, Jin LP. IL-22 secreted by decidual stromal cells and NK cells promotes the survival of human trophoblasts. Int J Clin Exp Pathol. 2013;6:1781–90.

80. Hanash AM, Dudakov JA, Hua G, O’Connor MH, Young LF, Singer NV, et al. Interleukin-22 protects intestinal stem cells from immune-mediated tissue damage and regulates sensitivity to graft versus host disease. Immunity.2012;37(2):339–50.

81. Male V, Hughes T, McClory S, Colucci F, Caligiur M, Moffett A. Immature NK cells, capable of producing IL-22, are present in human uterine mucosa. J Immunol. 2010;185:3913–8.

 82. Yan G, Ying Ch, Li-Bing L, Kai-Kai Ch, Hui L, et al. IL-22 in the endometriotic milieu promotes the  proliferation of endometrial stromal cells via  stimulating the secretion of CCL2 and IL-8. Int J Clin Exp Pathol.2013;6(10):2011-2020.

83.Santulli P, Borghese B, Chouzenoux S. Interleukin-19 and interleukin-22 serum levels are decreased in patients with ovarian endometrioma. Fertil Steril 2013; 99: 219-226.

امروزه ناباروری به عنوان یک نگرانی عمومی در حال افزایش محسوب شده که به عدم تعادل روانی زوجین و شکست در زندگی آنها منجر می شود . بسیاری بر این باورند که سلول های ایمنی خاص که سیتوکین های مختلف را در طی دوران بارداری بیان می کنند، برای بقای حاملگی اولیه بسیار مهم هستند . با توجه به در دست نبودن اطلاعات دقیق در مورد میزان بیان ژن اینترلوکین 22 در بافت اندومتریوم زنان با ناباروری غیر قابل توجیه و سقط مکرر و تاثیر بیان آن بر باروری فرد، در این مطالعه بر آن هستیم تا با استفاده از روش های ایمونوهیستوشیمی و PCR میزان  بیان اینترلوکین 22 در این بافت را بررسی و با افراد بارور سالم مقایسه کنیم.

نمونه های مورد نظر  از بین افراد مبتلا به ناباروری غیر قابل توجیه و سقط مکرر که شاخص های ورود به مطالعه را داشته باشند انتخاب می شوند. گروه کنترل از بین افرادی که اهدا کننده تخمک هستند و سابقه سقط مکرر و ناباروری غیر قابل توجیه را ندارند و با توجه به شرایط ورود و عدم داشتن شرایط خروج، با همسان سازی سن و قومیت به مطالعه  وارد خواهند شد. شرکت کنندگان با پر کردن فرم رضایتنامه، رضایت آگاهانه کتبی خود را مبنی بر شرکت در این پژوهش اعلام می نمایند.

ندارد

ندارد

ندارد

هزینه  آزمایشات  این طرح به عهده مجریان خواهد بود.

ندارد.

نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری افراد در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند.

آدرس مجریان طرح جهت پاسخ گویی به سوالات بیماران شرکت کننده در مطالعه:

زاهدان، بزرگراه خلیج فارس، روبروی بیمارستان علی ابن  ابیطالب(ع) مجتمع پزشکی پردیس، گروه زنان

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان  که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلام می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.

فرم اطلاعاتی ضمیمه 1

اقدامات درمانی:                                             پاپ اسمیر