بررسی پلی مورفیسم های ژن های Pre miR-3131 (rs57408770),miR-30C-1 (rs928508),miR-221(rs17084733),miR34a(rs35301225),miR-205(rs3842530), miR-1262(rs12740674) در زنان مبتلا به سرطان سینه در مقایسه با زنان سالم

ad

سرطان سینه یکی از شایعترین بدخیمی ها در زنان در سراسر جهان است (1).که بیش از یک میلیون زن راسالانه تحت تاثیرقرارداده و21.4درصد از کلیه سرطان ها رادرمیان زنان ایرانی تشکیل می دهد(1, 2)علت دقیق سرطان سینه هنوز ناشناخته است (3).امابرخی ازفاکتورهامثل زمینه ژنتیکی،عوامل محیطی هورمونهای غدددرون ریز ویائسگی دروقوع این سرطان می توانند نقش داشته باشند(4).که عمدتا درزنان رخ می دهدوکمتر در مردان رایج است(5).طبق گزارش انجمن سرطان امریکامیزان سرطان سینه دربین زنان درسراسر جهان درسال2012 تقریبا1/676/600موردشناسایی شدکه521/900مورداز انها منجر به مرگ شد(6).میزان افرادمبتلابه سرطان سینه درسال2012درکشورهای اسیایی 639/824موردشناسایی شدکه ازهر100000نفردر5کشورلبنان با78/7اسرائیل80/5ارمنستان74/1سنگاپور65/7وقزاقستان73/5بیشترین میزان ابتلا به سرطان سینه درمقایسه باجمعیت ایرانی رادارند(7). گزارش شده است که زنان ایرانی درمقایسه با کشور های غربی در سنین پایینتری به سرطان سینه مبتلا می شوند. (8)

:Non coding RNAs(ncRNAs)

از جمله ژنهای غیر کد کننده هستند که رونویسی می شونداما ترجمه نمی شوند(9).non coding RNAsهاعموما به دودسته تقسیم می شوند 1.Housekeeping RNAs   2.regulatory RNAs(10).

regulatory RNAsها حداقل به دودسته تقسیم می شوند.1.SHORT nc RNAs

(11) . Long non coding RNAs.2 MicroRNAs(miRs)

بیش از 200نوکلئوتید طول دارند(11) : long non coding RNAs

نقش های مهمی در فعالیت بیولوژیک ایفا می کنند مانند ترجمه ,تنظیم پس ازرونویسی,سازماندهی پروتئین,سیگنالینگ سلول به سلول,تنظیم چرخه سلولی,آپوپتوزوپاسخ به آسیب DNA(12).مطالعات نشان می دهد که این ژنها به عنوان پروتو انکوژن عمل می کنند(13). واختلال در عملکرد Long non coding RNAsباعث تشکیل ,پیشرفت ومتاستاز تومور می شود.و در سرطان های مختلف از جمله سرطان سینه(14),پروستات,مثانه وکلیه نقش ایفا می کنند(15).

MicroRNAs(miRNAs)

مولکولهای تک رشته ای کوچک وغیر کد کننده که از19-25نوکلئوتیدتشکیل شده اند(16, 17). در چندین فرایند بیولوژی از جمله تمایزسلولی،آپوپتوز،توسعه وتنظیم چرخه سلولی نقش دارند.(18)ژن کد گذاری شدهMiRNAsدر ابتدا به صورتMiRNAهای اولیه(pri-MiRNAs)رونویسی می شوند که توسط مجموعه های آنزیمی DOrshaوDicer پردازش روی انها صورت می گیرد ابتدا به پیش ساز MiRNAs(pre-miRNAS)وسپس بهMiRNAهای بالغ تبدیل می شوند (19).MiRNAsها به منطقهUTR3'از mRNAهدف متصل شده وتنظیم بیان ژن را پس از رونویسی کنترل می کنند(18). MiRNAsنقش کلیدی در تغییر شکل سلولی ودرشروع وپیشرفت سرطان دارند(20).برطبق مطالعات این ژن هانقش مهمی درتشخیص بالینی و شاخص پیش آگهی  دهنده برای ابتلا به سرطان می باشند(21).این ژنهاهم نقش انکوژنیک وهم سرکوب گر تومورراایفامی کنند(22).بیان غیر عادی micro RNASدر سرطان های مختلف از جمله سرطان سینه مشاهده شده است(21).

MiR-205 rs3842530 (12bp ins/del)این ژن برروی کروموزم1بازویq32واقع است(23).بر طبق مطالعات انجام شده MiR-205هم نقش انکوژنیک وهم سرکوبگرتومورراایفامی کند(24).در مطالعه ای که در چین دررابطه باپلی مورفیسمrs3842530ژن MiR205در بیماران مبتلا به سرطان سینه وسرطان ریه انجام شده است نشان داده شدکه پلی مورفیسم rs3842530هیچ ارتباطی با سرطان سینه ندارد ولی ریسک ابتلا به سرطان ریه را افزایش می دهد(25). ما به بررسی رابطه بین پلی مورفیسم این جایگاه و ریسک ابتلا به سرطان سینه دریک نمونه از جمعیت ایرانی (زاهدان) می پردازیم.

MiR34a rs35301225(C/A)این ژن بر روی بازوی کوتاه کروموزم1واقع است(26).در مطالعه ای که در آمریکا در سال2016انجام شدنشان داده شدکه بیانmir34aدر سلولهای سرطانی سینه وتومورهای اولیه کاهش می یابد.همچنین نشان داده شده کهmir34aیک ژن سرکوبگر توموراست که در سرطان های مختلف ازجمله سرطان سینه ,پروستات کبد,ریه,کلورکتال وروده بزرگ موردمطالعه قرارگرفته است(26).تاکنون یک مقاله در رابطه باارتباط پلی مورفیسمmir34ars35301225وریسک ابتلا به سرطان کلورکتال منتشر شده است نتایج این مطالعه نشان می دهد که این پلی مورفیسم ریسک ابتلا به سرطان کلورکتال را افزایش می دهد. تاکنون مطالعه ای دررابطه باپلی مورفیسمmir34a rs35301225وریسک ابتلا به سرطان سینه انجام نشده است .لذا در این پژوهش به ارتباط بین این پلی مورفیسم وریسک ابتلا به سرطان سینه در یک نمونه ازجمعیت ایرانی می پردازیم.

Pre mir-3131 rs 57408770(3bp ins/del)این ژِن بر روی کروموزم 2 بازویq35 قراردارد.این جایگاه ژنی درانتهایmiR31313'قرار گرفته است(27).با توجه به مطالعه ای که درچین انجام شد نتایج نشان داد که پلی مورفیسمPremir31313bpباریسک ابتلا به سرطان سلولهای کبدی(HCC) ارتباط دارد.همچنین متوجه شدندکه آلل insدراین جایگاه به طورمعناداری ریسک ابتلابه سرطان کبد راافزایش می دهد(28).همچنین در مطالعه ای که درایران انجام شد نشان داده شد  که این ژن به طور معنا داری ریسک ابتلا به سرطان پروستات را درجمعیت ایرانی افزایش می دهد(27).تاکنون هیچ مطالعه ای دررابطه باپلی مورفیسم این جایگاه وریسک ابتلابه سرطان سینه انجام نشده است لذادراین پژوهش به ارتباط بین این پلی مورفیسم وریسک ابتلا به سرطان سینه دریک نمونه از جمعیت ایرانی می پردازیم.

MiR-221 rs17084733(A/G)این ژن بر روی کروموزم XبازویP11واقع است(29). در شماری ازمطالعات انجام شده نشان داده شدکه این ژن بیان ژنهای خاص اپی تلیال را کاهش و بیان ژن های خاص مزانشیمی راافزایش می دهد.همچنین در مطالعه ای که در سال2013 در ایتالیا انجام شد نشان داده شد که  mir-221یکی از MicroRNAهای درگیر در سرطان سینه است(16).درمطالعه ای که درمصر در سال 2017انجام شده است نشان داده شدکه آللG در جایگاهrs17084733در مقایسه با آلل A ریسک ابتلا به سرطان تیروئید را افزایش می دهد.وهمچنین نشان داده شد که پلی مورفیسم این جایگاه ارتباطی باسرطان سلولهای کبدی((HCC ندارد(30).تاکنون هیچ مطالعه ای دررابطه باپلی مورفیسم این جایگاه وریسک ابتلا به سرطان سینه انجام نشده است لذا در این پژوهش به ارتباط بین این پلی مورفیسم وریسک ابتلا به سرطان سینه دریک نمونه از جمعیت ایرانی می پردازیم.

MiR30C-1 rs928508(A/G)این ژن برروی کروموزم1بازویP34واقع است.درمطالعه ای که در چین سال 2012انجام شد نشان داده شد که پلی مورفیسم Pre-mir-30c(A/G) باعث افزایش ریسک ابتلا به سرطان معده می شود(31).همچنین بیان شده است کهmir30cمی تواند بیومارکر بالقوه درسرطان های مختلف ازجمله سرطان سینه,سرطان تخمدان ومزوتلیوما مطرح باشد(19).همچنین در مطالعه ای که درسال 2013 در کره جنوبی انجام شد نشان داده شد که این ژن ممکن است نقش مهمی در مهار متاستاز درسرطان داشته باشد(32).همچنین درمطالعه ای که در چین درسال 2012 در رابطه با پلی مورفیسم این جایگاه وسرطان ریه انجام شد نتایج نشان داد که پلی مورفیسمrs928508هیچ ارتباطی با سرطان ریه ندارد(33). تا کنون هیچ مطالعه ای دررابطه با پلی مورفیسم این جایگاه وریسک ابتلا به سرطان سینه انجام نشده است لذا در این پژوهش به ارتباط بین این پلی مورفیسم وریسک ابتلا به سرطان سینه دریک نمونه از جمعیت ایرانی می پردازیم.

MiR-1262 rs12740674(C/T) این جایگاه ژنی بر روی کروموزم 1بازویP31 واقع است.ودر منطقهbp743,61پایین دست miR1262قرار گرفته است.درمطالعه ای که در سال 2017 در چین انجام شده است نشان داده شده که آللTدر جایگاهrs12740674 این ژن در مقایسه با آلل Cریسک ابتلا به سرطان ریه را افزایش می دهد. (34). تا کنون هیچ مطالعه ای در رابطه با پلی مورفیسم این جایگاه وریسک ابتلا به سرطان سینه انجام نشده است لذا در این پژوهش به ارتباط بین این پلی مورفیسم وریسک ابتلا به سرطان سینه دریک نمونه از جمعیت ایرانی می پردازیم.  

ad

فراوانی پلی مورفیسم rs3842530ژنmiR205  در زنان مبتلا به سرطان سینه و زنان سالم متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسمrs35301225ژنmiR34a  در زنان مبتلا به سرطان سینه و زنان سالم متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسمrs57408770 ژن pre miR-3131 درزنان مبتلا به سرطان  سینه وزنان سالم متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسمrs928508 ژن miR30C-1زنان مبتلا به سرطان  سینه وزنان سالم متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسمrs17084733ژنmiR221  در زنان مبتلا به سرطان سینه و زنان سالم متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسمrs12740674 ژنmiR-1262در زنان مبتلا به سرطان  سینه وزنان سالم متفاوت است.

تعیین و مقایسه پلی مورفیسم های ژن های

Pre miR-3131 (rs57408770),miR-30C-1 (rs928508),miR-221(rs17084733),miR34a(rs35301225),miR-205(rs3842530) and miR1262(rs12740674)

در زنان مبتلا به سرطان سینه با زنان سالم.

تعیین توزیع فراوانی پلی مورفیسم rs3842530ژنmiR205  در زنان مبتلا به سرطان سینه و مقایسه آن بازنان سالم.

تعیین توزیع فراوانی پلی مورفیسمrs35301225ژنmiR34a  در زنان مبتلا به سرطان سینه و مقایسه آن بازنان سالم.

تعیین توزیع فراوانی پلی مورفیسمrs57408770 ژن pre miR-3131 درزنان مبتلا به سرطان  سینه ومقایسه آن بازنان سالم.

تعیین توزیع فراوانی پلی مورفیسمrs928508 ژن miR30C-1زنان مبتلا به سرطان  سینه و مقایسه آن بازنان سالم.

تعیین توزیع فراوانی پلی مورفیسمrs17084733ژنmiR221  در زنان مبتلا به سرطان سینه و مقایسه آن بازنان سالم.

تعیین توزیع فراوانی پلی مورفیسمrs12740674 ژنmiR-1262در زنان مبتلا به سرطان  سینه و مقایسه آن بازنان سالم.

دانشگاه علوم پزشکی زاهدان-گروه بیوشیمی

polymorphism) : SNP (single nucleotideتغییرات تک نوکلئوتیدی درتوالی DNA است که سبب ایجاد ژنوتیپ های مختلف می شود.طبق مطالعات انجام شده این تغییرات ژنتیکی ممکن است ریسک ابتلابه برخی بیماریهااز جمله سرطان ها را در جمعیت هایی با ژنوتیپ خاصی افزایش دهد

موردی – شاهدی (case –control)

کلیه زنان مبتلا به سرطان سینه که بیماری در آن ها توسط پاتولوژیست تایید شده است وبیماری زمینه ای دیگری ندارند وگروه کنترل نیز از افراد مراجعه کننده به بیمارستان امام علی زاهدان که جهت چکاپ مراجعه می کنند سالم بوده وبیماری شناخته شده ای  ندارند

برای بررسی پلی مورفیسم ژنی حداقل 160زن مبتلا به سرطان سینه که قبلا از آن ها خون گرفته شده وموارد جدید که هم اکنون تحت درمان می باشدنیز خونگیری می شودبه همین تعداد نیزاز زنان سالم که ارتباط فامیلی با گروه بیمار ندارند خونگیری می شود.

آسان در دسترس

بررسی های آزمایشگاهی

برای بررسی  پلی مورفیسم و حذف ژنی نمونه خون در 20- درجه سانتیگراد نگهداری می‌شود. DNA نمونه خون افراد گروه شاهد و مورد به روش salting out تخلیص می‌شود. پرایمرهای اختصاصی جهت تعیین پلی مورفیسم ژنی به روش  RFLP- PCRطراحی می شود. در مرحله بعد شرایط PCR برای تعیین این پلی مورفیسم ها بهینه می شود و سپس نمونه هاPCRشده وبا انزیم محدود الاثر اختصاصی جایگاه مورد نظر برش داده شده وقطعات حاصل روی ژل اگارزالکتروفرز می شوند وژنوتیپ تعیین می شود.  

پس از گردآوری اطلاعات لازم، یافته ها در نرم افزار آماری SPSS  وارد گشته و داده ها با استفاده از آزمون­های آماری χ2  و تی تست مستقل مورد تجزیه و تحلیل قرار می گیرند. ارتباط بین پلی مورفیسم ها ی ژنی  و ریسک ابتلا به سرطان با آزمون رگرسیون لجستیک (Regression Logistic  )تحلیل شده  که نسبت شانس  (OR) محاسبه شده و pکمتر از 0.05 از لحاط آماری معنی دار در نظر گرفته می شود.

با رضایت کامل از بیماران نمونه گیری می شود و تعهد می شود نام ومشخصات بیماران در هیچ گزارشی قید نشود. انجام آزمایشات هیچ گونه هزینه ای برای بیمار نخواهد داشت(باتوجه به کد های اخلاقی شماره های1،2،7،8،9،11،12،13،15،17،18

بر اساس فرم رضایت نامه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهشهای علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی در جمهوری اسلامی ایران

1  .هدف اصلی هر پژوهش باید ارتقای سلامت انسانها توأم با رعایت کرامت و حقوق ایشان باشد.

 .2 در پژوهش بر آزمودنی انسانی، سلامت و ایمنی فرد فرد آزمودنی ها در طول و بعد از اجرای پژوهش، بر تمامی مصالح دیگر اولویت دارد. هر پژوهشی که بر روی آزمودنی انسانی انجام میگیرد، باید توسط افرادی طراحی و اجرا شود که تخصص و مهارت بالینی لازم و مرتبط را داشته باشند. در کارآزماییهای بالینی بر روی بیماران یا داوطلبهای سالم نظارت پزشک دارای مهارت و دانش متناسب الزامی است.

 .3 پژوهش بر انسان فقط در صورتی توجیهپذیر است که منافع بالقوهی آن برای هر فرد آزمودنی بیشتر از خطرهای آن باشد. در پژوهشهای دارای ماهیت غیر درمانی، سطح آسیبی که آزمودنی در معرض آن قرار میگیرد نباید بیشتر از آنچه باشد که مردم عادی در زندگی روزمرهی خود با آن مواجه میشوند. حصول اطمینان از این امر برعهدهی طراحان، مجریان و همکاران پژوهش و تمامی شوراهای بررسی یا پایشکنندهی پژوهش از جمله کمیتهی اخلاق در پژوهش است.

.4مواردی از قبیل سرعت، سهولت کار، راحتی پژوهشگر، هزینهی پایینتر و/ یا صرفاً عملی بودن آن به هیچ وجه نباید موجب قرار دادن آزمودنی در معرض خطر یا زیان افزوده یا تحمیل هر گونه محدودیت اختیار اضافی به وی شود.

.5 قبل از آغاز هر پژوهش پزشکی ، باید اقدامات اولیه جهت به حداقل رساندن زیان احتمالی وارده به آزمودنیها و تامین سلامت آنها انجام گیرد.

.6در کارآزمایی های بالینی دوسوکور که آزمودنی از ماهیت دارویی یا مداخلهای که برای وی تجویز شده بیاطلاع است، پژوهشگر باید تدابیر لازم جهت کمکرسانی به آزمودنی در صورت لزوم و در شرایط اضطراری را تدارک ببیند.

.7 اگر در حین اجرای پژوهش مشخص شود که خطرات شرکت در این پژوهش برای آزمودنیها بیش از فواید بالقوهی آن است، باید آن پژوهش بلافاصله متوقف شود.

.8 طراحی و اجرای پژوهشهایی که بر روی آزمودنی انسانی انجام میگیرند، باید منطبق با اصول علمی پذیرفته شده بر اساس دانش روز و مبتنی بر مرور کامل منابع علمی موجود و پژوهشهای قبلی آزمایشگاهی، و در صورت لزوم، حیوانی مناسب باشد. مطالعات حیوانی باید با رعایت کامل اصول اخلاقی کار با حیوانات آزمایشگاهی انجام شوند.

.9در پژوهشهای پزشکی که ممکن است به محیط زیست آسیب برسانند، باید احتیاطهای لازم در جهت حفظ و نگهداری و عدم آسیب رسانی به محیط ریست انجام گیرد.

10. هر پژوهشی باید بر اساس و منطبق بر یک طرحنامه (پروپوزال) به انجام برسد. در کارآزماییهای بالینی باید علاوه بر طرح نامه، دستورالعمل (پروتکل) نیز تهیه و ارائه شود. طرحنامه و دستورالعمل باید شامل تمامی اجزای ضروری باشد. از جمله بخش ملاحظات اخلاقی، اطلاعات مربوط به بودجه، حمایت کنندهها، وابستگیهای سازمانی، موارد تعارض منافع بالقوهی دیگر، مشوقهای شرکت کنندگان، پیش بینی درمان و یا جبران خسارت افراد آسیب دیده در پژوهش (2).در مواردی که لازم است رضایتنامهی آگاهانه بهصورت کتبی اخذ شود، فرم رضایتنامه باید تدوین و به طرحنامه پیوست شده باشد(2). پیش از تصویب یا تأیید طرحنامه از سوی کمیتهی مستقل اخلاق در پژوهش، نباید اجرای پژوهش شروع شود.

11 . کمیتهی اخلاق در پژوهش علاوه بر بررسی و تصویب طرحنامه و دستورالعمل، این حق را دارد که طرحها را در حین و بعد از اجرا را از نظر رعایت ملاحظات اخلاقی مورد پایش قرار دهد. اطلاعات و مدارکی که برای پایش از سوی کمیتهی اخلاق درخواست میشود، باید از سوی پژوهشگران در اختیار این کمیته گذاشته شود.

12 . انتخاب آزمودنیهای بالقوه از میان جمعیت بیماران یا هر گروه جمعیتی دیگر، باید منصفانه باشد ،بهنحوی که توزیع بارها (خطرات یا هزینهها) و منافع شرکت در پژوهش، در آن جمعیت و کل جامعه ،تبعیضآمیز نباشد.

13 . کسب رضایت آگاهانه و آزادانه در هر پژوهشی که بر روی آزمودنی انسانی اجرا میشود، الزامی است. این رضایت باید به شکل کتبی باشد. در مواردی که اخذ رضایت آگاهانهی کتبی غیر ممکن یا قابل صرفنظر باشد، باید موضوع با ذکر دلایل به کمیتهی اخلاق منتقل شود. در صورت تأیید کمیتهی اخلاق ،اخذ رضایت کتبی قابل تعویق یا تبدیل به رضایت شفاهی یا ضمنی خواهد بود.

. 14- اگر در طول اجرای پژوهش تغییری در نحوه اجرای پژوهش داده شود یا اطلاعات جدیدی به دست آید که احتمال داشته باشد که بر تصمیم آزمودنی مبنی بر ادامهی شرکت در پژوهش تاثیر گذار باشد، باید موضوع به اطلاع کمیتهی اخلاق رسانده شود و در صورت موافقت کمیته با ادامهی پژوهش، مراتب به اطلاع آزمودنی رسانده شود و رضایت آگاهانه مجددا اخذ گردد.

. 15 پژوهشگر باید از آگاهانه بودن رضایت اخذشده اطمینان حاصل کند. برای این منظور، در تمامی پژوهشهای پزشکی، اعم از درمانی و غیردرمانی، پژوهشگر موظف است فرد در نظر گرفته شده بهعنوان آزمودنی را از تمامی اطلاعاتی که میتوانند در تصمیمگیری او مؤثر باشند، بهنحو مناسبی آگاه سازد. این اطلاعات مشتملند بر: عنوان و اهداف پژوهش، طول مدت پژوهش، روشی که قرار است بهکار گرفته شود (شامل احتمال تخصیص تصادفی به گروهمورد یا شاهد)، منابع تأمین بودجه، هر گونه تعارض منافع احتمالی، وابستگی سازمانی پژوهشگر، و فواید و زیانهایی که انتظار میرود مطالعه در بر داشته باشد. همچنین، هر آزمودنی باید بداند که میتواند هر لحظه که بخواهد از مطالعه خارج شود و باید دربارهی خطرات و زیانهای بالقوهی ناشی از ترک زودرس پژوهش آگاه و پشتیبانی شود. پژوهشگر همچنین باید به تمامی سؤالات و دغدغههای این افراد، با حوصله و دقت پاسخ بدهد. این موارد باید در رضایتنامهی آگاهانه منعکس شود.

 .16  پژوهشگر باید از آزادانه بودن رضایت اخذ شده اطمینان حاصل کند. رفتارهایی که به هر نحوی متضمن تهدید ،اغوا، فریب و یا اجبار باشد موجب ابطال رضایت آزمودنی میشود. به فرد باید فرصت کافی برای مشاوره با افرادی که مایل باشد – نظیر اعضای فامیل یا پزشک خانواده - داده شود. همچنین، در پژوهشهایی که پژوهشگر مقام سازمانی بالاتری نسبت به آزمودنی داشته باشد، دلایل این شیوهی جذب آزمودنی، باید توسط کمیتهی اخلاق تأیید شود، در این موارد شخص ثالث و معتمدی باید رضایت را دریافت کند.

 17.پژوهشگر ارشد مسؤول مستقیم ارائهی اطلاعات کافی و به زبان قابل فهم برای آزمودنی ، اطمینان از درک اطلاعات ارائه شده، و اخذ رضایت آگاهانه است. در مواردی که بنا بهدلیلی، نظیر زیاد بودن تعداد آزمودنیها، این اطلاعرسانی از طریق شخص دیگری انجام میگیرد، این پژوهشگر ارشد است که مسؤول انتخاب فردی آگاه و مناسب برای این کار و حصول اطمینان از تأمین شرایط مذکور در این بند است.

 18. در پژوهشهایی که از مواد بدنی (شامل بافتها و مایعات بدن انسان) یا دادههایی استفاده میشود که هویت صاحبان آنها معلوم یا قابل کشف و ردیابی است، باید برای جمعآوری، تحلیل، ذخیرهسازی و /یا استفادهی مجدد از آنها رضایت آگاهانه گرفته شود. در مواردی که اخذ رضایت غیرممکن باشد یا اعتبار پژوهش را خدشهدار کند، میتوان در صورت بررسی مورد و تصویب کمیتهی اخلاق ، از دادهها یا مواد بدنی ذخیره شده، بدون اخذ رضایت آگاهانه استفاده کرد.

.19 عدم قبول شرکت در پژوهش، یا ادامه ندادن به همکاری، نباید هیچگونه تأثیری بر خدمات درمانی که در همان مؤسسه – نظیر بیمارستان – به فرد ارائه میشود، داشته باشد. این موضوع باید در فرایند اخذ رضایت آگاهانه، به آزمودنی اطلاع داده شود.

. 20 در مواردی که آگاه کردن آزمودنی دربارهی جنبهای از پژوهش باعث کاهش اعتبار پژوهش می شود، ضرورت اطلاعرسانی ناکامل از طرف پژوهشگر باید توسط کمیتهی اخلاق تأیید شود. بعد از رفع عامل این محدودیت، باید اطلاعرسانی کامل به آزمودنی انجام گیرد.

. 21 برخی از افراد یا گروههایی از مردم، نظیر ناتوانان ذهنی، کودکان، جنین و نوزاد، بیماران اورژانسی ،یا زندانیانکه ممکن است بهعنوان آزمودنی در پژوهش شرکت کنند، نمیتوانند برای دادن رضایت، آگاهی یا آزادی لازم را داشته باشند. این افراد یا گروهها آسیبپذیر دانسته میشوند و باید مورد حفاظت ویژه قرار گیرند.

22. از گروههای آسیبپذیر هیچگاه نباید (به دلایلی چون سهولت دسترسی ) به عناون آزمودنی ترجیحی استفاده شود. پژوهش پزشکی با استفاده از گروهها یا جوامع آسیبپذیر تنها در صورتی موجه است که با هدف پاسخگویی به نیازهای سلامت و اولویتهای همان گروه یا جامعه طراحی و اجرا شود و احتمال معقولی وجود داشته باشد که همان گروه یا جامعه از نتایج آن پژوهش سود خواهد برد.

 . 23 در پژوهش بر روی گروههای آسیبپذیر، وظیفهی اخذ رضایت آگاهانه مرتفع نمیشود. در مورد افرادی که سرپرست قانونی دارند، پژوهشگر موظف است که علاوه بر اخذ رضایت آگاهانه از سرپرست قانونی، متناسب با ظرفیت خود فرد، از وی رضایت آگاهانه اخذ کند. در هر حال، باید به امتناع این افراد از شرکت در پژوهش احترام گذاشته شود.

. 24 اگر در حین اجرای پژوهش، آزمودنی دارای ظرفیت، ظرفیت خود را از دست بدهد یا آزمودنی فاقد ظرفیت، واجد ظرفیت شود، باید با توجه به تغییر حاصله، رضایت آگاهانه برای ادامهی پژوهش از سرپرست قانونی یا خود فرد اخذ شود.

. 25پژوهشگر مسؤول رعایت اصل رازداری و حفظ اسرار آزمودنیها و اتخاذ تدابیر مناسب برای جلوگیری از انتشار آن است. همچنین، پژوهشگر موظف است که از رعایت حریم خصوصی آزمودنیها در طول پژوهش اطمینان حاصل کند. هرگونه انتشار دادهها یا اطلاعات بهدست آمده از بیماران باید بر اساس رضایت آگاهانه انجام گیرد.

. 26 هر نوع آسیب یا خسارت ناشی از شرکت در پژوهش باید بر طبق قوانین مصوب جبران خسارت شود. این امر باید در هنگام طراحی پژوهش لحاظ شده باشد. نحوهی تحقق این امر ترجیحاً بهصورت پوشش بیمهای نامشروط باشد.

 .27در پایان پژوهش، هر فردی که به عنوان آزمودنی به آن مطالعه وارد شده است، این حق را دارد که دربارهی نتایج مطالعه آگاه شود و از مداخلات یا روشهایی که سودمندیشان در آن مطالعه نشان داده شده است، بهرهمند شود.

 .28 پژوهشگران موظفند که نتایج پژوهشهای خود را صادقانه ، دقیق، و کامل منتشر کنند. نتایج، اعم از منفی یا مثبت، و نیز منابع تأمین بودجه، وابستگی سازمانی، و تعارض منافع – در صورت وجود – باید کاملاً آشکارسازی شوند. پژوهشگران نباید در هنگام عقد قرارداد انجام پژوهش، هیچ گونه شرطی را مبنی بر حذف یا عدم انتشار یافتههایی که از نظر حمایت کنندهی پژوهش مطلوب نیست، بپذیرند.

 . 29 نحوه ی گزارش نتایج پژوهش باید ضامن حقوق مادی و معنوی تمامی اشخاص مرتبط با پژوهش ،از جمله خود پژوهشگر یا پژوهشگران، آزمودنیها و مؤسسهی حمایت کنندهی پژوهش باشد

. 30 گزارشها و مقالات حاصل از پژوهشهایی که مفاد این راهنما را نقض کرده اند، نباید برای انتشار پذیرفته شوند. -31. روش پژوهش نباید با ارزشهای احتماعی، فرهنگی و دینی جامعه در تناقض باشد.

راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران

1. پژوهشگر باید به این امر مهم توجه داشته باشد که بافت ها و اعضای مورد استفاده، دارای منشا انسانی اند و کرامت انسانی اقتضا می کند که جمع آوری، نگه داری، استفاده و نابود سازی آنها توام با رعایت ملاحضات و شوون مرتبط باشد.

. 2از اجزای بدنی دارای منشا انسانی باید تنها در پژوهش هایی استفاده شود که اهداف ارزشمندی را در راستای مبارزه با بیماری ها و ارتقای سلامت انسان ها دنبال می کند.

. 3 تمام پژوهش ها بر روی عضو و بافت انسانی، پیش از اجرا، باید مورد تایید کمیته ی اخلاق در پژوهش مرتبط قرار گیرد. کمیته ی اخلاق در پژوهش حق دارد درتمامی مراحل پژوهش بر آن نظارت داشته باشد. پژوهشگران باید در این زمینه با کمیته ی اخلاق در پژوهش همکاری کنند.

. 4 رضایت آگاهانه ی فرد دهنده ی عضو یا بافت، یا جانشین قانونی او، شرط اساسی در تایید اخلاقی هر پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی است. رضایت نامه باید با رعایت تمامی اصول مرتبط تهیه و هنگام ارسال طرح نامه برای تصویب، به آن پیوست شده باشد.

. 5 در مواردی که اخذ رضایت آگاهانه از دهنده ی نمونه ذخیره شده یا جانشین قانونی او امکان پذیر نباشد، به شرط وجود رضایت کلی اولیه بر استفاده پژوهشی،در صورت تایید کمیته ی اخلاق در پژوهش می توان از آن نمونه برای پژوهش استفاده کرد. در چنین مواردی باید از نمونه هایی استفاده شود که به نحو برگشت ناپذیر بینام شده باشد.

. 6 تمامی اطلاعاتی که از صاحبان عضو یا بافت مورد پژوهش، جمع آوری و ثبت می شود، راز حرفه ای تلقی می شود. از این رو، تمامی اصول و ملاحضات مربوط به رازداری و حفظ حریم شخصی، باید در مورد آن ها مراعات شود.

.7مرکز انجام دهنده ی پژوهش بر روی عضو و بافت باید مهارت و امکانات لازم برای حفظ رازداری را داشته باشد در غیر این صورت، اطلاعات باید به شکل بی نام و غیر قابل ردیابی ثبت و ذخیره شود.

. 8 پژوهشگر باید از اعضا و بافت هایی که به منظور پژوهش در اختیار اوقرار می گیرد استفاده بهینه کرده و از هدر رفتن آن ها جلوگیری کند.

. 9پژوهشگر موظف است که تمهیدات لازم ایمنی،از جمله آزمون های غربالگری و وسایل محافظت کننده را برای جلوگیری از آلودگی از اجزای بدنی مورد استفاده به هر فرد دیگر، اعم از پژوهشگران، آزمودنی ها و سایر افرادی که در فرایند پژوهش با این مواد سر و کار خواهند داشت، پیش بینی وتامین کنند.

. 10 پژوهش بر روی عضو و بافت ممکن است به ایجاد روش ها و محصولاتی منجر شود که به استفاده تجاری از آن ها بیانجامد. حقوق مالکیت معنوی نتایج حاصل از این گونه چژوهش ها باید مورد تایید و حمایت قرار گیرد. احتمال استفاده تجاری از نتایج پژوهش و اشخاصی که احتمالا از آن منتفع خواهند شد باید در رضایت نامه آورده شود.

. 11 زمان، نحوه و میزان اطلاع آزمودنی ها از نتایج پژوهش باید در رضایت نامه آورده شود.در هر حال، آزمودنی یا نماینده قانونی او باید به تمامی اطلاعاتی که در طول پژوهش درباره او به دست می آید، دسترسی داشته باشد.

. 12 در صورت کمبود بافت یا عضو، باید استفاده های درمانی بر استفاده های پژوهشی اولویت داشته باشد.

- عدم همکاری بیمار

-مشکل تهیه مواد وامکان طولانی شدن زمان دریافت آنها

سرطان سینه,پلی مورفیسم وmicro RNAs

1.            Rezaei M, Hashemi M, Sanaei S, Mashhadi MA, Taheri M. Association between vascular endothelial growth factor gene polymorphisms with breast cancer risk in an Iranian population. Breast cancer: basic and clinical research. 2016;10:85.

2.            Ghaffari K, Hashemi M, Ebrahimi E, Shirkoohi R. BIRC5 Genomic Copy Number Variation in Early-Onset Breast Cancer. Iranian biomedical journal. 2016;20(4):241.

3.            Hashemi M, Omrani M, Eskandari-Nasab E, Hasani S-S, Mashhadi MA, Taheri M. A 40-bp insertion/deletion polymorphism of Murine Double Minute2 (MDM2) increased the risk of breast cancer in Zahedan, Southeast Iran. Iranian biomedical journal. 2014;18(4):245.

4.            Farsinejad-Marj M, Talebi S, Ghiyasvand R, Miraghajani M. Adherence to Mediterranean diet and risk of breast cancer in premenopausal and postmenopausal women. Archives of Iranian Medicine (AIM). 2015;18(11).

5.            Kooshyar MM, Nassiri M, Nasiri K. Hereditary genes and SNPs associated with breast cancer. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention. 2013;14.

6.            Khatami F, Aghayan HR, Sanaei M, Heshmat R, Tavangar SM, Larijani B. The potential of circulating tumor cells in personalized management of breast cancer: A systematic review. Acta Medica Iranica. 2017;55(3):175-93.

7.            Ghoncheh M, Mohammadian-Hafshejani A, Salehiniya H. Incidence and mortality of breast cancer and their relationship to development in Asia. Asian Pac J Cancer Prev. 2015;16(14):6081-7.

8.            Hashemi M, Amininia S, Ebrahimi M, Hashemi SM, Taheri M, Ghavami S. Association between hTERT polymorphisms and the risk of breast cancer in a sample of Southeast Iranian population. BMC research notes. 2014;7(1):895.

9.            Ling H, Fabbri M, Calin GA. MicroRNAs and other non-coding RNAs as targets for anticancer drug development. Nature reviews Drug discovery. 2013;12(11):847-65.

10.          Rinn JL, Chang HY. Genome regulation by long noncoding RNAs. Annual review of biochemistry. 2012;81:145-66.

11.          Tao L, Bei Y, Zhou Y, Xiao J, Li X. Non-coding RNAs in cardiac regeneration. Oncotarget. 2015;6(40):42613.

12.          Giovarelli M, Bucci G, Ramos A, Bordo D, Wilusz CJ, Chen C-Y, et al. H19 long noncoding RNA controls the mRNA decay promoting function of KSRP. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2014;111(47):E5023-E8.

13.          Li L, Feng T, Lian Y, Zhang G, Garen A, Song X. Role of human noncoding RNAs in the control of tumorigenesis. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2009;106(31):12956-61.

14.          Cerk S, Schwarzenbacher D, Adiprasito JB, Stotz M, Hutterer GC, Gerger A, et al. Current status of long non-coding RNAs in human breast cancer. International journal of molecular sciences. 2016;17(9):1485.

15.          Martens-Uzunova ES, Böttcher R, Croce CM, Jenster G, Visakorpi T, Calin GA. Long noncoding RNA in prostate, bladder, and kidney cancer. European urology. 2014;65(6):1140-51.

16.          Piva R, Spandidos DA, Gambari R. From microRNA functions to microRNA therapeutics: novel targets and novel drugs in breast cancer research and treatment. International journal of oncology. 2013;43(4):985-94.

17.          Lü L, Mao X, Shi P, He B, Xu K, Zhang S, et al. MicroRNAs in the prognosis of triple-negative breast cancer: A systematic review and meta-analysis. Medicine. 2017;96(22).

18.          van Schooneveld E, Wildiers H, Vergote I, Vermeulen PB, Dirix LY, Van Laere SJ. Dysregulation of microRNAs in breast cancer and their potential role as prognostic and predictive biomarkers in patient management. Breast cancer research. 2015;17(1):21.

19.          Kong X, Xu X, Yan Y, Guo F, Li J, Hu Y, et al. Estrogen regulates the tumour suppressor MiRNA-30c and its target gene, MTA-1, in endometrial cancer. PLoS One. 2014;9(3):e90810.

20.          Muluhngwi P, Klinge CM. Roles for miRNAs in endocrine resistance in breast cancer. Endocrine-related cancer. 2015;22(5):R279-R300.

21.          Wang W, Luo Y-p. MicroRNAs in breast cancer: oncogene and tumor suppressors with clinical potential. Journal of Zhejiang University SCIENCE B. 2015;16(1):18-31.

22.          Le Quesne J, Caldas C. Micro‐RNAs and breast cancer. Molecular oncology. 2010;4(3):230-41.

23.          Zeng Y, Zhu J, Shen D, Qin H, Lei Z, Li W, et al. Repression of Smad4 by miR‑205 moderates TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition in A549 cell lines. International journal of oncology. 2016;49(2):700-8.

24.          Orang AV, Safaralizadeh R, Hosseinpour Feizi M. Insights into the diverse roles of miR-205 in human cancers. Asian Pac J Cancer Prev. 2014;15(2):577-83.

25.          Zou F, Li J, Jie X, Peng X, Fan R, Wang M, et al. Rs3842530 polymorphism in microRNA-205 host gene in lung and breast cancer patients. Medical science monitor: international medical journal of experimental and clinical research. 2016;22:4555.

26.          Adams BD, Parsons C, Slack FJ. The tumor-suppressive and potential therapeutic functions of miR-34a in epithelial carcinomas. Expert opinion on therapeutic targets. 2016;20(6):737-53.

27.          Hashemi M, Bahari G, Sattarifard H, Narouie B. Evaluation of a 3-base pair indel polymorphism within pre-microRNA-3131 in patients with prostate cancer using mismatch polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism. Molecular and Clinical Oncology. 2017;7(4):696-700.

28.          Wang C, Li L, Yin Z, Zhang Q, Zhao H, Tao R, et al. An indel polymorphism within pre-miR3131 confers risk for hepatocellular carcinoma. Carcinogenesis. 2016;38(2):168-76.

29.          Ciafre S, Galardi S, Mangiola A, Ferracin M, Liu C-G, Sabatino G, et al. Extensive modulation of a set of microRNAs in primary glioblastoma. Biochemical and biophysical research communications. 2005;334(4):1351-8.

30.          Shaker O, Alhelf M, Morcos G, Elsharkawy A. miRNA-101-1 and miRNA-221 expressions and their polymorphisms as biomarkers for early diagnosis of hepatocellular carcinoma. Infection, Genetics and Evolution. 2017;51:173-81.

31.          Mu Y-p, Su X-l. Polymorphism in pre-miR-30c contributes to gastric cancer risk in a Chinese population. Medical Oncology. 2012;29(3):1723-32.

32.          Poudel S, Song J, Jin E-J, Song K. Sulfuretin-induced miR-30C selectively downregulates cyclin D1 and D2 and triggers cell death in human cancer cell lines. Biochemical and biophysical research communications. 2013;431(3):572-8.

33.          Chen J, Liu Y, Hu Z, Shen H. Single nucleotide polymorphism in flanking region of miR-30c influences the maturing process of miR-30c in lung carcinoma. Zhonghua zhong liu za zhi [Chinese journal of oncology]. 2012;34(9):664-8.

34.          Xie K, Chen M, Zhu M, Wang C, Qin N, Liang C, et al. A polymorphism in miR‐1262 regulatory region confers the risk of lung cancer in Chinese population. International Journal of Cancer. 2017.

بررسی پلی مورفیسم های ژن های Pre miR-3131 (rs57408770),miR-30C-1 (rs928508),miR-221(rs17084733),miR34a(rs35301225),miR-205(rs3842530), miR-1262(rs12740674) در زنان مبتلا به سرطان سینه در مقایسه با زنان سالم

نمونه گیری وتخلیص DNA از خون تام و انجام PCR

این تحقیق اگر چه فایده فوری نخواهد داشت اما بعلت بررسی استعداد ابتلا به سرطان پستان برای سایر افراد جامعه مفید خواهد بود.

در این طرح بغیر از خونگیری که توسط پرسنل مجرب صورت میگیرد،نمونه ای از بیمار گرفته نمیشود.تنها عارضه جانبی ممکن در زمان خونگیری خواهد بود که با توجه به خبره بودن پرسنل،بعید بنظر میرسد.

جبران عوارض احتمالی بر عهده پژوهشگران خواهد بود.

کلیه هزینه های تشخیصی به عهده مجریان طرح خواهد بود و بیمار هزینه ای را پرداخت نخواهد کرد.

در این قسمت باید شرح داده شود که در صورت عدم پذیرش روش انتخابی پژوهشگر، بیمار از چه روشهای درمانی یا تشخیصی دیگرتوسط پژوهشگر می تواند استفاده نماید.

نتایج آزمایشها و روشهای به کار رفته به اطلاع بیمار خواهد رسید و این نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری وی در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند

دکتر محمد هاشمی

زاهدان- پردیس دانشگاه علوم پزشکی- دانشکده پزشکی- گروه بیوشیمی

تلفن 09173640366

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.

ندارد