بررسی پلی مورفیسم ژن های SIRT1 و CYP1A2 در بیماران مبتلا به سرطان مثانه در مقایسه با افراد سالم

گروه بیوشیمی

سرطان یک بیماری ‍‍پیچیده است که به دلیل تعامل بین عوامل محیطی و ژنتیکی ایجاد می شود. سرطان مثانه در همه کشورهای جهان اتفاق می افتد و پنجمین نوع سرطان در ایالات متحده و دومین بدخیمی شایع بعد از سرطان پروستات در جهان است با این حال در ایران شایع ترین سرطان سیستم های دستگاه تناسلی و سومین سرطان شایع در مردان می باشد. بروز سرطان مثانه در آسیا نسبت به غرب کمتر است. در سراسر جهان حدود 336000 مورد جدید سرطان مثانه در سال 2000 بروز کرده که دو سوم آن ها در کشورهای پیشرفته بوده است. سرطان مثانه چهارمین سرطان شایع در مردان و نهمین سرطان شایع در زنان است.(1) در ایالات متحده انتظار می رود 54610 مورد سرطان مثانه در مردان و 17960مورد در زنان در سال 2013 رخ دهد.(2)

احتمال بروز این بیماری با سن افزایش میابد و از احتمال 02/0% ابتلا به سرطان مثانه در سن 39 سالگی و احتمال 69/3%  ابتلا به این بدخیمی در سن 70 سالگی اتفاق می افتد. (2)   

سرطان مثانه یک بدخیمی ناهمگن است که در 3 زیر تیپ اصلی بافت شناسی تقسیم می شود:

 1. سرطان اوروتلیال (سلول بینابینی) 2. کارسینوم سلول های سنگفرشی3. آدنو کارسینوم.(3) اکثر سرطان های مثانه (90%) از نوع سرطان سلول بینابینی است و 10% باقی مانده شامل کارسینوم های سلول سنگفرشی و آدنو کارسینوم است.(4) به طور کلی سرطان مثانه اختلال در چندین مسیر متابولیکی را نشان میدهدکه شامل واکنش های شیمیایی ضروری است که باعث تولید انرژی می شود.(3) تعدادی از عوامل خطر مانند سیگار کشیدن، رنگ، آلودگی با ویروس پاپیلومای، قرار گرفتن در معرض آمین های و هیدروکربن های آروماتیک چند حلقه ای در صنایع شیمیایی و مصرف داروهای  کارسینوژن مانند فناسیتین، چلنورافازین، سیکلوفسفامید و پرتودرمانی در ناحیه لگن، دیابت ملیتوس و چاقی مهم ترین عوامل خطر برای سرطان مثانه هستند.(5, 6) مصرف الکل یک عامل خطر مستقل برای سرطان مثانه است. الکل باعث افزایش خطر ابتلا به سرطان مثانه در جمعیت شرق آسیا شده است. (7)                                                            

 تغییر بیان بعضی از پروتئین ها یکی از دلایل استعداد ابتلاء افراد به انواع سرطان ها می باشد.  بیان ژن و پروتئین توسط پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی  (SNP) در پروموتور یا دیگر مناطق تنظیم کننده ژن تحت تاثیر قرار می گیرد بنابراین می تواند به حساسیت فرد به سرطان مثانه کمک کند.(6) وجود یک SNP (پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی) باعث ایجاد تفاوت های فردی در نتیجه رونویسی، ترجمه، خصوصیات آنزیمی و در نهایت فعالیت های آنزیمی متفاوت در افراد مختلف می گردد.(8)

در مطالعه  حاضر قصد براین است که ارتباط پلی مورفیسم های ژن های CYP1A2 و SIRT1 با سرطان مثانه مورد بررسی قرار گیرد.

 CYP1A2 (Cytochrome P450 1A2): یکی از اعضای خانواده آنزیم های سیتوکروم های P450 است که در متابولیسم مواد مختلف از جمله زنوبیوتیک ها نقش دارند. آنزیم های سیتوکروم P450 مونواکسیژنازهای مخلوطی هستند که 500 اسیدامینه داشته و در جایگاه فعال آنها یک گروه آهن دار وجود دارد.  این آنزیم ها واکنش های متابولیسم داروها، کلسترول، استروئیدها و سایر لیپیدها را کاتالیز می کنند. انجام واکنش های کاتالیز شونده با سیتوکروم p450  نیازمند یک الکترون دهنده و مولکول اکسیژن است. که الکترون دهنده در واقع  NADH  یا NADPH می باشد. از همه 57 مورد CYP شناخته شده پنج نوع آن (CYP1A2-CYP3A4-CYP2C19-CYP2C9-CYP2D6) اکسیداسیون داروها را کاتالیز می کنند.(9, 10)

CYP1A2 که در غشاء شبکه آندوپلاسمی وجود دارد به طور طبیعی در سنتز ایکوزانوئیدها نقش دارد. این آنزیم قادر است بعضی از هیدروکربن های آروماتیک موجود در دود سیگار را به مواد سرطان زا (کاسینوژن) تبدیل کند. زنوبیوتیک های دیگری از جمله کافئین، افلاتوکسین B1 و استامینوفن نیز توسط CYP1A2 متابولیزه می شوند. CYP1A2 انسانی که توسط ژن CYP1A2  کد گذاری می شود دارای وزن مولکولیKD 58 است که شامل 29 امینو اسید در ناحیه N-ترمینال و دومین ترانس ممبران و شامل هم در مرکز کاتالیتیکی است. (11) بیان این انزیم علاوه بر کبد در پانکراس و ریه نیز تشخیص داده شده است. ژن CYP1A2  شامل 7 اگزون است و روی بازوی بلند کروموزوم15q22  قرار دارد. تاکنون بیش از 40 پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی  در این ژن شناسایی شده است.(12)

 Sirt1 (Silent information regulator 1): تنظیم کننده اطلاعات خاموش از خانواده داستیلاسیون وابسته به نیکوتین آمید آدنین دی نوکلئوتید (همچنین به عنوان سیرتوئین شناخته شده است) نقش مهمی در خاموش شدن ژن و تعمیر DNA در میان دیگر پروسه های سلولی دارد. در انسان 7 نوع Sirt  وجود دارد. Sirt1  نقش مهمی در پیری سلول و آنژیوژنز دارد.(13)

 Sirt1، Sirt6 ، Sirt7  عمدتا در هسته یافت می شود که از طریق اصلاح عوامل رونویسی، کوفاکتوها و هیستون ها و تنظیم سوخت وساز انرژی، استرس و پاسخ التهابی و اصلاحDNA  ( Sirt1و Sirt5 ) و رونویسی rDNA (Sirt7 ) شرکت می کنند.(14) این پروتئین برای اولین بار در مخمرها شناسایی شده است.(15) Sirt1 در فرایندهای سیتوپلاسمی نیز نقش مهمی را ایفا میکند. خانواده سیرتوئین ها از لحاظ عملکردشان نیز تقسیم بندی می شوند به طوری که  Sirt1- Sirt2-Sirt3-Sirt5  عمل داستیلاز را انجام می دهند ولی مابقی آنها عمل ADP ریبوزیلاسیون را انجام می دهند.(16) ژن  Sirt1 روی بازوی بلند کروموزوم 10q21.3 قرار دارد.(17)

گذراندن واحد پایان نامه دانشجوی کارشناسی ارشد

دانشکده پزشکی

فراوانی پلی مورفیسم rs2069514 (G/A)  ژنCYP1A2  در بیماران مبتلا به سرطان مثانه با افراد سالم متفاوت است .

فراوانی پلی مورفیسم rs762551 (A/C) ژن CYP1A2 در بیماران مبتلا به سرطان مثانه و افراد سالم متفاوت است .

فراوانی پلی مورفیسم rs3758391 (T/C) ژن Sirt1 در بیماران  مبتلا به سرطان مثانه و افراد سالم متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم(G/T)  rs369274325 ژن Sirt1 در بیماران مبتلا به سرطان مثانه و افراد سالم متفاوت است.

تعیین فراوانی پلی مورفیسم هایrs762551  وrs2069514  ژن CYP1A2 و پلی مورفیسم های rs3758391 و rs369274325 ژن Sirt 1 در بیماران مبتلا به سرطان مثانه و مقایسه آن با افراد سالم

تعیین و مقایسه فراوانی پلی مورفیسمrs2069514 (A/G)  ژنCYP1A2 در بیماران مبتلا به سرطان مثانه با افراد سالم

تعیین و مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs762551(A/C) ژن CYP1A2 در بیماران مبتلا به سرطان مثانه و افراد سالم

تعیین و مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs3758391(T/C) ژن Sirt1 در بیماران  مبتلا به سرطان مثانه و افراد سالم

 تعیین و مقایسه فراوانی پلی مورفیسم(G/T)  rs369274325 ژن Sirt1 در بیماران مبتلا به سرطان مثانه و افراد سالم

امتیاز پژوهشی

معاونت تحقیقات وفنآوری دانشگاه

دانشگاه علوم پزشکی

 (SNP(single nucleotide polymorphism: تغییرات تک نوکلئوتیدی در توالی DNA است که سبب ایجاد ژنوتیپ های مختلف می شود. طبق مطالعات انجام شده این تغییرات ژنتیکی ممکن است ریسک ابتلا به برخی بیماری ها از جمله سرطان ها را در جمعیت هایی با ژنوتیپ خاصی افزایش دهد.

بیلان فعالیت های پژوهشی

دانشگاه علوم پزشکی و پزشکان

موردی - شاهدی (case –control)

بیماران مبتلا به سرطان مثانه و فاقد هر گونه بیماری های سیستمیک دیگر به تعداد حداقل 100 نفرانتخاب می شوند.

افراد مبتلا به سرطان مثانه مراجعه کننده به بیمارستان لبافی نژاد تهران که بیماری ان ها توسط پاتولوژیست تایید شده و بیماری زمینه ای دیگری ندارند به عنوان گروه مورد وارد مطالعه میشوند. گروه شاهد هم از افراد مراجعه کننده به همان بیمارستان میباشند و بیماری شناخته شده خاصی ندارند به عنوان گروه شاهد وارد مطالعه می شوند.

مشخص کردن ریسک فاکتورهای سرطان مثانه

   برای بررسی پلی مورفیسم ژنی٬ افراد مبتلا به سرطان مثانه در تهران که قبلا  از آنها خون گرفته شده وموارد جدید که هم اکنون تحت درمان می باشند به تعداد حداقل 100 نفر  مورد مطالعه هستند. گروه شاهد از نمونه های خون افراد سالم که به بیمارستان شهید لبافی نژاد تهران  مراجعه نموده ولی هیچ بیماری زمینه ای در آن ها مشاهده نشده است انتخاب شده است .

نمونه گیری به روش آسان و در دسترس انجام می شود

پرسشنامه و آنالیزهای آزمایشگاهی

بعد از تصویب پروپوزال با کسب رضایت از بیماران و گروه کنترل برای بررسی  پلی مورفیسم، نمونه خون تام تحت شرایط استریل به مقدار 2 سی سی گرفته و در لوله حاوی ماده ضد انعقاد ریخته و تا زمان استخراج DNA در 20- درجه سانتیگراد نگهداری می‌شود. DNA نمونه خون افراد گروه شاهد و مورد به روش Salting out تخلیص می‌شود. پرایمرهای اختصاصی جهت تعیین پلی مورفیسم ژنی به روش  PCR RFLPو ARMS PCR طراحی می شود. در مرحله بعد شرایط PCR برای تعیین این پلی مورفیسم ها بهینه شده و سپس نمونه ها در ژل اگارز بررسی می شوند و  پلی‌مورفیسم  ژنی با این روش مورد ارزیابی قرار می‌گیرد.

پس از گردآوری اطلاعات لازم، یافته هادر نرم افزار آماری SPSS وارد گشته و داده ها با استفاده  از آزمون آماری Chi square ، independent sample T test و Regression Logistic  مورد تجزیه و تحلیل قرار خواهند گرفت. نسبت شانس (odds ratio)  هم، برای ژنوتیپ ها و آلل ها محاسبه خواهد شد.

بر اساس فرم رضایت نامه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهشهای علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی در جمهوری اسلامی ایران

1  .هدف اصلی هر پژوهش باید ارتقای سلامت انسانها توأم با رعایت کرامت و حقوق ایشان باشد.

 .2 در پژوهش بر آزمودنی انسانی، سلامت و ایمنی فرد آزمودنی ها در طول و بعد از اجرای پژوهش، بر تمامی مصالح دیگر اولویت دارد. هر پژوهشی که بر روی آزمودنی انسانی انجام میگیرد، باید توسط افرادی طراحی و اجرا شود که تخصص و مهارت بالینی لازم و مرتبط را داشته باشند. در کارآزماییهای بالینی بر روی بیماران یا داوطلبهای سالم نظارت پزشک دارای مهارت و دانش متناسب الزامی است.

 .3 پژوهش بر انسان فقط در صورتی توجیه پذیر است که منافع بالقوهی آن برای هر فرد آزمودنی بیشتر از خطرهای آن باشد. در پژوهشهای دارای ماهیت غیر درمانی، سطح آسیبی که آزمودنی در معرض آن قرار میگیرد نباید بیشتر از آنچه باشد که مردم عادی در زندگی روزمرهی خود با آن مواجه میشوند. حصول اطمینان از این امر برعهده طراحان، مجریان و همکاران پژوهش و تمامی شوراهای بررسی یا پایش کننده پژوهش از جمله کمیته اخلاق در پژوهش است.

.4مواردی از قبیل سرعت، سهولت کار، راحتی پژوهشگر، هزینه پایین تر و/ یا صرفاً عملی بودن آن به هیچ وجه نباید موجب قرار دادن آزمودنی در معرض خطر یا زیان افزوده یا تحمیل هر گونه محدودیت اختیار اضافی به  وی شود.

.5 قبل از آغاز هر پژوهش پزشکی ، باید اقدامات اولیه جهت به حداقل رساندن زیان احتمالی وارده به آزمودنیها و تامین سلامت آنها انجام گیرد.

.6در کارآزمایی های بالینی دوسوکور که آزمودنی از ماهیت دارویی یا مداخلهای که برای وی تجویز شده بیاطلاع است، پژوهشگر باید تدابیر لازم جهت کمکرسانی به آزمودنی در صورت لزوم و در شرایط اضطراری را تدارک ببیند.

.7 اگر در حین اجرای پژوهش مشخص شود که خطرات شرکت در این پژوهش برای آزمودنیها بیش از فواید بالقوهی آن است، باید آن پژوهش بلافاصله متوقف شود.

.8 طراحی و اجرای پژوهشهایی که بر روی آزمودنی انسانی انجام میگیرند، باید منطبق با اصول علمی پذیرفته شده بر اساس دانش روز و مبتنی بر مرور کامل منابع علمی موجود و پژوهشهای قبلی آزمایشگاهی، و در صورت لزوم، حیوانی مناسب باشد. مطالعات حیوانی باید با رعایت کامل اصول اخلاقی کار با حیوانات آزمایشگاهی انجام شوند.

.9در پژوهشهای پزشکی که ممکن است به محیط زیست آسیب برسانند، باید احتیاطهای لازم در جهت حفظ و نگهداری و عدم آسیب رسانی به محیط زیست انجام گیرد.

10. هر پژوهشی باید بر اساس و منطبق بر یک طرحنامه (پروپوزال) به انجام برسد. در کارآزماییهای بالینی باید علاوه بر طرح نامه، دستورالعمل (پروتکل) نیز تهیه و ارائه شود. طرحنامه و دستورالعمل باید شامل تمامی اجزای ضروری باشد. از جمله بخش ملاحظات اخلاقی، اطلاعات مربوط به بودجه، حمایت کنندهها، وابستگی های سازمانی، موارد تعارض منافع بالقوهی دیگر، مشوقهای شرکت کنندگان، پیش بینی درمان و یا جبران خسارت افراد آسیب دیده در پژوهش .در مواردی که لازم است رضایتنامه آگاهانه به صورت کتبی اخذ شود، فرم رضایتنامه باید تدوین و به طرحنامه پیوست شده باشد. پیش از تصویب یا تأیید طرحنامه از سوی کمیته مستقل اخلاق در پژوهش، نباید اجرای پژوهش شروع شود.

11 . کمیته اخلاق در پژوهش علاوه بر بررسی و تصویب طرحنامه و دستورالعمل، این حق را دارد که طرحها را در حین و بعد از اجرا را از نظر رعایت ملاحظات اخلاقی مورد پایش قرار دهد. اطلاعات و مدارکی که برای پایش از سوی کمیته اخلاق درخواست میشود، باید از سوی پژوهشگران در اختیار این کمیته گذاشته شود.

12 . انتخاب آزمودنیهای بالقوه از میان جمعیت بیماران یا هر گروه جمعیتی دیگر، باید منصفانه باشد ،به نحوی که توزیع بارها (خطرات یا هزینهها) و منافع شرکت در پژوهش، در آن جمعیت و کل جامعه ،تبعیض آمیز نباشد.

13 . کسب رضایت آگاهانه و آزادانه در هر پژوهشی که بر روی آزمودنی انسانی اجرا میشود، الزامی است. این رضایت باید به شکل کتبی باشد. در مواردی که اخذ رضایت آگاهانه کتبی غیر ممکن یا قابل صرف نظر باشد، باید موضوع با ذکر دلایل به کمیته اخلاق منتقل شود. در صورت تأیید کمیته اخلاق ،اخذ رضایت کتبی قابل تعویق یا تبدیل به رضایت شفاهی یا ضمنی خواهد بود.

. 14- اگر در طول اجرای پژوهش تغییری در نحوه اجرای پژوهش داده شود یا اطلاعات جدیدی به دست آید که احتمال داشته باشد که بر تصمیم آزمودنی مبنی بر ادامه شرکت در پژوهش تاثیر گذار باشد، باید موضوع به اطلاع کمیته اخلاق رسانده شود و در صورت موافقت کمیته با ادامهی پژوهش، مراتب به اطلاع آزمودنی رسانده شود و رضایت آگاهانه مجددا اخذ گردد.

. 15 پژوهشگر باید از آگاهانه بودن رضایت اخذ شده اطمینان حاصل کند. برای این منظور، در تمامی پژوهشهای پزشکی، اعم از درمانی و غیردرمانی، پژوهشگر موظف است فرد در نظر گرفته شده به عنوان آزمودنی را از تمامی اطلاعاتی که میتوانند در تصمیم گیری او مؤثر باشند، به نحو مناسبی آگاه سازد. این اطلاعات مشتملند بر: عنوان و اهداف پژوهش، طول مدت پژوهش، روشی که قرار است به کار گرفته شود (شامل احتمال تخصیص تصادفی به گروه مورد یا شاهد)، منابع تأمین بودجه، هر گونه تعارض منافع احتمالی، وابستگی سازمانی پژوهشگر، و فواید و زیانهایی که انتظار میرود مطالعه در بر داشته باشد. همچنین، هر آزمودنی باید بداند که میتواند هر لحظه که بخواهد از مطالعه خارج شود و باید دربارهی خطرات و زیانهای بالقوهی ناشی از ترک زودرس پژوهش آگاه و پشتیبانی شود. پژوهشگر همچنین باید به تمامی سؤالات و دغدغه های این افراد، با حوصله و دقت پاسخ بدهد. این موارد باید در رضایتنامه آگاهانه منعکس شود.

 .16  پژوهشگر باید از آزادانه بودن رضایت اخذ شده اطمینان حاصل کند. رفتارهایی که به هر نحوی متضمن تهدید ،اغوا، فریب و یا اجبار باشد موجب ابطال رضایت آزمودنی میشود. به فرد باید فرصت کافی برای مشاوره با افرادی که مایل باشد – نظیر اعضای فامیل یا پزشک خانواده - داده شود. همچنین، در پژوهشهایی که پژوهشگر مقام سازمانی بالاتری نسبت به آزمودنی داشته باشد، دلایل این شیوه جذب آزمودنی، باید توسط کمیته اخلاق تأیید شود، در این موارد شخص ثالث و معتمدی باید رضایت را دریافت کند.

 17.پژوهشگر ارشد مسؤول مستقیم ارائهی اطلاعات کافی و به زبان قابل فهم برای آزمودنی ، اطمینان از درک اطلاعات ارائه شده، و اخذ رضایت آگاهانه است. در مواردی که بنا به دلیلی، نظیر زیاد بودن تعداد آزمودنیها، این اطلاع رسانی از طریق شخص دیگری انجام میگیرد، این پژوهشگر ارشد است که مسؤول انتخاب فردی آگاه و مناسب برای این کار و حصول اطمینان از تأمین شرایط مذکور در این بند است.

 18. در پژوهشهایی که از مواد بدنی (شامل بافتها و مایعات بدن انسان) یا دادههایی استفاده میشود که هویت صاحبان آنها معلوم یا قابل کشف و ردیابی است، باید برای جمع آوری، تحلیل، ذخیره سازی و /یا استفاده مجدد از آنها رضایت آگاهانه گرفته شود. در مواردی که اخذ رضایت غیرممکن باشد یا اعتبار پژوهش را خدشه دار کند، میتوان در صورت بررسی مورد و تصویب کمیته اخلاق ، از دادهها یا مواد بدنی ذخیره شده، بدون اخذ رضایت آگاهانه استفاده کرد.

.19 عدم قبول شرکت در پژوهش، یا ادامه ندادن به همکاری، نباید هیچگونه تأثیری بر خدمات درمانی که در همان مؤسسه – نظیر بیمارستان – به فرد ارائه میشود، داشته باشد. این موضوع باید در فرایند اخذ رضایت آگاهانه، به آزمودنی اطلاع داده شود.

. 20 در مواردی که آگاه کردن آزمودنی درباره جنبهای از پژوهش باعث کاهش اعتبار پژوهش می شود، ضرورت اطلاع رسانی ناکامل از طرف پژوهشگر باید توسط کمیته اخلاق تأیید شود. بعد از رفع عامل این محدودیت، باید اطلاع رسانی کامل به آزمودنی انجام گیرد.

. 21 برخی از افراد یا گروههایی از مردم، نظیر ناتوانان ذهنی، کودکان، جنین و نوزاد، بیماران اورژانسی ،یا زندانیان که ممکن است به عنوان آزمودنی در پژوهش شرکت کنند، نمیتوانند برای دادن رضایت، آگاهی یا آزادی لازم را داشته باشند. این افراد یا گروهها آسیب پذیر دانسته میشوند و باید مورد حفاظت ویژه قرار گیرند.

22. از گروههای آسیب پذیر هیچگاه نباید (به دلایلی چون سهولت دسترسی ) به عناون آزمودنی ترجیحی استفاده شود. پژوهش پزشکی با استفاده از گروهها یا جوامع آسیب پذیر تنها در صورتی موجه است که با هدف پاسخگویی به نیازهای سلامت و اولویتهای همان گروه یا جامعه طراحی و اجرا شود و احتمال معقولی وجود داشته باشد که همان گروه یا جامعه از نتایج آن پژوهش سود خواهد برد.

 . 23 در پژوهش بر روی گروههای آسیب پذیر، وظیفه اخذ رضایت آگاهانه مرتفع نمیشود. در مورد افرادی که سرپرست قانونی دارند، پژوهشگر موظف است که علاوه بر اخذ رضایت آگاهانه از سرپرست قانونی، متناسب با ظرفیت خود فرد، از وی رضایت آگاهانه اخذ کند. در هر حال، باید به امتناع این افراد از شرکت در پژوهش احترام گذاشته شود.

. 24 اگر در حین اجرای پژوهش، آزمودنی دارای ظرفیت، ظرفیت خود را از دست بدهد یا آزمودنی فاقد ظرفیت، واجد ظرفیت شود، باید با توجه به تغییر حاصله، رضایت آگاهانه برای ادامه پژوهش از سرپرست قانونی یا خود فرد اخذ شود.

. 25پژوهشگر مسؤول رعایت اصل رازداری و حفظ اسرار آزمودنیها و اتخاذ تدابیر مناسب برای جلوگیری از انتشار آن است. همچنین، پژوهشگر موظف است که از رعایت حریم خصوصی آزمودنیها در طول پژوهش اطمینان حاصل کند. هرگونه انتشار دادهها یا اطلاعات به دست آمده از بیماران باید بر اساس رضایت آگاهانه انجام گیرد.

. 26 هر نوع آسیب یا خسارت ناشی از شرکت در پژوهش باید بر طبق قوانین مصوب جبران خسارت شود. این امر باید در هنگام طراحی پژوهش لحاظ شده باشد. نحوهی تحقق این امر ترجیحاً بهصورت پوشش بیمه ای نامشروط باشد.

 .27در پایان پژوهش، هر فردی که به عنوان آزمودنی به آن مطالعه وارد شده است، این حق را دارد که درباره نتایج مطالعه آگاه شود و از مداخلات یا روشهایی که سودمندیشان در آن مطالعه نشان داده شده است، بهره مند شود.

 .28 پژوهشگران موظفند که نتایج پژوهشهای خود را صادقانه ، دقیق، و کامل منتشر کنند. نتایج، اعم از منفی یا مثبت، و نیز منابع تأمین بودجه، وابستگی سازمانی، و تعارض منافع – در صورت وجود – باید کاملاً آشکارسازی شوند. پژوهشگران نباید در هنگام عقد قرارداد انجام پژوهش، هیچ گونه شرطی را مبنی بر حذف یا عدم انتشار یافته هایی که از نظر حمایت کننده پژوهش مطلوب نیست، بپذیرند.

 . 29 نحوه ی گزارش نتایج پژوهش باید ضامن حقوق مادی و معنوی تمامی اشخاص مرتبط با پژوهش ،از جمله خود پژوهشگر یا پژوهشگران، آزمودنیها و مؤسسه حمایت کننده پژوهش باشد

. 30 گزارشها و مقالات حاصل از پژوهشهایی که مفاد این راهنما را نقض کرده اند، نباید برای انتشار پذیرفته شوند.

. -31. روش پژوهش نباید با ارزشهای احتماعی، فرهنگی و دینی جامعه در تناقض باشد.

راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران

1. پژوهشگر باید به این امر مهم توجه داشته باشد که بافت ها و اعضای مورد استفاده، دارای منشا انسانی اند و کرامت انسانی اقتضا می کند که جمع آوری، نگه داری، استفاده و نابود سازی آنها توام با رعایت ملاحضات و شوون مرتبط باشد.

. 2از اجزای بدنی دارای منشا انسانی باید تنها در پژوهش هایی استفاده شود که اهداف ارزشمندی را در راستای مبارزه با بیماری ها و ارتقای سلامت انسان ها دنبال می کند.

. 3 تمام پژوهش ها بر روی عضو و بافت انسانی، پیش از اجرا، باید مورد تایید کمیته ی اخلاق در پژوهش مرتبط قرار گیرد. کمیته ی اخلاق در پژوهش حق دارد درتمامی مراحل پژوهش بر آن نظارت داشته باشد. پژوهشگران باید در این زمینه با کمیته ی اخلاق در پژوهش همکاری کنند.

. 4 رضایت آگاهانه ی فرد دهنده ی عضو یا بافت، یا جانشین قانونی او، شرط اساسی در تایید اخلاقی هر پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی است. رضایت نامه باید با رعایت تمامی اصول مرتبط تهیه و هنگام ارسال طرح نامه برای تصویب، به آن پیوست شده باشد.

. 5 در مواردی که اخذ رضایت آگاهانه از دهنده ی نمونه ذخیره شده یا جانشین قانونی او امکان پذیر نباشد، به شرط وجود رضایت کلی اولیه بر استفاده پژوهشی،در صورت تایید کمیته ی اخلاق در پژوهش می توان از آن نمونه برای پژوهش استفاده کرد. در چنین مواردی باید از نمونه هایی استفاده شود که به نحو برگشت ناپذیر بینام شده باشد.

. 6 تمامی اطلاعاتی که از صاحبان عضو یا بافت مورد پژوهش، جمع آوری و ثبت می شود، راز حرفه ای تلقی می شود. از این رو، تمامی اصول و ملاحضات مربوط به رازداری و حفظ حریم شخصی، باید در مورد آن ها مراعات شود.

.7مرکز انجام دهنده ی پژوهش بر روی عضو و بافت باید مهارت و امکانات لازم برای حفظ رازداری را داشته باشد در غیر این صورت، اطلاعات باید به شکل بی نام و غیر قابل ردیابی ثبت و ذخیره شود.

. 8 پژوهشگر باید از اعضا و بافت هایی که به منظور پژوهش در اختیار اوقرار می گیرد استفاده بهینه کرده و از هدر رفتن آن ها جلوگیری کند.

. 9پژوهشگر موظف است که تمهیدات لازم ایمنی،از جمله آزمون های غربالگری و وسایل محافظت کننده را برای جلوگیری از آلودگی از اجزای بدنی مورد استفاده به هر فرد دیگر، اعم از پژوهشگران، آزمودنی ها و سایر افرادی که در فرایند پژوهش با این مواد سر و کار خواهند داشت، پیش بینی وتامین کنند.

. 10 پژوهش بر روی عضو و بافت ممکن است به ایجاد روش ها و محصولاتی منجر شود که به استفاده تجاری از آن ها بیانجامد. حقوق مالکیت معنوی نتایج حاصل از این گونه پژوهش ها باید مورد تایید و حمایت قرار گیرد. احتمال استفاده تجاری از نتایج پژوهش و اشخاصی که احتمالا از آن منتفع خواهند شد باید در رضایت نامه آورده شود.

. 11 زمان، نحوه و میزان اطلاع آزمودنی ها از نتایج پژوهش باید در رضایت نامه آورده شود.در هر حال، آزمودنی یا نماینده قانونی او باید به تمامی اطلاعاتی که در طول پژوهش درباره او به دست می آید، دسترسی داشته باشد.

. 12 در صورت کمبود بافت یا عضو، باید استفاده های درمانی بر استفاده های پژوهشی اولویت داشته باشد.

عدم همکاری بیمار که با توضیح بیشتر درباره این طرح و توضیح این مطلب که هیچ خطری آنها را تهدید نمی کند برطرف می شود.

-مشکل تهیه مواد وامکان طولانی شدن زمان دریافت آنهاکه با وقت گذاشتن و پیگیری بیشتر حل می شود.

سرطان مثانه، پلی مورفیسم، CYP1A2 ،Sirt1

1.Ahmadi M, Ranjbaran H, Amiri MM, Nozari J, Mirzajani MR, Azadbakht M, et al. Epidemiologic and socioeconomic status of bladder cancer in Mazandaran Province, northern Iran. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention. 2012;13(10):5053-6.

2.Homami A, Ghazi F. MicroRNAs as biomarkers associated with bladder cancer. Medical journal of the Islamic Republic of Iran. 2016;30:475.

3.Rodrigues D, Jerónimo C, Henrique R, Belo L, de Lourdes Bastos M, de Pinho PG, et al. Biomarkers in bladder cancer: A metabolomic approach using in vitro and ex vivo model systems. International journal of cancer. 2016;139(2):256-68.

4.Shah A, Rachet B, Mitry E, Cooper N, Brown C, Coleman M. Survival from bladder cancer in England and Wales up to 2001. British journal of cancer. 2008;99(Suppl 1):S86.

5.EL-Arabey AA. New insight for metformin against bladder cancer. Genes and Environment. 2017;39(1):13.

6.Zeng Y, Jiang H-Y, Wei L, Xu W-D, Wang Y-J, Wang Y-D, et al. Association between the CYP1A2 rs762551 Polymorphism and Bladder Cancer Susceptibility: a Meta-Analysis Based on Case-Control Studies. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention. 2015;16(16):7249-54.

7.Zaitsu M, Nakamura F, Toyokawa S, Tonooka A, Takeuchi T, Homma Y, et al. Risk of alcohol consumption in bladder cancer: case-control study from a nationwide inpatient database in Japan. The Tohoku journal of experimental medicine. 2016;239(1):9-15.

8.Onsory K, Bakhtiari Tajar M, Haji Mehdi Nouri Z. Genetics Polymorphism of CYP3A4 Gene in Bladder Cancer Patients. پنتیک در هزاره سوم. 2014.

9.Paul Quehl1 JH, 2, Jan Schüürmann1, Tatjana Brossette2, Ruth Maas2 and Joachim Jose. Co‑expression of active human cytochrome P450 1A2 and cytochrome P450 reductase on the cell surface of Escherichia coli.

10.Luigi Capoferri1 MCAV-V, Danny Buitenhuis1, Jan N., M. Commandeur1 MP, Nico P. E. Vermeulen1, Daan P. Geerke1. Linear Interaction Energy Based Prediction of Cytochrome P450 1A2 Binding Affinities with Reliability Estimation.

11.Stamou M, Wu X, Kania-Korwel I, Lehmler H-J, Lein PJ. Cytochrome p450 mRNA expression in the rodent brain: species-, sex-, and region-dependent differences. Drug metabolism and disposition. 2014;42(2):239-44.

12.Vukovic V, Ianuale C, Leoncini E, Pastorino R, Gualano MR, Amore R, et al. Lack of association between polymorphisms in the CYP1A2 gene and risk of cancer: evidence from meta-analyses. BMC cancer. 2016;16(1):83.

13.Shim JS, Matsui Y, Bhat S, Nacev BA, Xu J, Bhang H-eC, et al. Effect of nitroxoline on angiogenesis and growth of human bladder cancer. Journal of the National Cancer Institute. 2010;102(24):1855-73.

14.Kurylowicz A. In Search of New Therapeutic Targets in Obesity Treatment: Sirtuins. International journal of molecular sciences. 2016;17(4):572.

15.Rizk SM, Shahin NN, Shaker OG. Association between SIRT1 gene polymorphisms and breast cancer in Egyptians. PloS one. 2016;11(3):e0151901.

16.Potente M, Dimmeler S. Emerging roles of SIRT1 in vascular endothelial homeostasis. Cell cycle. 2008;7(14):2117-22.

17.SIR2, S. CEREVISIAE, HOMOLOG-LIKE 1; SIR2L1 SIR2-ALPHA HST2, S. CEREVISIAE, HOMOLOG OF.

18.Zhi-Bin Bu1 MY, Yun Cheng1, Wan-Zhen Wu2. Four Polymorphisms in the Cytochrome P450 1A2 (CYP1A2) Gene and Lung Cancer Risk: a Meta-analysis.

19.Song Y, Wang L, Ren J, Xu Z. CYP1A2-163C/A (rs762551) polymorphism and bladder cancer risk: a case-control study. Genetics and molecular research: GMR. 2016;15(2).

20.Sangrajrang S, Sato Y, Sakamoto H, Ohnami S, Laird NM, Khuhaprema T, et al. Genetic polymorphisms of estrogen metabolizing enzyme and breast cancer risk in Thai women. International journal of cancer. 2009;125(4):837-43.

21.Shao W, He J. CYP1A2 rs2069514 polymorphism and lung cancer susceptibility: a meta-analysis. Annals of translational medicine. 2015;3(7).

22.Hu Q, Wang G, Peng J, Qian G, Jiang W, Xie C, et al. Knockdown of SIRT1 Suppresses Bladder Cancer Cell Proliferation and Migration and Induces Cell Cycle Arrest and Antioxidant Response through FOXO3a-Mediated Pathways. BioMed Research International. 2017;2017.

23.Lv Y, Lin S, Peng F. SIRT1 gene polymorphisms and risk of lung cancer. Cancer Management and Research. 2017;9:381.

24.Shaker OG, Wadie MS, Ali RMM, Yosry A. SIRT1 gene polymorphisms and its protein level in colorectal cancer. Gene Reports. 2017;7:164-8.

در این طرح پلی مورفیسم هایrs762551  وrs2069514  ژن CYP1A2 و پلی مورفیسم های rs3758391 و rs369274325 ژن Sirt 1 در بیماران مبتلا به سرطان مثانه و افراد سالم بررسی کرده و نتایج را با هم مقایسه می کنیم.

از هر نفر 2 سی سی خون جهت استخراج DNA در لوله حاوی EDTA جمع آوری کرده و در دمای 20- درجه نگه داری می شود.

اگر شیوه های طبی در اثر این تحقیقات بنیادی کشف شود که بتواند بیماری سرطان مثانه را کاهش دهد، میزان مرگ و میر در اثر این بیماری کاهش یافته و در هزینه ها صرفه جویی خواهد شد.

عوارض جانبی برای بیمار ندارد.

_

چنانچه در طرح تحقیقاتی اقدام تشخیصی یا درمانی انجام شود، هزینه به عهده مجری یا مجریان طرح خواهد بود و بیمار هزینه ای را پرداخت نخواهد کرد.

_

نتایج آزمایشها و روشهای به کار رفته به اطلاع بیمار خواهد رسید و این نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری وی در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند.

دکتر علیرضا نخعی، دانشکده پیراپزشکی، 09153418077

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان  که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.

ندارد