بررسی اثر عصاره الکلی بو مادران کوتاه دشتی بر الگوی بیان ژن LiN28B و نقش ان در القای تکثیر/اپوپتوز در سلول های سرطانی رده Hela

سرطان یکی ازمشکلات بهداشتی در سراسر جهان است و از مهمترین علت مرگ و میر در کودکان و بزرگسالان به شمار میرود و این بیماری در انواع مختلفی بروز میکند و بالغ بر 200 بیماری را شامل میشود(1)که سرطان دهانه رحم یکی از شایع ترین سرطان ها در زنان می باشد. سالیانه500 هزار زن به این سرطان مبتلا می شوند و 330 هزاز نفر می میرند(2).در واقع سرطان حاصل افرایش تکثیر سلول یا کاهش مرگ سلول می باشد(3). بروز سرطان به عواملی مانند سن، زمینه ژنتیکی، جنسیت و فاکتورهای محیطی بستگی دارد. برای تبدیل یک سلول طبیعی به یک سلول سرطانی بروز شش تغییر شایع ضروری می باشد عدم حساسیت به پیام های مهارکننده رشد، رشد و تکثیر نامحدود، توانایی رگ زایی و تهاجم به بافت ها، قدرت متاستاز و آپوپتوز هر کدام از این تغییرات سبب ایجاد سلول های سرطانی و تکثیر و گسترش تومور می شود(4)

اگر دسته ای از سلول ها به علت عدم توانایی در حذف خودشان دچار تکثیر بی رویه شوند، سرطان ایجاد می شود. سرطان زمانی شروع می شود که سلولها در ژنهای کنترل کننده رشد دچار جهش می شوند. در حالتهای طبیعی سلول اگر دچار جهش جبران ناپذیر شود، خودش را می کشد ولی اگر نتواند خود را بکشد، این سلول و یا اولاد و دودمان آنها ممکن است به شکل غیرقابل کنترل شده ای با اطلاعات ژنتیکی غلط تقسیم شوند(5). وقوع جهش در سلول ها سبب مقاومت سلول به محرک های مرگ و آپوپتوز می شود(3). در اغلب موارد آپوپتوز در تومور ها مهار یا مختل شده و در نتیجه میزان تکثیر سلول بسیار زیاد می شود(6).

آپوپتوز نوعی از مرگ سلولی است که در پاسخ به عامل های تنش زای گوناگون مانند عامل های فیزیولوژیک، پاتولوژیک و یا محرک های سیتوتوکسیک در بدن رخ می دهد(7). آپوپتوز در مراحل متفاوت تکامل زیستی یک موجود زنده ایفای نقش کرده و اگر از تنظیم خارج شود، بیماریهای گوناگونی را موجب می شود. برای نمونه، فعالیت بیش از حد آپوپتوز سبب بیماری های دژنره کننده مانند آلزایمر و پارکینسون می گردد(8). از سویی دیگر، چنان چه فعالیت آپوپتوزی کاهش یابد، سلول به سمت سرطانی شدن پیش می رود(9). مشخص شده است که این پدیده یک مرحله فعال و وابسته به انرژی در سلول بوده و سلولهایی که دچار مرگ برنامه ریزی شده می شوند دارای  شاخص های ویژه ای هستند برای مثال غشا سلول دست نخورده باقی می ماند. DNA به صورت اینترنوکلئوزومی با الگویی خاص نردبانی قطعه قطعه می شود و غشا و محتویات درونش به شکل حباب در اختیار سیستم بیگانه خواری قرار می گیرد(10).

در انسان آپوپتوز دارای مسیر بیرونی یا وابسته به رسپتور و مسیرداخلی یا وابسته به میتوکندری می باشد که هرکدام از این مسیرها کاسپازهای مختلفی دخالت دارند. کاسپازها جزو خانواده سیستئین - آسپارتات پروتئازها و واسطه ی مهم برای روند آپوپتوز می باشد(11). در مسیر داخلی یا میتوکندریایی با بهم خوردن نفوذپزیری غشا میتوکندری و آزاد شدن شماری از مولکول های موجود در غشا میتوکندری مانند سیتوکروم c، باعث فعال شدن کاسپاز 9 با دخالت apaf-1 می شود و در نهایت باعث فعال شدن کاسپازهای اجرایی مانند کاسپاز3 مشوند(12).

 مسیر خارجی آپوپتوز از طریق گیرنده های مرگ FAS  و TNF منجر به فعال شدن کاسپاز 8 می شود. کاسپاز 8 فعال شده می تواند به طور مستقیم کاسپازهای اجرایی از جمله کاسپاز 3 را فعال کند. یا اینکه از طریق پروتیین  tBidعمل نماید(13).

LIN28  شامل دو همولوگ  LIN28A و  LIN28Bمی باشد.  LIN28B اولین بار از یک نماتود بنام  Caenorhabditis elganse کشف شد. هردو ژن LIN 28 a وLIN 28 b شامل دومین شوکی سردی با یک جفت انگشت روی (cchc)  می باشد ( 18-14 ).  این ژن باعث مهار یک میکرو  RNA  سرکوب کننده تومور از خانواده Let 7 می باشد (22-19) نقش LIN28a  و LIN28B  در پروسه های تکامل مختلف نشان داده شد است و قابلیت این ژن برای سرکوب let7 می باشد. جهش ژن LIN28B  مرتبط با تاخیر در زمان بلوغ در انسان ها می باشد (13). در پیشگیری از ایجاد سرطان یک microRNA  به نام Let 7  بسیار مهم است وهمچنین ژن LIN28B باعث سرطان زایی می شود. Let 7 خانواده ای از microRNA  می باشد که در ژنوم انسان 12 عضو داشته و رابطه نزدیکی با انواع سرطان دارد (23). نقش  LIN28B  در ایجاد تومور های wilms (تومور کلیه) نشان داده شده است هر چند بیان بیش از اندازهLIN28B  باعث ایجاد Nscl  (سرطان ریه) ، سرطان پستان و سرطان پوست می شود. سطوح  LIN28B  در اکثر سرطان های کولون باعث محافظت پایداری بتا  کاتنین  و افزایش مسیر سیگنالی wnt  در بافت ها می شود(24,25).  LIN28Bباعث افزایش بیان فاکتور انکوژینیک ( سرطان زا )  c-myc که تنظیم مسیر   wnt  را هدف قرار می دهد؛ می شود . مارکر های سلول های بنیادی کولون مثل LGR5 و PROM  با بیان ژن LIN28B افزایش می یابد. Mir 203 با هدف قرار دادن مستقیم LIN28B و مختل کردن چرخه LIN28 / let7  و افزایش تولید let 7  باعث مهار تکثیر و رشد و افزایش بیان آپاپتوز در سلول های سرطانی ریه می شد و را های جدیدی را برای درمان سرطان ریه ایجاد کرده است. (29 -26) LIN28B باعث تحریک نوروبلاستوما و افزایش سطوح MYCN که باعث مهار  let7  می شود. LIN28B باعث افزایش پروتین MYCN در سلول های نوروبلاستوما می شود(30). در موش های مبتلا به سرطان پستان به دنبال تمرینات هوازی کاهش حجم تومور مشاهده می شود که به علت کاهش عوامل التهابی مانندIL.6  و افزایش Let 7 a  می باشد(33 - 31). عوامل سرطان زایی  مانند muc1-c  که در سرطان های ریه و دیگر سرطان ها بیان آن افزایش می یابد. Muc-c1 یک تحریک کننده  LIN28B  که باعث کاهش let 7  و افزایش  بیان ژن HMGA2  در سرطان ریه میشود(33).یافته ها نشان می دهد که کمبود  Sirtunis (یک خانواده از نیکوتین آمید آدنین دی نوکلئوتید محافظت شده می باشد گه یک پروتین پاسخ دهنده به استرس می باشد) باعث فعال شدن پروتینlIN28B  و ایجاد سرطان پانکراس می شود در صورت فقدان Sirtunis 6  کروماتین هایپر استیله قابل دسترس می شود(34 و 35).

lIN28A و lIN28B  به طور اختصاصی MICRO RNA  Let7  را در قسمت لوپ انتهایی مورد هدف قرار می دهد(36-37).  LIN28Aناحیه Pre E یک  (pri-let7)  micro RNA   را در قسمت سیتو پلاسمی با بکار گیری قسمت انتهایی یوریدیلاز (tutase) با دومین  Zcchc6 و zcchc11  که یک دم الیگو اوریدین به انتهای '3 let 7  اضافه می کند  که این پروسه باعث مهار dicer یا برش دهنده که باعث تخریب micro RNA  می شود. lIN28B به ناحیه ی pri-let7  در هسته متصل می شود و باعث جلوگیری از عملکرد برش دهنده dorsha  می شود(41-38). سرطان دهانه رحم چهارمین سرطان شایع زنان در جهان می باشد و رتبه هفتم سرطان های زنان را شامل می شود. این سرطان در سال2012 هفت و نیم درصد از مرگ ناشی از سرطان در جهان را شامل می شود. ولی در برخی از مناطق آفریقا و جنوب آسیا دومین علت مرگ به دلیل سرطان به شمار می رود(43, 42). شیوع سرطان دهانه رحم در ایران نسبت به برخی کشورهای جهان کمتر گزارش شده است؛ بطوری که براساس گزارش مرکز ملی ثبت سرطان وزارت بهداشت ایران، در سال 2009 میزان شیوع آن2/7 در هر صد هزار نفر بوده و رتبه 11 در بین کل سرطان های زنان ایرانی را تشکیل می دهد  که نسبت به گزارش سال 2008 که این سرطان در رتبه 13 را داشت کمی افزایش نشان می دهد(44). عوامل ایجاد کننده و یا عوامل خطرساز سرطان دهانه رحم  شامل فعالیت جنسی  خصوصا شروع تماس جنسی از سنین پایین، زایمان در سنین پایین، داشتن شرکای متعدد جنسی، وضعیت پایین اقتصادی می باشد(45). عامل اصلی ایجاد کننده این سرطان آلودگی به ویروس پاپیلومای انسانی است که دو سویهHPV16  و HPV18 باعث ایجاد 70 درصد سرطان های دهانه رحم می باشند(46). امروزه برای درمان سرطان دهانه رحم از روش های جراحی، لیزر، فریز کردن جهت از بین بردن بافت و در موارد بسیار شدید از شیمی درمانی و پرتو درمانی استفاده می شود(47). در سال های اخیر استفاده از داروهای طبیعی گیاهی برای پیشگیری  و درمان سرطان مطرح شده است در این روش نه تنها سلول های توموری کنترل می شود بلکه به سلول سالم نیز آسیب نمی رسد(48). بومادران نوع کوتاه دشتی با نام علمی Achillea wilhelmsii از قبیله Anthemidea و تیره می باشد(49). این گیاه حاوی ترکیبات شیمیایی زیادی از قبیل فلاونوئید، آلکالوئید، Cineol، borneol، alpha and beta pinen،  camphor، monoterpenoids، rutin دارد(50). این گیاه در ایران در نواحی البرز مرکزی، نواحی مرکزی و شرق و شمال غرب ایران می روید(51). گیاهی نسبتا کوچک به ارتفاع 15-40 سانتی متر، علفی و چند ساله با برگ های عاری از دم برگ و پوشیده از کرک با گل های سفید یا سفید مایل به زرد می باشد(52). بومادران از زمان قدیم توسط ایرانیان به عنوان گیاه دارویی مورد استفاده قرار میگرفت این گیاه به علت دارا بودن تانن، مواد تلخ و معطر مقوی اعصاب و قلب می باشدبه طوری که در موارد درمانی مختلف مانند خستگی عمومی، ضعف و التهاب ماهیچه های قلبی و همچنین در بیمارهای عصبی مانند ضعف اعصاب، هیستری، صرع مفید و مصرف می شود. بعلاوه عصاره الکلی سرشاخه های گلدار این گیاه کاهش دهندهی تری گلیسرید و همچنین فشار سیستولی و دیاستولی خون است عصاره آبی این گیاه تحریک کننده ایمنی هومولار و سلولار می باشد عصاره متانولی گل این گیاه دارای خاصیت ضد باکتری و ضد قارچی است همچنین اندام های هوایی این گیاه داری خاصیت آنتی اکسیدانی هست(53). در طب سنتی این گیاه به عنوان تقویت کننده معده و همچنین به عنوان آرام بخش دردهای معدی کاربرد دارد، دم کرده این گیاه در سوء هاضمه همراه با نفخ و افزایش اسید معده موثر می باشد(52). بنابراین با توجه به شیوع بالای سرطان  دهانه رحم در کشورهای در حال توسعه و روند رو به رشد آن در کشور ایران و تهاجمی بودن روش های درمانی موجود نیاز به استفاده از ترکیبات و روش های نوین به ویژه از ترکیبات موجود در طبیعت در کنترل و درمان این سرطان بیش از پیش احساس می شود. از آنجا که ژن 28B در تومورها و همچنین بیانشان در سرطان ها افزایش می یابد هدف از مطالعه اخیر بررسی اثرات عصاره الکلی بو مادران بر الگوی بیان ژنLIN 28B  و نقش ان در القای تکثیر/اپوپتوز در سلولهای سرطانی رده Hela می باشد

-عصاره الکلی گیاه بومادران  باعث مهار رشد و القای اپوپتوز  در یک الگوی وابسته به دوز و زمان در سلولهای سرطانی رده Hela می شود.

2-درصد القا مرگ سلولی در سلولهای سرطانی رده  Helaتیمار شده با عصاره الکلی  گیاه بومادران  در مقایسه با سلول های تیمار نشده متفاوت است.

3-میزان بیان ژن LIN28B رده سلولهای سرطانی Hela تیمار شده با عصاره الکلی  گیاه بومادران  در مقایسه با سلول های تیمار نشده متفاوت است.

بررسی اثرات عصاره الکلی بو مادران بر الگوی بیان ژن  lin 28 b و نقش ان در القای تکثیر/اپوپتوز در سلولهای سرطانی رده Hela

1- مقایسه اثر غلظت و زمان عصاره الکلی  گیاه بومادران  بر مرگ سلولی در سلولهای سرطانی رده Hela تیمار شده  با سلول های تیمار نشده

2-مقایسه در صد القا آپوپتوزدر رده سلول های سرطانی Hela تیمار شده با عصاره الکلی  گیاه بومادران با  سلول های تیمار نشده

3-مقایسه میزان بیان ژن LIN28B در سلولهای سرطانی رده Hela تیمار شده با عصاره الکلی  گیاه بومادران با سلول های تیمار نشده

دانشگاه علوم پزشکی زاهدان

LIN28B : ژن شناخته شده ای هستند که باعث تکامل سلولها و سرطان زایی می شود.

گیاه بومادران  : بومادران نوع کوتاه دشتی با نام علمی Achillea wilhelmsii از قبیله Anthemidea و تیره Asteruceae می باشد. این گیاه در ایران در نواحی البرز مرکزی، نواحی مرکزی و شرق و شمال غرب ایران می روید گیاهی نسبتا کوچک به ارتفاع 15-40 سانتی متر، علفی و چند ساله با برگ های عاری از دم برگ و پوشیده از کرک با گل های سفید یا سفید مایل به زرد می باشد.

سرطان گردن رحم: نوعی بیماری است که در آن رشد بافت سرطانی بدخیم از ناحیه گردن رحم شروع می شود  و به طور نامنظم و فزاینده‌ای تکثیر  می کند.

مرگ سلولی: مرحله نهایی آسیب سلول است. درصورت تداوم آسیب به سلول، آسیب غیرقابل برگشت می شود. در این حالت امکان بهبودی سلول وجود نداشته و سلول می میرد.

مداخله ای

سلولهای رده Hela cell در محیط کشت RPMI

ندارد

ندارد

MTT Real-Time PCR،  Testو فلو سایتومتری

سلول های Hela در محیط کشت   RPMI1640 کشت داده شدند و در انکوباتور حاوی CO2 5% و دمای 37 درجه سانتی گراد  قرار داده می شوند. و پس از پاساژ ، سلول ها برای تیمار با عصاره هیدرو الکلی گیاه بومادران (بخش های هوایی گیاه )آماده می شوند. سلول ها به دو گروه تیمار شونده و بدون تیمار تقسیم می شوند و سلول های Hela در غلظت (0-25-50-100-200 میکروگرم پر دسی لیتر) و زمان های مختلف (24-48-72 ساعت) تیمار می شوند تا دوز موثر بر مرگ سلولی مشخص شود.

1. سنجش مرگ سلولی با استفاده ازMTT assay: MTT نمک زرد تترازولیوم محلول در آب است که توسط سوکسینات دهیدروژناز میتوکندری های سلولهای زنده و فعال، احیا و به ترکیب رنگی فورمازان نامحلول تبدیل می شود که این رنگ با حلال آلی حل میگردد. شدت رنگ حاصله در طول موج 570 نانومتر متناسب با میزان سلولهای زنده است.

2. 2. بررسی اپوپتوز: بررسی آپوپتوز با استفاده از روش Flow Cytometry: استفاده از فلوسایتومتری روش متداول در آنالیز سلولها از لحاظ آپوپتوز و تعیین درصد سلول های آپوپتوزی می باشد. در این مرحله از کیت تشخیص آپوپتوز Annexin  استفاده خواهد شد.

3. بمنظور بررسی بیان ژن٬  ابتدا mRNA از سلول با استفاده از کیت اختصاصی تخلیص می شود، پس از تخلیص با استفاده از کیت اختصاصی٬ CDNA ساخته می شود. سپس با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن مورد نظر و تکنیک Real-time PCR بیان نسبی ژن  LIN28B در مقایسه با  House keeping gene ( GAPDHیا Beta Actin)برای هر نمونه محاسبه می شود

به منظور تجزیه و تحلیل داده ها از آزمون واریانس دو طرفهANOVA  و Post Hoc Tukey استفاده خواهد شد. نتایج به صورت Mean ± SEM گزارش می شود و p<0.05 معنی دار در نظر گرفته می شد.

راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های علوم پزشکی 

دارای آزمودنی انسانی  در جمهوری اسلامی ایران

1. هدف اصلی هر پژوهش‌باید ارتقای سلامت انسان‌ها توأم با رعایت کرامت و حقوق ایشان باشد.
2. در پژوهش بر آزمودنی انسانی، سلامت و ایمنی فرد فرد آزمودنی‎ها در طول و بعد از اجرای پژوهش، بر تمامی مصالح دیگر اولویت دارد. هر پژوهشی که بر روی آزمودنی انسانی انجام می‌گیرد، باید توسط افرادی طراحی و اجرا شود که تخصص و مهارت بالینی لازم و مرتبط را داشته باشند. در کارآزمایی‌های بالینی  بر روی بیماران یا داوطلب‌های سالم نظارت پزشک دارای مهارت و دانش متناسب الزامی است.
3. پژوهش بر انسان فقط در صورتی توجیه‌پذیر است که منافع بالقوه‌ی آن برای هر فرد آزمودنی بیش‌تر از خطرهای  آن باشد. در پژوهش‌های دارای ماهیت غیر درمانی، سطح آسیبی که آزمودنی در معرض آن قرار می‌گیرد نباید بیش‌تر از آن‌چه باشد که مردم عادی در زندگی روزمره‌ی خود با آن مواجه می‌شوند. حصول اطمینان از این امر برعهده‌ی طراحان، مجریان و همکاران پژوهش و تمامی شوراهای بررسی یا پایش‌کننده‌ی پژوهش از جمله کمیته‌ی اخلاق در پژوهش‌ است.
4. مواردی از قبیل سرعت، سهولت کار، راحتی پژوهشگر، هزینه‌ی پایین‌تر و/ یا صرفاً عملی بودن آن به هیچ وجه نباید موجب قرار دادن آزمودنی در معرض خطر یا زیان افزوده یا تحمیل هر گونه محدودیت اختیار اضافی به وی شود.
5. قبل از آغاز هر پژوهش پزشکی ، باید اقدامات  اولیه جهت به حداقل رساندن زیان احتمالی وارده به آزمودنی‌ها و تامین سلامت آن‌ها انجام گیرد.
6. در کارآزمایی های بالینی دوسوکور  که آزمودنی از ماهیت دارویی یا مداخله‌ای که برای وی تجویز شده بی‌اطلاع است، پژوهشگر باید تدابیر لازم جهت کمک‌رسانی به آزمودنی در صورت لزوم و در شرایط اضطراری را تدارک ببیند.
7. اگر در حین اجرای پژوهش مشخص شود که خطرات شرکت در این پژوهش برای آزمودنی‌ها بیش از فواید بالقوه‌ی آن است، باید آن پژوهش بلافاصله متوقف شود.
8. طراحی و اجرای پژوهش‌هایی که بر روی آزمودنی انسانی انجام می‌گیرند، باید منطبق با اصول علمی پذیرفته شده بر اساس دانش روز و مبتنی بر مرور کامل منابع علمی موجود و پژوهش‌های قبلی آزمایشگاهی، و  در صورت لزوم،  حیوانی مناسب باشد. مطالعات حیوانی باید با رعایت کامل اصول اخلاقی کار با حیوانات آزمایشگاهی انجام شوند.
9. در پژوهش‌های پزشکی که ممکن است به محیط زیست آسیب برسانند، باید احتیاط‌های لازم در جهت حفظ و نگهداری و عدم آسیب رسانی به محیط ریست انجام گیرد.
10. هر پژوهشی باید بر اساس و منطبق بر یک طرح‌نامه (پروپوزال) به انجام برسد. در کارآزمایی‌های بالینی باید علاوه بر طرح نامه، دستورالعمل (پروتکل) نیز تهیه و ارائه شود. طرح‌نامه و دستورالعمل باید شامل تمامی اجزای ضروری باشد. از جمله بخش ملاحظات اخلاقی، اطلاعات مربوط به بودجه، حمایت کننده‌ها، وابستگی‌های سازمانی، موارد تعارض منافع بالقوه‌ی دیگر، مشوق‌های شرکت کنندگان، پیش بینی درمان و یا جبران خسارت افراد آسیب دیده در پژوهش .در مواردی که لازم است رضایت‌نامه‌ی آگاهانه به‌صورت کتبی اخذ شود، فرم رضایت‌نامه باید تدوین و به طرح‌نامه پیوست شده باشد. پیش از تصویب یا تأیید طرح‌نامه از سوی کمیته‌ی مستقل اخلاق در پژوهش، نباید اجرای پژوهش شروع شود.
11. کمیته‌ی اخلاق در پژوهش علاوه بر بررسی و تصویب طرح‌نامه و دستورالعمل، این حق را دارد که طرح‌‌ها را در حین و بعد از اجرا را از نظر رعایت ملاحظات اخلاقی مورد پایش قرار دهد. اطلاعات و مدارکی که برای پایش از سوی کمیته‌ی اخلاق درخواست می‌شود، باید از سوی پژوهشگران در اختیار این کمیته گذاشته شود.    
12. انتخاب آزمودنی‌های بالقوه از میان جمعیت بیماران یا هر گروه جمعیتی دیگر، باید منصفانه باشد، به‌نحوی که توزیع بارها (خطرات یا هزینه‌ها) و منافع شرکت در پژوهش، در آن جمعیت و کل جامعه، تبعیض‌آمیز نباشد.
13. کسب رضایت آگاهانه و آزادانه در هر پژوهشی که بر روی آزمودنی انسانی اجرا می‌شود، الزامی است. این رضایت باید به شکل کتبی باشد. در مواردی که اخذ رضایت آگاهانه‌ی کتبی غیر ممکن یا قابل صرف‌نظر باشد، باید موضوع با ذکر دلایل به کمیته‌ی اخلاق منتقل شود. در صورت تأیید کمیته‌ی اخلاق، اخذ رضایت کتبی قابل تعویق یا تبدیل به رضایت شفاهی یا ضمنی خواهد بود.
14. اگر در طول اجرای پژوهش تغییری در نحوه اجرای پژوهش داده شود یا اطلاعات جدیدی به دست آید که احتمال داشته باشد که بر تصمیم آزمودنی مبنی بر ادامه‌ی شرکت در پژوهش تاثیر گذار باشد، باید موضوع به اطلاع کمیته‌ی اخلاق رسانده شود و در صورت موافقت کمیته با ادامه‌ی پژوهش، مراتب به اطلاع آزمودنی رسانده شود و رضایت آگاهانه مجددا اخذ گردد.
15. پژوهشگر باید از آگاهانه بودن رضایت اخذشده اطمینان حاصل کند. برای این منظور، در تمامی پژوهش‌های پزشکی، اعم از درمانی و غیردرمانی، پژوهشگر موظف است فرد در نظر گرفته شده به‌عنوان آزمودنی را از تمامی اطلاعاتی که می‌توانند در تصمیم‌گیری او مؤثر باشند، به‌نحو مناسبی آگاه سازد. این اطلاعات مشتملند بر: عنوان و اهداف پژوهش، طول مدت پژوهش، روشی که قرار است به‌کار گرفته شود (شامل احتمال تخصیص تصادفی به گروه‌مورد یا شاهد)، منابع تأمین بودجه، هر گونه تعارض منافع احتمالی، وابستگی  سازمانی پژوهشگر، و فواید و زیان‌هایی که انتظار می‌رود مطالعه در بر داشته باشد. هم‌چنین، هر آزمودنی باید بداند که می‌تواند هر لحظه که بخواهد از مطالعه خارج شود و باید درباره‌ی خطرات و زیان‌های بالقوه‌ی ناشی از ترک زودرس پژوهش آگاه و پشتیبانی شود. پژوهشگر هم‌چنین باید به تمامی سؤالات و دغدغه‌های این افراد، با حوصله و دقت پاسخ بدهد. این موارد باید در رضایت‌نامه‌ی آگاهانه منعکس شود.
16. پژوهشگر باید از آزادانه بودن رضایت اخذ شده اطمینان حاصل کند. رفتارهایی که به هر نحوی متضمن تهدید، اغوا، فریب و یا اجبار باشد موجب ابطال رضایت آزمودنی می‌شود. به فرد باید فرصت کافی برای مشاوره با افرادی که مایل باشد – نظیر اعضای فامیل یا پزشک خانواده - داده شود. هم‌چنین، در پژوهش‌هایی که پژوهشگر مقام سازمانی بالاتری نسبت به آزمودنی  داشته باشد، دلایل این شیوه‌ی جذب آزمودنی، باید توسط کمیته‌ی اخلاق  تأیید شود، در این موارد شخص ثالث و معتمدی باید رضایت را دریافت کند.
17. پژوهشگر ارشد مسؤول مستقیم ارائه‌ی اطلاعات کافی و به زبان قابل فهم برای آزمودنی ، اطمینان از درک اطلاعات ارائه شده، و اخذ رضایت آگاهانه است. در مواردی که بنا به‌دلیلی، نظیر زیاد بودن تعداد آزمودنی‌ها، این اطلاع‌رسانی از طریق شخص دیگری انجام می‌گیرد، این پژوهشگر ارشد است که مسؤول انتخاب فردی آگاه و مناسب برای این کار و حصول اطمینان از تأمین شرایط مذکور در این بند است.
18. در پژوهش‌هایی که از مواد بدنی (شامل بافت‌ها و مایعات بدن انسان)  یا داده‌هایی استفاده می‌شود که هویت صاحبان آن‌ها معلوم یا قابل کشف و ردیابی است، باید برای جمع‌آوری، تحلیل، ذخیره‎سازی و /یا استفاده‌ی مجدد از آن‌ها رضایت آگاهانه گرفته شود. در مواردی که اخذ رضایت غیرممکن باشد یا اعتبار پژوهش را خدشه‌دار کند، می‌توان در صورت بررسی مورد و تصویب کمیته‌ی اخلاق ، از داده‌ها یا مواد بدنی ذخیره شده، بدون اخذ رضایت آگاهانه استفاده کرد.
19. عدم قبول شرکت در پژوهش، یا ادامه ندادن به همکاری، نباید هیچ‌گونه تأثیری بر خدمات درمانی که در همان مؤسسه – نظیر بیمارستان – به فرد ارائه می‌شود، داشته باشد. این موضوع باید در فرایند اخذ رضایت آگاهانه، به آزمودنی اطلاع داده شود.
20. در مواردی که آگاه کردن آزمودنی درباره‌ی جنبه‌ای از پژوهش باعث کاهش اعتبار پژوهش می شود، ضرورت اطلاع‌رسانی ناکامل از طرف پژوهشگر باید توسط کمیته‌ی اخلاق تأیید شود. بعد از رفع عامل این محدودیت، باید اطلاع‌رسانی کامل به آزمودنی انجام گیرد.
21. برخی از افراد یا گروه‌هایی از مردم، نظیر ناتوانان ذهنی، کودکان، جنین و نوزاد، بیماران اورژانسی، یا زندانیان‌که ممکن است به‌عنوان آزمودنی در پژوهش شرکت کنند، نمی‌توانند برای دادن رضایت، آگاهی یا آزادی لازم را داشته باشند. این افراد یا گروه‌ها آسیب‌پذیر دانسته می‌شوند و باید مورد حفاظت ویژه قرار گیرند.
22. از گروه‌های آسیب‌پذیر هیچ‌گاه نباید (به دلایلی چون سهولت دسترسی ) به عناون آزمودنی ترجیحی استفاده شود. پژوهش پزشکی با استفاده از گروه‌ها یا جوامع آسیب‌پذیر تنها در صورتی موجه است که با هدف پاسخگویی به نیازهای سلامت و اولویت‌های همان گروه یا جامعه طراحی و اجرا شود و احتمال معقولی وجود داشته باشد که همان گروه یا جامعه از نتایج آن پژوهش سود خواهد برد.
23. در پژوهش بر روی گروه‌های آسیب‌پذیر، وظیفه‌ی اخذ رضایت آگاهانه مرتفع نمی‌شود. در مورد افرادی که سرپرست قانونی دارند، پژوهشگر موظف است که علاوه بر اخذ رضایت آگاهانه از سرپرست قانونی، متناسب با ظرفیت خود فرد، از وی رضایت آگاهانه اخذ کند. در هر حال، باید به امتناع این افراد از شرکت در پژوهش احترام گذاشته شود.
24. اگر در حین اجرای پژوهش، آزمودنی دارای ظرفیت، ظرفیت خود را از دست بدهد یا آزمودنی فاقد ظرفیت، واجد ظرفیت شود، باید با توجه به تغییر حاصله، رضایت آگاهانه برای ادامه‌ی پژوهش از سرپرست قانونی یا خود فرد اخذ شود. 
25. پژوهشگر مسؤول رعایت اصل رازداری و حفظ اسرار آزمودنی‌ها و اتخاذ تدابیر مناسب برای جلوگیری از انتشار آن است. هم‌چنین، پژوهشگر موظف است که از رعایت حریم خصوصی آزمودنی‌ها در طول پژوهش اطمینان حاصل کند. هرگونه انتشار داده‌ها یا اطلاعات به‌دست آمده از بیماران باید بر اساس رضایت آگاهانه انجام گیرد.
26. هر نوع آسیب یا خسارت ناشی از شرکت در پژوهش باید بر طبق قوانین مصوب جبران خسارت شود. این امر باید در هنگام طراحی پژوهش لحاظ شده باشد. نحوه‌ی تحقق این امر ترجیحاً به‌صورت پوشش بیمه‌ای نامشروط باشد.
27. در پایان پژوهش، هر فردی که به‌عنوان آزمودنی به آن مطالعه وارد شده است، این حق را دارد که درباره‌ی نتایج مطالعه آگاه شود و از مداخلات یا روش‌هایی که سودمندی‌شان در آن مطالعه نشان داده شده است، بهره‌مند شود.
28. پژوهشگران موظفند که نتایج پژوهش‌های خود را صادقانه ، دقیق، و کامل منتشر کنند. نتایج، اعم از منفی یا مثبت، و نیز منابع تأمین بودجه، وابستگی  سازمانی، و تعارض منافع – در صورت وجود – باید کاملاً آشکارسازی شوند. پژوهشگران نباید در هنگام عقد قرارداد انجام پژوهش، هیچ  گونه شرطی را مبنی بر حذف یا عدم انتشار یافته‌هایی که از نظر حمایت کننده‌ی پژوهش  مطلوب نیست، بپذیرند.
29. نحوه‌ی گزارش نتایج پژوهش باید ضامن حقوق مادی و معنوی تمامی اشخاص مرتبط با پژوهش، از جمله خود پژوهشگر یا پژوهشگران، آزمودنی‌ها و مؤسسه‌ی حمایت کننده‌ی  پژوهش باشد.
30. گزارش‌ها و مقالات حاصل از پژوهش‌هایی که مفاد این راهنما را نقض کرده‌اند، نباید برای انتشار پذیرفته شوند.
31. روش پژوهش نباید با ارزش‌های احتماعی، فرهنگی و دینی  جامعه در تناقض باشد.

تاخیر در دریافت لوازم کشت و کیت ها و برای رفع مشکل باید ثبت سفارش قبل از سال میلادی جدید انجام شود

Cervical cancer ,  Achillea wilhelmsii , LiN28B, apoptosis,    

بومادران، سرطان رحمLiN28B،   آپوپتوز  

. معصومه ف. روشهای به کار گرفته شده جهت تسکین شدت خستگی بیماران مبتلا به تحت سرطان .نشریه پرستاری ایران2004;17(38) :64-58.

2. A. Z. Cervical cancer epidemiology. Hrvatski kongres ginekološke onkologije s međunarodnim sudjelovanjem; 2008.

3. Kerr JF, Winterford CM, Harmon BV. Apoptosis. Its significance in cancer and cancer therapy. Cancer. 1994;73(8):2013-26.

4. Hanahan D, Weinberg RA. The hallmarks of cancer. Cell. 2000;100(1):57-70.

5. Blagosklonny MV. A node between proliferation, apoptosis, and growth arrest. BioEssays : news and reviews in molecular, cellular and developmental biology. 1999;21(8):704-9.

6. Thompson CB. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease. Science (New York, NY). 1995;267(5203):1456-62.

7. Reed JC. Apoptosis-based therapies. Nature reviews Drug discovery. 2002;1(2):111-21.

8 Offen D, Elkon H, Melamed E. Apoptosis as a general cell death pathway in neurodegenerative diseases. Journal of neural transmission Supplementum. 2000(58):153-66.

9. Mahmood Z, Shukla Y. Death receptors: targets for cancer therapy. Experimental cell research. 2010;316(6):887-99.

10. Leist M, Jaattela M. Four deaths and a funeral: from caspases to alternative mechanisms. Nature reviews Molecular cell biology. 2001;2(8):589-98.

11. Kischkel FC, Lawrence DA, Tinel A, LeBlanc H, Virmani A, Schow P, et al. Death receptor recruitment of endogenous caspase-10 and apoptosis initiation in the absence of caspase-8. The Journal of biological chemistry. 2001;276(49):46639-46.

12.Jiang X, Wang X. Cytochrome C-mediated apoptosis. Annual review of biochemistry. 2004;73:87-106.

13. Kim R, Emi M, Tanabe K, Murakami S, Uchida Y, Arihiro K. Regulation and interplay of apoptotic and non-apoptotic cell death. The Journal of pathology. 2006;208(3):319-26.

14.  Euling S, Ambros V. Heterochronic genes control cell cycle progress and developmental competence of C. elegans vulva precursor cells. Cell 1996;84:667–76.

15.  Euling S, Ambros V. Reversal of cell fate determination in Caenorhabditis elegans vulval development. Development 1996;122:2507–15.

16. Ambros V, Horvitz HR. Heterochronic mutants of the nematode Caenorhabditis elegans. Science 1984;226:409–16.

17. Yu J, Vodyanik MA, Smuga-Otto K, Antosiewicz-Bourget J, Frane JL, Tian S, et al. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science 2007;318:1917–20.

18. Moss EG, Tang L. Conservation of the heterochronic regulator Lin-28, its developmental expression and microRNA complementary sites. Dev Biol 2003;258:432–42.

19. Hagan JP, Piskounova E, Gregory RI. Lin28 recruits the TUTase Zcchc11 to inhibit let-7 maturation in mouse embryonic stem cells. Nat Struct Mol Biol 2009;16:1021–5.

20.  Heo I, Joo C, Cho J, Ha M, Han J, Kim VN. Lin28 mediates the terminal uridylation of let-7 precursor MicroRNA. Mol Cell 2008;32:276–84.

21. Lehrbach NJ, Armisen J, Lightfoot HL, Murfitt KJ, Bugaut A, Balasubramanian S. LIN-28 and the poly(U) polymerase PUP-2 regulate let-7 microRNA processing in Caenorhabditis elegans. Nat Struct Mol Biol 2009;16:1016–20.

22. Rybak A, Fuchs H, Smirnova L, Brandt C, Pohl EE, Nitsch R. A feedback loop comprising lin-28 and let-7 controls pre-let-7 maturation during neural stem-cell commitment. Nat Cell Biol 2008;10:987–93.

23. Jen-Liang S, Pai-Sheng C, Gunnar J , Min-Liang K.  Function and regulation of Let-7 family microRNAs. MicroRNA 2012; 1:34-39

24. He TC, Sparks AB, Rago C, Hermeking H, Zawel L, da Costa LT. Identification of c-MYC as a target of the APC pathway. Science1998;281:1509–12.

25. Powell SM, Zilz N, Beazer-Barclay Y, Bryan TM, Hamilton SR, Thibodeau SN. APC mutations occur early during colorectal tumorigenesis. Nature 1992;359:235–7.

26. Chang TC, Zeitels LR, Hwang HW, Chivukula RR, Wentzel EA, Dews M. Lin-28B transactivation is necessary for Myc-mediated let-7 repression and proliferation. Proc Natl Acad Sci U S A 2009;106: 3384–9.

27. Chen T, Xu C, Chen J, Ding C, Xu Z, Li C, Zhao J. MicroRNA-203 inhibits cellular proliferation and invasion by targeting Bmi1 in non-small cell lung cancer. Oncol Lett2015; 2639–2646.

28. Wang  N, Liang  H, Zhou  Y , Wang  C , Zhang  S, Pan  Y, Wang  Y, Yan  X, miR-203 suppresses the proliferation and migration and promotes the apoptosis of lung cancer cells by targeting SRC. PLoS One  2014; 9:e105570.

29.Contributed equally to this work with: Nan Wang, Hongwei Liang, Yong Zhou, Chen WanAffiliation Jiangsu Engineering Research Center for microRNA Biology and Biotechnology, State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology, School of Life Sciences, Nanjing University, Nanjing, Jiangsu, China ⨯ 32292992922 Wang  C ,Liang  H, Zhou  Y , Wang  C , Zhang  S, Pan  Y, Wang  Y, Yan  X. miR-203 inhibits cell proliferation and migration of lung cancer cells by targeting PKCalpha. PLoS One 2013; 8: e73985.

30. Westermann  F ,  Muth D, Benner A, Bauer T, Henrich K, Oberthuer A, Brors B, Beissbarth T , Vandesompele J, Pattyn F . Barbara Hero. Distinct transcriptional MYCN/c-MYC activities are associated with spontaneous regression or malignant progression in neuroblastomas. Genome Biol 2008; 9: 150.

31. Murphy E A, Davis J M, Barrilleaux T, McClellan J, Steiner J, Carmichael M. Benefits of exercise training on breast cancer progression and inflammation in C3 (1) SV40Tag mice. Cytokine 2011; 55(2): 274-9.

32. Woods J A, Vieira V J, Keylock K T. Exercise, inflammation, and innate immunity. Immunology and Allergy Clinics of North America 2009; 29(2): 381-93.

33. Lee YS, Dutta A. The tumor suppressor microRNA let-7 represses the HMGA2 oncogene. Genes Dev 2007;21:1025–30.

34. Zhong L, D’Urso A, Toiber D. The his­tone deacetylase Sirt6 regulates glucose homeo­stasis via Hif1alpha. Cell 2010;140(2):280-293.

35. Sebastián C, Zwaans BMM, Silberman DM. The histone deacetylase SIRT6 is a tumor sup­pressor that controls cancer metabolism. Cell 2012;151(6):1185-1199.

36. Newman M, Thomson J, Hammond S. Lin-28 interaction with the Let-7 precursor loop mediates regulated microRNA processing. RNA 2008; 14: 1539–1549.

37. Heo I, Joo C, Cho J, Ha M, Han J, Kim VN. 2008. Lin28 mediates the terminal uridylation of let-7 precursor microRNA. Mol Cell  2008; 32: 276–284.

38.Heo I, Joo C, Kim Y, Ha M, Yoon M, Cho J, Yeom K, Han J, Kim V. TUT4 in concert with Lin28 suppresses microRNA biogenesis through pre-microRNA uridylation. Cell 2009; 138: 696–708.

39. Hagan J, Piskounova E, Gregory RI. Lin28 recruits the TUTase Zcchc11 to inhibit let-7 maturation in mouse embryonic stem cells. Nat Struct Mol Biol 2009; 16: 1021–1025.

40. Piskounova E, Polytarchou C, Thornton J, LaPierre RJ, Pothoulakis C, Hagan J, Iliopoulos D, Gregory R. Lin28A and Lin28B inhibit let-7 microRNA biogenesis by distinct mechanisms. Cell 2011; 147: 1066–1079.

41. Thornton JE, Chang HM, Piskounova E, Gregory RI. Lin28-mediated control of let-7 microRNA expression by alternative TUTases Zcchc11 (TUT4) and Zcchc6 (TUT7). RNA 2012 ;18: 1875–1885.

42. Ferlay J, Steliarova-Foucher E, Lortet-Tieulent J, Rosso S, Coebergh JW, Comber H, et al. Cancer incidence and mortality patterns in Europe: estimates for 40 countries in 2012. European journal of cancer (Oxford, England : 1990). 2013;49(6):1374-403.

43. Ferlay J, Shin HR, Bray F, Forman D, Mathers C, Parkin DM. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: GLOBOCAN 2008. International journal of cancer Journal international du cancer. 2010;127(12):2893-917.

44.          خداکرمی ن, فرزانه ف, یاوری پ, خیام زاده م, طاهری پناه ر, اسماعیل اکبری م. برنامه جدید غربالگری سرطان دهانه رحم برای زنان کم خطر ایرانی. مجله زنان، مامایی و نازایی ایران. 2014;17(95):8-17.

45. K.J R, R.S B, R.L B, A D, S K. Gyneclogy and women's Helth. 1999;7.

46. Kahn JA. HPV vaccination for the prevention of cervical intraepithelial neoplasia. The New England journal of medicine. 2009;361(3):271-8.

47. Bergmark K, Avall-Lundqvist E, Dickman PW, Henningsohn L, Steineck G. Patient-rating of distressful symptoms after treatment for early cervical cancer. Acta obstetricia et gynecologica Scandinavica. 2002;81(5):443-50.

48. Hashemi M, Nouri Lang M, Entezari M, Nafisi S, Nowrouzi H. Evaluation of induced apoptosis of apigenin in 3 lines of human B cell lymphoma in vitro. 2. 2009;19(2):87-92.

49.لیلا ا, صدیقه م. بررسی مقایسه ای ویژگی های ساختاری و پروتئین های محلول در گرده های نابالغ و بالغ گیاه بومادران (Achillea wilhelmsii C. koch).

50. Amjad L, Mousavidehmourdi K, Saghazadeh M. Antifungal potential of Achillea wilhelmsii flowers methanolic extract on different strains of Candida albicans. 2012.

51.علی اخ. ترکیبات شیمیایی و اثر ضدباکتریایی اسانس گیاه بومادران (Achillea wilhelmsii C. Koch) جمع آوری شده از شهرستان خوی

52. نیازمند, سعید, احمدپور ع, زاده ح, الرضا م, استاد خ, et al. اثر عصاره آبی ـ الکلی بومادران (Achillea wilhelmsii) بر میزان ترشح اسید معده موش صحرایی تحت شرایط پایه، قطع و تحریک عصب واگ. مجله علمی پژوهشی فیض::: دانشگاه علوم پزشکی کاشان. 2008;12(3):12-6

53. Isfahani LD, Monajemi R, Amjad L. Cytotoxic Effects of Extract and Essential oil Leaves of Achillea wilhelmsii C. Koch on Colon Cancers Cells.

54. Shahani S, Hamzekanlu N, Zakeri N, Hosseinimehr SJ. Synergistic effect of Achillea millefolium L. combined with bleomycin on prostate cancer cell. Research in Molecular Medicine. 2015;3(1):10-5.

55. Bashi DS, Fazly Bazzaz BS, Sahebkar A, Karimkhani MM, Ahmadi A. Investigation of optimal extraction, antioxidant, and antimicrobial activities of Achillea biebersteinii and A. wilhelmsii. Pharmaceutical biology. 2012;50(9):1168-76.

56. Özgen U, Mavi A, Terzi Z, Coflkun M. Antioxidant activities and total phenolic compounds amount of some Asteraceae species. 2004.

57. Hoshyar R, Mostafavinia SE, Zarban A, Hassanpour M, Partovfari M, Taheri A, et al. Correlation of Anticancer Effects of 12 Iranian Herbs on Human breast Adenocarcinoma cells with antioxidant Properties.

58. Csupor‐Löffler B, Hajdú Z, Zupkó I, Réthy B, Falkay G, Forgo P, et al. Antiproliferative effect of flavonoids and sesquiterpenoids from Achillea millefolium sl on cultured human tumour cell lines. Phytotherapy Research. 2009;23(5):672-6.

ندارد