تشخیص توکسوپلاسما گوندی از نمونه خون بیماران مبتلا به سرطان به روش LAMP (روش تکثیر هم دمایی به واسطه حلقه )و مقایسه آن با تکنیک Nested-PCR با هدف قرار دادن ژن RE

مراکز بهداشتی و درمانی

توکسوپلاسموزیس بیماری است که بر اثر عفونت به نوعی انگل تک یاخته ای و داخل سلولی به وجود می آید. این بیماری بین انسان و حیوان مشترک بوده و آلودگی با آن انتشار جهانی دارد به طور ی که بیش از یک سوم جمعیت جهان با آن آلوده هستند. (4-1) عامل بیماری توکسوپلاسموزیس، توکسوپلاسما گوند ی(Toxoplasma gondii) می باشد ، انگل در چرخه زندگی خود دارای اشکال تاکی زوئیت ، برادی زوئیت های موجود در کیست نسجی و اووسیست است که گربه به عنوان میزبان اصلی و سایر پستانداران و پرندگان به عنوان میزبان واسط مورد هجوم این تک یاخته قرارمی گیرند . (2، 5).توکسوپلاسموزیس در افراد بالغ با سیستم ایمنی قوی،اغلب بدون علامت است و نیاز به درمان ندارد و تنها 20 درصد موارد، توکسوپلاسموزیس باعث لنفادنوپاتی خوش خیم و محدود شونده می شود؛ انگل ابتدا در مراحل حاد سریعا به شکل تروفوزوئیت تکثیر می یابد اما بعد از مدتی به صورت کیست در بافت های مختلفی به صورت نهفته قرار می گیرد و با کاهش قدرت سیستم ایمنی دوباره فعال می شود. توکسوپلاسموزیس یک عفونت فرصت طلب است و در اشخاص با سیستم ایمنی تضعیف شده مثل مبتلایان به سرطان،گیرندگان پیوند،بیماران دیالیزی و بیماران مبتلا به ایدز می تواند کشنده باشد.عفونت مزمن توکسوپلاسما با ایجاد پاسخ های التهابی طولانی مدت و خطر افزایش میزان جهش می تواند سرطان را گسترش دهد؛ به علاوه پاتوژن های درون سلولی در برابر سرطان را از بین ببرند و محصولات انکوژنی به مرور زمان درون سلول تجمع پیدا کنند. از این رو تشخیص سریع و دقیق آلودگی در افراد مذکور در پیشگیری از وخامت بیماری و صدمات جبران ناپذیر آن بسیار موثر خواهد بود. توکسوپلاسموزیس به صورت روتین به وسیله روشهای سرولوژی مثل الایزا، ایمونوفلورسنت غیر مستقیم، بافت شناسی تشخیص داده می شود که دارای معایب و محدودیتهای خاص خود می باشند(2 ، 4 ). جداسازی و تشخیص انگل به وسیله واکنش زنجیره ای پلیمراز(PCR) نیز انجام می شود . در میان این تکنیک ها Nested-PCR و بدنبال آن هیبریدیزاسیون حساسترین تکنیک تشخیصی در توکسوپلاسموزیس گزارش شده است. (9 ) با وجود این پیشرفتها تشخیص توکسوپلاسموزیس هنوز نارضایت بخش باقی می ماند چراکه تکنیک های PCR در توکسوپلاسماگوندی هنوز به سطح کافی از حساسیت دست نیافته اند و بدلیل تجهیزات گران قیمت و دوره زمانی طولانی واکنش محدودیت دارند.(4) تکثیر هم دما به واسطه لوپ(LAMP) یکی از تستهای تکثیر اسید نوکلیئک است که جهت تکثیر DNA با حساسیت و اختصاصیت بالا به منظور شناسایی پاتوژنهایی نظیر ویروسها، باکتریها، تک یاخته ها و قارچها استفاده شده است.( 20-15،4) اخیراً گزارش شده که تکنیک LAMP در تشخیص عفونتهای انگلی مانند مالاریا، تریپانوزومیازیس، دیروفیلاریازیس، بابزیوزیس بسیار قدرتمند است(19) براساس مطالعات ،آمارهای متنوعی از توکسوپلاسموزیس درکشورهای مختلف گزارش شده است که بالاترین میزان شیوع دردنیا مربوط به فرانسه باحداقل50% جمعیت،سرم مثبت است . (21 ) به طورکلی موارد مثبت سرولوژی که با بالا رفتن سن افزایش می یابد و معمولابعدازسن25سالگی درهردوجنس مشابه است . (22 )تفاوتهای آشکاربین میزان شیوع توکسوپلاسموزیس درمناطق مختلف به دلیل پراکندگی جغرافیائی آب و هوایی ، رژیم وعادات غذایی از عوامل این بیماری است، چراکه توکسوپلاسموزیس درنواحی خشک کمترین شیوع ودرنواحی گرم ومرطوب بالاترین شیوع رادارد.درایران نیزآمارهای انتشاریافته باتوجه به موقعیت جغرافیایی وسال انجام مطالعه متنوع است(23) .

در سال 2016 موسوی و همکارانش در مطالعه ای که بر روی تشخیص توکسوپلاسموز در زنان باردار دیابتی به روش Nested-PCR بر اساس دو ژن RE و B1 داشتند،نشان دادند روش Nested-PCR برای تشخیص توکسوپلاسموزیس از روش های سرولوژی مطمئن تر بود و همچنین ژن RE نسبت به ژن B1 به دلیل تعداد کپی بیشتری که دارد،از حساسیت بیشتری برخوردار است.

در سال 2008 سوتیریادو و همکارانش تکنیک LAMP و Nested-PCR را با ژنهای B1 و TgOWP با ایمنوفلورسانت (IFT) جهت تشخیص آلودگی به توکسوپلاسما گوندی در نمونه های آب مقایسه کردند. بر اساس نتایج حاصله حساسیت LAMP و Nested-PCR به ترتیب 100٪ و 53.8٪ بدست آمد.آلودگی توکسوپلاسما گوندی در هیچ کدام از نمون های آب با روش IFT تشخیص داده نشد.

زنگ و همکاران در سال 2009 محدودیت تشخیص LAMP را با ژن تکرار شونده 529bp،1 pg/ul از DNA توکسوپلاسما گوندی گزارش نمودند.همچنین مقایسه تکنیک های LAMP و PCR استاندارد در تشخیص DNA انگل در نمونه غدد لنفاوی خوکهای مشکوک به توکسوپلاسموزیس در مطالعه آنها نشان داد که روش LAMP بسیار حساستر از PCR استاندارد قادر به تشخیص آلودگی به توکسوپلاسموزیس در نمونه های مورد آزمایش است.

در سال 2009 کراستو و همکارانش تکنیک LAMP و PCR استاندارد را با استفاده از ژن SAG1 جهت تشخیص توکسوپلاسما گوندی در ارگانهای موش آلوده استفاده کردند.نتایج نشان داد که حساسیت روش LAMP نسبت به PCR استاندارد حداقل 1000 برابر بالاتر است.

Yee Ling Lau و همکاران در سال 2010 حساسیت و ویژگی تکنیک LAMP را با استفاده از ژنهای SAG1، SAG2 و B1 در تشخیص توکسوپلاسموزیس فعال در نمونه های خون انسان با روش Nested-PCR مقایسه کردند و گزارش کردند که تکنیک LAMP در تشخیص توکسوپلاسموزیس فعال 10 برابر حساستر از Nested-PCR است. هر دو تست در تشخیص توکسوپلاسما گوندی دارای ویژگی 100% بودند.(24)

در سال2012 Qing Ming Kong و همکاران گزارش کردند که روش LAMP-529bp دارای حد تشخیصی کمتر از 0.6 fg از DNA توکسوپلاسما بوده و نسبت به روش LAMP-B1،100 برابر و روش Nested-PCR-529bp ، 1000 برابر حساستر است.(26)

در مطالعه ای که توسط Zhibing Lin و همکاران در سال 2012 انجام شد روشهای LAMP و Real-Time PCR با استفاده از توالی تکراری 529bp در تشخیص توکسوپلاسموزیس با یکدیگر مقایسه شدند. نتایج آنها نشان داد که حد تشخیصی LAMP و Real-Time PCR به ترتیب 10fg و 1fg از DNA توکسوپلاسما گوندی است.(27)

کاربرد روش های نوین در تشخیص بیماری

پژوهشکران عرصه تشخیص طبی

1. میزان توافق (ضریب کاپا) روش LAMP در مقایسه با روش سرولوژی، در تشخیص ژن RE توکسوپلاسما گوندی در نمونه خون افراد سرطانی چقدر است؟
2. میزان توافق (ضریب کاپا) روش Nested-PCR در مقایسه با روش سرولوژی ، در تشخیص ژن RE توکسوپلاسما گوندی در نمونه خون افراد سرطانی چقدر است؟
3. میزان توافق (ضریب کاپا) دو روش LAMP و روش Nested-PCR جهت تشخیص توکسوپلاسموز در بیماران سرطانی چقدر در مقایسه با هم است؟

تشخیص سریع، حساس و اختصاصی توکسوپلاسما گوندی از نمونه خون بیماران مبتلا به سرطان به روش LAMP و مقایسه آن با تکنیک Nested-PCR با هدف قرار دادن ژن RE

1. بررسی میزان توافق (ضریب کاپا) تکنیک LAMP با روش سرولوژی جهت تشخیص ژن RE توکسوپلاسما در بیماران سرطانی
2. بررسی میزان توافق (ضریب کاپا) تکنیک Nested-PCR با روش سرولوژی جهت تشخیص ژن RE توکسوپلاسما در بیماران سرطانی
3. بررسی میزان توافق (ضریب کاپا) روش های LAMP و Nested-PCR در مقایسه با هم جهت تشخیص ژن RE توکسوپلاسما در بیماران سرطانی

تامیم روش مذکور برای تشخیص سایر بیماریها

مراکز خدمات بهداشتی – درمانی

تاکی زوئیت : فرم فعال و تکثیر شونده توکسوپلاسما گوندی که به تمامی سلولهای هسته دار میزبان حمله کرده ودر مرحله حاد بیماری دیده می شود.

برادی زوئیت : فرم غیر فعال با تکثیر آهسته توکسوپلاسما گوندی که در داخل کیست نسجی ودر مرحله مزمن بیماری دیده می شود.

اووسیست : فرم حاصل از سیکل جنسی انگل در روده گربه که با مدفوع دفع شده و باعث آلودگی میزبانان واسط می شود.

الایزا (ELISA) : یک تکنیک ایمونوآنزیمی بیوشیمیایی است که بر پایه اندازه گیری کمپلکس رنگی آنتی‌ژن و آنتی‌بادی استوار است.

تکثیر هم دما به واسطه لوپ (LAMP) : یکی از روشهای جدید تکثیر اسیدهای نوکلئیک که DNA را با حساسیت و ویژگی بالا با استفاده از 4 الی 6 پرایمر اختصاصی تحت شرایط دمایی یکسان (°65) در مدت زمان یک ساعت تکثیر می کند

• زنجیره پلی مراز آشیانه ای (Nested-PCR): زنجیره پلی مراز آشیانه ای روش تغییر یافته ای از واکنش زنجیره پلی مراز است که برای کاهش آلودگی محصولات حاصله از تکثیر جایگاه های اتصال پرایمرغیر منتظره ابداع گردیده است. در این روش دو دسته پرایمر در دو مرحله متوالی واکنش زنجیره پلی مراز مورد استفاده قرارمی گیرد که دومین سری پرایمر جهت تکثیر یک هدف ثانویه در داخل اولین محصول بکار می رود .

تجربی – آزمایشگاهی

بیماران سرطانی که به تشخیص پزشک متخصص بر پایه معیار های تشخیصی به سرطان  مبتلا و در بخش بیماران سرطانی بیمارستان های امام علی (ع) بستری شده اند و هنوز تحت شیمی درمانی قرار نگرفته اند.

معیار ورود و خروج بر اساس تشخیص و مطالعات پزشک متخصص می باشد.

n=(Z_1-α/2)²(pq)/ d² = (1.96)²(0.3383)(0.6617)/(0.09)²= 106

که در آن داریم:

P= نسبت حساسیت مورد انتظار تست الایزا =3383/0

q= 1-p

α= احتمال خطای نوع اول=05/0

d= دقت مطالعه در برآورد نسبت حساسیت = 09/0

غیر احتمالی در دسترس

برای ثبت نتایج مشاهدات از یک فرم جمع آوری اطلاعات استفاده می شود . این فرم شامل نتایج آزمون الایزا ، آزمون LAMP ، نتیجه آزمون Nested-PCR و تاریخ مشاهده می باشدکه ضمیمه نموده ایم .

ابتدا هماهنگی های لازم با معاونت تحقیقات و فناوری دانشگاه علوم پزشکی زاهدان و بیمارستان امام علی (ع) زاهدان جهت نمونه گیری خون ازبیماران مبتلا به سرطان که هنوز کموتراپی را دریافت نکرده اند صورت می گیرد و سپس پرکردن رضایت نامه توسط بیماران جهت نمونه گیری انجام خواهد شد ودر ادامه نمونه های جمع آوری می گردد . 5 میلی لیترنمونه خون ازهرفرد برای تجزیه و تحلیل آزمایشات سرولوژیکی و ملکولی جهت تشخیص توکسوپلاسموزیس گرفته می شود ، روش معمول(روش کاربردی جایگزین گلد استاندارد ) تشخیص توکسوپلاسموزیس روش های سرولوژیکی است که متداول ترین آنها روش اندازه گیری جذب ایمنی با واسطه آنزیم (ELISA) می باشد. در توکسوپلاسموز اکتسابی اگر سطح آنتی بادی IgM بالا بوده و IgG نیز مثبت باشد و علائم بالینی وجود داشته باشد و یا اینکه افزایش آنتی بادی IgG طی سه هفته اخیر ایجاد شده باشد نشانه عفونت حاد است ولی در عفونت مزمن ، سطح آنتی بادی IgG بالا بوده و IgM منفی است . پس از تشخیص افراد مبتلا به توکسوپلاسموزیس، نمونه خون به منظورتهیه مایع بافی کوت در3000 دوردردقیقه به مدت 20 دقیقه سانتریفیوژشده وسرم در C°20 - برای انجام آزمایشات نگهداری می شود ، با توجه به حجم نمونه باید آنقدر نمونه گرفته شود تا 106 مورد از آنها دارای تیتر آنتی بادی (IgG,IgM) باشند تا به عنوان جامعه کنترل مثبت در نظر گرفته شوند و متعاقب آن 106 مورد نیز باید فاقد این تیتر ازآنتی بادی ها باشند تا به عنوان کنترل منفی جهت ارزیابی دو روش مولکولی مورد استفاده قرار گیرد. سپس استخراج وتخلیص DNA از نمونه های خون و تاکی زوئیتهای انگل با استفاده از کیت انجام خواهد گرفت و پس از طراحی پرایمرهای مخصوص LAMP و Nested-PCR وراه اندازی وتعیین شرایط اپتیمم جهت واکنش LAMP تکنیکهای LAMP، Nested-PCR با استفاده از ژن RE انجام خواهد شد ، سپس توافق تست های LAMP و Nested-PCR درمقایسه با تست الایزا در تشخیص توکسوپلاسموزیس در مقایسه با دو گروه مثبت و منفی تعیین می شود .

ضریب توافق تست ها (ضریب کاپا) ، تست سرولوژی و  تست های مولکولی  توسط نرم افزار مدیکال کالکولیتور تجزیه و تحلیل خواهند شد .

با رضایت کامل از بیماران نمونه گیری می شود و تعهد می شود که نام و مشخصات بیماران در هیچ گزارشی قید نشود. انجام آزمایشات هیچ گونه هزینه ای برای بیمار نخواهد داشت.

دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش های دارای آزمودنی انسانی

1 – هدف اصلی ارتقای سلامت انسان ها با رعایت کرامت و حقوق ایشان

2 – اولویت سلامت و ایمنی فرد فرد آزمودنی ها

3 - منافع بالقوه ی پژوهش برفرد آزمودنی بیش تر از خطر آن باشد

4 – فرد آزمودنی در نتیجه پژوهش نباید درمعرض خطر یا زیان قرار گیرد

7 – توقف بلافاصله پژوهش در صورتی که در حین اجرای پژوهش مشخص شود خطرات برای آزمودنی بیش از فواید بالقوه ی آن باشد

11 – اطلاعات و مدارکی که برای پایش از سوی کمیته اخلاق درخواست شود در اختیار این کمیته گذاشته شود

13 – کسب رضایت آگاهانه وآزادانه کتبی در پژوهش

14 – اطلاع دادن تغییرات در طول پژوهش به کمیته اخلاق

15 – اطلاع رسانی دقیق و آگاهانه فرد آزمودنی از اطلاعات پژوهش

17 – پژوهشگر ارشد مسئول مستقیم ارائه اطلاعات کافی برای آزمودنی و اخذ رضایت آگاهانه است

18 – در پژوهش هایی که از مواد بدنی (مایعات بدن انسان) استفاده شده نیز اخذ رضایت آگاهانه مطرح است

19 – عدم قبول شرکت در پژوهش نباید تاثیری بر خدمات درمانی ارائه شده در مرکز درمانی داشته باشد

25 – پژوهشگر مسئول رعایت اصل رازداری و حفظ اسرار آزمودنی ها برای جلوگیری از انتشار است

27 – درپایان پژوهش ، فرد آزمودنی حق دارد که درباره ی نتایج مطالعه آگاه شود

28 – نشر صادقانه ، دقیق و کامل نتایج پژوهش

29 – گزارش نتایج پژوهش باید ضامن حقوق مادی و معنوی تمامی اشخاص مرتبط با پژوهش باشد

31 – روش پژوهش نباید مغایر با ارزش های اجتماعی ، فرهنگی و دینی جامعه باشد

دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی

1 – استفاده و نابودسازی نمونه ها با رعایت ملاحظات وشئون مرتبط

2 – پژوهش باید اهداف ارزشمندی در راستای مبارزه با بیماری ها و ارتقای سلامت انسان ها داشته باشد

3 – داشتن تایید کمیته اخلاق در پژوهش

4 – رضایت آگاهانه فرد دهنده شرط اساسی در تایید اخلاقی پژوهش است

6 – تمام اطلاعات که از افراد دهنده مورد پژوهش جمع آوری و ثبت شده راز حرفه ای تلقی می شود

7 – داشتن مهارت و امکانات لازم برای حفظ رازداری

8 – جلوگیری از هدررفت نمونه ها واستفاده بهینه از آن ها

9 – تامین تمهیدات لازم ایمنی برای جلوگیری از انتقال آلودگی

11 – عنوان زمان و نحوه و میزان اطلاع آزمودنی ها از نتایج پژوهش در رضایت نامه

12 – در صورت کمبود بافت یا عضو ، استفاده های درمانی اولویت دارند بر استفاده های پژوهشی

1. عدم همکاری بیماران
2. دشوار بودن جمع آوری نمونه

LAMP, Toxoplasma gondi, cancer, nested-PCR

1. Burg JL, Grover CM, Pouletty P, Boothroyd JC: Direct and sensitive detection of a pathogenic protozoan, Toxoplasma gondii, by polymerase chain reaction. J. Clin. Microbiol.1989, 27:1787-1792

2.Ling Lau Y., Meganathan P., Sonaimuthu P., et al., Specific, Sensitive, and Rapid Diagnosis of Active Toxoplasmosis by a Loop-Mediated Isothermal Amplification Method Using Blood Samples from Patients. J. Clin. Mic., Oct. 2010, 3698–3702

3. Sotiriadou I. and Karanis P., Evaluation of loop-mediated isothermal amplification for detection of Toxoplasma gondii in water samples and comparative findings by polymerase chain reaction and immunofluorescence test (IFT). Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 62 (2008) 357–365 .

4. Zhang H., Thekisoe Oriel M.M. Aboge Gabriel O. et al., Toxoplasma gondii: Sensitive and rapid detection of infection by loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method. Experimental Parasitology 122 (2009) 47–50

5.Dubey, J. P. Toxoplasmosis—a waterborne zoonosis. Vet. Parasitol. 2004,126:57–72.

6. Dubey JP, Hill DE, Jones JL, Hightower AW, Kirkland E, Roberts JM, Marcet PL, Lehmann T, Vianna MC, Miska K, Sreekumar C, Kwok OC, Shen SK, Gamble HR. Prevalence of viable Toxoplasma gondii in beef, chicken, and pork from retail meat stores in the United States: risk assessment to consumers. J Parasitol 2005; 91(5): 1082-93.

7. Meerburg BG, Van Riel JW, Cornelissen JB, Kijlstra A, Mul MF. Cats and goat whey associated with Toxoplasma gondii infection in pigs. Vector Borne Zoonotic Dis 2006; 6(3): 266-74.

8. Switaj K, Master A, Skrzypczak M, Zaborowski P: Recent trends in molecular diagnostics for Toxoplasma gondii infections. Clin.Microbiol. Infect. 2005, 11:170-176.

9. Pujol-Rique M, Derouin F, Garcia-Quintanilla A, et al., Design of a one-tube hemi-nested PCR for detection of Toxoplasma gondii and comparison of three DNA purification methods. J. Med. Microbiol. 1999, 48:857-862.

10. Muhammadi P. Seroepidemiology of toxoplasmosis in women attending pre-marriage counseling center in Sanandaj city in 1385. Journal of Infectious Diseases, Infectious Disease Specialists Association. 2005:25-9.

11. ZangiAbadi M. Serological study of toxoplasmosis in pregnant women. Journal of East Physician. 2001:149-53.

12 .Brown AS. Further evidence of infectious insults in the pathogenesis and pathophysiology of schizophrenia. Am J Psychiatry.

2011;168(8):764–6.

13 .Alvarado-Esquivel C, Urbina-Alvarez JD, Estrada-Martinez S, Torres- Castorena A, Molotla-de-Leon G, Liesenfeld O, et al. Toxoplasma gondii infection and schizophrenia: a case control study in a low Toxoplasma seroprevalence Mexican population. Parasitol Int. 2011;60(2):151–5.

14 .Cetinkaya Z, Yazar S, Gecici O, Namli MN. Anti-Toxoplasma gondii antibodies in patients with schizophrenia--preliminary findings in a Turkish sample. Schizophr Bull. 2007;33(3):789–91.

15. Mori Y, Notomi T. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): a rapid, accurate, and cost-effective diagnostic method for infectious diseases. J Infect Chemother 2009; 15(2): 62-9.

16. Notomi T, Okayama H, Masubuchi H, Yonekawa T, Watanabe K, Amino N, et al. Loop-mediated isothermal amplification of DNA. Nucleic Acids Res 2000; 28(12): E63.

17. Parida MM, Santhosh SR, Dash PK, Tripathi NK, Lakshmi V, Mamidi N, et al. Rapid and real-time detection of Chikungunya virus by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification assay. J Clin Microbiol 2007; 45(2): 351-7

18.Notomi T., Okayama H., Masubuchi H., et al. Loop-Mediated Isothermal Amplification of DNA. Nucleic Acids Research, 2000, Vol.28, N.12,

19. Qing-Ming Kong, Shao-Hong Lu, Qun-Bo Tong, et al., Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): Early detection of Toxoplasma gondii infection in mice. Parasites & Vectors 2012, 5:2.

20. Karanis P. and Ongerth J., LAMP – a powerful and flexible tool for monitoring microbial pathogens. Trends in Parasitology Vol.25 No.11.

21. Eskandarian A. Seroepidemiology of toxoplasmosis in pregnant women admitted to the maternity ward Kosar Hospital of Qazvin in 1386. iranian journal of microbiology. 2009:73-9.

22. Edrisiangh. Medical protozoology. Publication of Tehran University School of Public Health and Institute of Health Research. 1989;1:76.

23. Ghani H. Seroprevalence of IgG antibodies among students of Kerman University of Medical Sciences, 84-1383 School Year. Journal of Infectious Diseases, Infectious Disease Specialists Association. 2008:39-43.

24.Ling Lau Y., Meganathan P., Sonaimuthu P., et al., Specific, Sensitive, and Rapid Diagnosis of Active Toxoplasmosis by a Loop-Mediated Isothermal Amplification Method Using Blood Samples from Patients. J. Clin. Mic., Oct. 2010, 3698–3702

25. Xin H., Chang-Wang P., Ya-Fei L., et al., Urine sample used for detection of Toxoplasma gondii infection by loop-mediated isothermal amplification (LAMP). Folia Parasitologica (2012) 59 21-26

26. Qing-Ming Kong, Shao-Hong Lu, Qun-Bo Tong, et al., Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): Early detection of Toxoplasma gondii infection in mice. Parasites & Vectors 2012, 5:2

27. Zhibing L,Yanlei Z, Houshuang Z., et al., Comparison of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) and real-time PCR method targeting a 529-bp repeat element for diagnosis of toxoplasmosis. Veterinary Parasitology, 2012 Apr 30;185(2-4):296-300.

یان مسئله تحقیق (مشتمل بر مرور تحقیقات گذشته داخلی و خارجی مرتبط با موضوع با ذکر منابع و توجیه ضرورت انجام طرح) :

توکسوپلاسموزیس بیماری است که بر اثر عفونت به نوعی انگل تک یاخته ای و داخل سلولی به وجود می آید. این بیماری بین انسان و حیوان مشترک بوده و آلودگی با آن انتشار جهانی دارد به طور ی که بیش از یک سوم جمعیت جهان با آن آلوده هستند. (4-1) عامل بیماری توکسوپلاسموزیس، توکسوپلاسما گوند ی(Toxoplasma gondii) می باشد ، انگل در چرخه زندگی خود دارای اشکال تاکی زوئیت ، برادی زوئیت های موجود در کیست نسجی و اووسیست است که گربه به عنوان میزبان اصلی و سایر پستانداران و پرندگان به عنوان میزبان واسط مورد هجوم این تک یاخته قرارمی گیرند . (2، 5).توکسوپلاسموزیس در افراد بالغ با سیستم ایمنی قوی،اغلب بدون علامت است و نیاز به درمان ندارد و تنها 20 درصد موارد، توکسوپلاسموزیس باعث لنفادنوپاتی خوش خیم و محدود شونده می شود؛ انگل ابتدا در مراحل حاد سریعا به شکل تروفوزوئیت تکثیر می یابد اما بعد از مدتی به صورت کیست در بافت های مختلفی به صورت نهفته قرار می گیرد و با کاهش قدرت سیستم ایمنی دوباره فعال می شود. توکسوپلاسموزیس یک عفونت فرصت طلب است و در اشخاص با سیستم ایمنی تضعیف شده مثل مبتلایان به سرطان،گیرندگان پیوند،بیماران دیالیزی و بیماران مبتلا به ایدز می تواند کشنده باشد.عفونت مزمن توکسوپلاسما با ایجاد پاسخ های التهابی طولانی مدت و خطر افزایش میزان جهش می تواند سرطان را گسترش دهد؛ به علاوه پاتوژن های درون سلولی در برابر سرطان را از بین ببرند و محصولات انکوژنی به مرور زمان درون سلول تجمع پیدا کنند. از این رو تشخیص سریع و دقیق آلودگی در افراد مذکور در پیشگیری از وخامت بیماری و صدمات جبران ناپذیر آن بسیار موثر خواهد بود. توکسوپلاسموزیس به صورت روتین به وسیله روشهای سرولوژی مثل الایزا، ایمونوفلورسنت غیر مستقیم، بافت شناسی تشخیص داده می شود که دارای معایب و محدودیتهای خاص خود می باشند

دارد

کمک به جلوگیری از عوارض ناخواسته برای بیمار

ندارد

عوارض ندارد

مربوط به بیمار نمیباشد

ندارد

کاملا اطلاعات بیمار محرمانه نزد محقق باقی میماند

به تمامی پرسشهای احتمالی از جانب بیمار صادقانه پاسخ داده خواهد شد

برای بیمار محفوظ است

به صورت کتبی از بیمار یا قیم قانونی کسب خواهد شد

فرم اطلاعاتی پایان نامه تحقیقاتی

تشخیص سریع،حساس و اختصاصی توکسوپلاسما گوندی از نمونه خون بیماران مبتلا به سرطان به روش LAMP و Nested-PCR با استفاده از ژن RE