ارزیابی نحوه ی مرگ سلولی ناشی از شست و شو دهنده های مختلف اندودونتیک بر کشت همزمان سلولهای بنیادی مزانشیم دندانی

درمان مرسوم سیستم کانال ریشه شامل حذف بافت پالپی نکروز یا ملتهب از کانال ریشه و پرکردن فضای کانال با مواد مصنوعی می باشد. در نتیجه ی این روند درمانی عملکرد فیزیولوژیک پالپ دندانی از دست می رود. در دندان های نابالغ با تشکیل ناکامل ریشه، دیواره های عاجی کانال ریشه نازک و قیفی شکل هستند. پرکردن فضای کانال ریشه ی این دندان ها مشکل است و بعد از درمان احتمال شکستن ریشه ی این دندان ها وجود دارد و نسبت ضعیفی از تاج به ریشه ی دندان باقی میماند(1, 2). 

در دهه های اخیر تکنیک درمانی جدید ریواسکولاریزاسیون به عنوان یک انتخاب درمانی جایگزین برای دندان های دائمی نابالغ با پالپ نکروز پیشنهاد شده است(3). این درمان رژنراتیو از نظر بیولوژیکی بر اساس فرایندی است که پالپ دندانی آسیب دیده و نکروز با یک ماتریکس جدید جایگزین می شود(4, 5) و ضایعات پری اپیکال را التیام می بخشد و باعث افزایش ضخامت دیواره های عاجی و طول ریشه می شود(3). 

پروتکل درمانی مرسوم برای تکنیک ریواسکولاریزاسیون شامل ١) ضدعفونی سیستم کانال ریشه برای ایجاد محیط عاری از باکتری و آلودگی ٢) تحریک خونریزی به داخل فضای کانال ریشه جهت ایجاد اسکافولدی برای رشد بافتی ٣) سیل قسمت تاجی کانال با ماده ی پرکننده است (3).

ضدعفونی فضای کانال ریشه که اولین قدم در این پروتکل است برای درمان رژنراتیو ضروری است و توسط کاربرد شوینده ها و داروهای داخل کانال مختلف به دست می آید. شوینده ی مرسوم برای این امر هیپوکلریت سدیم و نرمال سالین می­باشد.

رایجترین ماده ضد عفونی کننده هیپوکلریت سدیم  است که ماده ضد میکروبی موثری است و خاصیت حل کنندگی بافت را دارد در غلظت %6_%05استفاده میشود فعالیت هیپوکلریت با غلظت، زمان تماس، حجم مایع و دمای آن متناسب است . (6) Spangberg و همکاران  نشان دادند که غلظت بالای هیپو کلریت توکسیسیته بیشتری دارد (7). Trevino و همکاران  نشان دادند که نرخ زنده مانی سلول­هایSCAP  (سلولهای بنیادی اپیکال پاپیلا) که با هیپوکلریت %6 تیمار شدند %74 می یاشد (8). تغییرات ماتریکس عاجی در اثر تماس با هیپوکلریت می­تواند چسبندگی سلول­های بنیادی به دنتین را تحت تاثیر قرار دهد (9).

کلر هگزیدین ترکیبی است در دو دهه گذشته به جای هیپوکلریت در بعضی موارد جایگزین شده و اثرات ضد میکروبی بیشتری داشته است.  در مطالعات in vivo  و  invitro  تاثیرات کلر هگزیدین %2 کمتر از هیپو %5/2 می باشد (10).کلر هگزیدین چون به دنتین باند میشود  خاصیت ضد عفونی کننده قابل توجه دارد .ولی توانایی حذف کردن دبری های ارگانیک را ندارد بنابراین برای حذف کردن دبری های عالی از مناطق غیر قابل دسترس به هیپو کلریت نیاز است (11).

محلول اتیلن دی آمین تترا استیک اسید (EDTA) یکی از شوینده های داخل کانال است که برای برداشتن لایه ی اسمیر در درمان کانال ریشه ی مرسوم استفاده می شود. این ماده می تواند ضدعفونی بیشتری برای فضای کانال ریشه فراهم کند.EDTA دارای اثر دمینرالیزه کننده روی دیواره ی عاجی است و می تواند منجر به آزادسازی فاکتورهای بیولوژیک مدفون در عاج شود و از این طریق روی تکثیر و تمایز سلول های بنیادی موثر واقع شود (12).

مطالعات نشان میدهند که نتایج متفاوت از درمان رژنریشن نتیجه تفاوت در پروسه disinfection  .شرایط پالپ و پری اپیکال . قطر اپیکالی و موادی  است که به عنوان barrier  استفاده می­شوند .به صورت ایده ال irrigant  ها برای درمان revitalization  نباید بافت زنده پالپ را تحریک کنند و نباید تاثیرات مضری برای دنتین داشته باشند(13).

در مطالعه ای که  توسط  ملاشاهی و همکاران در سال 2016 انجام شد تاثیرات سیتوتوکسیسیته محلولهای مختلف اندو را بر روی سلول­های بنیادی اپیکال پاپیلا ارزیابی کردند سیتوتوکسیسیته به روش MTT  ارزیابی شد  در این مطالعه سیتوتوکسیسیته مواد مختلف از زیاد به کم به ترتیب شامل MTAD وEDTAوQMIXوNAOCL CHX,و نرمال سالین بود .کلر هگزیدین کمترین سیتوتوکسیسته را داشت وسیتوتوکسیسیته ان  با گذشت زمان تغییر نمیکر (14).

در مطالعه ای که Alkahtani  و همکاران در سال 2014 انجام دادند بررسی سیتوتوکسیسیتیQMIX  و هیپوکلریت  بر روی سلول­های بنیادی مزانشیمال مغز استخوان انجام شد .سیتوتوکسیسیتی  به روش MTT  ارزیابی شد نتایج نشان داد که هر دو ماده برای سلول­ها توکسیک بودند ولی  مرگ سلولی  ارامتر توسط QMIX  انجام شد و از این رو QMIX   برای سلولهای زنده قابل قبول­تر بود (15).

در سال 2014 مطالعه ای توسط Suh و همکاران انجام شد که در این مطالعه دو رده سلولی پالپ و پریودونتال لیگامنت به صورت همزمان و بصورت جداگانه کشت داده شدند. نتایج نشان دهنده افزایش بیان دنتین سیالوپروتین فسفات و دنتین سیالو پروتئین در هردو رده هنگام کشت همزمان نسب به کشت جداگانه بود. کشت به صورت همزمان باعث افزایش پرولیفزاسیون و تمایز در هردو سلول می­شد(16)

Nishikiori و همکاران در سال 2008  اثرات سه ترکیب آب اکسیژنه، هیپوکلریت و کلرین دی اکساید را بر روی فیبروبلاست های لثه بررسی نمودند که نتایج نشان دهنده افزایش میزان آپاپتوز در سلول­های تیمار شده با آب اکسیژنه بود، در صورتی که دو ترکیب دیگر تغییری در میزان آپاپتوز سلول­ها ایجاد نکردند(17).

در مطالعه ی  که در سال 2005 توسط Barnhart  و همکاران انجام شد سیتوتوکسیسیته شستشو دهنده­های  مختلف را بر روی فیبروبلاست های لثه انسان انجام دادند سیتو توکسیسیته با روشcyquant  ارزیابی شد و  سیتوتوکسیسیته مواد مختلف مثل هیپوکلریت ، ایدین پتاسیم یداید، بتادین، سدیم هیدروکساید و کلرین دی اکساید بررسی شد  نتایج نشان داد ایدین پتاسیم یداید و کلسیم هیدروکساید ,  سیتوتوکسیسیتی کمتری نسبت به بتادین، هیپوکلریت و کلرین دی اکساید  داشتند و در نهایت یدین پتاسیم یداید و کلسیم هیدروکساید  به وسیله فیبروبلاست های لثه قابل تحمل میباشند (18).

دو راه برای مرگ سلولی شناخته شده است نکروز و اپوپتوز که تفاوت های بیوشیمیایی و مورفولوژی بسیاری بین نکروز و اپوپتوز وجود دارد . مشخصات سلول هنگام اپوپتوز شامل تراکم کروماتین درون هسته قطعه قطعه شدن DNA  انتقال فسفاتیدیل سرین از نیمه ی داخلی به نیمه ی خارجی غشای سلول بالونی شدن سطح سلول و تولید اجسام اپوپتوزی است.در نکروز تمامی اندامک های داخل سلولی به خصوص میتوکندری متورم میشود و با از هم گسیختگی غشای سلول و لیز سلول تخریب صورت میگیرد و مرگ سلول از طریق نکروز با تخریب گسترده ی بافت همراه است .راه های بررسی اپوپتوز شامل :بررسی سیتوتوکسیسیتی، تغیرات مورفولوژی ،الگوی نردبانی DNA ،فلوسیتومتری  و تست TUNELاست.(19)

در فلوسیتومتری طی مراحل اولیه ی اپوپتوز فسفا تیدیل سرین که به طور طبیعی در نیمه ی داخلی غشا وجود دارد به نیمه ی خارجی منتقل میشود . از آنجایی که در سلول­های نکروتیک تمامیت غشایی از بین رفته و غشای سلول نفوذ پذیر شده است در نتیجه ترکیب فلوئورسنت پروپیدیوم یدید(pi)توانایی عبور از غشا را داشته و می­تواند به DNA متصل شود. در سلو­هایی که دچار آپاپتوز شده اند تمامیت غشایی حفظ شده در نتیجه پروپیدیوم یدید توانایی ورود به سلول را نداردو از طرفی  فسفاتیدیل سرین در سطح خارجی غشا قرار گرفته است و انکسین به آن متصل می­شود. با رنگ آمیزی همزمان سلول­ها بوسیله این دو ترکیب میتوان بین سلول­های آپاپتوتیک و نکروتیک افتراق داد (20). از این روش در مطالعات مختلف برای بررسی نوع مرگ سلولی و درصد آن جهت مطالعات  مکانیسمی(21) اثر دارو ها (19)و عصاره های گیاهی(22) در سلول­های مختلف استفاده شده است.  

Cocultureارتباط و تقابل متقابل بین سلولهای مختلف ایجاد میشود .این ارتباطات بین سلولهای هتروتیپ برای تکامل بیولوژیک لازم و برای ثبات عملکردی بافت ها و ارگان ها لازم است  و از طرفی تقسیم و تمایز سلولها را تحت تاثیر قرار میدهد  در مطالعه ی suh ، coculture  از سلولهای بنیادی دندانی تمایز استئوژنیک و تقسیم سلولی را افزایش میدهد و مینرالیزیشن در گروه  coculture  نسبت به گروه single culture  بیشر است.(16)

مطالعات گذشته تاثیرات توکسیک شست و شو دهنده های مختلف را روی single culture  بررسی کرده ولی تا کنون مطالعه ای در مورد اثر شوینده های داخل کانال نرمال سالین، هیپوکلریت و EDTAو کلر هگزیدین  روی مرگ سلولی همزمان سلول های SCAP و سلولهای بنیادی PDL و مقایسه ی اثر آنها صورت نگرفته است لذا مطالعه ی حاضر طراحی شده است تا اثر این شوینده های داخل کانال راروی سلول های بنیادی پالپ دندانی و پاپیلای آپیکال به صوت کشت همزمان بررسی کند.

1.نوع مرگ سلولهای بنیادی در single culture  و co culture  درمان شده با هیپوکلریت سدیم 1.5% در زمان های مختلف چگونه است؟

2.نوع مرگ سلولهای بنیادی در single culture و co culture  درمان شده با EDTA 17%  در زمان های مختلف چگونه است؟

3.نوع مرگ سلولهای بنیادی در single culture  و co culture  درمان شده با نرمال سالین در زمانهای مختلف چگونه است ؟

4.نوع مرگ سلولهای بنیادی در single culture  و co culture  دمان شده با کلرهگزیدین 2% در زمانهای مختلف چگونه است؟

5.بین نوع مرگ سلولهای بنیادی در محیط کشت های فوق درمان شده با مواد مختلف در زمان های مورد مطالعه تفاوت وجود دارد.

تعیین  نحوه ی مرگ سلولی ناشی از شست و شو دهنده های مختلف اندودونتیک بر کشت همزمان سلولهای بنیادی مزانشیم دندانی

1.تعیین نوع مرگ سلولهای بنیادی در single culture  و co-culture  درمان شده با هیپوکلریت سدیم 1.5% در زمان های مختلف .

2.تعیین نوع مرگ سلولهای بنیادی در single culture و co culture  درمان شده با EDTA 17%  در زمان های مختلف .

3.تعیین نوع مرگ سلولهای بنیادی در single culture  و co culture  درمان شده با نرمال سالین در زمانهای مختلف .

4.تعیین نوع مرگ سلولهای بنیادی در single culture  و co culture  درمان شده با کلرهگزیدین 2% در زمانهای مختلف .

5.مقایسه ی نوع مرگ سلولهای بنیادی در محیط کشت های فوق درمان شده با مواد مختلف در زمان های مورد مطالعه .

دانشجویان و دندانپزشکان

coculture:ارتباط و تقابل متقابل بین سلولهای مختلف است .و در single culture  در محیط کشت فقط یک نوع سلول وجود دارد.(16)

اپوپتوز:مشخصات سلول هنگام  شامل تراکم کروماتین درون هسته قطعه قطعه شدن هسته

 انتقال فسفاتیدیل سرین از نیمه ی داخلی به نیمه ی خارجی غشای سلول، بالونی شدن سطح سلول و تولید اجسام اپوپتوزی است.

نکروز:در نکروز تمامی اندامک های داخل سلولی به خصوص میتوکندری متورم میشود و با از هم گسیختگی غشای سلول و لیز سلول تخریب صورت میگیرد و مرگ سلول از طریق نکروز با تخریب گسترده ی بافت همراه است.(19)

تجربی

معیار ورود:سلولهای بنیادی اپیکال پاپیلا و لیگامنت پریودنتال از دندان مولر سوم

معیار خروج:نمونه هایی که الوده شدند از مطالعه خارج میشوند.

با توجه به اینکه مداخله بر روی نمونه های یکسان و در شرایط ازمایشگاهی یکسان انجام می شود و نیز با توجه به مقالات نسبتا مشابه در هر گروه از مواد اندو دنتیک 6 چاهک در نظر گرفته خواهد شد (23).

تصادفی

کشت سلولیSCAP و PDL از ناحیه پری اپیکال دندان های مولر سوم از دو اهدا کننده جوان  16-18 ساله که حداقل دو سوم ریشه تشکیل شده باشد به روش جداسازی آنزیمی ایجاد می شود. از تمامی اهدا کنندگان رضایت نامه آگاهانه گرفته می شود که ضمیمه طرح می باشد. دندانهابا phosphate buffered saline (PBS)  شستو شو  می شوند و از ناحیه CEJ قطع شده و لیگامنت پرودونتال  و ناحیه پاپیلای اپیکال آنها خارج میشود. بافت به قطعات کوچکی تقسیم میشود و در محلول 5mgr/ml  از کلاژناز نوع I  (Invitrogen, Karlsruhe, Germany)   به مدت یک ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد قرار داده میشود. محلول تک سلولی توسط عبور دادن محلولها از صافی سلولی um ۷۰ (BD Biosciences, Heidelberg, Germany)  به دست می آید. سلول ها در داخل فلاسک 25 به همراه محیط کشت  DMEM حاوی FBS 15% و 1%pen/strep  در داخل انکوباتور O2%95 /5%CO2 قرار می گیرند.هر  دو روز یکبار refresh  میشود و  بعد از اینکه 80% کف فلاسک از سلول پر شد پاساژ داده می شوند و محتویات یک فلاسک بین سه فلاسک تقسیم می گردد. برای انجام آزمایشات از سلول های پاساژ سوم به بعد استفاده می گردد.

 8-2-3- بررسی مرگ سلولی

برای تیمار سلول­ها از پلیت­های insert ( ۰.۴ µm) (SPL Life Science, Gyeonggi-do, South Korea). استفاده شد. بعد از کشت سلول­ها به تعداد مناسب در هر چاهک پلیت­های 6 خانه این insert ها بر روی چاهک قرار داده شده و در لایه بالایی سلول­های SCAP و در کف پلیت­ها سلول­های PDL قرار می­گیرند(80000  سلول در هر چاهک). بعد از تیمار سلولها با ترکیبات  (MD-cleanser, Meta Biomed, Chungju,  Korea)EDTA 17% (Clorhexidina S, Dentscare LTDA, Joinville, SC, Brasil), CHX 2%, (Sehat, Tehran, Iran )NaOCL  5.25%  و نرمال سالین در زمان­های مختلف ( 10 5 1)دقیقه Insert ها برداشته شده و هر کدام جداگانه از پلیت قبلی تریپسینه شده و آماده بررسی با فلوسایتومتری(Becton dickinson  )می­شوند.

برای بررسی مرگ سلولی از ترکیب انکسین(E bioscience)استفاده می­شود که به ترکیب فسفاتیدیل سرین موجود در سطح سلول­های آپاپتوتیک متصل شده و خاصیت فلوئورسنت دارد. بدین منظور بعد از تیمار سلول­ها محیط رویی آن­ها برداشته شده و بعد از تریپسینه کردن و برداشت سلو­های تریپسینه شده، به محیط رویی اضافه می­شوند و به مدت 5 دقیقه در دور 1200 سانتریفیوژ می­شوند. سپس محیط رویی دور ریخته شده و سلول­ها دو مرتبه توسط بافر فسفات شسته می­شوند. بعد از  این مرحله 500 میکرولیتر باندینگ بافر موجود در کیت به سلول­ها اضافه شده و در ادامه 100 ماکرولیتر انکسین و 5 ماکرو لیتر پروپیدیک یدید هم به سوسپانسیون سلولی اضافه شده و به مدت 15 دقیقه در محیط تاریک نگهداری می­شوند. بعد از گذشت زمان 15 دقیقه حدود 10000 سلول­ توسط دستگاه فلوسایتومتری مورد آنالیز قرار میگیرید که  فیلتر FL1  برای انکسین و فیلتر FL3 برای پروپیدیوم یدید استقاده می­شود.  در ادامه درصد سلول­های آپاپتوتیک و نکروتیک با توجه به میزان فلوئورسنت آن­ها مشخص می­شود. از آنجایی که در سلول­های نکروتیک تمامیت غشایی از بین رفته و غشای سلول نفوذ پذیر شده است در نتیجه ترکیب فلوئورسنت پروپیدیوم یدید توانایی عبور از غشا را داشته و می­تواند به DNA متصل شود. در سلو­هایی که دچار آپاپتوز شده اند تمامیت غشایی حفظ شده در نتیجه پروپیدیوم یدید توانایی ورود به سلول را ندارو از طرفی  فسفاتیدیل سرین در سطح خارجی غشا قرار گرفته است و انکسین به آن متصل می­شود. با رنگ آمیزی همزمان سلول­ها بوسیله این دو ترکیب میتوان بین سلول­های آپاپتوتیک و نکروتیک افتراق داد (20).

داده ها به کمک انالیز واریانس تجزیه و تحلیل و از ازمون توکی برای مقایسه نوع مرگ سلولی در یک غلظت ثابت استفاده می گردد.سطح معنی داری05/> p در نظر گرفته میشود.

عنوان جدول :نوع مرگ سلولی بعد از 1 دقیقه   تماس با شست و شو دهنده های مختلف

کدهای 15، 14، 13، 12، 11، 10، 9، 5 و 1 از دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش با سلول های بنیادی در جمهوری اسلامی ایران

و کد های 12، 11، 10، 9، 8، 7، 6، 4، 3، 2 و 1از کدهای راهنمای عمومی دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران

و کد های 31، 30، 29، 28، 27، 26، 25، 24، 23، 22، 21، 20، 19، 18، 17، 16، 15، 14، 13، 12، 11، 10، 9، 8، 7، 5، 3، 2 و 1 از دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی در جمهوری اسلامی ایران رعایت می گردد.

1_دشواری  کشت  و ایزوله کردن  و زنده نگه داشتن سلولهای مورد نظر و راه حل ان جلوگیری از الودگی محیط کشت است .

2_هزینه بالای انجام پروژه.

Co culture, Cell Death, Irrigant

1.           Galler KM, D’Souza RN, Federlin M, Cavender AC, Hartgerink JD, Hecker S, et al. Dentin conditioning codetermines cell fate in regenerative endodontics. Journal of endodontics. 2011;37(11):1536-41.

2.           Lovelace TW, Henry MA, Hargreaves KM, Diogenes A. Evaluation of the delivery of mesenchymal stem cells into the root canal space of necrotic immature teeth after clinical regenerative endodontic procedure. Journal of endodontics. 2011;37(2):133-8.

3.           Park M, Pang N-S, Jung I-Y. Effect of dentin treatment on proliferation and differentiation of human dental pulp stem cells. Restorative dentistry & endodontics. 2015;40(4):290-8.

4.           Shrestha S, Torneck CD, Kishen A. Dentin conditioning with bioactive molecule releasing nanoparticle system enhances adherence, viability, and differentiation of stem cells from apical papilla. Journal of endodontics. 2016;42(5):717-23.

5.           Shigetani Y, Ohkura N, Yoshiba K, Ohshima H, Hosoya A, Yoshiba N, et al. GaAlAs laser‐induced pulp mineralization involves dentin matrix protein 1 and osteopontin expression. Oral diseases. 2016;22(5):399-405.

6.           Marending M, Luder H, Brunner T, Knecht S, Stark WJ, Zehnder M. Effect of sodium hypochlorite on human root dentine–mechanical, chemical and structural evaluation. International endodontic journal. 2007;40(10):786-93.

7.           Spangberg L, Engström B, Langeland K. Biologic effects of dental materials: 3. Toxicity and antimicrobial effect of endodontic antiseptics in vitro. Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology. 1973;36(6):856-71.

8.           Trevino EG, Patwardhan AN, Henry MA, Perry G, Dybdal-Hargreaves N, Hargreaves KM, et al. Effect of irrigants on the survival of human stem cells of the apical papilla in a platelet-rich plasma scaffold in human root tips. Journal of endodontics. 2011;37(8):1109-15.

9.           Ring KC, Murray PE, Namerow KN, Kuttler S, Garcia-Godoy F. The comparison of the effect of endodontic irrigation on cell adherence to root canal dentin. Journal of endodontics. 2008;34(12):1474-9.

10.         Ringel AM, Patterson SS, Newton CW, Miller CH, Mulhern JM. In vivo evaluation of chlorhexidine gluconate solution and sodium hypochlorite solution as root canal irrigants. Journal of Endodontics. 1982;8(5):200-4.

11.         Haapasalo M, Shen Y, Qian W, Gao Y. Irrigation in endodontics. Dental Clinics. 2010;54(2):291-312.

12.         Galler K, Widbiller M, Buchalla W, Eidt A, Hiller KA, Hoffer P, et al. EDTA conditioning of dentine promotes adhesion, migration and differentiation of dental pulp stem cells. International endodontic journal. 2016;49(6):581-90.

13.         Basrani B, Haapasalo M. Update on endodontic irrigating solutions. Endodontic topics. 2012;27(1):74-102.

14.         Mollashahi NF, Saberi E, Karkehabadi H. Evaluation of cytotoxic effects of various endodontic irrigation solutions on the survival of stem cell of human apical papilla. Iranian endodontic journal. 2016;11(4):293.

15.         AlKahtani A, Alkahtany SM, Mahmood A, Elsafadi MA, Aldahmash AM, Anil S. Cytotoxicity of QMix™ endodontic irrigating solution on human bone marrow mesenchymal stem cells. BMC oral health. 2014;14(1):27.

16.         Suh J-D, Lim KT, Jin H, Kim J, Choung P-H, Chung JH. Effects of co-culture of dental pulp stem cells and periodontal ligament stem cells on assembled dual disc scaffolds. Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 2014;11(1):47-58.

17.         Nishikiori R, Nomura Y, Sawajiri M, Masuki K, Hirata I, Okazaki M. Influence of chlorine dioxide on cell death and cell cycle of human gingival fibroblasts. Journal of Dentistry. 2008;36(12):993-8.

18.         Barnhart BD, Chuang A, Dalle Lucca JJ, Roberts S, Liewehr F, Joyce AP. An in vitro evaluation of the cytotoxicity of various endodontic irrigants on human gingival fibroblasts. Journal of endodontics. 2005;31(8):613-5.

19.         Hashemi M, Karami‐Tehrani F, Ghavami S, Maddika S, Los M. Adenosine and deoxyadenosine induces apoptosis in oestrogen receptor‐positive and‐negative human breast cancer cells via the intrinsic pathway. Cell proliferation. 2005;38(5):269-85.

20.         Vermes I, Haanen C, Steffens-Nakken H, Reutellingsperger C. A novel assay for apoptosis flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled annexin V. Journal of immunological methods. 1995;184(1):39-51.

21.         Zunino SJ, Singh MK, Bass J, Picker LJ. Immunodetection of histone epitopes correlates with early stages of apoptosis in activated human peripheral T lymphocytes. The American Journal of Pathology. 1996;149(2):653-63.

22.         Vidya Priyadarsini R, Senthil Murugan R, Maitreyi S, Ramalingam K, Karunagaran D, Nagini S. The flavonoid quercetin induces cell cycle arrest and mitochondria-mediated apoptosis in human cervical cancer (HeLa) cells through p53 induction and NF-κB inhibition. European Journal of Pharmacology. 2010;649(1):84-91.

23.          Ruparel NB, Teixeira FB, Ferraz CC, Diogenes A. Direct effect of intracanal medicament on survival of stem cells of the apical papilla.2012;38(10):1372-5.

ارزیابی  نحوه ی مرگ سلولی ناشی از شست و شو دهنده های مختلف اندودونتیک بر کشت همزمان سلولهای بنیادی مزانشیم دندانی

ندارد

استفاده از سلولهای بنیادی به جای استفاده از بیمار

ندارد

ندارد

هیچ هزینه ای بر بیمار تحمیل نمیشود

استفاده از مطالعه ی حیوانی به جای مطالعه ی انسانی

کلیه ی اطلاعات محرمانه است

مجری موظف است پاسخگوی کلیه پرسش ها باشد. 

حق نپذیرفتن بیمار ازاد است .بیمار میتواند نمونه ندهد

رضایت نامه اخذ می گردد

پرسشنامه 1