ارزیابی نحوه مرگ سلولی ناشی از داروهای داخل کانال ریشه مختلف در کشت همزمان سلولهای بنیادی مزانشیم دندانی

1.  دندان های دارای ریشه نابالغ ممکن است در اثر ضربه، پوسیدگی یا بیماری های دیگر پالپ، به درمان ریشه نیاز پیدا کنند. این دندان ها برای درمان ریشه نیاز به توجه خاصی دارند. درمان سنتی این دندان ها، ایجاد سد در ناحیه اپیکالی است که یا به صورت مصنوعی و یا به صورت بیولوژیک القا می شود، که بعنوان اپکسیفیکاسیون شناخته می شود. روش های مختلفی جهت اپکسیفیکاسیون وجود دارد که معمول ترین آن ها استفاده از کلسیم هیدروکساید می باشد(1). اگرچه ایجاد سد بافت سخت فیزیولوژیک با کلسیم هیدروکساید تقریبا قابل پیشگویی است، اما به 3 تا 18 ماه زمان نیاز دارد. از معایب این روش می توان به دوره طولانی درمان، جلسات متعدد و مستعد بودن دندان به شکستگی تاجی و نیز ریزنشت کرونالی اشاره کرد. بعلاوه نشان داده شده است که درمان طولانی با کلسیم هیدروکساید ممکن است ریشه ها را ضعیف کرده و آنها را مستعد شکست نماید(1, 2).

2. روش دوم اپکسیفیکاسیون کاربرد یک ماده با سازگاری بافتی و هدایت گر روند ساخت بافت معدنی مانند Mineral trioxide aggregate) MTA) می باشد(3). این روش به صورت یک یا دو جلسه ای انجام می شود، اما نشان داده شده که همچنان دندان های درمان شده با این روش مستعد شکستگی تاجی هستند(4).

   یک شکل ایده آل درمان دندان های نابالغ روش های regenerative می باشد که در آن بافت پالپ بیمار یا نکروز حذف و با بافت پالپ سالم جایگزین می شود(5).

   روش درمان ریشه regenerative می تواند به عنوان روش طراحی شده بر اساس اصول بیولوژیک برای جایگزینی بافتهای آسیب دیده، از جمله عاج و ریشه و همچنین کمپلکس عاج _ پالپ تعریف شود(6). regeneration دندان سابقه طولانی دارد و در سال 1952دکتر  B. W. Hermann در گزارش یک مورد از کلسیم هیدروکساید در vital pulp amputation استفاده کرد(7).

   در عفونت پالپ، میکروارگانیسم به فضای پالپ حمله می کنند و در دیوار کانال بیوفیلم تشکیل می دهند و به توبول های عاجی نفوذ می کنند(8).به شکل معمول آماده سازی کانال ریشه به صورت مکانیکی و شیمیایی با هیپوکلریت سدیم برای ضد عفونی کانال ریشه انجام می گردد(9). در درمان های regenerative بعلت عدم تکامل ساختار دندان و نازک بودن دیواره های کانال ریشه آماده سازی مکانیکال دندان مقدور نبوده و بیشتر روی جنبه شیمیایی تمرکز می گردد، لذا جهت پاکسازی فضای کانال ریشه از خمیرهای آنتی بیوتیکی و یا کلسیم هیدروکساید استفاده می شود(10).

   کلسیم هیدروکساید:

   بطور رایج از کلسیم هیدروکساید بعلت فعالیت ضد میکروبی در کانال ریشه و ناحیه پری رادیکولار و خنثی کردن بقایای بافتی درون کانال ریشه به عنوان داروی رایج داخل کانال استفاده می شود (11). استفاده از کلسیم هیدروکساید به مدت یک هفته داخل کانال ریشه سبب گندزدایی کانال ریشه می شود (12). کلسیم هیدروکساید توانایی هیدرولیز لیپوپلی ساکارید باکتری ها را دارد و از ایجاد عفونت در کانال ریشه بوسیله بقایای دیواره سلولی باکتری های مرده پیشگیری می کند(13)،همچنین توانایی انحلال مواد آلی را دارد(14).

   خمیر آنتی بیوتیکی:

   مطالعات بالینی قدرت خمیر آنتی بیوتیک سه گانه (TAP) ترکیبی از مترونیدازول، سیپروفلوکساسین و ماینوسیکلین را به عنوان ماده ضد عفونی کننده داخل کانال ثابت کرده اند(15-21). نشان داده شده است که پس از استفاده از TAP به مدت 2 هفته، 30 درصد از باکتری ها زنده باقی می مانند،(9) همچنین، ارتباط نزدیکی میان تغییر رنگ دندان و ماینوسیکلین وجود دارد(22) . بنابراین، Yassen و همکاران  استفاده از خمیر دو گانه آنتی بیوتیک (DAP) بدون ماینوسیکلین و یا تعویض ماینوسایکلین با آنتی بیوتیک دیگر (clindamyxin، cefaclor، یا amoxicillin) را پیشنهاد دادند(23).                                                        

   کلرهگزیدین:

    یکی از شستشو دهنده های داخل کانال بوده و ارزش آن به طور اولیه در پریودنتیک کشف شد و بعداً در اندودنتیک به عنوان مایع یا ژل در غلظت­های مختلف مورد بررسی قرار گرفت. ژل کلرهگزیدین ممکن است به عنوان یک medicationداخل کانال پذیرفته شود زیرا این ماده در شرایط ویسکوز تطابق خوبی با دیواره های کانال برقرار می کند. و فعالیت آن برای دو هفته یا بیشتر باقی می ماند. کلرهگزیدین اثرات آنتی باکتریال عالی در شرایط آزمایشگاهی نشان می دهد.

   نشان داده شده است که از نظر خصوصیات ضد میکروبی مشابه و قابل مقایسه با هیپوکلریت سدیم می باشد و قابلیت نفوذ به داخل توبولهای عاجی را دارد اما متأسفانه دارای خاصیت حلالیت بافتی نمی­باشد.

    

   Komorowski نتایج مطالعه وهمکارانش نشاندادکه  پس ازیک ساعت اول خواص آنتی میکروبیال کلرهگزیدین به عنوان پوشش دهنده به همراه کلسیم هیدروکساید با گذشت زمان افزایش می­یابد.(24, 25)

   در سال 2014 مطالعه ای توسط suh و همکاران انجام شد که در این مطالعه دو رده سلولی پالپ و پریودونتال لیگامنت به صورت همزمان و بصورت جداگانه کشت داده شدند. نتایج نشان دهنده افزایش بیان دنتین سیالوپروتین فسفات و دنتین سیالو پروتئین در هردو رده هنگام کشت همزمان نسب به کشت جداگانه بود. کشت به صورت همزمان باعث افزایش پرولیفزاسیون و تمایز در هردو سلول می­شد(26).دو راه برای مرگ سلولی شناخته شده است نکروز و اپوپتوز که تفاوت های بیوشیمیایی و مورفولوژی بسیاری بین نکروز و اپوپتوز وجود دارد . مشخصات سلول هنگام اپوپتوز شامل تراکم کروماتین درون هسته قطعه قطعه شدن DNA  انتقال فسفاتیدیل سرین از نیمه ی داخلی به نیمه ی خارجی غشای سلول بالونی شدن سطح سلول و تولید اجسام اپوپتوزی است.در نکروز تمامی اندامک های داخل سلولی به خصوص میتوکندری متورم میشود و با از هم گسیختگی غشای سلول و لیز سلول تخریب صورت میگیرد و مرگ سلول از طریق نکروز با تخریب گسترده ی بافت همراه است .راه های بررسی اپوپتوز شامل :بررسی سیتوتوکسیسیتی تغیرات مورفولوژی الگوی نردبانی DNA فلوسیتومتری  و تست TUNELاست.(27)

   در فلوسیتومتری طی مراحل اولیه ی اپوپتوز فسفا تیدیل سرین که به طور طبیعی در نیمه ی داخلی غشا وجود دارد به نیمه ی خارجی منتقل میشود . از آنجایی که در سلول­های نکروتیک تمامیت غشایی از بین رفته و غشای سلول نفوذ پذیر شده است در نتیجه ترکیب فلوئورسنت پروپیدیوم یدید توانایی عبور از غشا را داشته و می­تواند به DNA متصل شود. در سلو­هایی که دچار آپاپتوز شده اند تمامیت غشایی حفظ شده در نتیجه پروپیدیوم یدید توانایی ورود به سلول را نداردو از طرفی  فسفاتیدیل سرین در سطح خارجی غشا قرار گرفته است و انکسین به آن متصل می­شود. با رنگ آمیزی همزمان سلول­ها بوسیله این دو ترکیب میتوان بین سلول­های آپاپتوتیک و نکروتیک افتراق داد (28). از این روش در مطالعات مختلف برای بررسی نوع مرگ سلولی و درصد آن جهت مطالعات  مکانیسمی(29) اثر دارو ها (27)و عصاره های گیاهی(30) در سلول­های مختلف استفاده شده است.  

   Cocultureارتباط و تقابل متقابل بین سلولهای مختلف ایجاد میشود .این ارتباطات بین سلولهای هتروتیپ برای تکامل بیولوژیک لازم و برای ثبات عملکردی بافت ها و ارگان ها لازم است  و از طرفی تقسیم و تمایز سلولها را تحت تاثیر قرار میدهد  در مطالعه ی وsuhوهمکاران  coculture  از سلولهای بنیادی دندانی تمایز استئوژنیک و تقسیم سلولی را افزایش میدهد و مینرالیزیشن در گروه  coculture  نسبت به گروه single culture  بیشر است(26).

   مطالعات گذشته تاثیرات توکسیک داروهای داخل کانال ریشه مختلف را روی single culture  بررسی کرده ولی تا کنون مطالعه ای در مورد اثر داروهای داخل کانال ریشه کلرهگزیدین و کلسیم هیدروکساید، کلسیم هیدروکساید و نرمال سالین،TAP،MTAP و نرمال سالین،MTAP و کلرهگزیدین و DAPروی مرگ سلولی همزمان سلول های بنیادی اپیکال پاپیلا Stem Cells of the Apical Papilla((SCAP و سلولهای بنیادی PDL و مقایسه ی اثر آنها صورت نگرفته است لذا مطالعه ی حاضر طراحی شده است تا اثر این داروهای داخل بنیادی اپیکال پاپیلاال راروی سلول های بنیادی اپیکال پاپیلا((SCAP و سلولهای بنیادی PDL به صوت کشت همزمان بررسی کند.

1. آیاغلظت های مختلف هیدروکساید و کلرهگزیدین در زمان های روز 1،3،5،7 باعث مرگ سلولی سلول­های بنیادی پریودونتال لیگامت می گردد؟
2. آیاغلظت های مختلف هیدروکساید و کلرهگزیدین در زمان های روز 1،3،5،7  باعث مرگ سلولی سلول­های بنیادی اپیکال پاپیلا می گردد؟
3.   آیاغلظت های مختلف هیدروکساید و کلرهگزیدین در زمان های روز 1،3،5،7 باعث افزایش مرگ سلولی در کشت همزمان سلول­های بنیادی  اپیکال پاپیلا و پریودونتال لیگامنت می­شود؟
4. آیاغلظت های مختلف هیدروکساید و نرمال سالین در زمان های روز 1،3،5،7 باعث مرگ سلولی سلول­های بنیادی پریودونتال لیگامت می گردد؟
5. آیاغلظت های مختلف هیدروکساید و نرمال سالین در زمان های روز 1،3،5،7 باعث مرگ سلولی سلول­های بنیادی اپیکال پاپیلا می گردد؟
6. آیاغلظت های مختلف هیدروکساید و نرمال سالین در زمان های روز 1،3،5،7 باعث افزایش مرگ سلولی در کشت همزمان سلول­های بنیادی  اپیکال پاپیلا و پریودونتال لیگامنت می­شود؟
7. آیاغلظت های مختلف MTAP در زمان های روز 1،3،5،7 باعث مرگ سلولی سلول­های بنیادی پریودونتال لیگامت می گردد؟
8. آیاغلظت های مختلف MTAP در زمان های روز 1،3،5،7 باعث مرگ سلولی سلول­های بنیادی اپیکال پاپیلا می گردد؟
9. آیاغلظت های مختلف MTAP در زمان های روز 1،3،5،7 باعث افزایش مرگ سلولی در کشت همزمان سلول­های بنیادی  اپیکال پاپیلا و پریودونتال لیگامنت می­شود؟

10. آیاغلظت های مختلف DAP در زمان های روز 1،3،5،7عث مرگ سلولی سلول­های بنیادی پریودونتال لیگامت می گردد؟
11. آیاغلظت های مختلف DAP در زمان های روز 1،3،5،7 باعث مرگ سلولی سلول­های بنیادی اپیکال پاپیلا می گردد؟
12. آیاغلظت های مختلف DAP در زمان های روز 1،3،5،7 باعث افزایش مرگ سلولی در کشت همزمان سلول­های بنیادی  اپیکال پاپیلا و پریودونتال لیگامنت می­شود؟
13. ایا بین مکانیسم مرگ سلولی (اپوپتوز و نکروز )توسط مواد فوق تفاوتی وجود دارد؟

1. تعیین نوع مرگ سلول­های بنیادی پریودونتال لیگامنت در گروه درمان شده  با غلظتهای متفاوت  کلرهگزیدین و کلسیم هیدروکساید در زمان های مختلف.
2. تعیین نوع مرگ سلول­های بنیادی اپیکال پاپیلا در گروه درمان شده با غلظتهای متفاوت کلرهگزیدین و کلسیم هیدروکساید در زمان های مختلف.
3.  تعیین  نوع مرگ سلولی بر روی کشت همزمان سلول های پریودونتال لیگامنت و اپیکال پاپیلا گروه درمان شده با غلظتهای متفاوت کلرهگزیدین و کلسیم هیدروکسای در زمان های مختلف د.
4. تعیین نوع مرگ سلول­های بنیادی پریودونتال لیگامنت در گروه درمان شده  با غلظتهای متفاوت نرمال سالین و کلسیم هیدروکساید در زمان های مختلف.     
5. تعیین نوع مرگ سلول­های بنیادی اپیکال پاپیلا در گروه درمان شده با غلظتهای متفاوت نرمال سالین و کلسیم هیدروکساید در زمان های مختلف.
6. تعیین  نوع مرگ سلولی بر روی کشت همزمان سلول های پریودونتال لیگامنت و اپیکال پاپیلا گروه درمان شده با غلظتهای متفاوت نرمال سالین و کلسیم هیدروکساید در زمان های مختلف.
7. تعیین نوع مرگ سلول­های بنیادی پریودونتال لیگامنت در گروه درمان شده  با غلظتهای متفاوت  MTAP در زمان های مختلف
8. تعیین نوع مرگ سلول­های بنیادی اپیکال پاپیلا در گروه درمان شده با غلظتهای متفاوت MTAP در زمان های مختلف
9. تعیین  نوع مرگ سلولی بر روی کشت همزمان سلول های پریودونتال لیگامنت و اپیکال پاپیلا گروه درمان شده با غلظتهای متفاوت MTAP در زمان های مختلف
10. تعیین نوع مرگ سلول­های بنیادی پریودونتال لیگامنت در گروه درمان شده  با غلظتهای متفاوت DAP در زمان های مختلف
11. تعیین نوع مرگ سلول­های بنیادی اپیکال پاپیلا در گروه درمان شده با غلظتهای متفاوت DAP در زمان های مختلف.

12. تعیین  نوع مرگ سلولی بر روی کشت همزمان سلول های پریودونتال لیگامنت و اپیکال پاپیلا گروه درمان شده با غلظتهای متفاوت DAP در زمان های مختلف
13. مقایسه مکانیسم مرگ سلولی (اپوپتوز و نکروز )در گروه های فوق

دانشجویان و دندانپزشکان

دو راه برای مرگ سلولی شناخته شده است نکروز و اپوپتوز که تفاوت های بیوشیمیایی و مورفولوژی بسیاری بین نکروز و اپوپتوز وجود دارد . مشخصات سلول هنگام اپوپتوز شامل تراکم کروماتین درون هسته قطعه قطعه شدن DNA  انتقال فسفاتیدیل سرین از نیمه ی داخلی به نیمه ی خارجی غشای سلول بالونی شدن سطح سلول و تولید اجسام اپوپتوزی است.در نکروز تمامی اندامک های داخل سلولی به خصوص میتوکندری متورم میشود و با از هم گسیختگی غشای سلول و لیز سلول تخریب صورت میگیرد و مرگ سلول از طریق نکروز با تخریب گسترده ی بافت همراه است .(27)

تجربی

سلولهای بنیادی اپیکال پاپیلا و پریودنتال لیگامنت از دندان مولر سوم.نمونه های دارای الودگی از مطالعه خارج میشوند 

با توجه به اینکه مداخله بر روی نمونه های یکسان و در شرایط یکسان انجام میشود و نیز با توجه به مقالات نسبتا مشابه در هر گروه از مواد اندودونتیک 6 چاهک در نظر گرفته خواهد شدبا توجه به اینکه مداخله بر روی نمونه های یکسان و در شرایط یکسان انجام میشود و نیز با توجه به مقالات نسبتا مشابه در هر گروه از مواد اندودونتیک 6 چاهک در نظر گرفته خواهد شد(31)

کشت سلولیSCAP و PDL از ناحیه پری اپیکال دندان مولر سوم اهدا کننده دختر جوان  17 ساله که حداقل دو سوم ریشه تشکیل شده باشد به روش جداسازی آنزیمی ایجاد می شود

نتیجه فلوسایتومتری پس از یک هفته در نمونه های مواجه شده با MTAP

کشت سلولیSCAP و PDL از ناحیه پری اپیکال دندان مولر سوم دخثر جوان  ۱7 ساله که حداقل دو سوم ریشه تشکیل شده باشد به روش جداسازی آنزیمی ایجاد می شود. از تمامی اهدا کنندگان رضایت نامه آگاهانه گرفته می شود که ضمیمه طرح می باشد. دندانها ضدعفونی می شوند و از ناحیه CEJ قطع شده و لیگامنت پرودونتال  و ناحیه پاپیلای اپیکال آنها خارج میشود. بافت به قطعات کوچکی تقسیم میشود و در محلول 3mgr/ml  از کلاژن نوع 4mgr/ml dispas I (Invitrogen, Karlsruhe, Germany)   به مدت یک ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد قرار داده میشود. محلول تک سلولی توسط عبور دادن محلولها از صافی سلولی um ۷۰ (BD Biosciences, Heidelberg, Germany)  به دست می آید. سلول ها در داخل فلاسک 25 به همراه محیط کشت DMEM، FBS و pen/strep در داخل انکوباتور CO2 قرار می گیرند. بعد از اینکه 80% کف فلاسک از سلول پر شد پاساژ داده می شوند و محتویات یک فلاسک بین سه فلاسک تقسیم می گردد. برای انجام آزمایشات از سلول های پاساژ سوم استفاده می گردد.

 8-2-3- بررسی مرگ سلولی

برای تیمار سلول­ها از پلیت­های insert ( ۰.۴ µm) (SPL Life Science, Gyeonggi-do, South Korea). استفاده شد. بعد از کشت سلول­ها به تعداد مناسب در هر چاهک پلیت­های 6 خانه این insert ها بر روی چاهک قرار داده شده و در لایه بالایی سلول­های SCAP و در کف پلیت­ها سلول­های PDL قرار می­گیرند(80000 سلول در هر چاهک)(31). بعد از تیمار سلول­ها با غلظتهای 125/0، 25/0، 1، 5 و 10 میلیگرم بر میلی لیتر ترکیب های ، کلسیم هیدروکسایدو کلرهگزیدین ، کلسیم هیدروکساید و نرمال سالین، MTAP شامل سیپروفلوکساسین (فارابی - ایران) مترونیدازول (البرز دارو - ایران) و سفاکلور (Aspen، Hungary، Actavis، Ceclor، Philippines) با نسبت وزنی1-1-1 و نرمال سالین ، وDAP شامل سیپروفلوکساسین (فارابی - ایران) مترونیدازول (البرز دارو - ایران) با نسبت وزنی1-1 در زمان­های 1هفته، 2 هفته و 3 هفته Insert ها برداشته شده و هر کدام جداگانه ار پلیت قبلی تریپسینه شده و آماده بررسی با فلوسایتومتری می­شوند. برای بررسی مرگ سلولی از ترکیب انکسین استفاده می­شود که به ترکیب فسفاتیدیل سرین موجود در سطح سلول­های آپاپتوتیک متصل شده و خاصیت فلوئورسنت دارد. در ادامه درصد سلول­های آپاپتوتیک و نکروتیک با توجه به میزان فلوئورسنت آن­ها مشخص می­شود. از آنجایی که در سلول­های نکروتیک تمامیت غشایی از بین رفته و غشای سلول نفوذ پذیر شده است در نتیجه ترکیب فلوئورسنت پروپیدیوم یدید توانایی عبور از غشا را داشته و می­تواند به DNA متصل شود. در سلو­هایی که دچار آپاپتوز شده اند تمامیت غشایی حفظ شده در نتیجه پروپیدیوم یدید توانایی ورود به سلول را ندارو از طرفی  فسفاتیدیل سرین در سطح خارجی غشا قرار گرفته است و انکسین به آن متصل می­شود. با رنگ آمیزی همزمان سلول­ها بوسیله این دو ترکیب میتوان بین سلول­های آپاپتوتیک و نکروتیک افتراق داد(28).   از این روش در مطالعات مختلف برای بررسی نوع مرگ سلولی و درصد آن جهت مطالعات  مکانیسمی(29) اثر دارو ها (27)و عصاره های گیاهی(30) در سلول­های مختلف استفاده شده است.  

تحلیل آماری داده ها در زمان­های مختلف با آزمون measure repeated ANOVAو به دنبال آن آزمون Bonferriniو نرم افزار GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA, USA)جهت بررسی استفاده شد و معنی داری در سه سطح  P<0.05 و P<0.01 و P<0.001 در نظر گرفته می شود.

نوع مرگ سلولی در زمانهای 1،2و3 هفته در مواجهه با غلظت  mg/ml1

کدهای 15، 14، 13، 12، 11، 10، 9، 5 و 1 از دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش با سلول های بنیادی در جمهوری اسلامی ایران

و کد های 12، 11، 10، 9، 8، 7، 6، 4، 3، 2 و 1از کدهای راهنمای عمومی دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران

و کد های 31، 30، 29، 28، 27، 26، 25، 24، 23، 22، 21، 20، 19، 18، 17، 16، 15، 14، 13، 12، 11، 10، 9، 8، 7، 5، 3، 2 و 1 از دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی در جمهوری اسلامی ایران رعایت می گردد.

هزینه بالای طرح و الودگی محیط کشت و راه حل آن اماده کردن محیط کشت اضافه برای جایگزینی نمونه های الوده است

مرگ سلولی، سلو­های اپیکال پاپیلا، پریودونتال لیگامنت، کشت همزمان

1.            Frank AL. Therapy for the divergent pulpless tooth by continued apical formation. The Journal of the American Dental Association. 1966;72(1):87-93.

2.            Andreasen JO, Farik B, Munksgaard EC. Long‐term calcium hydroxide as a root canal dressing may increase risk of root fracture. Dental Traumatology. 2002;18(3):134-7.

3.            Torabinejad M, Chivian N. Clinical applications of mineral trioxide aggregate. Journal of endodontics. 1999;25(3):197-205.

4.            Kerekes K, Heide S, Jacobsen I. Follow-up examination of endodontic treatment in traumatized juvenile incisors. Journal of endodontics. 1980;6(9):744-8.

5.            Huang AHC, Chen YK, Lin LM, Shieh TY, Chan AWS. Isolation and characterization of dental pulp stem cells from a supernumerary tooth. Journal of oral pathology & medicine. 2008;37(9):571-4.

6.            Murray PE, Garcia-Godoy F, Hargreaves KM. Regenerative endodontics: a review of current status and a call for action. Journal of endodontics. 2007;33(4):377-90.

7.            Hermann B. On the reaction of the dental pulp to vital amputation and calxyl capping. Deutsche Zahnarztliche Zeitschrift. 1952;7(24):1446.

8.            Duggan D, Arnold RR, Teixeira FB, Caplan DJ, Tawil P. Periapical inflammation and bacterial penetration after coronal inoculation of dog roots filled with RealSeal 1 or Thermafil. Journal of endodontics. 2009;35(6):852-7.

9.            Windley W, Teixeira F, Levin L, Sigurdsson A, Trope M. Disinfection of immature teeth with a triple antibiotic paste. Journal of endodontics. 2005;31(6):439-43.

10.          Fouad A. The microbial challenge to pulp regeneration. Advances in dental research. 2011;23(3):285-9.

11.          Barnett F, Trope M, Rooney J, Tronstad L. In vivo sealing ability of calcium hydroxide‐containing root canal sealers. Dental Traumatology. 1989;5(1):23-6.

12.          Souza-Filho FJd, Soares AdJ, Vianna ME, Zaia AA, Ferraz CCR, Gomes BPFdA. Antimicrobial effect and pH of chlorhexidine gel and calcium hydroxide alone and associated with other materials. Brazilian dental journal. 2008;19(1):28-33.

13.          Silva LAB, Nelson-Filho P, Leonardo MR, Rossi MA, Pansani CA. Effect of calcium hydroxide on bacterial endotoxin in vivo. Journal of endodontics. 2002;28(2):94-8.

14.          Wadachi R, Araki K, Suda H. Effect of calcium hydroxide on the dissolution of soft tissue on the root canal wall. Journal of Endodontics. 1998;24(5):326-30.

15.          Shivashankar VY, Johns DA, Vidyanath S, Kumar MR. Platelet rich fibrin in the revitalization of tooth with necrotic pulp and open apex. Journal of conservative dentistry: JCD. 2012;15(4):395.

16.          Vijayaraghavan R, Mathian VM, Sundaram AM, Karunakaran R, Vinodh S. Triple antibiotic paste in root canal therapy. Journal of pharmacy & bioallied sciences. 2012;4(Suppl 2):S230.

17.          Sato I, Ando‐Kurihara N, Kota K, Iwaku M, Hoshino E. Sterilization of infected root‐canal dentine by topical application of a mixture of ciprofloxacin, metronidazole and minocycline in situ. International endodontic journal. 1996;29(2):118-24.

18.          Hoshino E, Kurihara‐Ando N, Sato I, Uematsu H, Sato M, Kota K, et al. In‐vitro antibacterial susceptibility of bacteria taken from infected root dentine to a mixture of ciprofloxacin, metronidazole and minocycline. International endodontic journal. 1996;29(2):125-30.

19.          Sato T, Hoshino E, Uematsu H, Noda T. In vitro antimicrobial susceptibility to combinations of drugs of bacteria from carious and endodontic lesions of human deciduous teeth. Molecular Oral Microbiology. 1993;8(3):172-6.

20.          Ritter ALdS, Ritter AV, Murrah V, Sigurdsson A, Trope M. Pulp revascularization of replanted immature dog teeth after treatment with minocycline and doxycycline assessed by laser Doppler flowmetry, radiography, and histology. Dental Traumatology. 2004;20(2):75-84.

21.          Yanpiset K, Trope M. Pulp revascularization of replanted immature dog teeth after different treatment methods. Dental Traumatology. 2000;16(5):211-7.

22.          Lenherr P, Allgayer N, Weiger R, Filippi A, Attin T, Krastl G. Tooth discoloration induced by endodontic materials: a laboratory study. International endodontic journal. 2012;45(10):942-9.

23.          Yassen GH, Al-Angari SS, Platt JA. The use of traditional and novel techniques to determine the hardness and indentation properties of immature radicular dentin treated with antibiotic medicaments followed by ethylenediaminetetraacetic acid. European journal of dentistry. 2014;8(4):521.

24.          Mohammadi Z. Chlorhexidine gluconate, its properties and applications in endodontics. Iranian endodontic journal. 2008;2(4):113.

25.          Komorowski R, Grad H, Wu XY, Friedman S. Antimicrobial substantivity of chlorhexidine-treated bovine root dentin. Journal of endodontics. 2000;26(6):315-7.

26.          Suh J-D, Lim KT, Jin H, Kim J, Choung P-H, Chung JH. Effects of co-culture of dental pulp stem cells and periodontal ligament stem cells on assembled dual disc scaffolds. Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 2014;11(1):47-58.

27.          Hashemi M, Karami‐Tehrani F, Ghavami S, Maddika S, Los M. Adenosine and deoxyadenosine induces apoptosis in oestrogen receptor‐positive and‐negative human breast cancer cells via the intrinsic pathway. Cell proliferation. 2005;38(5):269-85.

28.          Vermes I, Haanen C, Steffens-Nakken H, Reutellingsperger C. A novel assay for apoptosis flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled annexin V. Journal of immunological methods. 1995;184(1):39-51.

29.          Zunino SJ, Singh MK, Bass J, Picker LJ. Immunodetection of histone epitopes correlates with early stages of apoptosis in activated human peripheral T lymphocytes. The American Journal of Pathology. 1996;149(2):653-63.

30.          Vidya Priyadarsini R, Senthil Murugan R, Maitreyi S, Ramalingam K, Karunagaran D, Nagini S. The flavonoid quercetin induces cell cycle arrest and mitochondria-mediated apoptosis in human cervical cancer (HeLa) cells through p53 induction and NF-κB inhibition. European Journal of Pharmacology. 2010;649(1):84-91.

31.          Ruparel NB, Teixeira FB, Ferraz CC, Diogenes A. Direct effect of intracanal medicaments on survival of stem cells of the apical papilla. Journal of endodontics. 2012;38(10):1372-5.

32.          Zhang W, Zhuang A, Gu P, Zhou H, Fan X. A review of the three-dimensional cell culture technique: Approaches, advantages and applications. Current stem cell research & therapy. 2016;11(4):370-80.

ارزیابی نحوه  مرگ سلولی ناشی از  داروهای داخل کانال ریشه مختلف در کشت همزمان سلولهای بنیادی مزانشیم دندانی

ندارد

استفاده از سلولهای بنیادی به جای استفاده از بیمار

ندارد

ندارد

هیچ هزینه ای بر بیمار تحمیل نمیشود

استفاده از مدل حیوانی

کلیه اطلاعات محرمانه است

مجری موظف است پاسخگوی کلیه پرسش ها باشد. 

بیمار آزاد است نمونه ندهد

رضایت نامه اخذ میگردد

نتیجه فلوسایتومتری پس از یک هفته در نمونه های مواجه شده با MTAP  

 1mg   در غلظت