بررسی سطح بزاقی اینترفرون گاما در بیماران مبتلا به آفت مینور دهانی.

استوماتیت افتی راجعه(RAS) اختلالی است که با زخم های عودکننده محدود به مخاط دهان در بیمارانی که هیچ نشانه دیگری از بیماری سیستمیک ندارند مشخص میگردد.RAS تقریبا 20% کل جمعیت را درگیر میسازد.

RAS براساس ویژگی های بالینی طبقه بندی میشود:زخم های مینور،زخم های ماژور و زخم های هرپتی فرم¹.

فاکتور های اصلی که در حال حاضر با RAS ارتباط داده میشوند شامل عوامل ژنیتیکی،نقایص هماتولوژیک، مشکلات ایمونولوژیک و عوامل موضعی مثل تروما و مصرف دخانیات میباشد.شواهد رو به افزایشی در مورد رابطه اختلال ایمنی موضعی با RAS وجود دارد که البته نقص مشخصی شناخته نشده است.طی 30 سال اخیر مطالعات به وجود ارتباطی میان RAS و لنفوتوکسیتی وابسته به آنتی بادی،نقص در سلول های زیرگروه لنفوسیت ها و تغییر نسبت لنفوسیته اشاره کردند.بیشتر تحقیقات جدید روی اختلال عملکرد شبکه سیتوکین مخاطی متمرکز شده اند.آبشار غیرطبیعی سیتوکین مخاطی در بیماران مبتلا به RAS منجر به پاسخ ایمنی تشدید شده و زخم موضعی مخاط میگردد¹.

اینترفرون گاما یکی از سیتوکین هایی است که توسط سلول های Th1 ترشح میشود و جز سیتوکین های پیش التهابی میباشد و در فعال کردن سلولهای تی سایتوتوکسیک نقش دارد².

در مطالعه ای که سال 2018 توسط wei و همکاران انجام شد میزان

INF-gamma بزاق در بیماران مبتلا به لیکن پلان RAS بررسی شد.در این مطالعه که برروی 41 بیمار مبتلا به لیکن پلان و 14 بیمار مبتلا به RAS و 14 فرد سالم انجام شد، میزان سیتوکین های INF-gamma،TNF-alpha،IL-4،IL-5،IL-6،IL-10 به طور معنی داری در افراد مبتلا به RAS نسبت به گروه کنتری بالاتر بود³.

Najafi و همکاران در سال 2017 پلی مرفیسم ژنی اینترفرون گاما را در بیماران مبتلا RAS بررسی کردند.در این مطالعه گزارش شده است که اگرچه اختلاف معنی داری در تکرار الل INF-gamma در UTR5644 وجود ندارد اما SNPs(single nucleotide polymorphism)ژن INF-gamma همراه با استعداد به RAS در افراد میباشد⁴.

Ozyurt و همکاران در سال 2014 سیتوکین های Th1 و Th2 سرم در بیماران مبتلا به افت دهانی را بررسی کردند.در این مطالعه که بر روی 24 بیمار مبتلا به آفت و 20 فرد سالم انجام شد، سطح سرمی اینترفرون گاما در افراد مبتلا به RAS بیشتر از گروه کنترل بود⁵.

Sun و همکاران در سال 2013 پلی مرفیسم ژن فاکتورهای التهابی را در بیماران مبتلا به RAS بررسی کردند. انها بیان نموده اند که پلی مریسم ژنی اینترفرون گاما(rs2430561) از نظر ژنوتیپ و الل با گروه کنترل تفاوت معنی داری ندارد⁶.

با توجه به اینکه طبق بررسی ماتا کنون تنها یک مطالعه به بررسی سطح بزاقی INF-gamma در مبتلایان به RAS پرداخته است³ و از طرفی یکی از علل ایجاد آفت واکنش های  ایمونولوژیک میباشد تصمیم به انجام این مطالعه گرفتیم.

1_میزان اینترفرون گاما بزاق در بین افراد مبتلا به  آفت مینور و افراد سالم متفاوت است.

2_میزان اینترفرون گاما بزاق در بین افراد مبتلا به آفت مینور در دوره عود و بهبودی متفاوت است.

تعیین میزان اینترفرون گاما در بیماران مبتلا به آفت مینور دهانی.

1_مقایسه میزان اینترفرون گاما بزاق در بین افراد مبتلا به آفت  مینور و افراد سالم.

2- مقایسه میزان اینترفرون گاما بزاق در بین افراد مبتلا به آفت مینور در دوره عود و بهبودی.

دندانپزشکان ، دانشگاه علوم پزشکی زاهدان

ائوتاکسین:زیرمجموعه ای از خانواده بزرگ کموکاین ها هستند که در واکنش های آلرژی منجر به فراخوانی ائوزینوفیل ها و بازوفیل ها و Th2 میشود.⁸

اینترفرون گاما:یکی از سایتوکاین هایی است که توسط سلول های Th1 ترشح میشود و جزو سایتوکاین های پیش التهابی میباشد.²

مورد_شاهدی

جامعه مورد بررسی شامل بیماران مراجعه کننده به دانشکده دندانپزشکی که دارای آفت مینور دهانی هستند و گروه کنترل شامل افرادی فاقد هرگونه زخم دهانی و بیماری سیستمیک میباشند.

الف)معیار های ورود به مطالعه:

1-بیماران دارای آفت مینور دهانی(در دوره عود و بیماری)

2-گروه کنترل نیز نباید سابقه ای از هرگونه زخم دهانی و یا بیماری سیستمیک را ذکر کنند

3-داشتن سن 20-40 سال

4-عدم مصرف دخانیات

5-عدم وجود هر نوع ضایعه دهانی و دندانی بجز آفت مینور

3-عدم وجود بیماری های سیستمیک و یا مصرف دارو

ب)معیار های خروج از مطالعه:

1-عدم مراجعه بیمار مبتلا به آفت در دوره بهبودی

با براورد واریانس ایتنرفرون گاما از روی IQR با توجه به مطالعات قبلی و مقدار واریانس در افراد مبتلا به آفت و افراد سالم به ترتیب 451 و 121 به دست آمده با درنظر گرفتن α=0.05  و β=0.2 و d=14 تعداد نمونه لازم در هر گروه23 نفر براورد شد³:

n = (S₁² + S₂²) × ( Z₁  ̱ _α/2   + Z₁  ̱_β )/ d² =7.8×572/196=23

نمونه گیری به روش آسان در دسترس پس از تصویب طرح و اجازه کمیته اخلاق انجام خواهد شد وکلیه افراد واجد شرایط  تا رسیدن به حجم نمونه مورد نظر وارد مطالعه میشوند.

با استفاده از فرم اطلاعاتی میزان اینترفرون گاما بزاق هر فرد در هر گروه ثبت خواهد شد.

(ضمیمه شماره1)

در این مطالعه مورد شاهدی از افراد مراجعه کننده به کلینیک دندانپزشکی زاهدان در سال 1397،بیمارانی که دارای آفت دهانی مینور(در دوره ی فعال بیماری و در دوره بهبودی) باشند و معیارهای ورود به مطالعه را داشته باشند، قبل از انجام هرگونه کار دندانپزشکی و پس از اخذ رضایت آگاهانه، نمونه بزاق غیرتحریکی گرفته خواهد شد. تشخیص بالینی آفت برعهده متخصص بیماریهای دهان، کسب رضایت آگاهانه و جمع آوری نمونه بر عهده دانشجو می باشد. گروه کنترل نیز از نظر سن و جنس با گروه مورد هماهنگ میشوند. افراد بایستی 90 دقیقه قبل از نمونه گیری از خوردن و آشامیدن و مسواک زدن خودداری کنند. تمام نمونه ها 9تا11 صبح جمع آوری خواهند شد.بزاق غیرتحریکی تمام افراد گروه مورد و شاهد به روش Spitting جمع آوری خواهد شد.

بعداز جمع آوری بزاق در لوله ازمایش ،درب آن با پارافیلم بسته و کدگذاری به صورت blind انجام خواهد شد و سپس به آزمایشگاه بیوشیمی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان منتقل خواهد شد.

نمونه ها در دمای 20- درجه سانتی گراد تا زمان اجرای آزمایش نگهداری میشوند.برای اندازه گیری میزان مارکر های بزاقی ابتدا نمونه  های فریز شده به مدت نیم ساعت در دمای آزمایشگاه قرار میگیرند. سپس عمل سانتریفیوژ با دور 3500^rpm  به مدت 30 دقیقه بر روی آنها انجام و مایع رویی و شفاف حاصل به وسیله ی سمپلر های حجمی مناسب به میکروتیوب ها منتقل خواهند شد. مشخصات هر نمونه بر روی میکروتیوب درج میگردد سپس بر اساس راهنمای کیت های خریداری شده به روش ELISA آزمایشات بیوشیمیایی جهت تعیین میزان مارکر صورت خواهد گرفت.

تمامی اطلاعات به دست آمده با استفاده از نرم افزار spss22 و آزمون آماری ANOVA  مستقل یا در صورت عدم توزیع نرمال داده ها با آزمون ناپارامتری کراس کالوالیس تجزیه تحلیل خواهد شد.

مقایسه میزان اینترفرون گاما بزاق در افراد مبتلا به آفت مینور و افراد سالم.

براساس راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش های علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی در جمهوری اسلامی ایران در این مطالعه کد های 1،2،3،10،11،12،13،14،15،16،17،18،20،24،25،26،27،28،29،30،31 رعایت خواهد شد.

همچنین بر اساس راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران،کدهای 1،2،3،4،5،6،7،8،9،10،11،12 رعایت خواهد شد.

عدم همکاری بیماران که بایستی تا رسیدن به حجم مورد نظر،بیمار جدید پذیرش میشود.

افت مینور _اینترفرون گاما_ائوتاکسین 1ـ بزاق

Minor aphthous-interferon gamma-eotaxin1-saliva

1_Glick M.burckets oral medicine. 12^th . Philadelphia:WB sanders;2015:160_161

2_Albanidou_Farmaki E,Markopoulos A, Kalogerakov F,Antoniados D.Detection enumeration and characterization of T helper cells secreting type 1 and type 2 cytokines in patients with recurrent Aphthous stomatitis.Tohoku t.Etp.med 2007;212:101_105

3_Wei W,Sun Q, Deng Y,et al.Mixed and inhomogeneus eppression profile of Th1/Th2 related cytokines detected by cytometric bead array in the saliva of patients with oral lichen planus.oral surg oral med oral pathol oral radiol.2018;68:2212_4403

4_Najafi sh, yousefi H,Mohammadzadeh M,et al.interleukin_2,interferon_gamma Gene polymorphism in recurrent Aphthous stomatitis . J prague medical Report 2017;118:81_86

5_Ozyurt K,celik A,sayarhoglu M,et al.serum Th1.Th2 and Th17 cytokine profiles and alpha enolase levels in recurrent aphthous stomatitis Joral pathol med 2014;43:691_695

6_Sun M,Fu sh,Dong G,et al.Inflammatory Factors gene polymorphism inrecurrent oral ulceration. J oral pathol med 2013;42:528_534

این مطالعه به بررسی سطح بزاقی اینترفرون گاما در بیماران مبتلا به افت مینور دهانی میپردازد.

ندارد

در این مطالعه با بررسی سطح بزاقی اینترفرون گاما نقش این مارکر ها در تکامل و پیشرفت آفت مینور مشخص میگردد.

ندارد

هزینه به عهده مجری یا مجریان طرح خواهد بود و بیمار هزینه ای را پرداخت نخواهد کرد.

ندارد.

اطلاعات شخصی مربوط به هر یک از شرکت کنندگان به صورت محرمانه نگه داری خواهد شد.

مجری موظف است پاسخگوی کلیه پرسش ها باشد. 

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان  که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.

ضمیمه 1

بررسی سطح بزاقی اینترفرون گاما در بیماران مبتلا به افت راجعه دهانی.

کد:...............

سن:....... سال     

جنس:      مرد □              زن □            

آفت مینور دهان:      دارد □               ندارد□

میزان اینترفرون گاما:...........