بررسی اثر ضدباکتریایی عصاره الکلی و آبی ریشه شلغم بر برخی از باکتری های بیماری زا

آنتی بیوتیک ها به عنوان یکی از ارزشمند ترین دسته های دارویی امروزه در خطر کاهش میزان اثرگذاری و بازدهی در اثر افزایش مقاومت های میکروبی می باشند. طبق تعریف سازمان بهداشت جهانی (WHO) مصرف منطقی دارو، استفاده از داروهایی با اثر درمانی مناسب می باشد که بتواند نیازهای بالینی بیماران را در محدوده جغرافیایی خاص با کمترین عوارض و کمترین هزینه برطرف نماید، ضمن اینکه توجه به دوز و مدت زمان مصرف دارو از اهمیت بالایی برخوردار می باشد.از موثرترین راه ها جهت بهبود کیفیت تجویز آنتی بیوتیکها می باشد که به طور غیر مستقیم کاهش میزان مقاومت میکروبی را در پی خواهد داشت.(1-3)در واقع مصرف بی رویه ، نامناسب یا بیش از حد آنتی بیوتیکها سبب گسترش مقاومت میکروبی می شود ؛میکروبها با ایجاد ژن مقاوم در برابر آنتی بیوتیکها ،این مقاومت را از نسلی به نسل دیگر منتقل می کنند و حتی این ژن مقاومت می تواند از یک گونه میکروبی به گونه دیگر انتقال یابد.اینجاست که با وجود تجویز آنتی بیوتیک در مقادیر بالا نه تنها  نتیجه ای حاصل نمی شود بلکه عوارض جانبی بیشتری به جای گذاشته و عفونت پایدار می ماند .اهمیت مساله مقاومت میکروبی به قدری است که شعار روز جهانی بهداشت در سال 2013 'مقاومت به داروهای ضدمیکروبی ،یک تهدید جهانی ' انتخاب شده است.(4)

در یک بررسی انجام شده در آمریکا نشان داده شده است که علت بیش از پنجاه درصد موارد پذیرش بیماران با نارسایی حاد کبد، مصرف داروها از جمله آنتی بیوتیکها می باشد.(5)

در قرن اخیر عفونتهای باکتریایی و مقاومت بدن  در مقابل آنتی بیوتیکها، تهدیدی جدی برای سلامت انسان ها محسوب می شود . لذا دستیابی به ترکیبات جدید ضدمیکروبی و طبیعی با کمترین عارضه جانبی ، موضوعی است که همواره ذهن محققان را به خود مشغول کرده است . از انجا که گیاهان برای حفاظت از خود در برابر عوامل بیماری زا ، ناگزیر از ایجاد مکانیسم های دفاعی خاص و سنتز ترکیبات ضد میکروبی هستند، همواره یک منبع بالقوه و ارزشمند برای تولید ترکیبات ضد میکروبی خواهند بود.(6) به همین دلیل تمایل به استفاده از داروها و ترکیبات گیاهی در سالهای اخیر افزایش یافته است .استفاده از گیاهان دارویی در درمان بیماری ها، قرنها سابقه دارد .امروزه با وجود سنتتیک بودن بخش عظیمی از داروهای مصرفی ، تخمین زده می شود که دست کم یک سوم از کلیه فراورده های دارویی ، از گیاه به دست آمده اند یا پس از استخراج از گیاه تغییر شکل یافته اند. (7) گیاهان دارویی در طبیعت یکی از نعمتهای بزرگ الهی می باشد.آثار به جای مانده از تمدنهای بشری ،حکایت از قدمت شصت هزار ساله طب گیاهی دارد.(8)گیاهان دارویی به علت سهولت در دسترسی ، کاهش عوارض جانبی و صرفه اقتصادی به عنوان جایگزینهای شایسته داروهای صناعی ،همواره مورد توجه بوده و از چند دهه اخیر به طور خاص مورد توجه محققین قرار گرفته است .مواد بیولوژیک با منشا گیاهی شاخه ای از فارماکوتراپی مدرن بیماری ها را تشکیل می دهد .اگر چه عوامل دارویی متنوعی برای درمان انواع بیماریها وجود دارد ،لکن اغلب بیماران قادر به تحمل اثرات جانبی داروهای شیمیایی نیستند و از سوی ذیگر اکثر گیاهان اثرات جانبی بسیار اندکی در روی بیماران به جای می گذارند .(9)از آن جایی که کشور ما دارای تنوع اقلیمی گسترده ای است ،گونه های فراوان گیاهی در طبیعت اطراف ما رویش دارند.(10)استفاده از گیاهان دارویی جهت درمان طیف وسیعی از بیماری ها، به سرعت در حال توسعه بوده و توجه ویژه ای به اثرات محافظتی آنتی اکسیدانهای با منشا طبیعی در برابر بیماری ها شده است.(11)

گیاهان خانواده  Brassicaceaبه طور گسترده ای در سراسر جهان کشت داده شده و مورداستفاده قرار می گیرند. شلغم گیاهی از خانواده شبو بوده و نوع گیاه به صورت بوته است. شلغم گیاهی با برگهای ناصاف و بریدگی های زیادی به رنگ سبز و سفید است. ریشه آن غده ای و به شکل های گرد یا دراز به رنگ سفید با لکه های بنفش است. شلغم در هوای سرد بسیار خوب رشد میکند و شاید علت آن باشد  که برای درمان بیماری هایی که در فصل سرما زیاد است و بیماریهای تنفسی بکار میرود. قسمتهای قابل استفاده آن شامل: غده (ریشه)، برگ و دانه می باشد. ویتامین ها، املاح (آهن)، روغن فرار، راپین و گلوکوزینولات از مهمترین مواد موثر دارویی شلغم هستند .(12)

مصرف گیاهان جنس شلغم با سلامت انسان در ارتباط بوده و این خصوصیت اغلب به گیاشیمی(Phytochemistry)این گیاه به خصوص گلوکوزینولات ها(glucosinolates)و ترکیبات فنولیک ( phenolic compounds) آن نسبت داده می شود .(13)مصرف قسمتهای مختلف این گیاه (ریشه ،بذر،برگ ،گل)در طب سنتی برای درمان امراض مختلف از جمله دیابت ،چاقی و چربی خون توصیه شده است.(14)

شلغم دارای ترکیبات بیولوژیک فعالی نظیر: 1-فلاوونوئیدها شامل ایزو رامنتین، کیمپفرول و گلوکوزیدهای کوئرستین   2-مشتقات فنیل پروپانوئید (15)-3آلکالوئیدهای ایندول- 4- گلوکوزیدهای استرول  میباشد(16)

فلاوونوئید ها دارای اثرات بسیار مفیدی بخصوص در بیماری دیابت هستند.(17)

مروری بر مطالعات :                          

در مطالعه  انجام شده وفایی نژاد و همکاران در سال 1394 با موضوع فعالیت کاهنده چربی خون عصاره آبی ریشه شلغم در موشهای صحرایی هایپرلیپیدمی که مطالعه ای تجربی بود 40 سر موش صحرایی نژاد ویستار به پنج گروه مساوی کنترل سالم، هایپرلیپیدمی (دریافت روزانه نرمال سالین)،آتورواستاتین (دریافت روزانه 10میلی گرم بر کیلوگرم ) و دریافت کننده عصاره آبی شلغم (روزانه 200و400میلی گرم میلی گرم بر کیلوگرم )تقسیم و به مدت 10روز تیمار شدند .در روز یازدهم پس از 18 ساعت ناشتایی تمامی گروه ها (به جز گروه کنترل سالم) مورد تزریق درون صفاقی ترایتون –WR1339      (300mg/kg) قرار گرفتند 24 ساعت پس از دریافت ترایتون ،نمونه های خون جمع آوری و مقادیر چربی های خون اندازه گیری شد.و یافته ها به این صورت است که عصاره آبی شلغم در دوز mg/kg 200 افزایش کلسترول تام را به خوبی مهار کرد هر دو دوز عصاره ریشه شلغم مقادیر تری گلیسیرید و LDL کلسترول را در مقایسه با گروه هایپرلیپیدمی به طور معنی داری کاهش داد ،اما در مقایسه با گروه کنترل سالم به طور معنی داری بالا بود p<0.05  

و نتایج این تحقیق نشان داد که مصرف شلغم میتواند به عنوان ماده غذایی با خواص کاهنده چربی های خون برای مبتلایان به دیس لیپیدمی ،بیماری های قلب و عروق و دیابت مورد توصیه قرار می گیرد. . (18)

در سال 1392 در مطالعه ای که علیزاده و همکاران بر عصاره الکلی شلغم انجام دادند با موضوع اثر ضدباکتریایی عصاره الکلی گیاه شلغم برروی تعدادی از باکتریهای بیماریزا پس از تهیه عصاره الکی گیاه ،تاثیر غلظتهای mg/ml 50 و mg/ml100   و mg/ml200و mg/ml400 از این عصاره به روش انتشار از چاهک و انتشار از دیسک  بر روی باکتری های استافیلوکوکوس اورئوس ،باسیلوس سرئوس ،اشرشیا کلی و سودوموناس آئروژنوزا مورد بررسی قرار گرفت .آزمایش تعیین حداقل غلظت مهارکنندگی رشد باکتریها و حداقل غلظت کشندگی باکتریها( MIC/MBC)به روش رقت در لوله انجام گرفت. و یافته ها نشان دادند که عصاره الکلی گیاه شلغم از رشد باکتری های فوق جلوگیری میکند.حداقل غلظت مهارکنندگی از رشد باکتریها از        mg/ml100تا  mg/ml 12.5 متغیر است و به این نتیجه رسیدند که عصاره الکلی شلغم در شرایط آزمایشگاهی بر رشد باکتریهای بیماری زا اثرات مهارکنندگی قابل ملاحظه ای دارد. (19)

در مطالعه ای که درپاییز 96 توسط بهنام و همکاران با موضوع  تعیین ترکیبات شیمیایی و خاصیت ضد میکروبی اسانس ریشه شلغم شیرازی در شرایط ازمایشگاهی انجام شد . اسانس ریشه شلغم شیرازی به روش تقطیر با آب به کمک دستگاه کلونجر استخراج و انالیز اسانس توسط کروماتوگرافی گازی ،جرمی ،منجر به شناسایی16 ترکیب شد .اصلی ترین ترکیبات شامل متیل کاویکول با بالاترین درصد (32.31درصد) ،ترنس آنتول (19.58درصد) ،لینالول (15.46 درصد) ،الفا پینین (9.28 درصد)،آلفا توجون (6.59درصد) ،بتا پنتین (3.34درصد) بودند.به منظور ارزیابی خاصیت ضد میکروبی اسانس از دو روش میکرودایلوشن و انتشار دیسک استفاده شد.یافته های تحقیق نشان داد که اسانس گیاه شلغم شیرازی دارای اثر قابل توجه ی در کاهش رشد  باکتری های مورد ازمون بوده است.اگرچه اسانس حاصل حداقل غلظت بازدارندگی کمی (2.5میلی گرم بر میلی لیتر) روی باکتری اشرشیاکلی داشت اما درمقابل باکتری استافیلوکوکوس اورئوس بالاترین تاثیر (حداقل غلظت بازدارندگی 0.625میلی گرم بر میلی لیتر) را از خود نشان داد. نتایج ارائه شده دراین تحقیق، نشان دهنده خاصیت ضدباکتریای اسانس ریشه شلغم شیرازی می باشد ، بنابراین می توان از اسانس ریشه این گیاه به عنوان یک منبع بالقوه از یک ماده ضدمیکروبی فعال برای صنعت غذا استفاده نمود.نشان داده شد که اسانس ریشه گیاه شلغم شیرازی میتواند به عنوان یک نگهدارنده  و بازدارنده گیاهی و طبیعی و جایگزین نگهدارنده شیمیایی در صنعت غذا و دارو استفاده گردد.(12)

در مطالعه مهاجری و همکاران در سال 90با موضوع اثرات آنتی اکسیدانی محافظتی عصاره الکلی ریشه گیاه شلغم در برابر سمیت کبدی سیس پلاتین در موش صحرایی انجام شد 40 سر موش صحرایی نر ویستار به طور تصادفی در چهار گروه مساوی تقسیم گردید گروه یک به عنوان شاهد انتخاب شد. به گروه های 2و4TREE(200mg/kg)به مدت 15 روز متمادی گاواژ گردید.گروه های 3و4تک دوز سیسپلاتینmg/kg 7.5را در دهمین روز آزمایش به روش داخل صفاقی  دریافت کردند.در پایان،سطوح سرمی آنزیم های آسپارتات و آلانین آمینوترانسفراز و لاکتات دهیدروژناز و بیلی روبین تام،آلبومین وپروتئین تام اندازه گیری شد.میزان مالون دی آلدئید،گلوتاتیون احیاء و فعالیت آنزیم های سوپراکسید دسموتاز ،کاتالاز؛گلوتاتیون پراکسیداز و گلوتاتیون ردوکتاز نیز در هموژنات بافت کبد اندازه گیری شد. در نهایت،یافته های بیوشیمیایی با نتایج هیستوپاتولوژی تطبیق داده شد.و نتایج به این شکل بود که در گروه 4TREEبه طور معنی داری(p=0/0001.) میزان افزایش یافته آنزیم های شاخص آسیب کبد و بیلی روبین تام را کاهش و سطوح کاهش یافته آلبومین و پروتئین تام سرم را به طور معنی داری (به ترتیبp=0/001وp=0/032)افزایش داد. در این گروه،TREEبه طور معنی داری(P=0/0001)میزان پراکسیداسیون لیپیدی را کاهش و سطوح آنتی اکسیدان های کبد را افزایش داد.از لحاظ هیستوپاتولوژی نیز تغییرات بافتی همراستا با یافته ها بیوشیمیایی بودند.

بنابراین  TREEباخواص آنتی اکسیدانی خود،کبد موش صحرایی را در برابر سمیت سیسپلاتین محافظت میکند. (13)

با توجه به نقش مهم این گیاه در رژیم غذایی مردم در کشورهای مختلف دنیا ،از جمله ایران وعدم انجام تحقیق بر روی نمونه های بومی این گیاه و استفاده در هنگام سرماخوردگی از ریشه این گیاه این مطالعه با فرض اثر آنتی باکتریال و با هدف بررسی اثر آنتی بیوتیکی ریشه شلغم بر برخی از باکتری های بیماری زا طراحی شده است.

  میانگیین قطر هاله عدم رشد عصاره الکلی و آبی ریشه شلغم بر روی باکتریهای استافیلوکوکوس اورئوس ،اشرشیا کلی ،سودوموناس آئروژینوزاو باسیلوس سرئوس چقدر است؟

حداقل غلظت مهارکنندگی عصاره الکلی و آبی ریشه شلغم بر علیه باکتریهای استافیلوکوکوس اورئوس ،اشرشیا کلی ،سودوموناس آئروژینوزا و باسیلوس سرئوس چقدر است؟

حداقل غلظت کشندگی عصاره الکلی و آّبی ریشه شلغم بر علیه باکتریهای استافیلوکوکوس اورئوس ،اشرشیا کلی ،سودوموناس آئروژینوزا و باسیلوس سرئوس چقدر است؟

تعیین اثر ضدباکتریایی عصاره الکلی و آبی شلغم بر برخی از باکتری های بیماری زا

تعیین میانگیین قطر هاله عدم رشد عصارم الکلی و آبی ریشه شلغم بر روی باکتریهای استافیلوکوکوس اورئوس ،اشرشیا کلی ،سودوموناس آئروژینوزاو باسیلوس سرئوس

تعیین حداقل غلظت مهارکنندگی عصاره الکلی و آبی ریشه شلغم بر روی باکتریهای استافیلوکوکوس اورئوس ،اشرشیا کلی ،سودوموناس آئروژینوزاو باسیلوس سرئوس

تعیین حداقل غلظت کشندگی عصاره الکلی و آبی ریشه شلغم بر روی باکتریهای استافیلوکوکوس اورئوس ،اشرشیا کلی ،سودوموناس آئروژینوزا و باسیلوس سرئوس

دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی زاهدان

MIC: حداقل غلظتی از یک عصاره است که میتواند از رشد باکتری در شرایط آزمایشگاهی جلوگیری کند.

MBC: کمترین غلظتی از عصاره که می تواند سبب نابودی بیشترین تعداد باکتری (9/99%) شود.

توصیفی

برخی از میکروب های بیماریزا شامل استافیلوکوکوس اورئوس ،اشرشیا کلی ،سودوموناس آئروژینوزا ، باسیلوس سرئوس

حجم نمونه48 نمونه از غلظت های  عصاره الکلی و آبی ریشه شلغم که جهت ازمون های مورد نیاز برای چهار باکتری استافیلوکوکوس اورئوس ،اشرشیا کلی ،سودوموناس آئروژینوزا ، باسیلوس سرئوس مورد استفاده قرار خواهند گرفت

نمونه های ریشه شلغم تهیه شده از نمونه های در دسترس محلی ( منطقه خاش)

نتایج آزمایشگاهی

مواد اولیه و تجهیزات مورد نیاز

دستگاه-ها، مواد و وسایل مورد استفاده:

در این پژوهش علاوه بر لوازم عمومی آزمایشگاهی مانند بالن-های 1 لیتری و 2 لیتری، بالن ژوژه در حجم-های مختلف، بشر در حجم-های مختلف، پتری دیش، پی‌پت-های مدرج، لوله‌های آزمایش در اندازه‌های متفاوت، پوآر، ویال برای نگه‌داری اسانس-ها و عصاره-ها، پلیت 96خانه، سوآپ، دیسک میکروبی و غیره. انواعی از دستگاه‌ها نیز استفاده شده است.

میکروارگانیسم‌ها :

                                       جدول1: میکروارگانیسم-های مورد استفاده

تهیه ریشه شلغم: 

ریشه گیاه شلغم از نمونه های در دسترس محلی از شهرستان خاش خریداری شده و سپس توسط دانشکده کشاورزی دانشگاه سیستان و بلوچستان مشخصات آن شامل گونه و واریته آن تعیین خواهد شد.

استخراج عصاره متانولی وآبی :

ریشه گیاه شلغم پس از خرید از بازار محلی  جهت تعیین واریته به دانشگاه سیستان و بلوچستان زاهدان ، دانشکده کشاورزی منتقل خواهد شد. ریشه از قسمت های مختلف گیاه  جدا شده وپس از شستشو بصورت برش های نازک درامده و  در انکوباتور 60 درجه خشک میشود. سپس نمونه ها آسیاب می شود و50گرم از پودر ریشه گیاه مورد بررسی به صورت جداگانه ، در 500 میلی لیتر متانول  80%  و500 میلی لیتر آب به مدّت 48 ساعت روی دستگاه شیکر ارلن  در دمای 40-37 درجه سانتیگراد با دور 200 دور در دقیقه به روش ماسراسیون، عصاره گیری خواهد شد. دلیل استفاده از خیساندن، عدم آسیب مواد موجود در عصاره تهیه شده از گیاهان است. در طول این فرآیند سعی میشود تا با همزدن، عصاره یکنواختی حاصل شود. عصاره های حاصل با کاغذ واتمن 4/0 میکرونی صاف میگردد. عصاره متانولی  تحت شرایط خلاء در دمای 70 درجه سانتیگراد با دور 8 دور در دقیقه توسط دستگاه روتاری تغلیظ و در پتری دیشهای استریل ریخته و در دمای 60 درجه سانتیگراد آون خشک میگردد. 

احیاء باکتری :

قبل از هر آزمون میکروبی، زیر هود لامینارفلو قسمتهای سطحی هود با پنبه آغشته به الکل 70% استریل و به مدت 20 دقیقه تحت اشعه UV قرار میگیرد. آمپول لیوفیلیزه حاوی میکروارگانیسمهای مورد مطالعه  تهیه شده از مرکز ملی پژوهش های علمی وصنعتی  در شرایط استریل پوشش آلومینیومی برداشته شده  و با حدود 2-1 میلی لیتر محیط کشت نوترینت براث ( طبق دستور شرکت سازنده ) به صورت سوسپانسیون درمی آید. چند قطره از این سوسپانسیون توسط سرنگ استریل به محیط کشت جامد TSIشیب دار منتقل تا بعد از گذشت مدت زمان  24-18 ساعت در گرمخانه  37 درجه، از کلنی های تشکیل شده به عنوان کشت ذخیره  استفاده گردد.

تهیه استاندارد محلول نیم مکفارلند :

9 میلی لیتر از محلول سرم فیزیولوژی یا محلول نمکی( NaCl 8.5 g/ l)  استریل تهیه شده را به لوله آزمایش منتقل میکنیم وبه وسیله لوپ از کلنی هرکدام از باکتریها برداشته وبا شیکر ارلن کاملا مخلوط کرده به طوری که سوسپانسیون کاملا یکنواختی از باکتری مورد آزمایش به دست می آید. سپس جذب نوری این سوسپانسیون در طول موج 625 نانومتر توسط دستگاه اسپکتروفتومتر، در مقابل شاهد آن  خوانده می شود تا کدورتی معادل استاندارد 5/0 مک فارلند 10⁸ ×5/1 داشته باشد.

آزمونهای میکروبی :

حساسیت  این میکروارگانیسم به عصاره ها با استفاده از روش چاهک بررسی می گردد. جهت انجام این آزمایش، مقدار مشخصی از عصاره های خشک گیاهی در حلال DMSO استریل شده، حل و سپس غلظتهای 500، 250 و 125 و5/62و25/31 میلی گرم بر میلی لیتر تهیه می شود. 100 میکرولیتر سوسپانسیون باکتریایی روی سطح محیط کشت مولر هینتون آگار چکانده میشود و با یک سوآپ استریل روی محیط گسترش می یابد. چاهک  به قطر 5 میلی متر توسط پیپت پاستوراستریل روی محیط کشت در زیر دستگاه لامینارفلو ودر مرکز  پلیت ایجاد می شود و 20 میکرولیتر از محلول عصاره ها با غلظتهای مشخص درون چاهک ها  چکانده میشود. پلیتها به مدت 24 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه میشوند . از آن جایی که عصاره ها دارای رنگ هستند، با توجه به انتشار رنگ در محیط میتوانیم انتشار عصاره را نیز ردیابی کنیم. اندازه گیری قطر هاله عدم رشد در شرایط آسپتیک با استفاده از میکرومتر ثبت میشود.

                                 شکل 1: اندازه گیری قطر هاله عدم رشد با خط کش میلیمتری

برای حصول اطمینان، این آزمایش برای هر سویه باکتری سه بار تکرار میگردد و میانگین قطر هاله عدم رشد به عنوان قطر نهایی ثبت میشود. قطر هاله عدم رشد بر اساس نتایج نوشته می شود.

تعیین حداقل غلظت بازدارندگی و حداقل غلظت کشندگی :

جهت انجام آزمایشهای کمی برای حداقل غلظت بازدارندگی از رشد میکروارگانیسم و حداقل غلظت کشندگی میکروارگانیسم  از روش رقت لوله ای استفاده میشود.

MIC: غلظتی از یک عصاره است که میتواند از رشد باکتری در شرایط آزمایشگاهی جلوگیری کند.

MBC: کمترین غلظتی از عصاره که می تواند سبب نابودی بیشترین تعداد باکتری (9/99%) شود.

تعیین MIC عصاره :

برای تعیین MIC با روش رقت لوله ای از میکروپلیت 96 خانه سلولی استفاده  میشود.  یک خانه  به عنوان کنترل مثبت (حاوی سوسپانسیون میکروبی و DMSO فاقد عصاره)، یک خانه  به عنوان کنترل مثبت مثبت (حاوی سوسپانسیون میکروبی فاقد عصاره) و یک لوله به عنوان کنترل منفی (دارای محیط کشت و عصاره بدون سوسپانسیون میکروبی) در نظر گرفته میشود.

به هر کدام از خانه ها  100 ماکرولیتر محیط کشت نوترینت  براث اضافه و به خانه  اول 100 ماکرولیترعصاره استوک با غلظت 500 میلی گرم بر میلی لیتر اضافه میکنیم. پس از مخلوط کردن، 100 ماکرولیتر از خانه اول به خانه  دوم و سپس 100ماکرولیتراز خانه دوم به خانه سوم، به همین ترتیب تا آخر انجام میشود و سرانجام 100 ماکرولیتر از آن به بیرون ریخته میشود. به تمامی خانه ها50 میکرولیتر از هر سوسپانسیون میکروبی اضافه میگردد . به این ترتیب غلظت عصاره درخانه ها500، 250، 125، 5/62، 25/31، میلی گرم بر میلی لیتر خواهد بود. تمامی لوله ها به مدّت 24 ساعت در انکوباتور 37 درجه سانتیگراد قرار میگیرند. پس از گذشت مدت زمان لازم پلیتها از گرمخانه خارج و جهت تعیین MIC مورد بررسی قرار میگیرند.

سپس توسط دستگاه الایزا ریدر میزان غلظت عصاره ها بررسی خواهد شد.کمترین میزان عدد خوانده شده توسط دستگاه به عنوان MICگزارش میگردد.

تعیین MBC عصاره :

به منظور تعیین MBC عصاره از هر کدام ازغلظت های تهیه شده5 میکرولیتر بر روی محیط کشت مولر هینتون آگار انتقال داده میشود. سپس پلیتها به مدت 24 ساعت در گرمخانه 37 درجه قرار داده میشوند. پس از گذشت زمان لازم پلیتها از گرمخانه خارج و نتایج آن بررسی میشود. غلظتی که در آن رشدی دیده نشود، به عنوان MBC عصاره برای میکروب مورد نظر گرفته می شود .

از آمار توصیفی شامل میانگین و انحراف معیار جهت توصیف داده ها استفاده خواهد شد

 بر اساس  دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهشهای علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی  در جمهوری اسلامی ایران

و بندهای 1-  9- 10- 11- -25 – 28- 29 – 30 –و 31

1- هدف اصلی هر پژوهش‌باید ارتقای سلامت انسان‌ها توأم با رعایت کرامت و حقوق ایشان باشد.

9-در پژوهش‌های پزشکی که ممکن است به محیط زیست آسیب برسانند، باید احتیاط‌های لازم در جهت حفظ و نگهداری و عدم آسیب رسانی به محیط ریست انجام گیرد.

10- هر پژوهشی باید بر اساس و منطبق بر یک طرح‌نامه (پروپوزال) به انجام برسد. در کارآزمایی‌های بالینی باید علاوه بر طرح نامه، دستورالعمل (پروتکل) نیز تهیه و ارائه شود. طرح‌نامه و دستورالعمل باید شامل تمامی اجزای ضروری باشد. از جمله بخش ملاحظات اخلاقی، اطلاعات مربوط به بودجه، حمایت کننده‌ها، وابستگی‌های سازمانی، موارد تعارض منافع بالقوه‌ی دیگر، مشوق‌های شرکت کنندگان، پیش بینی درمان و یا جبران خسارت افراد آسیب دیده در پژوهش .در مواردی که لازم است رضایت‌نامه‌ی آگاهانه به‌صورت کتبی اخذ شود، فرم رضایت‌نامه باید تدوین و به طرح‌نامه پیوست شده باشد. پیش از تصویب یا تأیید طرح‌نامه از سوی کمیته‌ی مستقل اخلاق در پژوهش، نباید اجرای پژوهش شروع شود.

11- کمیته‌ی اخلاق در پژوهش علاوه بر بررسی و تصویب طرح‌نامه و دستورالعمل، این حق را دارد که طرح‌‌ها را در حین و بعد از اجرا را از نظر رعایت ملاحظات اخلاقی مورد پایش قرار دهد. اطلاعات و مدارکی که برای پایش از سوی کمیته‌ی اخلاق درخواست می‌شود، باید از سوی پژوهشگران در اختیار این کمیته گذاشته شود.    

30 -گزارش‌ها و مقالات حاصل از پژوهش‌هایی که مفاد این راهنما را نقض کرده‌اند، نباید برای انتشار پذیرفته شوند.

31-روش پژوهش نباید با ارزش های اجتماعی، فرهنگی و دینی  جامعه در تناقض باشد.

محدودیت ندارد

عصاره ریشه شلغم - حداقل غلظت مهارکنندگی-حداقل غلظت کشندگی -خاصیت ضد باکتریایی

1-Boucher HW, Talbot GH, Bradley JS, et al. Bad bugs, no drugs: no eskape! An update from

the infectious diseases society of america. Clin   Infect Dis. 2009; 48: 1-12.

2-World Health Organization. Promotin g rational use of medicines: core components. Geneva: WHO; 2002.

3-Kolar M, Urbanek K, Latal T. Antibiotic selective pressure and development of bacterial

resistance. Int J Antimicrob Agents. 2001; 17: 357-63.

4- ( Center   for disease control and prevention office of  infections  disease antibiotic resistance threats in the United states ,2013.Apr ,2013 .    Available at :http ://www.cdc.gov/drugresistance/ threat report -2013 .accessed  January  28 ,2015

5-Andrade RJ, Lucena MI, Kaplowitz N, Garcia Munoz B, Borraz Y, Pachkoria K, et al. Outcome of acute

idiosyncratic drug-induced liver injury: long-term follow-up

in a hepatotoxicity registry. Hepatology 2006; 44(6): 1581-8.

      برگرفته از مقاله عوارض کبدی انتی بیوتیکها )

6-Mazandarani M, Ghaemi E, Ghaffari F. Antibacterial survey of different extracts of Peganum harmala L. different parts in North east of Golestan province  (Inche Borun). Journal on Plant Science Researches, 2009; 3(15): 27-38 [Persian]

7-جدیدی ع ،گلی طالب  م،صدرکیا غ . مقایسه اثرضدمیکروبی اسپند و پراکسیدهیدروژن بر میکروب بیمارستانی. فصلنامه علمی-پژوهشی طب مکمل دوره 7،شماره2،تابستان96 . 1905-1897

8-پایگاه جامع علوم و فنون گیاهان دارویی ایران ؛  قابل دسترسی در سایت               www.scitech.iran.com

یا مصفا ن. نگرشی بر روشهای تجربی در بررسی اثرگیاهان دارویی از پژوهش تا رویکرد.مجله پژوهش در پزشکی دوره 35 شماره 3 پاییز 1390،صفحات 185-182

9-مهاجری د ،موسوی غ،محمدی پ.مطالعه هیستوپاتولوژی تاثیر عصاره الکلی ریشه شلغم بر اسیب ایسکمی باز خونرسانی کلیه در موش صحرایی. مجله دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد تبریز،دوره6،شماره2،تابستان 1391 .9451-9441

10-عباسی قراچه م،پهلوان م.مطالعه مردم شناختی کاربرد گیاهان دارویی در طب سنتی مطالعه موردی در شهرستان محلات.مجله طب سنتی اسلام و ایران،سال هشتم ،شماره اول،بهار سال1396.   296-283

11-Balz F,Jane V,antioxidant activity of tea polyphenols in vivo :evidence from animal studies .The journal of nutrition 133(10),3274S-3284S,2003

یا مطالعه هیستوپاتولوژی تاثیر عصاره الکلی ریشه شلغم بر اسیب ایسکمی باز خونرسانی کلیه در موش صحرایی)

12-بهنام خ ،محمدی ثانی ع،اسماعیل پور م.تعیین ترکیبات شیمیایی و خاصیت ضد میکروبی اسانس ریشه شلغم شیرازی در شرایط ازمایشگاهی.مجله میکروب شناسی مواد غذایی،سال سوم،شماره سوم،پاییز96.  49-31

13-مهاجری د،دوستار ی،موسوی غ.اثرات انتی اکسیدانی محافظتی عصاره الکلی ریشه گیاه شلغم در برابر سمیت کبدی سیس پلاتین در موش صحرایی .مجله تحقیقات پزشکی زاهدان،سال90،دوره 13،شماره .9     . 15-8

14--Shukia R shama SB puri D parbhu KM murthy PS. Medicinal plants for treatment of diabetes mellitus .India J cli Biochem. 2000 15 suppl 1 :169-177

15-HPLC-DAD/MS Characterization of Flavonoids and

Hydroxycinnamic Derivatives in Turnip Tops Brassica rapa L. Subsp. sylvestris L.j.Agric.Food.Chem.54 . 1342-1360

16-Schonhof  I, Krumbein A and Bruckner  B

            .2004. Genotype effects on glucosinolates and sensory properties of broccoli and cauliflower  .Nahrung/Food.48(1) : 25-33

17-Sasaki K  and  Takahashi T .2002. A flavonoid from brassica rapa fiower as the UV-absorbing nectar guide.Phytochem .61(3) :339-343

18- Vafaeinejad S., Serki E, Hassanpour Fard  M, Hosseini M.*Hypolipidemic Activity of Aqueous Extract of Turnip (Brassica rapa) Root in Hyperlipidemic Rats.Horizon Med Sciences.Volume 21.issue.1, spring2015.45-51

19- Alizade H, Ghiamirad1 M,  Ebrahimiasl S.The Study of Antibacterial Activity of Alcoholic Extract of Brassica Napus L. On Some of Pathogenic Bacteria. Medical Journal of Tabriz University of Medical Sciences a nd Health Services Vol. 35, No. 6, Feb. – Mar. 2014, Pages: 74-79

نام میکروب:

غلظت عصاره: 

هاله عدم رشد

MIC

MBC