بررسی اثر اسانس آویشن و میخک در ایزوله های کاندیدایی ولوواژینیت عودکننده

بررسی اثر اسانس آویشن و میخک در ایزوله­های کاندیدایی ولوواژینیت عودکننده

The evaluation of the Effects of Thyme and Clove oil in Candida isolates of recurrent vulvovaginitis

کاندیدیازیس ولوواژینال یک مشکل ژنیکولوژی مهم در زمینه پزشکی می‌باشد. به طور معمول 75 درصد از زنان حداقل یک بار در سال در طول زندگی خود مبتلا به کاندیدیازیس واژینال می‌شوند که این امر از نظر مراقبت‌های بهداشتی قابل توجه است [1]. ولوواژنیت کاندیدایی بعد از عفونت‌های باکتریایی دومین عامل واژینیت در زنان بوده و افزایش تجویز داروهای مربوط به عفونت‌های مخمری از سال 1980 تا 1990 نشان دهنده افزایش دو برابری واژینیت کاندیدایی بوده است [2]. حدود 45 درصد زنان دو بار یا بیش از دو بار در طول زندگی به این عفونت مبتلا می­شوند. تقریبأ 5 درصد زنان در سال سه بار و یا بیشتر به این بیماری مبتلا می شوند که به آن ولوواژینیت کاندیدایی عود کننده  Recurrent Vulvovaginal candidiasis (RVVC) گفته می­شود (2).

عوامل مستعد کننده اصلی در این بیماری شامل حاملگی، سرکوب سیستم ایمنی، دیابت ملیتوس کنترل نشده، مصرف قرص­های ضد بارداری، درمان آنتی­باکتریال، استفاده از وسایل داخل رحمی، فعالیت جنسی زیاد و نقص ایمنی موضعی ناحیه واژن می­باشد. مشخص ترین علامت واژینیت کاندیدائی، خارش واژن است، در این بیماری سوزش ادرار بسیار شایع بوده و ترشحات واژن افزایش می­یابد، از علائم بالینی ادم، قرمزی و شقاق ولو می­باشد و دیواره واژن قرمز رنگ با پلاک­های چسبنده خشک و سفید دیده می­شود. رایج­ترین روش تشخیص، مبتنی بر مشاهده­ی مستقیم میکروسکوپی لام بدست آمده از بیمار به منظور یافتن عوامل قارچی کاندیدایی می­باشد (3 و 4). تاکنون بررسی های انجام گرفته برای کشف مکانیسم عامل واژینیت­های عودکننده ناموفق بوده اند. عامل بیشتر موارد بیماری­های کاندیدایی، گونه­ی کاندیدا آلبیکنس است ولی در بیماران مبتلا به ولوو واژینیت کاندیدایی عود کننده 15-47 درصد موارد توسط گونه های غیر آلبیکنس ایجاد می شوند. در مواردی که کاندیدا آلبیکنس عامل ایجاد کننده باشد، به ندرت مقاومت دارویی مشاهده می شود، در حالی که در عفونت­های با عوامل کاندیدا گلابراتا و کاندیدا تروپیکالیس و کاندیدا کروزه­ای، فقدان حساسیت به داروهای ضد قارچی آزول می­تواند عامل عفونت مزمن یا راجعه باشد. استفاده ی بی رویه از داروهای ضد قارچی به عنوان یکی از عوامل افزایش کلنیزاسیون گونه­های غیر آلبیکنس مورد توجه می باشند زیرا رژیم­های درمانی مورد استفاده در بیماران که اغلب به صورت یک دوره 1 تا 3 روزه­از داروهای ایمیدازو­ل­ بوده ممکن است رشد قارچ  کاندیدا آلبیکنس را متوقف نماید و از طرفی باعث رشد بیش از حد گونه­های غیر آلبیکنس  کاندیدا شود. همچنین از آن­جایی که تعداد داروهای ضد قارچی موجود در بازار معدود می­باشد و با توجه به مطالعات انجام شده مصرف بیش از حد آنها باعث افزایش مقاومت دارویی کاندیداها می­شود. بنابراین شناسایی دقیق گونه­های کاندیدا اهمیت به سزایی در درمان و مقابله با افزایش مقاومت کاندیدایی به داروهای ضد قارچی خواهد داشت (5، 6 و 7).

مهم­ترین پاتوژن این جنس کاندیدا آلبیکنس می­باشد اما یک تغییر جهانی به سمت گونه­های غیرآلبیکنس مانند کاندیدا تروپیکالیس، کاندیدا گلابراتا و کاندیدا کروزه­ای مشاهده شده است. این تغییر اپیدمیولوژیکی به دلیل کاهش حساسیت این گونه­های نو ظهور به داروهای ضدقارچ می تواند نگران کننده باشد (8). بنابراین شناسایی دقیق گونه های کاندیدا به منظور انتخاب بهترین روش درمان، جلوگیری از مقاومت های دارویی و کنترل عفونت­های ایجاد شده توسط این گونه ها بسیار ضروری است. استفاده از تست های بیوشیمیایی برای شناسایی مخمرهای مهم از لحاظ پزشکی، علاوه بر زمان بر بودن، امکان شناسایی دقیق این گونه­ها را فراهم نمی­کند، به همین دلیل روش­های مبتنی بر PCR در حال جایگزینی برای این متدهای مرسوم هستند. (9) تاکنون روش­های مولکولی زیادی از جمله PCR-RFLP(6و10)، Multiplex PCR (11)، توالی­یابی نواحی خاص ژنوم (8) و  Real time PCR (12) برای شناسایی گونه­های کاندیدا استفاده شده­ است.

آنزیم­های خارج سلولی کاندیدا نظیر فسفولیپاز و پروتئیناز در اتصال، تهاجم و تخریب ساختار سلولی میزبان نقش دارند. فسفولیپاز مسئول هیدرولیز فسفولیپیدها است که مخمر را در تهاجم به سلول­های مخاطی و تخریب غشا این سلول­ها کمک می­کند، هم­چنین برخی از فسفولیپازها ممکن است آنتی­ژن­های سطحی سلول­های ارائه­دهنده آنتی­ژن را از بین ببرند (13).

به دلیل بروز مقاومت دارویی در مقابل داروهای شیمیایی رایج به خصوص در جنس کاندیدا و هم­چنین وجود تنوع بسیار زیاد ترکیبات دارای خواص درمانی در گیاهان موجب شده است تا از گیاهان به عنوان منبعی مهم به منظور جستجوی ترکیبات جدید دارویی و سنتز داروهای موثر استفاده نمود(17 و 18).

گیاه آویشن با نام علمی (Thymus vulgaris) یکی از گیاهان تیره نعناعیان (Lamiaceae) است که در نواحی مختلف مدیترانه و برخی نواحی آسیا می­روید و امروزه در مناطق مختلف جهان و از جمله در ایران کشت و تولید می­شود. آویشن محتوی 8/0تا 6/2 درصد (معمولاً 1 درصد) اسانس است. مهم­ترین اجزای تشکیل­دهنده اسانس آن را تیمول (Thymol) و کارواکرول (Carvacrol) تشکیل می­دهد که دارای خاصیت ضدمیکروبی می­باشند (19 و 20).

گیاه میخک از خانواده مورد می­باشد که حاوی 14-21 درصد اسانس است. اسانس میخک حاوی 70-80 درصد از یک ترکیب فنلی به نام اوگنول است که خاصیت آنتی­اکسیدانی دارد. اسانس­ها فعالیت­های ضد میکروبـی گسـترده­ای دارنـد و در بسـیاری از مـوارد سـبب از بـین بـردن باکتری­ها، قارچ­ها و ویروس­ها می­شوند، بدون اینکه اثرهای نامطلوبی بـر سـلامت مصـرف کننده داشـته باشـند. عمده ترین ترکیبات شیمیایی مشترک در اسـانس های گیـاهی شـامل تیمـول، آلفـا پیـنن، بتـا پیـنن، کـارواکرول، لینالول، ژرماکرن و کومین آلدهیـد می­باشد (19 و 21).

تکنیک مولکولی Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) به عنوان یک روش قابل اعتماد جهت شناسایی و تایید نهایی گونه­های کاندیدا ارزشمند می­باشد (22).استفاده از روش های مولکولی با استفاده از ناحیه ITS rDNA، جهت شناسایی سریع و دقیق قارچ­های بیماری­زای انسانی، بسیار قابل اعتماد می­باشد  و مطالعات زیادی از آن برای شناسایی گونه­های کاندیدایی استفاده کرده­اند(9).

این مطالعه به منظور شناسایی گونه های کاندیدای دخیل در ولوواژینیت کاندیدایی عودکننده بیماران شهر زاهدان، با روش PCR-RFLP ناحیهITS rDNA با پرایمرهای ITS1: 5' - TCC GTA GGT GAA CCT GCG G - 3' و ITS4: 5' - TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC - 3' انجام می­شود.

در سال 94، فولادی و همکاران به شناسایی گونه­های کاندیدا در بیماران مبتلا به ولوواژینیت کاندیدایی با روش PCR-RFLP پرداختند. آلبیکنس با بیشترین فراوانی و سپس گلابراتا، کروزه­ای، پاراپسیلوزیس و تروپیکالیس به ترتیب شایع بودند (23).

در سال 94، جزایری و همکاران اثر مهاری اسانس آویشن مرتعی و کوهی را بر روی رشد کاندیدا آلبیکنس بررسی کرده و نتایج را با اثر مهاری نیستاتین مقایسه کردند. نتایج آن­ها نشان داد که اسانس دو گیاه مورد مطالعه، اثر مهاری مناسبی بر رشد قارچ کاندیدا آلبیکنس  داشت و اثر مهاری آن­ها قابل مقایسه با نیستاتین بود (25).

1.  

2. فراوانی گونه­های آلبیکنس در ایزوله­های ولوواژینیت کاندیدایی عودکننده مورد مطالعه چگونه می­باشد؟
3. فراوانی گونه­های غیرآلبیکنس در ایزوله­های ولوواژینیت کاندیدایی عودکننده مورد مطالعه چگونه می­باشد؟
4. مقاومت به فلوکونازول در ایزوله­های ولوواژینیت کاندیدایی عودکننده مورد مطالعه چگونه می­باشد؟ (بررسی MIC فلوکونازول علیه کاندیداهای مورد مطالعه)
5. MIC اسانس آویشن بر علیه ایزوله های واژینال کاندیدا چقدر است؟
6. MIC اسانس میخک بر علیه ایزوله های واژینال کاندیدا چقدر است؟

مطالعه اثر ضد قارچی اسانس آویشن و میخک در ایزوله­های کاندیدایی ولوواژینیت عودکننده

1.  

2. شناسایی انواع گونه­های کاندیدای درگیر در زنان مبتلا به ولوواژینیت کاندیدایی عودکننده مراجعه کننده به مراکز درمانی زاهدان با روش PCR-RFLP.
3. تعیین MIC داروی فلوکونازول علیه ایزوله­های ولوواژینیت کاندیدایی عودکننده مورد مطالعه.
4. تعیین MIC اسانس آویشن علیه ایزوله­های ولوواژینیت کاندیدایی عودکننده مورد مطالعه.
5. تعیین MIC اسانس میخک علیه ایزوله­های ولوواژینیت کاندیدایی عودکننده مورد مطالعه

دانشگاه علوم پزشکی زاهدان، مرکز تحقیقات دانشکده علوم پزشکی زاهدان و سایر مراکز تحقیقاتی

 1.حداقل غلظت مهارکنندگی (MIC)( Minimum Inhibitory Concentration)حداقل غلظت یک دارو است که رشد قابل رویت یک میکروارگانیسم را مهار می­کند (19).

2. واکنش زنجیره­ای پلی­مراز (PCR)(  Polymerase Chain Reaction)

3. چند شکلی طول قطعه محدود شونده (RFLP)( Restriction Fragment Length Polymorphism)

4. واکنش زنجیره­ای پلی­مراز در زمان واقعی (Real time PCR)

تجربی- تحلیلی (مطالعه آزمایشگاهی)

60 نمونه بالینی تهیه شده از زنان دارای علائم بالینی عفونت ولوواژینیت کاندیدایی عودکننده (زنانی که در سال 3 بار یا بیشتر به این عفونت مبتلا می­شوند) مراجعه کننده به مراکز درمانی زاهدان که با روش­های فنوتیپی تایید شده­اند.

طبق منبع ذکر شده 60 نمونه کاندیدای ایزوله شده از زنان دارای علائم بالینی عفونت ولووازینیت کاندیدایی عودکننده که به روش فنوتیپی تایید شده­اند، مورد بررسی­های بعدی قرار می­گیرد.

Eftekhari, A.D., Anvari, M., Ranji, N., 2015. Investigation of ERG11 gene mutations in fluconazole resistant Candida albicans isolated from a number of Rasht hospitals. Pathobiology Research 18, 98-107.

نمونه­گیری از نوع غیراحتمالی و انتخاب جدایه­ها به روش تصادفی از نمونه­گیری آسان پیروی شده است.

فرم جمع­ آوری داده­ ها و نتایج بدست آمده از کشت­های قارچی (فرم ضمیمه شماره 1)

در این مطالعه از بیماران مشکوک به ولوواژینیت کاندیدایی عودکننده مراجعه کننده به مراکز درمانی زاهدان طی یک دوره 6 ماهه نمونه­گیری می­شود. نمونه­ها توسط متخصص مربوطه با سواب استریل از جدار خلفی واژن گرفته می­شود و به آزمایشگاه منقل می­گردد.

پس از بررسی مستقیم میکروسکوپی، جهت عملیات قارچ­شناسی(فنوتایپی)، نمونه­های جدا شده از واژن با استفاده از آزمون­های فنوتیپی(تشکیل جرم تیوب(لوله زایا)) و تولید کلامیدوسپور روی محیط کورن میل آگار دارای یک درصد توئین 80 و به ویژه رنگ کلنی مورد شناسایی قرار می­گیرند. تشخیص قطعی کاندیداها با استفاده از تست­های لوله زایا، تولید کلامیدوکونیدی و پیگمان کاندیدا روی محیط کروم آگار انجام می­شود.

از نمونه­های اخذ شده، یک لام مرطوب که با یک قطره هیدروکسید پتاسیم 10درصد تهیه و نمونه دیگر بر روی محیط سابورو دکستروز آگار (SC) کشت داده می­شود. بعد از انکوباسیون محیط­های کشت در 35 درجه سانتی­گراد به مدت 24 تا 48 ساعت، کلنی­های ایجاد شده از لحاظ وجود عناصر مخمری مورد ارزیابی مجدد قرار می­گیرند. پس از گذشت زمان انکوباسیون و رشد مخمرهای کاندیدا، از آنها سوسپانسیون سلولی تهیه می شود. بدین ترتیب که ابتدا در یک میکروتیوب 5/1 میلی لیتری مقدار 1000 میکرولیتر بافر فسفات سالین (PBS) 2/7=pH استریل ریخته شده، سپس با آنس استریل شده مقدار کمی از کلنی های رشد یافته روی محیط SC در PBS مخلوط می شود، پس از مخلوط شدن مخمرها در بافر، با استفاده از لام نئوبار سوسپانسیونی معادل 10³×1 سلول در هر میلی لیتر تهیه می گردد.

تعیین حداقل غلظت مهارکنندگی (MIC) با استفاده از روش میکرو براث دایلوشن اسانس آویشن ، میخک و داروی فلوکونازول در ایزوله های بالینی کاندیدا: در این آزمایش از میکروپلیت 96 خانه ای استفاده می شود. ابتدا درون چاهک ها 100 میکرولیتر محیط کشت

(Roswell Park Memorial Institute) RPMI1640 ریخته شده و غلظت های متوالی از اسانس آویشن، میخک و داروی فلوکونازول تهیه و سپس 100 میکرولیتر از سوسپانسیون سلول مخمری از هر کدام از سویه های کاندیدا با تراکم 10³×1 سلول در هر میلی لیتر به آن اضافه می گردد. این آزمون به صورت سه بار تکرار انجام می شود. پلیت 96 خانه ای در انکوباتور شیکردار 35 درجه سانتیگراد با سرعت 150 دور در دقیقه به مدت 48 ساعت گذاشته می شود. پس از طی زمان انکوباسیون 10 میکرولیتر از محتویات چاهک ها بر روی پلیت های حاوی محیط SC کشت و در دمای 35 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت انکوبه می گردد. سپس بر اساس شمارش تعداد کلنی های رشد کرده از هر یک از رقت های اسانس آویشن، میخک و فلوکونازول نسبت به سویه استاندارد، مقادیر حداقل غلظت مهار کنندگی از رشد قارچ بدست می­آید.

برای استخراج DNA، قارچ­ها در محیط سابورو دکستروز براث (SDB) کشت داده می­شوند و به مدت 24 ساعت در 35 درجه سانتی­گراد انکوبه می­شوند. برای استخراج DNA ابتدا سلول­ها با سانتریفوژ دور 14000 از محیط کشت مایع جمع­آوری می­شوند و 50 میکرولیتر از بافر (NaCl 0.5 M، STES Tris-HCL 0.2M، SDS 0.1% و EDTA 0.01 M)به آن اضافه می­گردد، سپس 20 میکرولیتر از دانه­های شیشه­ای شسته شده با اسید، 20 میکرولیتر بافر TE (Tris-EDTA buffer) و 10 میکرولیتر مخلوط فنل/ کلروفرم/ ایزوآمیل الکل (به نسبت 1:24:25) به محتویات سلولی اضافه و به مدت 32 ثانیه ورتکس می­گردد. مایع رویی حاوی DNA با استفاده از اتانول آب­گیری و تخلیص نهایی DNA صورت می­گیرد (8).

واکنش زنجیره­ای پلی­مراز در حجم نهایی 50 میکرولیتر با استفاده از DNA الگو، پرایمرها، Master mix و آب مقطر استریل در دستگاه ترموسایکلر با برنامه دمایی 94 به مدت 4 دقیقه، 30 چرخه با دمای 94 به مدت 40 ثانیه، 56 درجه به مدت 30 ثانیه و 72 درجه به مدت 30 ثانیه و در انتها 5 دقیقه در دمای 72 درجه انجام می­شود. پس از الکتروفوزر محصول PCR و مشاهده باندهای حاصل از واکنش PCR، در قدم بعدی واکنش هضم آنزیمی محصولات PCR با استفاده از روش Restriction Fragment Length Polymorphism) PCR-RFLP) با آنزیمMSP1  ( (Thermo Scientific جهت افتراق گونه‌های کاندیدا آلبیکنس، کاندیدا گلابراتا، کاندیدا پاراپسیلوزیس، کاندیدا تروپیکالس و کاندیدا کروزیی استفاده می­شود. مقدار 10 میکرولیتر از محصول PCR با 2 میکرولیتر بافر آنزیم X10 و 1 میکرولیتر آنزیم MSP1 و 7 میکرولیتر آب مقطر استریل مخلوط و به مدت 2 تا 3 ساعت در دمای 37 درجه سانتی‌گراد نگهداری می­شود و سپس در ژل آگارز 1 درصد الکتروفورز می­گردد (آنزیم MSP1 موجب برش در قطعات تکثیر شده در ناحیه‌ی CCGG می‌گردد)و نتایج با نرم­افزار SPSS 25 مورد تجزیه و تحلیل قرار می­گیرد.  

نتایج با استفاده از آزمون­های توصیفی شامل فراوانی درصد و جداول و نمودارهار توصیف شده و برای مقایسه میانگین MIC بین گروه­های مورد بررسی از آزمون آنالیز واریانس یکطرفه و در صورت معنی داری از تست­های تکمیلی برای تعیین گروه­های متفاوت از یکدیگر استفاده می­شود و در صورتی­که شرایط توزیع نرمال در گروه­ها برقرار نباشد از ازمون­های ناپارامتری مناسب مانند کروسکال والیس و یا من­ویتنی استفاده می­شود. سطح معناداری 05/0 > P در نظر گرفته می­شود.

از بیماران رضایت نامه آگاهانه کتبی گرفته می­شود. (فرم رضایت نامه پیوست می­ باشد). از دفترچه راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در جمهوری اسلامی ایران از فصل راهنمای عمومی کد 4 و از دفترچه راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی  در جمهوری اسلامی ایران کدهای 1، 2، 5، 11،13، 15، 16، 19، 22، 27، 28، 29، 30 و 31 رعایت و اجرا می شود.

پیدا نکردن نمونه به اندازه کافی در زمان پیش­بینی شده برای جمع­ آوری نمونه

همکاری نکردن همکاران متخصص بدلیل مشغله کاری

راه حل: جمع­ آوری نمونه از چندین مرکز مربوطه در زاهدان و اکتفا نکردن به یک مرکز

کاندیدا،اسانس آویشن و میخک، ژن­های PLB-CDR-ERG11.

Candida, Thyme and Clove essential oils, ERG11- CDR-PLB  genes

1.         Moreria, D., Paula, CR., 2006.  Vulvovaginal candidiasis. Internat J Gynecol, 92: 266–267.

2.         Sobel, JD., 2007 Vulvovaginal candidiasis. Lancet , 1961 – 71.

3.         Nazeri, M., Mesdaghinia, E., Moravej, S.A.R., Atabakhshiyan, R., Soleymani, F., 2012. Prevalence of vulvovaginal candidiasis and frequency of candida species in women. Journal of Mazandaran University of Medical Sciences 21, 254-262.

4.         مومن زاده، م.، طالبی، الف.، مهری دهنوی، ع. و ربانی، ح.، تشخیص کاندیدیازیس واژینال با استفاده از استخراج اتوماتیک قارچ کاندیدا در تصاویر مربوط به نمونه های پاپ اسمیر. مجله دانشکده پزشکی اصفهان، 1393؛ 304: 1659- 1667.

5.         Falahati, M., Fateh, R., Sharifynia, S., Kanani, A., Memar, A.R., Hashem Dabbaghiyan, F., 2012. Anticandidal effects of shallot extracts against chronic candidiasis agents. Razi Journal of Medical Sciences 19, 22-28.

6.         سهرابی، ح.، ساروخانی، م. و ازعانی، الف.، شناسایی گونه های کاندیدای جدا شده از موارد ولوو واژینیت کاندیدایی با مقایسه دو روش کشت و مولکولی ابداعی در سال 1391. مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراک، 1392؛ 8 (77): 48- 56.

7.         کرد، ز.، فتی، ع.، زرین فر، ح.، شناسایی مولکولی گونه های کاندیدا جدا شده از مبتلایان به ولوواژینیت کاندیدایی برای اولین بار در مشهد. مجله زنان، مامایی و نازایی ایران، 1396؛ 20 (4): 50- 57

8.         Eftekhari, A.D., Anvari, M., Ranji, N., 2015. Investigation of ERG11 gene mutations in fluconazole resistant Candida albicans isolated from a number of Rasht hospitals. Pathobiology Research 18, 98-107.

9.         Fathi, N., Mohammadi, R., Tabatabaiefar, M.A., Ghahri, M., Sadrossadati, S.Z., 2016. Sequence-identification of Candida species isolated from candidemia. Advanced biomedical research 5.

10.       Merseguel, K.B., Nishikaku, A.S., Rodrigues, A.M., Padovan, A.C., e Ferreira, R.C., de Azevedo Melo, A.S., da Silva Briones, M.R., Colombo, A.L., 2015. Genetic diversity of medically important and emerging Candida species causing invasive infection. BMC infectious diseases 15, 57.

11.       Ge, Y.P., Wang, L., Lu, G.X., Shen, Y.N., Liu, W.D., 2012. A simple and reliable PCR-restriction fragment length polymorphism assay to identify Candida albicans and its closely related Candida dubliniensis. Brazilian Journal of Microbiology 43, 873-879.

12.       Liguori, G., Di Onofrio, V., GallA, F., Lucariello, A., Albano, L., Catania, M., Guida, M., 2010. Candida albicans identification: comparison among nine phenotypic systems and a multiplex PCR. Journal of preventive medicine and hygiene 51.

13.       Zhang, J., Hung, G.-C., Nagamine, K., Li, B., Tsai, S., Lo, S.-C., 2016. Development of Candida-specific Real-Time PCR assays for the detection and identification of eight medically important Candida species. Microbiology insights 9, MBI. S38517.

14.       Azarhoosh , K., Nasrollahi Omran, A., 2017. Evaluation of Extracellular Enzyme Activities in Candida albicans Isolated From Patients with Diabetes Mellitus. J Clin Res Paramed Sci 6, e81292.

15.       Ghannoum, M.A., 2000. Potential role of phospholipases in virulence and fungal pathogenesis. Clinical microbiology reviews 13, 122-143.

16.       Balabandi, S., KHAZAEI, K.Z., Ranji, N., 2017. Correlation between ERG11 Gene Mutations and Fluconazole Resistance in Candida albicans Strains Isolated from Rasht in Years 2015-2016. Majallah-i dānishgāh-i ̒ulūm-i pizishkī-i Arāk 20, 13-22.

17.       Jensen, R.H., Astvad, K.M.T., Silva, L.V., Sanglard, D., Jørgensen, R., Nielsen, K.F., Mathiasen, E.G., Doroudian, G., Perlin, D.S., Arendrup, M.C., 2015. Stepwise emergence of azole, echinocandin and amphotericin B multidrug resistance in vivo in Candida albicans orchestrated by multiple genetic alterations. Journal of Antimicrobial Chemotherapy 70, 2551-2555.

18.       GOLPOUR, H., RANJI, N., SHARAMI, S.H., 2017. Investigation of antifungal effect of nanoparticle-encapsulated curcumin on CDR1 gene expression in fluconazole-resistant isolates of Candida albicans.

19.       حقیقی، ف.، رودبار محمدی، ش.، سلیمانی، ن.، ستاری، م.، ارزیابی فعالیت ضد قارچی اسانس های آویشن باغی، جعفری، زیره سبز و زیره سیاه روی کاندیدا آلبیکنس در مقایسه با فلوکونازول. مجله علوم پزشکی مدرس: آسیب شناسی زیستی 1390 ، 14(1): 29-35

20.       محمدی، ش.،  ابراهیمی، ح .،  سایه میری، ک.، مطالعه مرور سیستماتیک و متا آنالیز: مقایسه تاثیر دو گیاه آویشن و سیر بر روی قارچ کاندیدا آلبیکنس. مجله علمی پزوهشی دانشگاه علوم پزشکی ایلام. 1397. 26, 38-46.

21.       داشی پور،ع.، کیخا، ن.، مودی، م.، کشاورزی، ف.، درگاهیان، م.، مقایسه اثر اسانس آویشن و میخک با فلوکونازول و نیستاتین بر ایزوله های بالینی کاندیدا آلبیکنس. فصلنامه بیماری های عفونی و گرمسیری وابسته به انجمن متخصصین بیماری های عفونی و گرمسیری 1397، سال 23 شماره 81: 47-54

22.       Jazayeri, M., Radi, S., Abdosamadi, H.R., Madani Pour, A., Samie, L., 2016. Comparison the Inhibitory Effects Of Essential Oil of Thymus eriocalyx and Thymus kotschyanus with Nystatin on Candida Albicans Growth-In Vitro Study. Journal of Mashhad Dental School 40, 133-142.

23.       Aali, E., Mahmoudi, R., Kazeminia, M., Hazrati, R., Azarpey, F., 2017. Essential oils as natural medicinal substances. Tehran University Medical Journal 75, 480-489.

24.       Lisar, N.A., Kordbacheh, P., Rezaie, S., Safara, M., Ghazvini, R.D., Bakhshi, H., Jalali, Z.O., 2018. Identification of Candida species by molecular and mycological methods in pregnant women with vulvovaginal candidiasis. Tehran University Medical Journal 75, 894-901.

25.اربابی کلاتی، ف.، شیرزایی، م.، پورزمانی، م.، دبیری، س.، مقایسه تاثیر عصاره گیاهی آویشن، میخک و دارچین با نیستاتین بر میزان مهار کاندیدا آلبیکنس (مطالعه آزمایشگاهی). مجله تحقیق در علوم دندانپزشکی 1390، دوره هشتم، شماره چهارم: 175-179

26. Zia, M., Bayat, M., Khalkhali, H., Saffari, S., 2014. Effect of Thymus vulgaris, Myrtus communis and nystatin on Candida albicans. Journal of Gorgan University of Medical Sciences 15.

27.       Fouladi, B., Yadegari, M.H., Rajabibazl, M., Fazaeli, A., Hashemzadeh-Chaleshtori, M., 2015. Identification of candida species in patients with vulvovaginitis presenting different clinical symptoms. Journal of Zanjan University of Medical Sciences and Health Services 23, 57-68.

28.       Ghaffaripour, R., Rajabibazl, M., Yadegari, M.H., 2016. A Survey of the Effect of Camphor on INT1 and EFG1 Gene Expressions of Candida albicans at Three Treatment Times (24, 48, and 72 hours) via Real-time PCR. Pathobiology Research 19, 59-72.

29.       Khodavandi, A., Alizadeh, F., Abraheh, Z., 2018. Comparison of ERG11 gene expression profiles of Candida albicans treated with Thymus vulgaris extracts alone and in combination with Mentha spicata.

30.       Deorukhkar, S.C., Saini, S., Mathew, S., 2014. Virulence factors contributing to pathogenicity of Candida tropicalis and its antifungal susceptibility profile. International journal of microbiology 2014.

31.       Khan, M.S., Ahmad, I., Cameotra, S.S., Botha, F., 2014. Sub-MICs of Carum copticum and Thymus vulgaris influence virulence factors and biofilm formation in Candida spp. BMC complementary and alternative medicine 14, 337.

32.       Szweda, P., Gucwa, K., Kurzyk, E., Romanowska, E., Dzierżanowska-Fangrat, K., Jurek, A.Z., Kuś, P.M., Milewski, S., 2015. Essential oils, silver nanoparticles and propolis as alternative agents against fluconazole resistant Candida albicans, Candida glabrata and Candida krusei clinical isolates. Indian journal of microbiology 55, 175-183.

33.       Khajeh, E., Hosseini Shokouh, S.J., Rajabibazl, M., Roudbary, M., Rafiei, S., Aslani, P., Farahnejad, Z., 2016. Antifungal effect of Echinophora platyloba on expression of CDR1 and CDR2 genes in fluconazole-resistant Candida albicans. British journal of biomedical science 73, 44-48.

34.       Mandras, N., Nostro, A., Roana, J., Scalas, D., Banche, G., Ghisetti, V., Del Re, S., Fucale, G., Cuffini, A.M., Tullio, V., 2016. Liquid and vapour-phase antifungal activities of essential oils against Candida albicans and non-albicans Candida. BMC complementary and alternative medicine 16, 330.

35.       Andrews, J. M. Determination of minimum inhibitory concentrations. Journal of Antimicrobial Chemotherapy 2001; 48 (1): 5–16.

بررسی اثر اسانس های آویشن بر میزان بیان ژن­های CDR، ERG11 و PLB  بیماری­زا در ایزوله­های کاندیدایی ولوواژینیت عودکننده

ندارد

شرکت کردن بیمار در این پژوهش، به بررسی اثر آویشن روی عامل بیماری کمک کرده و در صورت کسب نتیجه مطلوب منجر به استفاده از آویشن به عنوان یک داروی گیاهی به جای استفاده از داروهای شیمیایی رایج برای درمان بیماری می­ گردد.

ندارد

ندارد

هزینه­ای به عهده بیمار نمی­باشد.

ندارد

در صورت تمایل بیمار، نتایج تحقیق به اطلاع وی خواهد رسید. هم­چنین اطلاعات شخصی بیمار و هویت بیماری وی به صورت کاملأ محرمانه صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری وی در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند.

بیمار می­تواند در صورت داشتن هر گونه سوال درباره این مطالعه، به آدرس زیر مراجعه نماید و یا با شماره داده شده تماس بگیرد.

میدان دکتر حسابی- پردیس دانشگاه علوم پزشکی زاهدان- 33295745

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان  که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.