مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  ژن­های FOXO1, HOTTIP, FOXO3a, miR146a  و HOTAIR در زنان مبتلا به سقط مکرر در مقایسه با گروه کنترل

ﺳﻨﺪرم ﺳﻘﻂ ﻣﻜﺮر ﺧﻮدﺑﺨﻮدی  (Recurrent spontaneous abortion) اﻏﻠﺐ ﺑﻪ ﺻﻮرت سه سقط پشت سر هم  ﺗﻌﺮﻳﻒ ﻣـﻲ شود که به عبارتی از دست دادن جنین یا رویان تا وزن 500 گرم، پیش از هفته 20 بارداری تعریف می­شود(1). سقط یک اتفاق متداول در طی دوران بارداری است و این یکی از مشکلاتی است که همسران جوان با آن روبه رو هستند، که باعث نگرانی و ناکامی آنها می شود. در واقع حدود 15 درصد بارداری­هایی که از نظر کلینیکی تشخیص داده می­شوند، در نیمه اول بارداری سقط می­شوند.(2) سقط مکرر خود به خودی هنگامی که سه سقط پی در پی و بدون دخالت و تاثیر دارو یا وسایل مکانیکی صورت ­گیرد. در مطالعه ای نشان داده شده است که 5 درصد زوج ها، دو سقط مکرر و 2 درصد آنها سه سقط مکرر یا بیشتر را تجربه خواهند کرد. این سقط از شایعترین عارضه ی حاملگی محسوب می شود و موجب استرس شدید در زوجهای مشتاق فرزند می شود.سقط مکرر به دو گروه سقط مکرر اولیه و ثانویه تفکیک می­گردد. در مورد سقط اولیه فرزند زنده ای متولد نمی شود، ولی در سقط مکرر ثانویه یک یا چند تولد زنده و پس از آن سقط های پشت سر هم رخ می دهد (3). منشا سقط مکرر خود به خودی (RSA) چند عاملی است، که در نیمی از موارد علت آن ناشناخته باقی می ماند. اما بررسی های سیتوژنتیکی نمونه های سقط نشان داده است، که در 50% موارد رویان یا جنین های سقط شده از نظر سیتوژنتیکی غیرطبیعی بودند (4). درRSA  اولیه 55% سقط شده ها و در RSA ثانویه 35% آنها از نظر سیتوژنتیکی غیرطبیعی بودند. اساس ژنتیکی سقط مکرر خودبخودی جنین به طور ناچیزی شناخته شده است. موتاسیون های ژنهای منفرد، پلی ژنیک و فاکتورهای سیتوژنتیکی با RSA  مرتبط اند. در بیشتر مواقع سقط به صورت پدیده تصادفی در زوج اتفاق می افتد. به هر صورت دلایلی از جمله اختلالات کروموزومی مانند ترانسلوکاسیون، سندرم آنتی فسفولیپید،سندرم تخمدان پلی کیستیک، در ایجاد سقط مکرر شناسایی شده است. چنین حالات غیرطبیعی کروموزومی در 5 درصد زوج­هایی که دچار سقط مکرر می­شوند، حادث می شود. از سایر علل می توان به دلایل آناتومیک (6-12درصد)، آندوکرین (20-17درصد)، عفونت­ها (5-15درصد)، دلایل ایمنولوژیکی (ترومبوفیلی) و همچنین علل متفرقه دیگر اشاره کرد. البته بعد از ارزیابی واقعی در 60 درصد موارد، سقط مکرر غیرقابل توجیه باقی می­ماند(5-7). بر اساس مطالعات مختلف اختلالات ژنتیک 6-5/3درصد دلایل سقط مکرر را شامل می شوند .این فاکتور تنها دلیل بدون بحث سقط مکرر می باشد که به دلیل وجود ساختمان غیر طبیعی در کروموزوم های یک یا هر دو زوج اتفاق می افتد. این اختلالات می توانند به علت تعداد غیر طبیعی کروموزوم ها که منجر به آنوپلوئیدی جنین خواهد شد، نیز باشد.و این اختلالات با بالا بودن سن مادر رابطه زیادی دارد.اختلالات ژنتیکی به دو روش مختلف تشخیص داده می شود:.

1. تشخیص سیتوژنیک:
2.  اختلالات کاریوتایپ ژنومی

تشخیص مولکولی. که دارای چند نقص ژنتیکی است که به کمک تجزیه DNA مشخص می شود

اختلالات کروموزومی ممکن است به علت وراثت اختلالات ساختمانی و جابجایی های قطعات کروموزومی در کروموزوم­های والدین و یا اختلال در تعداد کروموزوم جنین و یا اشکال ساختمانی در کروموزم های جنین اتفاق بیافتد. معمولاً این اشکالات به شکل جابجایی های کرموزومی، بر عکس شدن کروموزوم، حلقه ای شدن و غیره اتفاق می افتد. این جابه جایی ها مشکلی را برای خود والدین ایجاد نمی­کنند، اما در روند تقسیم و ایجاد سلول های جنسی نر و ماده ( که منجر به ایجاد سلول هایی با نصف کروموزم پدری و مادری می شود ) ایجاد مشکل می کنند. در واقع تعداد زیادی از جنین های با اشکالات کروموزومی سقط می شوند و تعداد کمی از آنها تولد زنده را تجربه خواهند کرد (8). اختلال کروموزومی جنین یکی از علل عمده سقط خودبخودی و بی علت است که 50٪ از سقط ها را شامل می شود (9). از طرفی دیگر، فراوانی کاریوتایپ طبیعی جنین در سقط ها افزایش یافته که نشانه اهمیت بیشتر فاکتورهای مادری در عدم بارداری موفق است (10, 11).

miRNA ها یک نوع از RNA غیرکد شونده که در نماتودها و انسان بسیار محافظت می­باشد و بسته به ظرفیت اتصال آن به توالی غیر ترجمه شونده ناحیه '3 از mRNA هدف، فعالیت های متابولیکی بسیاری را به وسیله خاموش کردن ژن های هدف مربوطه میانجی­گری می­نماید. یک سری  miRNA­ها با ثبات بالا و بیان حفظ شده؛ به عنوان بیومارکرها در پزشکی بالینی شناخته شده اند، آنها همچنین دخالت مستقیمی در تنظیم مکانیسم های مرتبط با بارداری و زایمان دارند (12). در حال حاضر، miRNA ها به علت عملکرد در بروز اختلالات مرتبط با سقط جنین، برای تحقیق در مورد بیومارکرهای موثر در تشخیص زودهنگام و سریع این بیماری مورد توجه فراوانی قرار گرفته­اند و اهداف جدید برای درمان بیماری­های زنان محسوب می­شوند (13). از میان این دسته از RNA های non-coding، miR146a به عنوان ژنی مهم در بروز بیماری­هایی از جمله سرطان و سکته قلبی کاندید شده است. همچنین این ژن در فرایند التهاب دخالت مستقیمی داشته و پلی مورفیسم های تک نوکلئوتیدی ژن کد کننده­ی آن، شامل rs6864584 T>C، rs2910164 C>G و rs57095329 A>G با ریسک ابتلا به بیماری­های زنان از جمله پره اکلامپسی، و انواع بیماری­های خود ایمنی در ارتباط است (14-16).

RNA های بلند غیر کد کننده (LncRNA)، به عنوان مولکول­های RNA رونویسی شده تعریف می شوند که طولی بیش از 200 نوکلئوتید دارند، فاقد قالب خواندنی باز (open reading frame) هستند، ظرفیت قابل مشاهده ای برای کدکردن پروتئین ندارند و در بیان خاص انواع سلولی و بافت نقش دارند. LncRNA ها میتوانند فعالیت رونویسی را مورد هدف قرار دهند. همچنین فعالیت پروتئین و قرارگیری آن ها و تنظیم اپی ژنتیکی را تعدیل می نمایند (17). نقش lncRNA ها در تنظیم پروسه های سلولی مختلف، مثل پُرتوانی (pluripotency) سلول های بنیادی، تکامل، رشد و عملکرد سلول نیز گزارش شده است. یکی از lncRNA های شناخته شده HOTAIR می باشد. ژن HOX transcript antisense RNA (HOTAIR) به وسیله لوکوس انسانی HOXC بر روی کروموزم 12q13.13 کد می شود. HOTAIR در سلولهای سرطانی متفاوت به عنوان یک مولکول اونکوژنیک نقش ایفا می­کند. سطح بیانHOTAIR  به عنوان یک بیو مارکر بالقوه در اهداف تشخیصی و درمانی در چندین سرطان استفاده می شود (18). مطالعات زیادی نشان داده است که تنظیم HOTAIR در تکامل جفت نقش دارد و روی عملکرد سلول های تروفوبلاست در پره اکلامپسی نیز اثر می گذارد، اگرچه نقش دقیق HOTAIR در مهاجرت و تهاجم تروفوبلاست انسان هنوز شناسایی نشده است.  ژن HOTAIR به صورت اختصاصی فعال کننده مسیر سیگنالینگ فسفاتیدیل اینوزیتول 3کیناز-پروتئین کینازB (PI3K-AKT)، می باشد که مسیر اصلی مرتبط با التهاب، سرطان و افزایش تهاجم سلولی است (19). اخیراَ گزارش شده است که بیان HOTAIR در تروفوبلاست بیماران دارای سقط مکرر در مقایسه با گروه کنترل کاهش معناداری داشته است که اهمیت نقش HOTAIR به عنوان یک RNA غیرکننده در این بیماری را نشان می دهد (20). ارتباط بین پلی­مورفیسم­های RNAهای بلند غیر کدکننده، مانند MALAT1 و CCAT2 در بروز سقط مکرر به تازگی شناسایی شده است (21, 22) اما تا کنون درخصوص اثر پلی مورفیسم های ژن HOTAIR در سقط مکرر مطالعه ای انجام نشده است. چهار پلی­مورفیسم تک نوکلئوتیدی (SNP) rs920778 G>A، rs4759314 A>G، rs1899663 G>T و rs12826786 C>T با فراوانی آلل مغلوب (MAF) به ترتیب 0.44، 0.09، 0.25 و 0.36 در ناحیه­ی اینترونیک ژن کد کننده­ی HOTAIR قرار دارند و مطالعات زیادی ارتباط آماری بین آلل­ها و ژنوتیپ­های مختلف این واریانت­ها و ریسک ابتلا به انواع سرطان را نشان داده است (23, 24). همچنین سلیمی و همکاران در سال 2019 نشان دادند rs10783618 T>C واقع در این ژن باعث افزایش ریسک ابتلا به پره اکلامپسی می شود (25). همچنین تغییر سطوح سرمی میکرو RNAها از جمله miR29a نیز در بیماری سقط مکرر نشان داده شده است. HOTTIP به عنوان یک LncRNA بسیار جدید باعث مهار ژن پایین دست خود (RND3) شده که بدین وسیله می تواند در پاتوژنز بیماری پره اکلامپسی دخالت داشته باشد. همچنین پیشنهاد شده است تغییر بیان HOTTIP با بروز ناباروری در مردان مرتبط باشد. 3 جایگاه اینترونی در ژن کد کننده HOTTIP شامل rs78248039A/T، rs1859168C/A و rs2023843T/C با فراوانی آلل مغلوب 0.13، 0.48 و 0.16 طبق اطلاعات پروژه 1000 ژنوم هستند. تا کنون، ارتباط این واریانت ها و ریسک ابتلا به سقط مکرر مورد بررسی قرار نگرفته است.

 از طرفی، پروتئین­های سر چنگالی (Fox head) از جمله فاکتورهای رونویسی دخیل در فرایند­های آنتی اکسیدانی هستند که با اتصال به DNA یا تعامل پروتئین-پروتئین نقش خود را ایفا می­کنند. از جمله ی این فاکتورهای رونویسی میتوان به FOXO3a اشاره کرد که با افزایش بیان ژن های مقاوم در برابر استرس اکسایشی (مثل سوپر اکسید دیسموتاز)، موجب سم زدایی گونه­های آزاد اکسیژن و ترمیم DNA آسیب دیده می­شود. این عامل رونویسی در یکسری فرایند­های سلولی دیگر مانند مهار اتوفاژی سلول، پیری سلول، التهاب، همئوستاز و ایمنی ذاتی نیز نقش دارد (26, 27). همچنین، نشان داده شده است که FOXO میبایستی برای فعالیت به β-catenin اتصال یابد که این پروتئین نقش مهمی در مسیر سیگنالینگ Wnt ایفا می­کند. Almeida و همکاران گزارش دادند که در اثر استرس اکسیداتیو و فعال شده مسیر FOXO، β-catenin موجود در سیتوسل مصرف شده و نمی­تواند نقش خود را در مسیر پیام رسانی Wnt ایفا کند. این بدان معنیست که استرس اکسیداتیو می­تواند منجر به تضعیف مسیر Wnt شود که خود نقش بسیار مهمی در تکامل جنینی ایفا می­کند(28-31). پیشنهاد شده است که کاهش بیان یا تضعیف مسیر سیگنالینگ  Wnt/β‐cateninارتباط مستقیمی با پاتوژنز RSA دارد (32). Lim و همکاران نشان دادندFOXO3  می­تواند تنظیم کننده­ی بالادست مسیرهای التهابی در بافت رحم باشد (33). در مطالعه دیگری Lappas و تیم تحقیقاتی وی نشان دادند پروتئین FOXO1 و FOXO3 بیان ثابتی در بافت­های جفت و غشاءهای جنینی دارد. به گفته ی آنها، وجود دو فاکتور رونویسی FOXO4  وFOXO3  دخالت مستقیمی در القاء یا سرکوب آپوپتوز و تنظیم سیکل سلولی داشته و در پارگی غشاء جنینی موثر است (34). از سوی دیگر، Kajihara و همکاران گزارش دادند القاء بیان ژنFOXO1  منجر به افزایش قابلیت سلول­های اپیتلیالی دیواره رحم (decidual cells) برای مقابله با اپیسود­های طولانی استرس اکسیداتیو طی حاملگی می­شود (35). امروزه، استرس اکسیداتیو به عنوان یک عامل بسیار مهم در اتیولوژی RSA شناخته می­شود (36). سه پلی­مورفیسم تک نوکلئوتیدی (SNP) rs9549240 T>G، rs9549241 G>A و rs12585277 C>T با MAF به ترتیب 0.47، 0.46و 0.47 در ناحیه­ی اینترونیک ژن کد کننده­ی FOXO1 (روی کروموزوم 13) قرار دارند و مطالعه یLi و همکاران در سال 2011 تنها ارتباط آماری بین وجود این واریانت­ها و افزایش احتمال ابتلا به دیابت تیپ دو را نشان داده است (37). از میان SNP های واقع در نواحی غیر کد کننده از ژن­های خانواده FOXO، rs17592236 C>T (MAF=0.11 ) و rs4946936 T>C (MAF=0.48) در ناحیه 3’-UTR از ژن­های FOXO1 و FOXO3a قرار دارند. مطالعات سالهای 2013 تا 2019 اهمیت وجود این واریانت­ها را در پاتوژنز دیابت نفروپاتیک ، سرطان کبد و بیماری­های پوستی و به اثبات رسانیده است (38-40)، ولی با این حال ارتباط این جایگاه­ها با بروز بیماری­های زنان مورد ارزیابی قرار نگرفته است.

با توجه به شیوع نسبتاً بالای RSA در بین بیماری­های زنان و اثبات نقش پر رنگ ژنتیک در اتیولوژی این بیماری، بر آن شدیم تا SNP­های حائز اهمیت بالینی واقع شده در 4 ژن HOTAIR, FOXO3a, FOXO1 و miR146a را در جمعیتی از بیماران مراجعه کننده به بخش زنان بیمارستان علی بن ابیطالب (ع) شهر زاهدان بسنجیم. بدیهی است شناخت پلی مورفیسم های موثر در بروز این بیماری، کمک شایان توجهی به روند درمان و تشخیص به موقع این اختلال شایع در آینده خواهد نمود.

فراوانی پلی مورفیسم rs57095329 ژنmiR146a در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است.

فراوانی  پلی مورفیسم  rs6864584 ژن miR146a در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم rs2910164 ژن miR146a در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم rs157907 ژن miR29a در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم  rs9549240 ژن FOXO1  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم rs9549241 ژن FOXO1  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم  rs12585277 ژن FOXO1  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم  rs2253310 ژن FOXO3a  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم  rs920778 ژن HOTAIR  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم  rs4759314 ژن HOTAIR  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم  rs1899663 ژن HOTAIR  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم  rs12826786 ژن HOTAIR  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم rs1859168  ژن HOTTIP در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم  rs78248039  ژن HOTTIP در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

فراوانی پلی مورفیسم  rs2023843 ژن HOTTIP در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل متفاوت است

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  ژن­هایFOXO1HOTTIP, FOXO3a, miR146a  وHOTAIR در زنان مبتلا به سقط مکرر در مقایسه با گروه کنترل

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs57095329 ژنmiR146a   در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی  پلی مورفیسم  rs6864584 ژن miR146a در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم    rs2910164 ژن miR146a در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs157907 ژن miR29a در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل.

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs9549240 ژن FOXO1  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs9549241 ژن FOXO1  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs12585277 ژن FOXO1  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs2253310 ژن FOXO3a  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs920778 ژن HOTAIR  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs4759314 ژن HOTAIR  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs1899663 ژن HOTAIR  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs12826786 ژن HOTAIR  در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم rs1859168  ژن HOTTIP در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs78248039  ژن HOTTIP در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

مقایسه فراوانی پلی مورفیسم  rs2023843 ژن HOTTIP در زنان مبتلا به سقط مکرر و گروه کنترل .

دانشگاه علوم پزشکی زاهدان

سقط مکرر: ﺳﻨﺪرم ﺳﻘﻂ ﻣﻜﺮر ﺧﻮدﺑﺨﻮدی  (Recurrent spontaneous abortion) اﻏﻠﺐ ﺑﻪ ﺻﻮرت به صورت  دو ﻳﺎ ﺑﻴﺶ از دو ﺳﻘﻂ ﻣﺘﻮاﻟﻲ ﭘﻴﺶ از ﻫﻔﺘﻪ  20 ﺑـﺎرداری ﺗﻌﺮﻳﻒ ﻣـﻲ شود

پلی مورفیسم: تغییری در دنباله DNA که در یک نوکلئوتید(T،G،C،A) در ژنوم بین افراد یک گونه بیولوژیکی یا بین یک جفت کروموزم در یک فرد این نوکلئوتید فرق دارد

  موردی – شاهدی (case –control)

گروه هدف: زنان مبتلا به سقط مکرر مراجعه کننده به کلنیک ناباروری مولود واقع بیمارستان علی بن ابیطالب (ع) پس از همسان سازی بر اساس سن.

گروه کنترل: زنان سالم که سابقه زایمان طبیعی داشته و فرزندان سالم دارند.

معیار ورود:هر خانم باردار با سقط خودبخودی و دارای سابقه دو یا بیشتر سقط (در فاصله ی کمتر از ۲۰ هفتع از شروع بارداری) پس از انجام کاریوتایپینگ وارد مطالعه میشود

معیار خروج: بیماری زمینه ای مادر (لوپوس،بیماری اتوایمیون ،پره اکلامپسی،دیابت،کلیوی،فشارخون)

اختلالات آناتومیک رحمی در HSG

اختلالات کروموزومی والدین

هر گونه بیماری عفونی مادر

برای بررسی پلی مورفیسم ژنی کلیه بیماران مبتلا به سقط مکرردر طول یک سال پس از تصویب طرح و به همان تعداد افراد کنترل که حداقل آن 100 نمونه خون و 30 نمونه بافت به ازای هر گروه می باشد.

آسان و در دسترس

از طریق تشخیص بالینی و انجام آزمایشات واقدامات پاراکلینیک برای تشخیص بیماری و انجام PCR  بر روی DNA  استخراج شده از خون و بافت افراد و شناسایی آلل­های موردنظر. اطلاعات بیماران در پرسشنامه ضمیمه شده قید خواهد شد.

کلیه بیمارانی که برای انجام سقط جنین به کلنیک ناباروری مولود واقع در بیمارستان علی ابن ابیطالب(ع) مراجعه نموده اند چنانچه معیارهای ورود به مطالعه را داشته باشند وارد مطالعه خواهند شد اگر بیماران سابقه دو سقط خودبخودی قبلی داشته باشند بعنوان گروه مورد در نظر گرفته خواهند شد. همچنین مادرانی که زایمان طبیعی و فرزندان سالم داشته اند و سابقه سقط و بیماری های سیستمیک نیز نداشته باشند به عنوان گروه شاهد وارد مطالعه خواهند شد. ازکلیه افرادی که در مطالعه وارد شده اند 2 میلی لیتر خون در لوله های حاوی  جمع آوری خواهد شد.  همچنین از افراد مبتلا به تعداد 30 نفر گروه مورد و 30 نفر سالم بافت جمع آوری میشود. از نمونه های که در 20- درجه سانتیگراد نگهداری شده بودند، DNA با استفاده از کیت کیاژن  تخلیص خواهد شد. سپس با استفاده از پرایمرهای اختصاصی قطعات واجد ناحیه پلی مورفیک با روش  PCR  تکثیر گردیده و سپس توسط آنزیم های حدساز و با استفاده از تکنیکPCR-RFLP  و ARMS-PCR تعیین ژنوتیپ خواهند شد و آنالیز هاپلوتایپ نیز توسط نرم افزار Haploview انجام می شود.

پس از گردآوری اطلاعات لازم، یافته ها در نرم افزار آماری SPSS  وارد گشته و داده ها با استفاده از آزمون­های آماری χ2  و تی تست مستقل و Regression Logistic مورد تجزیه و تحلیل قرار خواهند گرفت.

در این مطالعه کدهای 1,2,3,4,8,11,12,13,14,15,17,19,22,25,28و31 از راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی در جمهوری اسلامی ایران استفاده می شود. همچنین کد های از 1,2,3,4,6,8,12 از راهنمای ‌عمومی اخلاقی پژوهش بر روی عضو و ژن و بافت انسانی و همچنین کد های 1,2,3,4,6,7‌و 8 از فصل اول (استفاده از اعضاء و بافت های جنین سقط شده انسان برای پژوهش) بعلاوه ی کدهای 1 و 2 از فصل چهارم (زیست بانک ها) راهنمای اختصاصی اخلاقی پژوهش بر روی عضو و ژن و بافت انسانی در این طرح رعایت می گردد.

عدم همکاری برخی بیماران که میبایستی با صرف زمان بیشتر سعی در جمع آوری نمونه از سایر بیماران کرد.

مشکل تهیه مواد وامکان طولانی شدن زمان دریافت آنها که با سفارش دادن مواد مورد نیاز قبل از شروع سال جدید (به دلیل اجتناب از افزایش قیمت ها) قابل حل است.

تفاوت در سن و قومیت افراد مورد مطالعه که میباستی با همسان سازی صحیح این اختلاف به حداقل برسد.

سقط مکرر خود به خودی، FOX ، LncRNA ، میکرو آر ان ای ، پلی مورفیسم

منابع:

1.           Iravani A, Saeedi M, Pakravesh J, Hamidi S, Abbasi M. Thyroid autoimmunity and recurrent spontaneous abortion in Iran: a case-control study. Endocrine Practice. 2008;14(4):458-64.

2.           Lee RM, Silver RM, editors. Recurrent pregnancy loss: summary and clinical recommendations. Seminars in reproductive medicine; 2000: Copyright© 2000 by Thieme Medical Publishers, Inc., 333 Seventh Avenue, New ….

3.           Sierra S, Stephenson M, editors. Genetics of recurrent pregnancy loss. Seminars in reproductive medicine; 2006: Copyright© 2006 by Thieme Medical Publishers, Inc., 333 Seventh Avenue, New ….

4.           Traina É, Daher S, Moron AF, Sun SY, Franchim CS, Mattar R. Polymorphisms in VEGF, progesterone receptor and IL-1 receptor genes in women with recurrent spontaneous abortion. Journal of reproductive immunology. 2011;88(1):53-7.

5.           Lim KJH, Odukoya O, Li T, Cooke I. Cytokines and immuno-endocrine factors in recurrent miscarriage. Human reproduction update. 1996;2(6):469-81.

6.           Michels TC, Tiu AY. Second trimester pregnancy loss. American family physician. 2007;76(9).

7.           Ghosh K, Shetty S, Vora S, Salvi V. Successful Pregnancy Outcome in Women With Bad Obstetric History and Recurrent Fetal Loss Due to Thrombophilia: Effect of Unfractionated Heparin and Low—Molecular Weight Heparin. Clinical and Applied Thrombosis/Hemostasis. 2008;14(2):174-9.

8.           Franssen MT, Korevaar JC, Leschot NJ, Bossuyt PM, Knegt AC, Gerssen-Schoorl KB, et al. Selective chromosome analysis in couples with two or more miscarriages: case-control study. bmj. 2005;331(7509):137-41.

9.           Stephenson M, Awartani K, Robinson W. Cytogenetic analysis of miscarriages from couples with recurrent miscarriage: a case–control study. Human reproduction. 2002;17(2):446-51.

10.         Ogasawara M, Aoki K, Okada S, Suzumori K. Embryonic karyotype of abortuses in relation to the number of previous miscarriages. Fertility and sterility. 2000;73(2):300-4.

11.         Sullivan AE, Silver RM, LaCoursiere DY, Porter TF, Branch DW. Recurrent fetal aneuploidy and recurrent miscarriage. Obstetrics & Gynecology. 2004;104(4):784-8.

12.         Barchitta M, Maugeri A, Quattrocchi A, Agrifoglio O, Agodi A. The role of miRNAs as biomarkers for pregnancy outcomes: A comprehensive review. International journal of genomics. 2017;2017.

13.         Dong F, Zhang Y, Xia F, Yang Y, Xiong S, Jin L, et al. Genome-wide miRNA profiling of villus and decidua of recurrent spontaneous abortion patients. Reproduction. 2014;148(1):33-41.

14.         Salimi S, Eskandari F, Rezaei M, Narooei-nejad M, Teimoori B, Yazdi A, et al. The effect of miR-146a rs2910164 and miR-149 rs2292832 polymorphisms on preeclampsia susceptibility. Molecular biology reports. 2019;46(4):4529-36.

15.         Venugopal P, Lavu V, RangaRao S, Venkatesan V. Evaluation of a panel of single-nucleotide polymorphisms in mir-146a and mir-196a2 genomic regions in patients with chronic periodontitis. Genetic testing and molecular biomarkers. 2017;21(4):228-35.

16.         Li Y, Du C, Wang W, Ma G, Cui L, Zhou H, et al. Genetic association of MiR-146a with multiple sclerosis susceptibility in the Chinese population. Cellular Physiology and Biochemistry. 2015;35(1):281-91.

17.         Wang KC, Chang HY. Molecular mechanisms of long noncoding RNAs. Molecular cell. 2011;43(6):904-14.

18.         Liu F, Zhou L, Qiu C, Xia G-f, Zhu P, Luo H. Association of the HOTAIR rs4759314 polymorphism with cancer risk: a meta-analysis. 2016.

19.         Zhang Y, Jin F, Li X-C, Shen F-J, Ma X-L, Wu F, et al. The YY1-HOTAIR-MMP2 signaling axis controls trophoblast invasion at the maternal-fetal interface. Molecular Therapy. 2017;25(10):2394-403.

20.         Tian F-J, He X-Y, Wang J, Li X, Ma X-L, Wu F, et al. Elevated Tristetraprolin Impairs Trophoblast Invasion in Women with Recurrent Miscarriage by Destabilization of HOTAIR. Molecular Therapy-Nucleic Acids. 2018;12:600-9.

21.         Che D, Huang W, Fang Z, Li L, Wu H, Pi L, et al. The lncRNA CCAT2 rs6983267 G allele is associated with decreased susceptibility to recurrent miscarriage. Journal of cellular physiology. 2019.

22.         Gu X, Fang Z, LI L, Liang Q, Pi L, Xu Y, et al. The lncRNA MALAT1 rs619586 G variant confers decreased susceptibility to recurrent miscarriage. Frontiers in physiology. 2019;10:385.

23.         Bayram S, Sümbül AT, Batmacı CY, Genç A. Effect of HOTAIR rs920778 polymorphism on breast cancer susceptibility and clinicopathologic features in a Turkish population. Tumor Biology. 2015;36(5):3863-70.

24.         Pan W, Liu L, Wei J, Ge Y, Zhang J, Chen H, et al. A functional lncRNA HOTAIR genetic variant contributes to gastric cancer susceptibility. Molecular carcinogenesis. 2016;55(1):90-6.

25.         Mohammadpour‐Gharehbagh A, Jahantigh D, Saravani M, Harati‐Sadegh M, Maruie‐Milan R, Teimoori B, et al. Impact of HOTAIR Variants on Preeclampsia Susceptibility Based on Blood and Placenta and In Silico Analysis. IUBMB life. 2019.

26.         Czymai T, Viemann D, Sticht C, Molema G, Goebeler M, Schmidt M. FOXO3 modulates endothelial gene expression and function by classical and alternative mechanisms. Journal of Biological Chemistry. 2010;285(14):10163-78.

27.         Hwang J-w, Rajendrasozhan S, Yao H, Chung S, Sundar IK, Huyck HL, et al. FOXO3 deficiency leads to increased susceptibility to cigarette smoke-induced inflammation, airspace enlargement, and chronic obstructive pulmonary disease. The Journal of Immunology. 2011;187(2):987-98.

28.         Essers MA, de Vries-Smits LM, Barker N, Polderman PE, Burgering BM, Korswagen HC. Functional interaction between ß-catenin and FOXO in oxidative stress signaling. Science. 2005;308(5725):1181-4.

29.         Manolagas SC, Almeida M. Gone with the Wnts: β-catenin, T-cell factor, forkhead box O, and oxidative stress in age-dependent diseases of bone, lipid, and glucose metabolism. Molecular Endocrinology. 2007;21(11):2605-14.

30.         Rossant J, Cross JC. Placental development: lessons from mouse mutants. Nature Reviews Genetics. 2001;2(7):538.

31.         Almeida M, Han L, Martin-Millan M, O'Brien CA, Manolagas SC. Oxidative stress antagonizes Wnt signaling in osteoblast precursors by diverting β-catenin from T cell factor-to forkhead box O-mediated transcription. Journal of Biological Chemistry. 2007;282(37):27298-305.

32.         Li S, Li N, Zhu P, Wang Y, Tian Y, Wang X. Decreased β‐catenin expression in first‐trimester villi and decidua of patients with recurrent spontaneous abortion. Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 2015;41(6):904-11.

33.         Lim R, Barker G, Lappas M. A novel role for FOXO3 in human labor: increased expression in laboring myometrium, and regulation of proinflammatory and prolabor mediators in pregnant human myometrial cells. Biology of reproduction. 2013;88(6):156, 1-12.

34.         Lappas M, Lim R, Riley C, Menon R, Permezel M. Expression and localisation of FoxO3 and FoxO4 in human placenta and fetal membranes. Placenta. 2010;31(12):1043-50.

35.         Kajihara T, Jones M, Fusi L, Takano M, Feroze-Zaidi F, Pirianov G, et al. Differential expression of FOXO1 and FOXO3a confers resistance to oxidative cell death upon endometrial decidualization. Molecular endocrinology. 2006;20(10):2444-55.

36.         Gupta S, Agarwal A, Banerjee J, Alvarez JG. The role of oxidative stress in spontaneous abortion and recurrent pregnancy loss: a systematic review. Obstetrical & gynecological survey. 2007;62(5):335-47.

37.         Li T, Wu X, Zhu X, Li J, Pan L, Li P, et al. Association analyses between the genetic polymorphisms of HNF4A and FOXO1 genes and Chinese Han patients with type 2 diabetes. Molecular and cellular biochemistry. 2011;353(1-2):259-65.

38.         Ma J, Pei Y, Xue P, Wang Y, Bao X, Li Y. Association of the polymorphisms in FOXO1 gene and diabetic nephropathy risk. Artificial cells, nanomedicine, and biotechnology. 2019;47(1):1471-5.

39.         Tan C, Liu S, Tan S, Zeng X, Yu H, Li A, et al. Polymorphisms in microRNA target sites of forkhead box O genes are associated with hepatocellular carcinoma. PloS one. 2015;10(3):e0119210.

40.         Turkcu UO, Tekin NS, Edgunlu TG, Karakas SÇ, Oner S. The association of FOXO3A gene polymorphisms with serum FOXO3A levels and oxidative stress markers in vitiligo patients. Gene. 2013.

در مطالعه فعلی، ارتباط وقوع یکسری پلی مورفیسم ­های ژنی غیر شایع و شناخته نشده بر فراوانی سقط مکرر به تفکیک مورد ارزیابی قرار می­ گیرد. بدیهی است شناخت این جایگاه­های ژنی می تواند به افزایش درک پژوهشگران از مکانیسم­ های مولکولی دخیل در بروز این بیماری ها کمک کند

از هر بیمار در طی این طرح تحقیقاتی حداقل 2 سی سی خونگیری بعمل آمده و نمونه­ها درون لوله­های CBC جمع آوری می شوند.

شناخت واریانت های ژنی دخیل در بروز بیماری حاضر می تواند به پیش بینی شدت بروز این اختلال و انتخاب درمان مناسب کمک کند

ندارد

در صورت صحیح انجام نشدن خونگیری، احتمال میرود در محل ورود سر سرنگ هماتوم ایجاد شود که با مشورت پزشک در جهت رفع آن اقدام می شود.

تمامی هزینه های طرح حاضر توسط مجری طرح پرداخت شده و در هیچ مرحله ای از پژوهش از بیمار هزینه ای اخذ نمی گردد

ندارد

اطلاعات بیماران به صورت کاملاً محرمانه حفظ شده و در اختیار هیچ شخص ثالثی قرار نخواهد گرفت.

در صورت هر گونه سوال در مورد روند انجام پژوهش با شماره ی زیر تماس حاصل شود
دکتر سامان سرگزی (09103161030)

بیمار حق دارد در هر مرحله از خون دادن امتناع کرده و از مطالعه خارج شود

توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح بابت موافقت بیمار در جهت شرکت در این مطالعه اعلان می شود. و پس از موافقت شفاهی بیمار یک نسخه از این فرم به وی  داده شده و فرصت خواندن آن را دارد.

تاریخ:.....................                                                                                        شماره پرونده:....................

گروه:.....................                                                                                      نام تکمیل کننده فرم:...............

پرسشنامه طرح تحقیقاتی سقط مکرر                         

نام :.................نام خانوادگی:............. سن:...........BMI :..........:شغل:...... قومیت:...... نسبت فامیلی با همسر.................

نام همسر:.............نام خانوادگی همسر:.................  سن:........شغل:............

وضعیت سیکل قاعدگی:..................

سابقه بارداری های قبلی:

Gravida:……Live:……..Death:……Abortion:….Mole:…….EP:……               

سابقه جراحی قبلی از جمله سزارین و کورتاژ:...........

سابقه مصرف دخانیات:

سوابق سقط قبلی به تفکیک:

1-حاملگی چندم:.........چند هفته:.......FHR مثبت یا منفی:.......کورتاژ شده یا خیر:....

2- حاملگی چندم:.........چند هفته:.......FHR مثبت یا منفی:.......کورتاژ شده یا خیر:....

3- حاملگی چندم:.........چند هفته:.......FHR مثبت یا منفی:.......کورتاژ شده یا خیر:....

سابقه مصرف سیگار و قلیان یا مواد مخدر در هر یک از زوجین:..............................

سابقه مصرف دارو در هر یک از زوجین :........................................................

سابقه بیماری تیرویید یا دیابت و...در هر یک از زوجین:........................................

نتایج آزمایشات:

SA:  count:..……motility(a):…....…(b):…..…PR:..…… normal:…….….                      (تاریخ)

FSH:……..LH:……AMH:……..TSH:………PRL:……..VD3:…………Antithrombin 3:……ANA:…

Homocystein:…………lupus anticoagulant:…………Anticardiolipin Ab:…………prc,s:……

HSG:………………………………………………

SONOGRAPHY:……………………..

HYSTEROSCOPY:……………………………………

Karyotype:…………………………